sirna转染试剂说明书

LIPOFECTAMINE 2000转染试剂转染步骤

LIPOFECTAMINE 2000转染试剂转染步骤 24孔板贴壁细胞的瞬时或稳定转染实验步骤： （在生长培养基中直接加入复合物） 1.转染前一天，胰酶消化细胞并计数，将细胞转至24孔板，控制密度使其在转染日密度接近90%。细胞铺板在0.5ml含血清，不含抗生素的正常生长的培养基中。 2.对于每孔细胞，使用50μl OPTI-MEMⅠ培养基稀释1μl-3μl LIPOFECTAMINE 2000试剂。温柔混匀LIPOFECTAMINE 2000，室温温浴5分钟 （在5-25分钟内同稀释的DNA混合。保温时间过长会降低活性。可以批量制备。） 注意：即使LIPOFECTAMINE 2000使用OPTI-MEMⅠ稀释，细胞也可以使用D-MEM培养。 3.对于每孔细胞，使用50μl无血清培养基（如OPTI-MEMⅠ培养基）稀释0.8μg-1.0μg DNA。多孔操作可以批量制备。 4.混合稀释的DNA（由第3步）和稀释的LIPOFECTAMINE 2000（由第2步）。在室温保温20分钟。注意：溶液可能会混浊，但不会影响转染。复合物可以在室温保持6小时稳定。

5.直接将复合物（100μl）加入到每孔中，前后（或左右）摇动培养板，轻轻混匀。 注意：如果在无血清条件下转染，使用含血清的正常生长培养基进行细胞铺板。在加入复合物前移去生长培养基，替换为0.2ml无血清培养基。 6.在37℃，5％的CO2中保温18-48小时，无须去掉复合物或更换培养基或者在4-5小时后更换生长培养基也不会降低转染活性。 7.在细胞中加入复合物18-72小时后，分析细胞抽提物或进行原位细胞染色，检测报告基因活性。这依赖于细胞类型和启动子活性。对稳定表达，在开始转染一天后将细胞传代至新鲜培养基中（1：10），两天后加入筛选抗生素。进行稳定表达需要数天或数周。

自己翻译的罗氏tunel检测细胞凋亡试剂盒说明书

罗氏tunel检测细胞凋亡试剂盒说明书 注意：Label溶液含有甲次砷酸盐和二氯化钴，严禁吸入和食入。 反应悬浮物收集于密闭、不易碎、有明确标识的容器中，按有毒废物处理。 需要自己配置的其他物品： 除上表所列试剂外，还需准备以下溶液。下表列出每步所需物品概览：

产品概述： 特异性：TUNEL 反应优先标记凋亡产生的DNA 链断裂，从而辨别凋亡与坏死、以及由抑 制细胞生长的药物或放射线产生的primary DNA 链断裂 实验干扰：假阴性：在某些型式的凋亡细胞中DNA 链断裂可能缺失或不完全。空间位阻， 如细胞外元件可能阻止TdT 到达DNA 断裂处。两种情况均能产生假阴性。 假阳性：在坏死晚期，可能产生大量的DNA 片段 DNA 链断裂也可能在具有高增殖和代谢活动的细胞中出现。两种情况均能产生 假阳性。为确认细胞死亡的凋亡型式，应认真进行每种细胞的形态学检查 凋亡过程中产生的形态学改变尤其特征形式，因此，对于可以结果进行解释时， 细胞形态评估是一项重要的参数 样本：细胞离心涂片和细胞涂片 在chamber slides 上培养的黏附细胞 冰冻或福尔马林固定、石蜡包埋样本 分析时间：2-3小时，除外培养、固定和渗透 检测次数：一个试剂盒50T

步骤和所需材料： 1 流程图： 2 样品准备 黏附细胞、细胞涂片和细胞离心涂片 需准备的其他试剂：Washing buffer：磷酸盐缓冲液（PBS） Blocking buffer封闭溶液：甲醇稀释的3% H2O2 Fixation solution固定溶液：PBS配制的4%多聚甲醛，ph ，新鲜配制 Permeabilisation solution 渗透液：%Triton1）X-100溶于%柠檬酸钠溶液 中，新鲜配制 步骤：下表描述了细胞固定、内源性过氧化物酶封闭和细胞渗透过程。 组织部分 福尔马林-包埋组织 福尔马林包埋组织的预处理：可按4种不同的方式预处理。如用蛋白酶K，不含核酸酶，浓 度、孵育时间和温度应按组织类型优化 注意：只用罗氏应用科学的蛋白酶K，因其经检测不含核酸酶， 核酸酶可导致假阳性。 另外3中替代方法在下表中描述（step 2） 需准备的其他试剂：二甲苯和乙醇（浓度：95%，90%，80%，70%，溶于双蒸水中）

