徒手切片的基本要求
、目的与要求
1、学习并掌握临时装片的制作方法和步骤。
2、学习徒手切片技术。
3、了解细胞基本结构和厚角组织的特点。
二、材料和用品
1、自备材料：解剖器（镊子、解剖针、单面刀片或双面刀片）；洋葱鳞茎、青红椒、芹菜叶柄、女贞叶片或其它植物的叶片、胡萝卜块等。
2、其它材料和用品：显微镜、盖玻片、载玻片、纱布、蒸馏水、吸水纸、10%甘油水
溶液、50%甘油水溶液、纯甘油、碘—碘化钾稀溶液、培养皿、吸管。
三、实验内容
1、临时装片的制作方法
2、徒手切片方法
四、实验方法要观察、研究植物细胞、组织和器官的微细结构，以及一些很微小的藻、菌植物等，这些用肉眼是无法看到的，必须借助于显微镜来观察，要用显微镜观察，首先必须制成各种制片，放在显微镜下才能观察。制片的方法很多，这里着重介绍临时装片法和徒手切片的方法技术。
1、临时装片的制作方法临时装片法是用少量的新鲜植物材料，如单个细胞、薄的表皮或切成的薄片以及其它小的或扁平的材料（如丝状或叶状的藻类、菌类、蕨类的原叶体和孢子囊、纤细的苔藓植物等等），把这些材料放在载玻片的水滴中，再盖上盖玻片做成玻片标本的方法。这种方法制成的标本，可以保持材料的生活状态和天然的色彩。此法一般多做为临时观察使用，也可根据需要选择适宜的染料染色，制成永久制片或用某些化学试剂作组织化学反应。
临时装片的制作方法和步骤如下：
（1）清洁玻片：将盖玻片和载玻片用清水洗净，再用纱布擦干，擦玻片时用左手食指和拇指夹住玻片的两边，右手食指和拇指包住纱布，同时擦到的玻片的两面，用力要均匀。注意：由于盖玻片很薄，所以擦盖玻片时要特别小心，用力要轻，右手食指和拇指要轻轻捻动，以免把盖玻片捏破。
（2）放置材料：先将载玻片平放在桌面上，于载玻片中央滴一滴蒸馏水或稀甘油，然后用镊子镊取或吸管吸取少量要观察的材料（如洋葱鳞叶表皮或水绵……），放在载玻
片中央的水滴或甘油中，再用镊子和解剖针将材料展平或分散开，勿使材料折叠或干燥。
（3）加盖玻片及其它处理：为了避免产生气泡，盖盖玻片时，应该以大拇指和食指拿着盖玻片的两个角或用镊子夹住其一端，使盖玻片的一边先与载玻片上的水滴边缘接触，而后徐徐放下另一边，当盖玻片被夹持的一边将贴近载玻片时，则可放手或抽出镊子，使其自然轻轻复盖，这样可以使盖玻片下的空气挤出，免生气泡。注意载玻片中央的液滴要适中，既要使其充满盖玻片，又要不会使盖玻片浮动或使液滴从盖片下外溢，假如水不够，可用吸管小心地从盖玻片的边上再滴入一小滴水，使它和盖玻片下面的水相接触；如果水太多，溢出盖玻片，则可用吸水纸吸去，盖玻片的上面，一定不能被水浸湿，如果发生这种情况，应该小心地取下盖玻片，擦干以后，再按上述方法重新盖上。这样做好的装片，便可在显微镜下进行观察。根据需要，临时水装片做好后还可以进行简单的染色（例如用碘—碘化钾或番红等来染色），其方法是直接在盖玻片的一侧加一滴染液，用吸水纸条在盖玻片的另一侧吸水，引入染液，以使盖片下的材料染上色。
注意：临时装片根据需要可以水封片或以甘油封片，凡用以临时观察，不欲久留的装片均可用水封片，制成水装片；需要提前半天或一天就备出的装片或者观察后须保留一定时间的装片，为防止水分蒸发，出现材料收缩现象，则适宜用甘油封片，制成甘油封片，用甘油封片时，保留时间短者，可用10% 甘油水溶液，保留时间长者则须从10%甘油中再转入50%甘油水溶液中或在此液中浸一小时后再转入纯甘油中封片。
用甘油做临时装
片的优点是不仅封片保留时间长，且有加强材料透明的作用。
本实验以洋葱(或大葱)鳞茎内表皮为材料，通过撕皮法做临时装片，用碘—碘化钾做染色剂，在观察做片效果时同时了解细胞的基本结构，如细胞壁、细胞质、液泡、细胞核等。
2、徒手切片法
徒手切片法简称手切片法，即手拿刀片将材料切成能在显微镜下观察其内部结构的薄片的方法。是植物形态解剖学实验及研究中最简单和最常用的方法，也是最重要的基本技能之一。徒手切片的材料一般是新鲜的，有时也可用预先固定好的。这种切片方法虽然有其缺点，如：不易做到将整个切面切得薄而完整，往往切出的片子厚薄不一；过软过硬的材料比较难切。但其优点很多，如：工具简单，只要有一把锋利的剃刀或双面刀片就够了；方法简便，容易学会；节省时间，只要有现成材料，可以立刻用刀片切成薄片，当即观察，即便要染色，时间也不长；还有一个独特的优点就是可以看到组织细胞内的自然结构和天然颜色。徒手切片的方法见图2—2。
一般材料的徒手切片方法
(1) 将材料切成长约2?3厘米的小段，削平切面。
( 2)左手大拇指和食指的第一关节指弯夹住材料，使之固定不动摇。为防止刀伤，拇指应略低于食指，并使材料上端超出手指2? 3 毫米，不可高出过多，否则切片时材料容易动摇，也不容易切薄。
(3)右手大拇指和食指捏住刀片的右下角 (刀片要非常锋利，双面刀片必须是新用的) 刀口向内，并与材料切面平行，切片前先将材料和刀口上蘸些水，使之切时滑润。
( 4 )切的方法，以刀口自外侧左前方向内侧右后方拉切，这样可以边切边看清切片的进展情况，同时切起来也比较顺手。切片时只用臂力而不要用腕力及握刀指关节的力量，左手保持不动，不要两手同时拉动，两手不要紧靠身体或压在桌子上，并且动作要敏捷，材料要一次切下，切忌中途停顿或推前拖后作“拉锯”式切割。关键是要切得薄而平。如此连续切片，切下数片后，用湿毛笔将切片轻轻移入培养皿的清水中备用。
( 5)在切片过程中刀口和材料要不断蘸水，以保持刀口锋利和避免材料失水变形。所切的材料和刀片一定要保持水平方向，不要切斜，如果切斜，即使很薄，但由于细胞切面偏斜，同样影响观察。