翻译好的罗氏公司Tunel试剂盒操作说明书

罗氏(R o c h e)公司T u n e l试剂盒操作说明书(In situ cell death detection kit-POD法) 一、原理： TUNEL（TdT-mediated dUTP nick end labeling）细胞凋亡检测试剂盒是用来检测组织细胞在凋亡早期过程中细胞核DNA的断裂情况。其原理是荧光素（fluorescein）标记的dUTP在脱氧核糖核苷酸末端转移酶（TdT Enzyme）的作用下，可以连接到凋亡细胞中断裂DNA的3’-OH末端，并与连接辣根过氧化酶（HRP，horse-radish peroxidase）的荧光素抗体特异性结合，后者又与HRP底物二氨基联苯胺（DAB）反应产生很强的颜色反应（呈深棕色），特异准确地定位正在凋亡的细胞，因而在光学显微镜下即可观察凋亡细胞；由于正常的或正在增殖的细胞几乎没有DNA断裂，因而没有3‘-OH形成，很少能够被染色。本试剂盒适用于组织样本（石蜡包埋、冰冻和超薄切片）和细胞样本（细胞涂片）在单细胞水平上的凋亡原位检测。还可应用于抗肿瘤药的药效评价，以及通过双色法确定细胞死亡类型和分化阶段。 二、器材与试剂 器材：光学显微镜及其成像系统、小型染色缸、湿盒（塑料饭盒与纱布）、塑料盖玻片或封口膜、吸管、各种规格的加样器及枪头等； 试剂：试剂盒含： 1号（蓝盖）Enzyme Solution 酶溶液：TdT 10×、 2号（紫盖）Label Solution标记液：荧光素标记的dUTP 1×、 3号（棕瓶）Converter-POD:标记荧光素抗体的HRP；

自备试剂：PBS、双蒸水、二甲苯、梯度乙醇（100、95、90、80、70%）、DAB工作液（临用前配制，5 μl 20×DAB+1μL 30%H2O2+94 μl PBS）、 Proteinase K工作液（10-20 μg/ml in 10 mM Tris/HCl，pH ）或细胞通透液（% Triton X-100 溶于% 柠檬酸钠，临用前配制）、 苏木素或甲基绿、DNase 1（3000 U/ml–3 U/ml in 50 mM Tris-HCl， pH ，10 mM MgCl2，1 mg/ml BSA）等。 三、实验步骤 操作流程图：制作石蜡切片→脱蜡、水合→细胞通透→加TUNEL反应液→加converter-POD→与底物DAB反应显色→光学显微镜计数并拍照。 具体操作步骤（石蜡包埋切片的检测）： 1. 用二甲苯浸洗2次，每次5min； 2. 用梯度乙醇（100、95、90、80、70%）各浸洗1次，每次3min； 注：上面两步是针对石蜡切片样本的处理 4. 用Proteinase K工作液处理组织15-30 min 在21–37°C（温度、时间、浓度均需摸索）如果凋亡细胞染色较弱时，可用高浓度的 Proteinase K（400μg/mL）处理5 分钟。其它替代方法：石蜡切片的预处理也可根椐实际情况可采用下述三种替代方法之一，即 蛋白酶K 处理的步聚改用下述方法，其余步聚均相同： 替代方法1: 将脱蜡及水合好的切片浸入通透液中8-10 min（通透 液：%TritonX-100 溶于%柠檬酸钠，需新鲜配制） 替代方法2：将脱蜡及水合好的切片浸入胃蛋白酶或胰蛋白酶中8-10 min （胃蛋白酶：%%溶于HCl PH2，胰蛋白酶%%溶于HCl ）

各种转染试剂的中文转染方法

各种转染试剂的中文转染方法 FuGENE6（Roche）转染步骤： 转染前一天将细胞分至培养板，转染当天细胞应50-80％融合。将细胞以1-3×105/2 ml接种于6孔板后孵育过夜将达到如此密度。 将FuGENE6 Reagent在室温孵育10-15分钟。使用之前将FuGENE6颠倒混匀一下。 1. 在PCR管中加入不含血清和双抗的营养液以稀释FuGENE6，直至总体积到100 ul。 2. 将3-6 ul FuGENE6 Reagent直接加入营养液，轻弹管壁混合。 3. 加入1-2 ug的DNA溶液（0.02－2.0 ug/ul），轻弹管壁混合。 4. 室温孵育20分钟。 5. 将6孔板中的旧营养液吸出，加入约1 ml不含血清和双抗的营养液洗涤一次，再加入2 ml不含血清和双抗的营养液。 6. 将转染复合物加入细胞，混匀使之均匀分布。 7. 3-8小时后，加入血清或换成含血清的营养液。 Lipofectamine 2000(Invitrogen)转染试剂转染步骤（6孔板）： 1. 转染前一天，胰酶消化细胞并计数，细胞铺板，使其在转染日密度为90-95％。细胞铺板在2 ml含血清，不含抗生素的正常生长的培养基中。 2. 对于每孔细胞，使用250 ul无血清培养基（如OPTI-MEM I培养基）稀释4.0 ugDNA，轻轻混匀。 3. 使用前将Lipofectamine 2000转染试剂轻轻混匀，用250 ul无血清培养基（如OPTI-MEM I培养基）稀释10 ul Lipofectamine 2000转染试剂，轻轻混匀。Lipofectamine 2000稀释后，在5分钟内同稀释的DNA混合（<30分钟）。NOTE：若使用DMEM培养基，则需在5分钟内同稀释的DNA混合。 4. 混合稀释的DNA（第二步）和稀释的Lipofectamine 2000（第三步）。室温放置20分钟。 5. （optional）将6孔板中的旧营养液吸出，用无血清培养基清洗两次。加入2 ml无血清配养基。 6. 直接将复合物加入到每孔中，摇动培养板，轻轻混匀。 中保温24-48小时。无需去掉复合物或更换培养基。 7. 在37℃，5％CO 2 或者在4-5小时后更换培养生长基也不会降低转染活性。 8. 在细胞中加入复合物24-72小时后，分析细胞抽提物或进行原位细胞染色，检测报告基因活性。这依赖于细胞类型和启动子活性。对稳定表达，在开始转染一天后将细胞传代至新鲜培养基中，两天后加入筛选抗生素。进行稳定表达需要数天或数周。 贴壁细胞的稳定转染： 转染后24小时，将细胞以≥1:10的比例传代至新鲜培养基中，次日加入选择性培养基。 Lipofectamine 2000转染试剂转染步骤（24孔板）：