( 6 )切下足够多的切片后，挑选薄而平的切片做成临时装片供镜检，必要时也可以制成永久装片。挑选切片时，不一定要材料切得很完整，只要切得很薄就行，有时只要有一小部分就可以看清其结构了，如玉米茎横切片，只要有四分之一或者更少的小片，就可以看出内外维管束的大小、多少及每个维管束的构造。因此切下的切片不是每一片都适用，也不是只有全面切得薄的才能用，要根据需要进行选择，一次可多选几片置于载玻片上，制成临时装片，通过镜检再进一步选择理想的材料用以观察。
柔软和坚硬材料的徒手切片方法过于柔软的材料，如植物的叶片或其他薄而微小的材料，难以直接执握手切，则须夹入坚固而易切的夹持物中切。常用的夹持物有胡萝卜根(用胡萝卜时可将中间硬心即木质部切去用其余部分) 、土豆块茎、接骨木的髓部及通草髓等。但须要注意的是通草髓遇水既变软，可将其保存在酒精中备用。切前先将夹持物切成长方小体，上端与纵轴垂直面削平，若被切材料属叶状体一类的薄片，将夹持物从上至下纵切一缝，材料夹于其中即可，如不是叶状体，即将材料夹于其中，或根据材料不同在缝里挖一个和材料形状相似、大小相同的凹陷，把材料夹在凹陷里。然后用手握住夹持物，采用上述方法将夹持物和其中的材料一齐切成薄片，除去夹持物的薄片，便得到材料的薄片。
坚硬的材料要经软化处理后再切。软化的方法：一种是对于比较硬的材料，先把材料切成小块，后进行煮沸，经3?4小时煮沸后，再浸入软化剂（50%酒精：甘油=1 : 1）中数天至更长些时间，而后再切。另一种，对于已干或含有矿物质，比较更硬的材料，要先在15%氢氟酸的水溶液中浸渍数周，充分浸洗后，再置入甘油里软化后再切。本实验主要以青红椒、芹菜叶柄为材料做徒手切片练习。并通过青红椒切片结果装镜观察来了解细胞基本结构中叶绿体和有色体；（提示：青椒切片细胞内绿色的小颗粒为叶绿体，红椒切片细胞内红色的小颗粒为有色体。）通过芹菜叶柄切片结果装镜观察来了解厚角组织的结构特点。（提示：芹菜切片在显微镜下观察，在棱角处稍靠内方有一团具有珠光色彩的组织即为厚角组织。在高倍镜下观察，可见其细胞壁厚为角隅处，其细胞壁的性质是初生壁性质，主要成分为纤维素，有强烈的吸水性，故显微镜下有珠光色彩。）
五、综合分析
1 、临时装片和徒手切片的特点和适用范围各是什么？
2、做临时装片盖盖玻片时应注意什么？
3、徒手切片法切取柔软和坚硬材料时应怎样进行？
六、实验报告自选材料制做几种不同材料的临时装片和徒手切片，写出你所做装片的步骤和要点。
学案六实验一可溶性还原糖脂肪蛋白质的鉴定
一、解读两纲
1. 识记鉴定实验所用的材料，懂得选材的要求。
2. 掌握实验原理、步骤，理解实验目的、方法。
3. 学会制备生物组织样液，正确选用鉴定试剂，并能按规范的要求操作，独立完成鉴定工作。
4. 明确观察对象，正确说出鉴定过程中样液的颜色变化，并能用准确的语言解释实验现象，作出实验结论。
5. 能熟练制作徒手切片，临时装片和使用低倍显微镜，了解高倍显微镜的使用方法。
6. 具备验证相关生物学事实的能力，并能对实验现象和结果进行解释、分析和处理；能对一些生物学问题进行初步的探究性研究。
二、高考热线
1. 题型以选择题为主，也可能以简答题出现，重点是以对比的方式考查相关实验的异同点。
2. 以教材实验为依据，设置实验设计题是今后考查的重点，如“设计实验证明淀粉酶是蛋白质”，就是依据教材中的实验3 的原理和步骤。
三、学法指点
1. 运用对比的方法认识三种物质的鉴定原理、过程及注意事项。
2. 对比三种物质鉴定过程中的相同点和不同点，重点掌握试剂使用上的区别。
3. 根据所学的原理鉴定类似物质，设计相应的实验程序。
四、教材梳理
（一）实验原理
生物组织中含有可溶性还原糖（如_____________ 、 ________ 、________ ）、脂肪、蛋白质等化
学成分，可分别与某些化学试剂作用产生特定的_______________________ 。
（1）____________________ 可溶性还原糖+ 试剂一-砖红色沉淀
可溶性还原糖+班氏糖定性试剂一-> ________________
（2）____________________ 脂肪+ 染液一-染成橘黄色
脂肪+苏丹W染液---------------- 染成 __________
（3）____________________ 蛋白质+ 试剂一-溶液呈紫色
（二）实验目的
1. 初步掌握鉴定可溶性还原糖、脂肪、蛋白质的基本方法。
（三）实验材料
（四）方法步骤
1. 可溶性还原糖的鉴定
（1）制备组织样液：苹果切块、研磨、 ____________ 。
（2）鉴定组织样液：1支试管+2mL _______________ +2mL _______________ 振荡试管，（溶液
_______ 色?）, _________ 2min 左右，观察溶液颜色变化。（__________ 色宀棕色宀 __________ 色）。
2. 脂肪的鉴定
（1）切片制作：用花生子叶作徒手切片。
（2）_______________________________ 染色：1块载玻片+切片+ 3滴__________________ 染液，
3min后吸去染液+ 2滴50% ___________________
溶液去浮色，吸去后+ 2滴_______________ ，盖盖玻片。
（3）镜检鉴定：先用低倍镜观察，找到子叶最薄处，再用高倍镜观察。（圆形的脂肪颗粒