磷酸钙法细胞转染试剂盒

磷酸钙法细胞转染试剂盒 简介： 外源基因导入真核细胞的方法有很多种，如磷酸钙转染法、DEAE-葡聚糖转染法、脂质体法、电穿孔法、显微注射法等。Leagene 磷酸钙法细胞转染试剂盒(Calcium Phosphate Cell Transfection Kit)是在传统的磷酸钙细胞转染方法的基础上进行了改良，提高了转染效率，并降低了毒性，可用于磷酸钙法转染细胞，不仅可以瞬时表达，也可以筛选稳定株。 组成： 操作步骤(仅供参考)： (一)贴壁细胞转染： 1、 在转染前24h 用胰蛋白酶消化培养细胞，取适量对数期细胞转移至新的培养器皿中，待细胞密度大70～80%满时即可进行转染。后续操作步骤均按6孔板计算，如果转染器皿不同，请按比例自行调节用量。 2、 在加入DNA 之前2～4h ，加入2ml 不含抗生素的完全培养液，置于37℃ 5% CO 2培养箱培养。 3、 取DNA(体积不宜超过20μl)加入100μl Calcium chloride solution ，混匀，即为DNA-CaCl 2溶液。 4、 取BBS solution 100μl ，用移液器一边吹打BBS solution ，一边逐滴加入DNA-CaCl 2溶液(操作缓慢，一般在1～2min)。 5、 室温静置20～30min ，即为DNA-CaCl 2-BBS 溶液，此时可能出现极其微小颗粒沉淀。 6、 取DNA-CaCl 2-BBS 溶液底部物质均匀加入到6孔板细胞中，轻轻晃动混匀。 7、 置于37℃ 5% CO 2培养箱培养。 8、 去除培养液，用PBS 清洗细胞2次，加入2ml 完全培养液继续培养，一般24h 后可见转染细胞的表达。 (二)悬浮细胞转染： 1、 低速离心收集悬浮细胞，用PBS 洗涤1次。 2、 取DNA(体积不宜超过20μl)加Calcium chloride solution ，混匀，即为DNA-CaCl 2溶液。 编号 名称 CZ0008 100T CZ0008 200T Storage 试剂(A): Calcium chloride solution 10ml 20ml -20℃ 试剂(B): BBS solution 10ml 20ml -20℃ 使用说明书 1份

翻译好罗氏公司Tel试剂盒操作说明书

罗氏(Roche)公司Tunel试剂盒操作说明书 (In situ cell death detection kit-POD法) 一、原理： TUNEL（TdT-mediated dUTP nick end labeling）细胞凋亡检测试剂盒是用来检测组织细胞在凋亡早期过程中细胞核DNA的断裂情况。其原理是荧光素（fluorescein）标记的dUTP在脱氧核糖核苷酸末端转移酶（TdT Enzyme）的作用下，可以连接到凋亡细胞中断裂DNA的3’-OH末端，并与连接辣根过氧化酶（HRP，horse-radish peroxidase）的荧光素抗体特异性结合，后者又与HRP底物二氨基联苯胺（DAB）反应产生很强的颜色反应（呈深棕色），特异准确地定位正在凋亡的细胞，因而在光学显微镜下即可观察凋亡细胞；由于正常的或正在增殖的细胞几乎没有DNA断裂，因而没有3‘-OH形成，很少能够被染色。本试剂盒适用于组织样本（石蜡包埋、冰冻和超薄切片）和细胞样本（细胞涂片）在单细胞水平上的凋亡原位检测。还可应用于抗肿瘤药的药效评价，以及通过双色法确定细胞死亡类型和分化阶段。 二、器材与试剂 器材：光学显微镜及其成像系统、小型染色缸、湿盒（塑料饭盒与纱布）、塑料盖玻片或封口膜、吸管、各种规格的加样器及枪头等； 试剂：试剂盒含： 1号（蓝盖）Enzyme Solution 酶溶液：TdT 10×、 2号（紫盖）Label Solution标记液：荧光素标记的dUTP 1×、 3号（棕瓶）Converter-POD:标记荧光素抗体的HRP； 自备试剂：PBS、双蒸水、二甲苯、梯度乙醇（100、95、90、80、70%）、

RFect小核酸转染试剂说明(单核细胞 转染)