为_____ 色）。
3. 蛋白质的鉴定
（1）制备样液：大豆切片、___________、_________ 。
（2）鉴定：1支试管+2mL黄豆组织样液+2mL __________________ ，振荡试管（溶液_______
色），+4滴 ________________ , ________ 试管，观察溶液颜色变化。（_____ 色T________ 色T
_______ 色）。
（五）结论与讨论
1. 结论：从斐林试剂与苹果样液作用、苏丹III染液与花生种子作用、双缩脲试剂与大
豆样液作用的颜色变化可以得出：
2. _________________________________________________________ 讨论鉴定依据。因为某些化学试剂与生物组织中的有关 ____________________________________________________ 发生一定的化学反
应，产生有固定颜色的新化合物。故可根据待检物与某些化学试剂反应的 _____________ ,如
橘黄色、__________ 色、________ 色等，鉴定生物组织中含有 ___________ 、可溶还原糖和
五、疑难精析
1 ?生物组织中的还原糖是指分子结构中含有还原性基团（如游离醛基或酮基）的糖，如
葡萄糖、麦芽糖、果糖，淀粉、蔗糖不具有还原性，斐林试剂只能检验可溶性还原糖的存在，而不能鉴定可溶性非还原糖或不溶性糖。
2?可溶性还原糖鉴定实验的选材原则。选用可溶性还原糖含量较高的生物组织，而且组织的颜色较浅，或近
于白色。常用的植物组织是：苹果、梨、白色甘蓝叶、白萝卜。双子叶植物光合作用的主要产物为淀粉，其叶不理
想。有些单子叶植物，如韭菜、鸢尾等，其叶内含有大量的可溶性单糖，但由于叶片
中叶绿素颜色较深，影响鉴定时实验现象的观察，也
不宜作实验材料。
3?可溶性还原糖鉴定实验的关键性的步骤在于斐林试剂现用现配及用量。很不稳定，故应将组成斐林试剂的
甲液(0.1g /mL的NaOH溶液)和乙液(0.05g /mL的CuS04溶液)分别配制、储存；使用时，再临时配制，将4?5滴乙液滴入2mL甲液中，配完混合均匀后［得到
淡蓝色的Cu(OH)2沉淀的悬浊液］立即使用。如果过早混合会产生Cu(OH)2沉淀，加入到组
织样液中并加热时会产生黑色CuO沉淀。而临时混合所得斐林试剂立即用于实验，即可使新
制的Cu(OH)2作氧化剂与可溶性还原糖发生氧化-还原反应，生成砖红色的CUO沉淀。溶液
的变化过程：淡蓝色T棕色T砖红色沉淀。
4?在可溶性还原糖的鉴定中，在对盛有组织样液与斐林试剂混合物的试管直接用酒精灯加热易破，因为试管
受热不均匀，若要避免此现象产生应改用水浴加热。此时试管底部不
要触及烧杯底部，试管口不要朝向实验者，以免溶液沸腾时冲出试管造成烫伤。
5?双缩脲试剂并不是双缩脲分子。所谓双缩脲是由两分子尿素经脱氨缩合而成的化合物。该化合物在碱性溶
液中能与CuSO4反应产生紫色络合物，此反应称双缩脲反应。蛋白质
分子中含有许多与双缩脲结构相似的肽键，因此也能起双缩脲反应。特别要提醒学生的是实
验桌上两瓶不同浓度的CuS0 4溶液，避免拿错。
6?蛋白质鉴定实验中，最好选用富含蛋白质的生物组织，植物材料常用的是大豆，动物材料常用的是鸡蛋。其关键性步骤在于先加双缩脲试剂 A (O.1g/mLNaOH溶液)再加双缩脲
试剂B(O.O1g/mLCuSO4溶液)。如果用鸡蛋白稀释液，则浓度不宜过大，以免实验后粘住试管壁，不易洗净。
7. 脂肪的鉴定实验中，实验材料最好选用富含脂肪的种子，其关键性步骤在于子叶要削成理想薄片。为了作好徒手切片，种子浸泡的时间不宜过长。也可改成刮取种子子叶泥制作临时装片，易做，效果又好。
需留一部分样液，以便与鉴定后样液颜色变化作对比。
例1用下列实验材料做特定实验，从理论上讲能否成功？说明依据的道理。
(1) 用韭菜叶片做可溶性还原糖的鉴定实验；
(2) 用蓖麻种子做脂肪鉴定实验；
(3) 用卵白做蛋白质鉴定实验。
[ 解析 ] 此题是要求根据课本实验原理进行拓展和应用， 这也是近几年高考的一个趋势。 韭菜在进行光合作用时并不能将光合作用的产物葡萄糖转变成淀粉， 因此叶内含有大量的可 溶性还原糖，但是， 由于叶片中叶绿素含量较多， 绿色较深， 对于鉴定时的颜色反应起着掩 盖作用， 导致实验现象不明显， 因此不宜用这些单子叶植物作此实验材料； 后两个实验材料 从理论上说是可行的。
答案： (1) 用韭菜叶片做还原糖实验不能成功， 因为叶片内虽然含有大量可溶性还原糖， 但叶片中叶绿素含
量较多，颜色较深，对鉴定时的颜色反应起着遮盖作用； (2) 若用蓖麻种 子做脂肪鉴定实验， 从理论上说可以成
功，因为该种子含较多的脂肪， 种子也比较大， 便于 进行徒手切片； (3) 由于卵白中含有大量的蛋白质，从理论上讲做蛋白质鉴定实验是会成功 的。
六、趁热打铁
(一)选择题 1．将面团包在纱布中在清水中搓洗，鉴定黏留在纱布上的黏稠物质和洗出的白浆用的 试剂分别是
( )
A.
碘液、苏丹川溶液 B .双缩脲试剂、碘液 C.亚甲基蓝溶液、苏丹川
D .碘液、斐林试剂 2.
蛋白质的鉴定时，事先留出一些黄豆组织样液的目的是 ( )
A. 与反应后混合液的颜色做对比 B .失败后重做一遍 C. 鉴定可溶性还原糖用 D. 留下次实验用
3.
用斐林试剂鉴定可溶性还原糖时，溶液的颜色变化过程为 ( )
A.