RFect 小核酸转染试剂 货 号：11011: 0.5ml 11012: 1.0ml 储存条件：-20℃ 11013: 1.5ml 产品特点 应 用 产品介绍 RFect 小核酸转染试剂是国际知名科学家崔坤元博士领导我公司研发团队在美国西雅图实验室研发成功的一种新型的小核酸转染试剂。RFect 可用来转染siRNA 、antisense RNA 、microRNA 等200bp 以内的小分子RNA 和DNA ，转染细胞包括绝大多数贴壁生长的细胞，如一般细胞株、肿瘤细胞株等。目前，无论国外还是国内，转染试剂的主要成分均为脂质体或聚乙烯亚胺(Polyethylenimine, PEI)，这两种成分都具有很大的细胞毒性，并且转染效果不好。RFect 采用新型的动物源性的纳米材料，毒性很低并且拥有非常卓越的转染性能。与其它品牌的小核酸转染试剂相比，RFect 的细胞转染阳性率一般在90%以上，Lamin A/C 基因抑制效率在95%以上，而其它品牌转染试剂的细胞转染阳性率一般不超过70%，Lamin A/C 基因抑制效率不超过75%。RFect 细胞毒性很低，转染细胞死亡率不到10%，而其它品牌试剂的转染细胞死亡率一般在30%以上。血清对转染效果没有影响，不必刻意添加或更换培养液。有关RFect 小核酸转染试剂的材料合成和试剂配制我们已申请了国际专利，并通过PCT 覆盖国际上多个国家和地区。 操作步骤：本说明书适用于24孔培养板的转染实验，其他规格的培养板的用量参照下面表格，表格给出的是每孔的用量与体积。 A. 细胞接种：转染前一天接种细胞，每孔 500 μl 培养基（不可加抗生素），使细胞在转染时密度在30-50% 。 B. siRNA-RFect 混合物准备： 1. 6pmol siRNA 用50μl 无血清培养基稀释。 2. 2μl RFect 用50μl 无血清培养基稀释。轻轻混匀，室温孵育5min 。注意：确保在25 min 内执行第三步操作，不要过于延迟。 3. 孵育5min 后，将siRNA 稀释液与RFect 稀释液混合（总体积100μl ）。轻轻混匀，室温孵育20 min 。 C. 将混合物加到培养的细胞内（完全培养基培养）： 1. 将100μl 混合物加入培养孔内，培养孔内含有0.5ml 培养的细胞。轻轻晃动培养板，混匀。 2. 37°C 培养18-72h ，检测基因抑制效果。如果需要，细胞培养4-6h 时可以更换培养基，但不是必须。孵育时间的长短，取决于细胞类型、 所干扰基因本身及分析方法。可设置不同的孵育时间进行实验以确定最佳孵育时间。 转染实验要点： ● 转染过程不可添加抗生素，否则会导致细胞死亡； ● 首次实验siRNA 的用量可稍大（一般10 nM ） ，后续实验根据实验结果修改。 RFect Transfection Reagent Formats for Various Cell Culture Vessels Culture vessel Surface area/well (cm 2) Vol. of growth medium (μl) Vol. of dilution medium (μl) siRNA Amount (pmol) RFect (μl) 96-well 0.3 100 2 x 10 1.2 0.4 48-well 0.8 250 2 x 25 3 1 24-well 2 500 2 x 50 6 2 12-well 4 1000 2 x 100 12 4 ◎卓越的细胞转染性能：细胞转染阳性率高达90%以上，基因敲除效果明显，A549细胞Lamin A/C 基因敲除效率在95%以上 ◎极低的细胞毒性：转染细胞死亡率不到10%，大大降低了因细胞毒性对实验结果的影响 ◎转染细胞范围广，绝大多数贴壁细胞株都能获得比较理想的转染结果 ◎siRNA 转染 ◎antisense RNA 转染 ◎200bp 内的小分子DNA 转染

各种转染试剂中文说明

FuGENE6（Roche）转染步骤: 转染前一天将细胞分至培养板，转染当天细胞应50-80％融合。将细胞以1-3×105/2ml接种于6孔板后孵育过夜将达到如此密度。 将FuGENE6 Reagent在室温孵育10-15分钟。使用之前将FuGENE6颠倒混匀一下。 1.在PCR管中加入不含血清和双抗的营养液以稀释FuGENE6，直至总 体积到100ul。 2.将3-6ul FuGENE6 Reagent直接加入营养液，轻弹管壁混合。 3.加入1-2ug的DNA溶液（0.02－2.0ug/ul），轻弹管壁混合。 4.室温孵育20分钟。 5.将6孔板中的旧营养液吸出，加入约1ml不含血清和双抗的营养液 洗涤一次，再加入2ml不含血清和双抗的营养液。 6.将转染复合物加入细胞，混匀使之均匀分布。 7.3-8小时后，加入血清或换成含血清的营养液。 Lipofectamine 2000(Invitrogen)转染试剂转染步骤（6孔板）： 1.转染前一天，胰酶消化细胞并计数，细胞铺板，使其在转染日密度为90-95％。 细胞铺板在2ml含血清，不含抗生素的正常生长的培养基中。 2.对于每孔细胞，使用250ul无血清培养基（如OPTI-MEM I培养基）稀释 4.0ugDNA，轻轻混匀。 3.使用前将Lipofectamine 2000转染试剂轻轻混匀，用250ul无血清培养基（如 OPTI-MEM I培养基）稀释10ul Lipofectamine 2000转染试剂，轻轻混匀。 Lipofectamine 2000稀释后，在5分钟内同稀释的DNA混合（<30分钟）。 NOTE：若使用DMEM培养基，则需在5分钟内同稀释的DNA混合。 4.混合稀释的DNA（第二步）和稀释的Lipofectamine 2000（第三步）。室温放 置20分钟。 5.（optional）将6孔板中的旧营养液吸出，用无血清培养基清洗两次。加入 2ml无血清配养基。 6.直接将复合物加入到每孔中，摇动培养板，轻轻混匀。

jetPRIME转染试剂说明

Polyplus-transfection S.A. - Bioparc - 850 Bd S. Brant - 67400 Illkirch - France - Phone: +33 3 90 40 61 80 - Fax: +33 3 90 40 61 81 Polyplus-transfection Inc. - 1251 Ave of the Americas - 34th fl. - New-York - NY 10020 - USA https://www.360docs.net/doc/a911788407.html, jetPRIME? in vitro DNA & siRNA transfection reagent PROTOCOL DESCRIPTION jetPRIME? is a novel powerful molecule based on a polymer formulation manufactured at Polyplus-transfection?. jetPRIME? ensures effective and reproducible DNA and siRNA transfection into mammalian cells. jetPRIME? is extremely efficient on a wide variety of cell lines. This powerful reagent only requires low amounts of nucleic acid per transfection, hence resulting in very low cytotoxicity . 1 Transient DNA transfection protocol (2) 1.1 Cell seeding .......................................................................................................................................... 2 1.2 DNA transfection protocol ................................................................................................................... 2 1.3 Virus production in adherent cells ....................................................................................................... 5 1.4 Optimization guidelines (5) 2 siRNA transfection protocol (6) 2.1 Cell seeding .......................................................................................................................................... 6 2.2 siRNA transfection protocol .. (7) 3 DNA & siRNA cotransfection protocol (7) 3.1 Cell seeding .......................................................................................................................................... 7 3.2 DNA & siRNA cotransfection protocol . (8) 4 Transfection of CRISPR/Cas9 ..................................................................................... 9 5 Stable DNA transfection ............................................................................................. 9 6 Troubleshooting ....................................................................................................... 10 7 Product information (11)

CK-MB试剂盒说明书(罗氏)

the MB isoenzyme of creatine kinase，CK-MB 11821598 322 100测试 主要用途 用免疫学方法定量测定人血清或血浆中肌酸 激酶同工酶MB含量。 电化学发光免疫测定试剂，适用于罗氏 Elecsys和cobas e免疫测定分析仪。 临床应用1、2、3 肌酸激酶（CK）是一种二聚体酶，它有四种不 同的形式：线粒体同工酶和胞浆同工酶CK-MM （肌型）、CK-BB（脑型）和CK-MB。 血清中CK-MB的测定值是诊断心肌缺血（例如 急性心肌梗塞、心肌炎等）的重要指标。CK-MB 在心脏症状出现3－8小时后即可检出并且可 持续较长时间，这取决于病情经过。 CK-MB还可出现在其它临床条件下，例如横纹 肌溶解症和中风。实验室诊断方面，测定总体 CK、肌钙蛋白T和/或肌红蛋百有助于鉴别这些 临床疾病。 CK-MB测定的灵敏度与取样时间有关。因此跟 踪测定非常有意义。 Elecsys Ck-MB测定法采用了两种不同的直接 对抗人CK-MB的单克隆抗体。 检测原理 双抗体夹心法，总检测时间：18分钟 ●第一次孵育：15μl标本、生物素化的抗 CK-MB单克隆抗体和钌（Ru）a标记的CK-MB 特异性单克隆抗体一起反应生成抗原抗 体夹心复合物。 ●第二次孵育：添加包被链霉亲和素的磁珠 微粒后，该复合物通过生物素和链霉素之 间的反应结合到微粒上。 ●将反应液吸入测量池中，通过电磁作用将 磁珠吸附在电极表面。未与磁珠结合的物 质通过ProCell被去除。给电极加以一定 的电压，使复合体化学发光，并通过光电 倍增器测量发光强度。 ●仪器自动通过2点校正的定标曲线计算得 到检测结果。 a)Tris(2,2’-bipyridyl) ruthenium(II)- complex (Ru(bpy){ 2 3 }三联吡啶钌 试剂－工作溶液 M 包被链霉亲和素的磁珠微粒（透明瓶 盖），1瓶，6.5ml；包被链霉亲和素的 磁珠微粒，0.72mg/ml；防腐剂。 R1 生物素化的抗CK-MB抗体（灰盖），1瓶， 10mL：生物素化抗CK-MB单克隆抗体（小 鼠）1.2mg/L；磷酸盐缓冲液100mmol/L， pH值7.0；防腐剂。 R2 Ru(bpy)32+标记的抗CK-MB抗体（黑盖）， 1瓶，10mL；钌标记的抗CK-MB单抗 1.2mg/L；磷酸盐缓冲液100mmol/L，pH 值 7.0；防腐剂。 警告和注意事项 仅用于体外诊断。 在使用本试剂盒时必需遵循所有试验室试剂 操作的注意事项。 所有废弃物必需按照当地法规进行处置。 专业人员可要求获得安全数据报告。 避免试剂和样本（样本、定标液和质控品）产 生气泡。 试剂处理 试剂盒为即用型，不能分开使用。 试剂相关信息可以通过试剂条形码阅读获取。 储存及稳定性 存放于2－8℃。 请垂直摆放Elecsys CK-MB试剂盒，确保使用 前仪器通过自动搅拌能够完全混匀磁珠微粒。 样本的采集和准备 仅以下罗列的样本通过检测要求。 血清样本须用标准试管或有分离胶的真空管 收集。 肝素锂、肝素钠、K3-EDTA和枸橼酸钠抗凝的 血浆都适用。使用枸橼酸钠抗凝的血浆时，结 果必须按＋10％校正。 标准：回收率在血清值的90-110%以内或斜率 0.9-1.1＋截距<±2×分析灵敏度（LDL）＋相 关系数>0.95。 稳定性：18-23℃保存4小时，2-8℃保存8小时， -20℃保存3个月。 样本只能冰冻一次。