浅蓝色T 棕色T 砖红色 B .无色T 浅蓝色T 棕色 C.砖红色T 浅蓝色T 棕色
D. 棕色T 绿色T 无色 4. 在鉴定可溶性糖的实验中，对试管中的溶液进行加热时，操作不正确的是 ( )
A. 将这支试管放进盛开水的大烧杯中 B .试管底部不要触及烧杯底部 C. 试管口不要朝向实验者 D.
试管底部紧贴烧杯底部 5?现有如下实验材料：①西瓜汁 ②菜籽 ③豆浆④草莓果实 ⑤花生仁 ⑥鸡蛋清,
A. 青苹果汁含有淀粉，不含有糖类 B .熟苹果汁含有糖类，不含有淀粉
C .苹果成熟时，淀粉水解成单糖 D. 苹果成熟时，单糖合成淀粉
7. 下列关于生物组织中三大有机物的鉴定操作步骤，正确的是
( )
A. 用于鉴定可溶性还原糖的斐林试剂，可直接用于蛋白质的鉴定
B .脂肪的鉴定需要用显微镜才能看到被染成橘黄色脂肪滴
C. 鉴定可溶性还原糖时，要加入斐林试剂甲液摇均后再加入乙液
D. 用于鉴定蛋白质的双缩脲试剂
A 液与
B 液要混合均匀后，再加入含样品的试管中,
且必须现配现用 &某同学在显微镜下观察被苏丹川染液染色后的花生种子子叶切片，当转动细准焦螺 旋调焦距时，有一部分细胞看得很清楚，另一部分细胞较模糊，这是由于
()
A. 反光镜没调好 B .标本切得厚薄不均匀 它们与斐林试剂作用呈砖红色、
验材料分别为 ( )
与苏丹川试剂作用呈橘黄色、与双缩脲试剂作用呈紫色的实 A.①④、②⑤、⑤⑥ B .①④、②⑤、③⑥
C.①④、②③、⑤⑥ D .②④、③⑤、③⑥ 6. 青苹果汁遇碘液显兰色， 熟苹果汁能与斐林试剂作用产生砖红色沉淀，
这说明 ( )
9?可溶性还原糖的鉴定中，制备生物组织样液时加入少许石英砂，其目的是 () A.研磨充分 B.
防止糖被破坏 C ?防止反应 D.无作用 10. 在过氧化氢酶溶液中加入双缩脲试剂，其结果应是 A.产生气泡 B.溶液呈紫色
C. 溶液呈蓝色
D. 11. 双缩脲试剂可以鉴定蛋白质是因为 A.蛋白质都有肽键 B.
蛋白质都有氨基酸 C.蛋白质都有羧基
D. 蛋白质都有氨基 12.
(多选)下列物质用斐林试剂检测时可能出现砖红色沉淀的是 ()
A.葡萄糖 B .果糖 C
.麦芽糖 D .淀粉 13. (多选)下列各组中前项为所鉴定的物质，
中项为所使用试剂，后项为所产生的颜色。 正确的是() A.葡萄糖、斐林试剂、橘黄色 B.脂肪、苏丹川染液、砖红色
C.蛋白质、双缩脲试剂、紫色
D.淀粉、碘液、蓝色
二、非选择题 14. 做“生物组织中可溶性还原糖、脂肪、蛋白质的鉴定”实验时，需根据实验需要选
(2) 小麦种子不如花生种子更适合用来鉴定脂肪，这是因为
。但小麦种子中糖类化合物 含量很高，却 不适合用来鉴定 ，这是因为
15?在做“可溶性还原糖的鉴定”实验时 ：
(1)_________________________________ 所用斐林试剂甲液的质量浓度为 __ g /mL ,乙液的质量浓度为 ______________________________________________ g/mL ,如何用这
两种溶液配制斐林试剂(简要步
(2) 斐林试剂甲液与乙液混合后产生 _______________ 色沉淀，它与葡萄糖在加热条件下发生化
学反应，产生 __________ 色沉淀。
(3) 请解释为什么斐林试剂要现配现用，不能放置太久
(4)___________________________________________________________ 做此实验时，试管直接用酒精灯加热易破，其原因是 ______________________________________________________ ，若要避免此现
象产生应改用 _____________________ 。
16. _________ 用苹果和黄豆做实验材料时， 都需将其研磨碎，在研磨时加入少量石英砂的作用是 ;在研磨后二者都需要对研磨液进行过滤，过滤的目的是除去 ，在过滤中为什么只用一层纱布，不用滤
纸? _________________________________________________________________________________ 。
17. (设计实验，论证结论)请根据下列材料和实验原理，设计一个证明淀粉酶是蛋白 质的实验。
(1) 实验器材：鸡蛋、人的唾液、清水、 0.1g/mLNaOH 溶液、0.01g/mLCuS04溶液、小 烧杯、玻璃棒、试管和滴瓶。
(2) 实验原理：鸡蛋的蛋清主要成分是蛋白质， 在碱性条件下，蛋白质与CuS04反应产
生紫色物质，即双缩脲反应。如通过实验再证明淀粉酶能发生双缩脲反应，
即可证明淀粉酶 C.显微镜物镜损坏
D .细准焦螺旋未调好 ( 产生砖红色沉淀
是蛋白质。
(3) 实验步骤：
第一步：制备蛋清液。取鸡蛋一个，打破蛋壳(不破坏蛋黄) ，取少许蛋清注入小烧杯
中，加入30mL清水，用玻璃棒搅拌均匀备用。
第二步：
O
第三步：
(4) 实验结果:
(5) 结果分析:
O
还原糖、脂肪、蛋白质的鉴定
一、实验成功的关键及注意事项
1?实验成功的关键在于实验材料的选择。
(1) 可溶性还原糖的鉴定实验中，最理想的实验材料是含糖量较高的生物组织(或器官)，而且
组织的颜色较浅，或近于白色的。经试验比较，颜色反应的明显程度依次为苹果、梨、白色甘蓝叶、白萝卜。
(2) 脂肪的鉴定实验中，实验材料最好选用富含脂肪的种子，且徒手切片要成功。
(3) 蛋白质的鉴定实验，最好选用富含蛋白质的生物组织，植物材料常用的是大豆，动物材料常用的是鸡蛋。2?注意事项：