转染试剂使用注意事项.doc

转染试剂使用注意事项 1.细胞密度：转染DNA（质粒）时，细胞密度为80-100%，转染RNA(siRNA 或miRNA)时，细胞密度为60-80%，具体细胞密度必须结合考虑核酸种类、转染试剂种类和细胞生长密度极限； 2.DNA用量：0.5-1ug/孔（以24孔板为例），具体用量根据转染效率检测实验 确定； 3.RNA用量：10-30 pmol/孔（以24孔板为例），具体用量根据转染效率检测实 验确定； 4.转染试剂的用量：转染试剂说明书推荐了一个使用范围，具体用量根据转染 效率检测实验确定； 5.根据转染效率检测实验确定核酸的用量及转染试剂的用量（核酸与转染试剂 的比例关系），转染效率检测实验一般在24孔板中进行，其他格式的培养器皿请根据底面积的比例（表1）进行计算； 6.转染试剂使用前才从4℃中取出，取用前，先短暂离心（转速达到3000RPM 时即可停止），然后放在涡旋振荡器上点动混匀三次，每次持续1秒，混匀后短暂离心（转速达到3000RPM时即可停止），上述措施是为了混匀转染试剂，保证使用效果，使用后立即放回4℃保存； 7.核酸和转染试剂分别用Opti-MEM（这是专用的转染稀释培养基，如果没有 Opti-MEM，可以用细胞对应的基础培养基代替）稀释，稀释的核酸可以通过弹匀，吹打均匀，颠倒混匀或涡旋点动混匀（三次，每次持续1秒），稀释的转染试剂可以通过弹匀，颠倒混匀或涡旋点动混匀（三次，每次持续1秒），不可使用吹打均匀；混匀后均需短暂离心； 8.把稀释的核酸和稀释的转染试剂复合混匀时，应该把稀释的核酸加入稀释的 转染试剂中（顺序不可调转）；加入后立即进行（不要耽搁）弹匀或颠倒混匀（稀释的核酸和稀释的转染试剂一旦复合，转染复合物的形成立即启动，如果不及时混匀，所形成的转染复合物的效率就会很低），先不进行短暂离心，待所有的管子复合完毕后，在一起进行涡旋点动混匀三次，每次持续1秒，然后短暂离心； 9.转染复合物孵育形成时尽量避光室温或37℃放置；

蛋白质专用转染试剂

蛋白质专用转染试剂 ● 多肽及小蛋白（如组蛋白，~11 kDa ）， ● 大蛋白（如抗体，~150 kDa ） ● 多分子蛋白复合物（半乳糖苷酶四聚体，~465 kDa ） 将蛋白导入细胞可以用于蛋白－蛋白相互作用，蛋白运转，细胞周期，信号传导通路，细胞凋亡通路，转录因子介导的基因调节等研究。将蛋白直接转染到细胞里也是研究特定蛋白对哺乳动物细胞的影响的最为迅速的方法。Novagen 的ProteoJuice TM 和Stratagene 的 BioTrek TM 是目前市售产品中适用细胞品种较多，对于哺乳动物细胞毒性极小的两种经过广泛测试的高效蛋白转染试剂。 BioTrek TM 蛋白转染试剂 已成功转染的细胞：293 B16-F0，BHK-21，CHO-K1，COS-1，COS-7， CV-1， HeLa ，HeLa-S3，HepG2，Jurkat ， K562Ki-Ras 267 β1， MDCK ，NIH 3T3，P19 转染试剂冻干粉 β-半乳糖苷酶对照10 μg FITC 标记山羊IgG 对照10 ug 包装 货号 24rxn #204140 ProteoJuice 蛋白转染试剂 已成功转染的细胞：A549，COS-7，HepG2，MCF-7，PC12，BHK-21，CV-1，HEK-293，Neuro2A ，Raw 264.7，CHO-K1，HeLa L6，NIH-3T3 包装 货号 0.125 ml 71281-3 4 × 0.125 ml 71281-4 质谱法（MS ）是蛋白质组学中鉴定蛋白品种的核心技术。蛋白MS 分析需要将蛋白按特定要求消化成多肽，再利用软件得到其序列及特性信息。胰蛋白酶能特异性地从赖氨酸和精氨酸残基的羧基端进行切割，产生符MS 分析所需要大小的肽段，因此胰蛋白酶是MS 实验中的重要工具之一。 Stratagene 的MS 级胰蛋白酶 纯度极高，克服了天然胰蛋白酶和非MS 级的胰蛋白酶的主要缺限，成为MS 的必然之选： ● 决无自我消化之虞：不会干扰目的蛋白的分析 经过甲基化修饰，消化活性只会针对目的蛋白；更不会产生糜蛋白酶这种活性更广的副产物 ● 杜绝任何可能的糜蛋白酶活性干扰 特别经过TCPK 处理，解决了其它胰蛋白酶产品的主要质量问题 ● 专为MS 应用而设计 Stratagene 著名的QuikChange 定点突变试剂盒家族的新成员 QuikChange TM Multi 多点突变试剂盒 用QuikChange TM Multi 多点突变试剂盒可以在短短1天时间内完成克 隆在如何质粒上多达5个点的突变，而不是通常方法的几天甚至数周！ ● 简单、高效、1天完成多点突变的全新方法 ● 可以从任何质粒开始，完全没有任何前处理步骤（如：亚克隆） ● 每个突变点设计一条引物，可以使用简并引物，省钱省时 ● 决无意外突变 ● 提供高效XL-10 Gold 超级感受态细胞 第1步 生成突变链 进行温度循环： 1) 模板DNA 变性 2) 突变引物退火 (所有的引物结合于同一条链) 3) 引物延伸，并用QuikChange Multi enzyme TM 封闭缺刻 第2步 Dpn I 消化模板DNA 用Dpn I 消化甲基化和半甲基化DNA 第3步 转化 将突变产物ssDNA 转入XL10-Gold 超级感受态细胞 QuikChange TM Multi 多点突变试剂盒

细胞转染的操作步骤

细胞转染的操作步骤 转染，是将外源性基因导入细胞内的一种专门技术。随着基因与蛋白功能研究的深入，转染目前已成为实验室工作中经常涉及的基本方法。转染大致可分为物理介导、化学介导和生物介导三类途径。电穿孔法、显微注射和基因枪属于通过物理方法将基因导入细胞的范例；化学介导方法很多，如经典的磷酸钙共沉淀法、脂质体转染方法、和多种阳离子物质介导的技术；生物介导方法，有较为原始的原生质体转染，和现在比较多见的各种病毒介导的转染技术。红外碳硫仪理想细胞转染方法，应该具有转染效率高、细胞毒性小等优点。病毒介导的转染技术，是目前转染效率最高的方法，同时具有细胞毒性很低的优势。但是，病毒转染方法的准备程序复杂，常常对细胞类型有很强的选择性，在一般实验室中很难普及。其它物理和化学介导的转染方法，则各有其特点。 >需要指出的一点，无论采用哪种转染技术，要获得最优的转染结果，可能都需要对转染条件进行优化。影响转染效率的因素很多，从细胞类型、细胞培养条件和细胞生长状态，到转染方法的操作细节，都需要考虑。 一、细胞传代 1. 试验准备：200ul/1mlTip头各一盒（以上物品均需高压灭菌），酒精棉球，废液缸，试管架，微量移液器，记号笔，培养皿，离心管。 2. 弃掉培养皿中的培养基，用1ml的PBS溶液洗涤两次。 3. 用Tip头加入1ml Trypsin液，消化1分钟。用手轻拍培养瓶壁，观察到细胞完全从壁上脱落下来为止。 4. 加入1ml的含血清培养基终止反应。 5. 用Tip头多次吹吸，使细胞完全分散开。 6. 将培养液装入离心管中，1000rpm离心5min。 7. 用培养液重悬细胞，细胞计数后选择0.8X10⁶个细胞加入一个35mm培养皿。8. 将合适体积完全培养液加入离心管中，混匀细胞后轻轻加入培养皿中，使其均匀分布。 9. 将培养皿转入培养箱中培养，第二天转染。 二、细胞转染 1. 转染试剂的准备 ①将400ul去核酸酶水加入管中，震荡10秒钟，溶解脂状物。 ②震荡后将试剂放在－20摄氏度保存，使用前还需震荡。 2. 选择合适的混合比例（1：1－1：2/脂质体体积：DNA质量）来转染细胞。在一个转染管中加入合适体积的无血清培养基。加入合适质量的MyoD或者EGFP的DNA，震荡后在加入合适体积的转染试剂，再次震荡。 3. 将混合液在室温放置10―15分钟。 4. 吸去培养板中的培养基，用PBS或者无血清培养基清洗一次。 5. 加入混合液，将细胞放回培养箱中培养一个小时。 6. 到时后，红外碳硫仪根据细胞种类决定是否移除混合液，之后加入完全培养基继续培养24－48小时。三、第二次细胞传代1. 在转染后24小时，观察实验结果并记录绿色荧光蛋白表达情况。 2. 再次进行细胞传代，按照免疫染色合适的密度0.8X10 个细胞/35mm培养皿将细胞重新转入培养皿中。 3. 在正常条件下培养24小时后按照染色要求条件固定。

翻译好的罗氏公司Tunel试剂盒操作说明书

罗氏 (Roche)公司 Tunel 试剂盒操作说明书 (In situ cell death detection kit-POD法) 一、原理： TUNEL （TdT-mediated dUTP nick end labeling）细胞凋亡检测试剂盒 是用来检测组织细胞在凋亡早期过程中细胞核DNA 的断裂情况。其 原理是荧光素（ fluorescein）标记的 dUTP 在脱氧核糖核苷酸末端转移 酶（ TdT Enzyme）的作用下，可以连接到凋亡细胞中断裂 DNA 的 3’-OH 末端，并与连接辣根过氧化酶（HRP，horse-radish peroxidase）的荧光素抗体特异性结合，后者又与 HRP 底物二氨基联苯胺（DAB ） 反应产生很强的颜色反应（呈深棕色），特异准确地定位正在凋亡的细胞，因而在光学显微镜下即可观察凋亡细胞；由于正常的或正在增殖的 细胞几乎没有 DNA 断裂，因而没有 3‘-OH 形成，很少能够被染色。本 试剂盒适用于组织样本（石蜡包埋、冰冻和超薄切片）和细 胞样本（细胞涂片）在单细胞水平上的凋亡原位检测。还可应用于抗 肿瘤药的药效评价，以及通过双色法确定细胞死亡类型和分化阶段。 二、器材与试剂 器材：光学显微镜及其成像系统、小型染色缸、湿盒（塑料饭盒与纱 布）、塑料盖玻片或封口膜、吸管、各种规格的加样器及枪头等；试 剂：试剂盒含： 1 号（蓝盖） Enzyme Solution 酶溶液： TdT 10×、

2号（紫盖） Label Solution 标记液：荧光素标记的 dUTP 1×、 3号（棕瓶） Converter-POD:标记荧光素抗体的 HRP； 自备试剂： PBS、双蒸水、二甲苯、梯度乙醇（100、95、90、80、 70%）、 DAB 工作液（临用前配制， 5 μl 20 ×DAB+1 μL 30%H2O2+94 μl PBS）、 Proteinase K工作液（ 10-20 μg/ml in 10 mM Tris/HCl ，pH 7.4-8）或细胞通透液（0.1% Triton X-100 溶于 0.1% 柠檬酸钠，临用前配制）、 苏木素或甲基绿、 DNase 1（3000 U/ml– 3 U/ml in 50 mM Tris-HCl ， pH 7.5， 10 mM MgCl2 ，1 mg/ml BSA ）等。 三、实验步骤 操作流程图：制作石蜡切片→脱蜡、水合→细胞通透→加TUNEL 反 应液→加 converter-POD→与底物 DAB 反应显色→光学显微镜计数并拍照。 具体操作步骤（石蜡包埋切片的检测）： 1.用二甲苯浸洗 2 次，每次 5min； 2.用梯度乙醇（ 100、95、90、80、70%）各浸洗 1 次，每次 3min；注：上面两步是针对石蜡切片样本的处理 4.用 Proteinase K工作液处理组织 15-30 min 在 21–37°C（温度、时间、浓度均需摸索）如果凋亡细胞染色较弱时，可用高浓度的