(1)斐林试剂很不稳定，故应将组成斐林试剂的甲液(0.1g/mL的NaOH溶液)和乙液
(0.05g/mL的CuSO 4溶液)分别配制、储存，使用时，再临时配制，将4?5滴乙液滴入2mL 甲液中，配完后立即使用。
⑵双缩脲试剂的使用，应先加试剂A(0.1g/mL的NaOH溶液)，造成碱性的反应环境，再加
试剂B(0.01g/mL 的CuSO 4 溶液)。
(3) 在鉴定可溶性糖的实验中，对试管中的溶液进行加热时，试管底部不要触及烧杯底部，另外，试管口不要朝向实验者，以免沸腾的溶液冲出试管，造成烫伤。
（4）在蛋白质的鉴定实验中，若用蛋白质作实验材料，必须稀释，以免实验后粘住试管，不易洗刷。
（5）在鉴定脂肪的实验中，若用花生种子
作实验材料，必须提前浸泡3?4小时，浸泡时间短了，不容易切片，浸泡时间过长，则组织太软，切下的薄片不易成形，染色时间不宜过长。
二、实验检测
（一）选择题
1?可用于鉴定生物组织中可溶性还原糖的试剂是（）
A.斐林试剂
B.双缩脲试剂
C.苏丹川染液
D.苏丹W染液
2?对斐林试剂和双缩脲试剂的配方，叙述不正确的是（）
A. 都含有NaOH溶液和CuSO 4溶液
B. 斐林试剂的配制是将4?5滴0.05g/mL的CuSO 4溶液滴入2mL 0.1g/mL的NaOH溶液中即成
C. 双缩脲试剂是将3?4滴0.01g/mL的CuSO 4溶液滴入2mL 0.1g/mL的NaOH溶液中混合而成的
D. 双缩脲试剂含有两种试剂：质量浓度为0.1g/mL的NaOH溶液和质量浓度为0.01g/mL的CuSO 4溶液
*3.用斐林试剂鉴定可溶性还原糖时，溶液颜色的变化过程为（）
A.无色T砖红色（沉淀）
B.浅蓝色T砖红色（沉淀）
C.浅蓝色T蓝色T砖红色（沉淀）
D.浅蓝色T棕色T砖红色（沉淀）
4?在用双缩脲试剂鉴定蛋白质实验时，正确的操作是（）
A. 2mL蛋白稀释液先加0.1g/mL的NaOH，再加3?4滴0.01g/mL的CuSO 4溶液
B. 2mL蛋白稀释液先加3?4滴0.01g/mL的CuSO 4溶液，再加0.1g/mL的NaOH溶液
C. 2mL蛋白稀释液，同时加入0.1g/mL的NaOH和0.01g/mL的CuSO 4混合液
D. 在NaOH和CuSO 4混合液中加入2mL蛋白稀释液
5?用苏丹川染液对脂肪组织进行染色时，可用来冲洗浮色的药品是（）
A.HCI
B.H 2 0
C.50%的酒精
D.无水酒精
6?下列物质中，能被苏丹W染液染成红色的是（）
A.马铃薯块茎
B.浸软的蓖麻种子
C.蛋清液
D.苹果
7?下列哪个实验用到显微镜（）
A.可溶性还原糖的鉴定
B.蛋白质的鉴定
C.脂肪的鉴定
D.淀粉的鉴定
8?下列哪组试剂在使用过程中，必须经过加热（）
A. 斐林试剂鉴定可溶性还原糖的过程中
B. 苏丹川和苏丹W染液在鉴定动物组织中的脂肪时
C. 双缩脲试剂鉴定蛋白质时
D. 碘化钾溶液鉴定淀粉时
二、简答题
9?某些单子叶植物，如韭菜、鸢尾的叶子内含有大量的可溶性还原糖，但这些单子叶植物的叶子不宜作实验材料，原因是。
实验指导
实验一
1.A
2.C
3.D
4.A
5.C
6.B
7.C
8.A
9?这些叶子的颜色较深，对还原性糖与斐林试剂的颜色反应起遮蔽作用
10?蛋白质只有在碱性环境中才能与CuSO 4发生紫色反应，否则紫色反应会被Cu（OH）2遮
蔽11?苏丹川染液易溶解于酒精中
石蜡切片的制作
说明 石蜡切片法包括取材、固定、洗涤和脱水、透明、浸蜡、包埋、切片与粘片、脱蜡、染色、脱水、透明、封片等步骤。一般的组织从取材固定到封片制成玻片标本需要数日，但标本可以长期保存使用，为永久性显微玻片标本。文档来自于网络搜索 取材 应根据要求选取材料来源及部位。例如植物细胞有丝分裂多选取洋葱根尖，细胞分裂快又便于切取；猪的肝小叶边界清晰明确；耳蜗以豚鼠的内耳易于定位和剥离。材料必须新鲜，搁置时间过久则产生蛋白质分解变性，导致细胞自溶及细菌的滋生，而不能反映组织活体时的形态结构。文档来自于网络搜索 固定 用适当的化学药液——固定液浸渍切成小块的新鲜材料，迅速凝固或沉淀细胞和组织中的物质成分、终止细胞的一切代谢过程、防止细胞自溶或组织变化，尽可能保持其活体时的结构。固定能使组织硬化，有利于切片的进行，而且也有媒浸作用，有利于组织着色。固定液的种类很多，其对组织的硬化收缩程度以及组织内蛋白质、脂肪、糖类等物质的作用各不相同。例如纯酒精可固定肝糖而能溶解脂肪，甲醛能固定一般组织，但溶解肝糖和色素。固定液可分为单一固定液及混合固定液。前者有甲醛（蚁醛、福尔马林）、酒精、醋酸或冰醋酸、升汞、锇酸（四氧化锇）、重铬酸钾及苦味酸等，单一固定液不能固定细胞中的所有成分；混合固定液可以互补不足，常用的混合固定液有Bouin氏液、Zenker氏液、FAA液、Carnoy氏液、SuSa 液（配方见有关技术书籍）。因此，应根据所要显示的内容来选择适宜的固定液。10％福尔马林（4％甲醛）或10％磷酸缓冲福尔马林是病理切片常规使用的固定液，不仅适用于常规HE（苏木精-伊红）染色，还可以用于组织学有关的其他技术的切片染色。固定液的用量通常为材料块的20倍左右，固定时间则根据材料块的大小及松密程度以及固定液的穿透速度而定，可以从1小时至数天，通常为数小时至24小时。文档来自于网络搜索 洗涤与脱水 固定后的组织材料需除去留在组织内的固定液及其结晶沉淀，否则会影响以后的染色效果。多数用流水冲洗；使用含有苦味酸的固定液固定的则需用酒精多次浸洗；如果组织经酒精或酒精混合液固定，则不必洗涤，可直接进行脱水。固定后或洗涤后的组织内充满水分，如不除去水分就无法进行以后的透明、浸蜡与包埋，因为透明剂多数是苯类，苯类和石蜡均不能与水相
徒手切片制作方法(借鉴材料)
一、目的要求 徒手切片法是观察植物内部结构的简易制片法。所需的仪器用具简单，药品经济，操作方便，费时较短，且易于保持材料的天然色泽和活体结构，必要时，也可经过脱水、染色制成永久制片而保存。但是徒手制片对于体积过小，质地太软或太硬的材料，则难于处理，同时，也不能制成连续切片，这些均为不足之处。 二、材料、用品 1、用品 显微镜、剃头刀（或刀片）、毛笔、镊子、培养皿、染色皿（或小酒杯）、吸管、载玻片、盖玻片、吸水纸。1%番红水溶液（或50%酒精溶液），0.5%固绿95%酒精溶液，70%、85%、95%酒精，纯酒精、二甲苯和中性树胶或加拿大树胶等。 三、方法与步骤 1、选材 所用材料不宜太软或太硬。一般植物幼嫩的根茎或一些植物的叶片、叶柄等均可使用此法。质地较薄的材料，如叶片，可沿主脉两侧切成宽约5～6毫米，长1～1.5厘米的小块，夹在夹持物(如胡萝卜根或马铃薯块茎等)中进行切片。使用夹持物时，先将夹持物的中央切成两
半，然后将切好的材料夹入，合拢夹持物进行切片，也可将叶片卷成筒状再切。 2、切片 （1）盛清洁的水于培养皿中。然后用左手的拇指及食指、中指夹住材料，拇指的位置要低于食指，并使材料的上端伸出指外2～3毫米，材料的切面必须保持水平方向。 （2）右手执刀(剃头刀或刀片)，平放在左手食指之上，刀口向内，自左前方向右后方滑行切割，要用臂力，不要用腕力，不可向内平切。 (3)拉切的速度宜快，一次切下，不要中途停顿或似拉锯式，以免损伤材料或切得不平。 (4) 切片过程中，如发现由于用力不均而使材料表面倾斜时，必须立即削平。 (5) 刀片或剃刀必须锋利，材料及切片均需经常沾水，以保持材料湿润、润滑。 (6)切下的薄片可随时涮入培养皿的水中，以备观察;等切到相当数量后;再选择其中最薄的透明度最大的做成临时玻片观察。如想短期保存，可用水或甘油封藏。如希望长期保存所切的材料，则还要经过以下几个步骤做成永久玻片标本。 3、固定 挑选出符合要求的切片，用毛笔移入盛有70%酒精的染色皿中进行固
组织切片制作步骤
组织切片制作步骤： 1.取材 确定所取材料的来源及部位，纵切还是横切； 取材要迅速，防止阻止发生进一步变化，材料体积要适宜。 下图为植物芽体取样实拍。 2.固定 （1）固定液的选择 最常用的固定液为FAA（万用固定液）。 它的优点是材料固定时间不受限制，固定时间短则数小时，长则数月或数年。（可做材料保存液） 配方：50％或70％酒精90ml 冰醋酸5 ml 福尔马林5 ml (柔软材料用50％酒精，坚硬材料用70％酒精配制) （2）材料固定后的处理 冲洗或漂洗：组织固定后应充分水洗，除去留在组织内的固定液及其结晶沉淀，否则会影响以后的染色效果。 (材料固定后，若暂时不能进行下一步操作，可于70%的酒精溶液或直接与FAA固定液中，于冰箱中4℃存放。) 下图为固定液浸泡的组织切块。 3.脱水 目的：水和透明剂不能互溶，只有脱去水分后，才能让透明剂进
入。 试剂：梯度酒精溶液 流程：70%---85%---95%--100%---100%每步1h-2h左右。 注意事项：保证脱水梯度和每一步脱水时间，水要完全脱净，但也不能过度脱水（过久使组织变脆、收缩，这个时间大家可以根据自己的实验来摸索一下，不必完全按照本操作来）。 下图为自动组织脱水机，适于大量样品组织脱水用。如果材料体积及样品量较少可用小烧杯做容器来进行逐级脱水。 4.透明 目的：纯酒精不能与石蜡相溶，还需用能与酒精和石蜡相溶的媒浸液，替换出组织内的酒精。 (二甲苯是最常用的透明剂，可以很好地与石蜡互溶) 流程：二甲苯与酒精的等体积混合液1h---纯二甲苯1h---纯二甲苯1h。 5.浸蜡与包埋 目的：用石蜡取代透明剂，使石蜡浸入组织而起支持作用。 浸蜡程序:(恒温) （1）低温浸蜡（36℃）：接上步，在有二甲苯和材料的烧杯中逐步加碎蜡至过饱和（石蜡不能溶解），过夜12-24h。 （2）高温浸蜡（55-60℃，高于石蜡熔点3℃）： 将上步二甲苯与石蜡的混合液倒出，不要倒掉材料，将烧杯中加入纯石蜡，共5-24h。纯石蜡需要更换三次。
实验二 徒手切片法和临时装片的制作方法以及植物细胞和组织观察
实验二临时装片的制作方法和徒手切片法以及植物细胞、组织观察 一、实验目的 1、掌握临时装片的制片方法、掌握徒手切片的方法 2、了解植物细胞结构。 二、实验材料 显微镜、载玻片、盖玻片、镊子、刀片、吸水纸、解剖针、培养皿、毛笔、滴管、纱布、 0.9%的NaCl溶液；洋葱、马铃薯、芹菜、番茄 三、实验内容和实验方法 （一）临时装片的制作 1、擦净载玻片和盖玻片 （1）擦载玻片用左手的拇指和食指捏信载玻片的边缘，右手用纱布将载玻片上下两面包住，然后反复擦拭，擦好后放在干净处备用。 （2）擦盖玻片先用左手拇指和食指轻轻捏住盖玻片的一角，再将右手拇指和食指用纱布把盖玻片包住，然后从上下两面隔着纱布慢慢地进行擦试。 2、取样 用滴管滴一点水或其他溶液（根据需要）于载玻片的中央，把观察物放于载玻片上的液滴中，展开或摇匀。 3、盖盖玻片 右手持镊子，轻轻夹住盖玻片的一角，使盖玻片的边缘与液滴的边缘接触，然后慢慢倾斜下落，最后平放于载玻片上，避免气泡的产生。如盖玻片下的液体过多，可用吸水纸将多余的液体吸掉。