转染试剂

自1978年William Linton 先生在美国威斯康辛州麦迪逊市（就是《廊桥遗梦》那里哦）创立Promega以来，今年已经是第26个年头了，也是Promega进驻中国的20周年――这个几乎可以说是国内生物技术最早的启蒙者之一的品牌非常了解国内科研经费来之不易，在进口品牌中以价格算可亲而广受欢迎。Promega的转染试剂产品由于市场定位较准确，获得的业内评价不错，尤其是在其价格经济实惠前提下，产品质量并没有因此打折扣（就是性价比高咯）。 1. siRNA转染试剂 CodeBreaker? siRNA转染试剂是Promega的专利配方产品，专门为有效转染siRNA而优化设计。这一试剂能有效促进siRNA转染哺乳动物细胞，促进基因沉默，而且毒性小，细胞死亡率低，比如转染CHO与HeLa细胞，使用CodeBreaker基因沉默率达到80%或更多，比起同类产品毒性小50%以上。这一产品操作简便，买来后即可使用，不用溶解。将CodeBreaker转染试剂与合适的siRNA二聚物混合后孵育几分钟，然后加到培养细胞即可。而且转染可在完全生长培养基中进行，不需要更换培养基或再加血清，简化了操纵步骤（见下）。CodeBreaker试剂适用的细胞有HeLa、HEK293、293T、CHO 和 3T3细胞等。价格1800/0.4ml，以24孔板为例，按照推荐剂量可以可以做200次，6孔板大约可用40次左右。Day One：细胞铺板 (in complete growth medium). Day Two 1. 将CodeBreaker? Reagent加到无血清培养基中，混合均匀，室温孵育15—20分钟。。 2. 制成复合物：加入siRNA到第二步中，轻微混合。室温孵育15—20分钟。 3. 然后与细胞混合，37°C培育24—72小时，OK，检测吧。 2. DNA转染试剂 Transfast? 是一种特殊的脂质体转染试剂，由阳离子脂类（+） -N,N[bis(2-hydroxyethyl)]-N-methyl-N-[2,3-di(tetradecanoyloxy)propyl]和中性脂类DOPE（用于加强转染能力）组成。TransFast试剂是干脂膜，一旦水化后就形成多层脂质体，因此也就具有更多优势，尤其表现在可以传递多种生物大分子－－小的从寡聚核苷酸，到质

Hieff TransTM脂质体核酸转染试剂说明书

Hieff Trans TM脂质体核酸转染试剂说明书 产品描述 Hieff Trans TM脂质体核酸转染试剂是一种多用途的脂质体转染试剂，适用于DNA、RNA 和寡核苷酸的转染，对大多数真核细胞具有很高的转染效率。其独特的配方使其可直接加入培养基中，血清的存在不会影响转染效率，这样可以减少去除血清对细胞的损伤。转染后不需要除去核酸-Hieff Trans TM复合物或更换新鲜培养基，也可在4～6小时后除去。 Hieff Trans TM以无菌的液体形式提供。通常情况下对于 24 孔板转染，每次用1.5μl左右，则1ml Hieff Trans TM约可做660次转染；对于6孔板，每次用6μl左右，则1ml Hieff Trans TM约可做160 次转染； 运输与保存方法 冰袋（wet ice）运输。产品4oC保存，一年有效。不可冷冻！ 注意事项 1）Hieff Trans TM脂质体核酸转染试剂要求细胞铺板密度较高，以90%-95%为佳，这有助于减少阳离子脂质体细胞毒性造成的影响；如果你研究的基因要求比较长的表达时间，比如细胞周期相关基因，或者细胞表面蛋白，最好选择细胞铺板密度要求较低的转染试剂，不适合用脂质体核酸转染试剂。 2）Hieff Trans TM脂质体核酸转染试剂可用于有血清培养基的转染，并且转染前后不需要换培养基。但是，制备转染复合物时要求用无血清培养基稀释DNA和转染试剂，因为血清会影响复合物的形成。另外，要检测所用的无血清培养基与脂质体核酸转染试剂的相容性，已知CD293, SFMII, VP-SFM 就不相容。 3）转染的时候培养基中不能添加抗生素。 4）使用高纯度的DNA或RNA有助于获得较高的转染效率，质粒中的内毒素是转染的大敌。 5）阳离子脂质体应该在4度保存，要注意避免多次反复长时间开盖，因为可能会导致脂质体氧化而影响转染效率。 6）初次使用应优化DNA浓度和阳离子脂质体试剂量以得到最大的转染效率。DNA 和转染试剂的比例，通常推荐是1:2-1:3，比如24孔板内接种0.5-2×105个细胞，使用0.5 μg DNA 和1-1.5 μl 转染试剂。通过调整DNA/Hieff Trans TM脂质体核酸转染试剂比例优化转染效率，保证细胞密度大于90%，DNA（μg）: Hieff Trans TM（μl）比值在1：0.5-1：5。