（二）徒手切片法 徒手切片法不需要任何的机械设备，只需要一把锋利的刀片就可以完成切片的制作，方法简单，也容易保持物的生活状态，有很大的实用价值。 1、选材 选择软适度的材料，先截成适当的段块。一般直径大小以3~5mm、长度以20~30mm为宜。若材料太软，如幼叶等，不能直接拿在手中进行切片，可用适当大小的马铃薯块茎或萝卜块根等作支持物，将材料夹入其中，一起切片。 2、切片 用左手拇指、食品指和中指夹住材料，使其稍突出在手指之上，拇指略低于食指，以免刀口损伤手指。材料和刀刃上蘸水，使其湿润。右手拇指和食指横向平握刀片，刀片要与材料断面平行，刀刃放在材料左前方稍低于材料断面的位置，以均匀的力量和平稳的动作从左前方向向右后方拉切。切片时要用臂力而不用腕力，手腕不要动，靠肘、肩关节的屈伸来切片，拉切要快，中途不要停顿，更不能用拉锯方式进行切片。 每切2~3片就要把刀片上的薄片用湿毛笔移入盛有清水的培养皿中暂存备用。如发现材料切面出现倾斜，应修平切面后再继续切片。 3、镜检观察 连续切下很多切片后，挑选最薄的切片放于加了1滴清水的载玻片，盖上盖玻片，制成临时装片，进行镜检、观察。 （三）植物细胞的结构观察 1、洋葱表皮细胞的观察 取一洁净载玻片，于载玻片中央加上一滴水。取洋葱一个，剥下一片新鲜的带紫色的南鳞叶，和刀片从外表面（或内表面）切一个面积为4mm2左右的方形小格，然后用镊子将表皮撕下，迅速入入载玻片上的小水滴中（表面向上）。并使其平展，盖上盖玻片，即制成临时装片。将装片放在显微镜下，用低倍镜观察细胞结构。
显微镜的使用、徒手切片法及绘图法
xx的使用、徒手切片xx绘图法 一．实验目的 ⑴掌握徒手切片、表面制片方法 ⑵熟悉xx使用方法及作图要领 二．实验内容 1．xx的使用 生物xx由光学部分和机械部分组成 ⑴光学部分——目镜、物镜、聚光器、可变光栏、反射镜 ※两次放大，即物镜将标本做第一次放大，目镜将第一次放大的像做第二次放大，两者相乘即是观察到的放大倍数 ⑵机械部分包括镜坐、镜臂、镜筒、载物台、粗细调节手轮及推动器 ⑶操作： ①将xx防置离桌缘约10厘米处 ②对光： 上升聚光镜至载物台水平，打开光栏，将低倍镜转至镜筒的正下放（用转盘听到“得”一声）转动反光镜，同时从接目镜向下看，直至明亮均匀在视野。 ③装片： 将观察的标本片从镜前方横置于载物台上 ④调节焦距： 向外旋转粗调节手轮，使镜筒慢慢下降，注意镜头与标本的距离，自目镜向下观察直至物像清楚为止。（向外物镜下降，向内物镜上升） 另外：
高倍镜应先在低倍镜下选择物像，移至视野中心，转动转盘使高倍镜转至镜筒正下方，应能看到欲观察之物像，用细调节手轮使之图象清晰。 ⑷注意点： ①取拿显微镜时，一手握镜臂，一手托镜坐，轻取轻放。 ②先用低倍镜观察，看清物象后再换高倍镜， ③在用高倍镜观察时，注意物镜与所观察标本的间距，以防错误操作，而损坏镜头，压碎标本片 ④注意保持显微镜的干燥和清洁，不得随意拆卸镜头，镜头要用擦镜纸擦拂，要防止水或药液外溢而污染镜头及其他部位。 2．徒手切片法 系用刀片或徒手切片器将材料切成薄片，可在显微镜下观察组织构造、细胞特征的制片法。 材料： xx应除净泥沙、干燥须经软化， 缺点： 厚薄不一，不利于长期保存。 ①方法 a： 取材，固定与切片： 选取易软化的中药材适当部位，切成2-3厘米的小段，用拇指及食指和中指夹住材料，下端用无名指托住，另手持刀片自左向右移动手腕，牵拽切片，动作要轻要快，切禁不能是拉锯式，在切的同时经常用水湿润，对于叶或柔软的材料，须用材料夹住。（如用胡萝卜、马铃薯等）
石蜡切片步骤
石蜡切片制作 大致步骤：取材、固定、洗涤和脱水、透明、浸蜡、包埋、切片和粘片、脱蜡、染色、脱水、透明、封片等步骤。 1、取材 植物材料选择时必须尽可能不损伤植物体或所需要的部分。 取材必须新鲜，尽可能割取所需要的组织块，并随即投入固定液。 取材时刀要锐利，避免因挤压细胞使其受到损伤。 切取的材料应该小而薄，便于固定剂迅速渗入内部。一般厚度不超过2mm，大小不超过5*5mm2。 2、固定 用适当的化学药液—固定液浸渍切成小块的新鲜材料，迅速凝固或沉淀细胞和组织中的物质成分、终止细胞的一切代谢过程、防止细胞自溶或组织变化，尽可能保持其活体时的结构。 固定液的选用：FAA固定液 FAA固定液配制：福尔马林（38%甲醛）5 ml 冰醋酸 5 ml 70%酒精 90 ml 5 ml甘油（丙三醇） 固定时间根据材料块的大小及松密程度而定。 3、洗涤与脱水 固定后的组织材料需要除去留在组织内的固定液及其结晶沉淀，否则会影响以后的染色效果。多数用流水冲洗：使用含有苦味酸的固定液固定的则需要用酒精多次浸洗；如果组织经酒精或酒精混合液固定，则不必洗涤，可直接进行脱水。 酒精为常用的脱水剂，为了减少组织材料的急剧收缩，应使用从低浓度到高浓度递增的顺序进行，通常从30%或50%酒精开始，经70%、85%、95%直至纯酒精（无水乙醇），每次时间为1-数小时，如不能及时进行脱水，材料可以放在70%酒精中保存，因高浓度酒精易使组织收缩硬化。 4、透明 选用二甲苯为酒精和石蜡的浸媒液，替换出组织内的酒精。通常组织先经过纯酒精和透明剂各半的混合液浸渍1-2小时，再转入纯透明剂中浸渍。时间根据材料块大小而定。 5、浸蜡与包埋 用石蜡取代透明剂，使石蜡浸入组织而起支持作用。通常把组织材料块放在熔化的石蜡和二甲苯的等量混合液浸渍1-2小时，再先后移入2个熔化的石蜡液中浸渍3小时左右，浸蜡应在高于石蜡熔点3℃左右的温箱中进行，以利于石蜡浸入组织内。浸蜡后的组织材料块放在装有蜡液的容器中（摆好在蜡中的位置），待蜡液表层凝固即迅速放入冷水中冷却，即做成含有组织块的蜡块。容器可用光亮且厚的纸折叠成纸盒或金属包埋框盒。如果包埋的组织块数量多，应进行编号，以免差错。石蜡熔化后应在蜡箱内过滤后使用，以免因含有杂质而影响切片质量，且可能损伤切片刀。 6、切片 包埋好的蜡块用刀片修成规整的四棱台，以少许热蜡液将其底部迅速贴附于小木块上，夹在轮转式切片机的蜡块钳内，使蜡块切面与切片刀刃平行，旋紧。切片刀的锐利与否、蜡块硬度适当都直接影响切片质量，可用热水或冷水等方法适当改变蜡块硬度。通常切片厚度为 4-7微米，切出一片接一片的蜡带，用毛笔轻托轻放在纸上。 7、贴片与烤片
徒手切片制作方法
、目的要求 徒手切片法是观察植物内部结构的简易制片法。所需的仪器用具简单，药品经济，操作方便，费时较短，且易于保持材料的天然色泽和活体结构，必要时，也可经过脱水、染色制成永久制片而保存。但是徒手制片对于体积过小，质地太软或太硬的材料，则难于处理，同时，也不能制成连续切片，这些均为不足之处。 二、材料、用品 1、用品 显微镜、剃头刀（或刀片）、毛笔、镊子、培养皿、染色皿（或小酒杯）、吸管、载玻片、盖玻片、吸水纸。1%番红水溶液（或50%酒精溶液）， 0.5%固绿95%酒精溶液，70%、85%、95%酒精，纯酒精、二甲苯和中性树胶或加拿大树胶等。 三、方法与步骤 1、选材 所用材料不宜太软或太硬。一般植物幼嫩的根茎或一些植物的叶片、叶柄等均可使用此法。质地较薄的材料，如叶片，可沿主脉两侧切成宽约5?6毫米，长1? 1.5 厘米的小块，夹在夹持物（如胡萝卜根或马铃薯块茎等）中进行切片。使用夹持物时，先将夹持物的中央切成两半，然后将切好的材料夹入，合拢夹持物进行切片，也可将叶片卷成筒状再切。 2、切片 （1 ）盛清洁的水于培养皿中。然后用左手的拇指及食指、中指夹住材料，拇指的位置要低于食指，并使材料的上端伸出指外2?3毫米，材料的切面必须保持水平方向。 (2) 右手执刀(剃头刀或刀片)，平放在左手食指之上，刀口向内，自左前方向右后方滑行切割，要用臂力，不要用腕力，不可向内平切。
(3) 拉切的速度宜快，一次切下，不要中途停顿或似拉锯式，以免损伤材料或切得不平。 (4) 切片过程中，如发现由于用力不均而使材料表面倾斜时，必须立即削平。 (5) 刀片或剃刀必须锋利，材料及切片均需经常沾水，以保持材料湿润、润滑。 (6) 切下的薄片可随时涮入培养皿的水中，以备观察;等切到相当数量后;再选择其中最薄的透明度最大的做成临时玻片观察。如想短期保存，可用水或甘油封藏。如希望长期保存所切的材料，则还要经过以下几个步骤做成永久玻片标本。 3、固定 挑选出符合要求的切片，用毛笔移入盛有70%酒精的染色皿中进行固定。固定时间为16 分钟或更长时间。 4、染色、脱水、透明 ( 1)用吸水管吸去70%酒精，染以1%番红( 50%酒精溶液)约30 分钟。 (2)再用吸管吸去番红，换用70%>85%>95%酒精进行冲洗、脱水，每级酒精3?5分钟。 ( 3)复染色。吸去酒精，用 0.5%固绿(95%酒精溶液)进行复染色，时间为 0.5 分钟。 ( 4)冲洗、脱水。用95%酒精冲洗1 次，时间10 秒。后移入纯酒精中脱水2?3 次，每次3?5 分钟。 （5）透明。吸去纯酒精，放入二甲苯—纯酒精溶液中脱水和透明1 次，时间5 分钟。 （6）吸去脱水透明液，换以纯二甲苯透明2次，时间5 分钟。 5、封片、贴标签将已透明材料用镊子或解剖针轻挑于清洁的载玻片上，滴上中性树胶，盖上盖玻片进行干燥。
显微镜的使用、徒手切片法及绘图法
显微镜的使用、徒手切片法及绘图法 一．实验目的 ⑴掌握徒手切片、表面制片方法 ⑵熟悉显微镜使用方法及作图要领 二．实验内容 1．显微镜的使用 生物显微镜由光学部分和机械部分组成 ⑴光学部分——目镜、物镜、聚光器、可变光栏、反射镜 ※两次放大，即物镜将标本做第一次放大，目镜将第一次放大的像做第二次放大，两者相乘即是观察到的放大倍数 ⑵机械部分包括镜坐、镜臂、镜筒、载物台、粗细调节手轮及推动器 ⑶操作： ①将显微镜防置离桌缘约10厘米处 ②对光：上升聚光镜至载物台水平，打开光栏，将低倍镜转至镜筒的正下放（用转盘听到“得”一声）转动反光镜，同时从接目镜向下看，直至明亮均匀在视野。 ③装片：将观察的标本片从镜前方横置于载物台上 ④调节焦距：向外旋转粗调节手轮，使镜筒慢慢下降，注意镜头与标本的距离，自目镜向下观察直至物像清楚为止。（向外物镜下降，向内物镜上升） 另外：高倍镜应先在低倍镜下选择物像，移至视野中心，转动转盘使高倍镜转至镜筒正下方，应能看到欲观察之物像，用细调节手轮使之图象清晰。 ⑷注意点： ①取拿显微镜时，一手握镜臂，一手托镜坐，轻取轻放。 ②先用低倍镜观察，看清物象后再换高倍镜， ③在用高倍镜观察时，注意物镜与所观察标本的间距，以防错误操作，而损坏镜头，压碎标本片 ④注意保持显微镜的干燥和清洁，不得随意拆卸镜头，镜头要用擦镜纸擦拂，要防止水或药液外溢而污染镜头及其他部位。 2．徒手切片法 系用刀片或徒手切片器将材料切成薄片，可在显微镜下观察组织构造、细胞特征的制片法。 材料：新鲜应除净泥沙、干燥须经软化，
优点：简便快速能保持植物原有结构的真像，色彩和内含物 缺点：厚薄不一，不利于长期保存。 ①方法 a：取材，固定与切片：选取易软化的中药材适当部位，切成2-3厘米的小段，用拇指及食指和中指夹住材料，下端用无名指托住，另手持刀片自左向右移动手腕，牵拽切片，动作要轻要快，切禁不能是拉锯式，在切的同时经常用水湿润，对于叶或柔软的材料，须用材料夹住。（如用胡萝卜、马铃薯等） b：装片：将切好的薄片用毛笔小心移入盛有清水的培养皿中，取载玻片滴加甘油和试液，用镊子或毛笔将切片移于其上。再加一滴甘油于片上，加上盖玻片，加盖玻片时以45度角避免产生气泡，也可滴加水合氯醛试液加热透化，再滴加稀甘油，加盖薄片后进行观察。3．表面制片法 多用于对叶片、果实或草本植物茎表皮组织的观察，可观察到表皮细胞形态（波浪形、长方形、圆形、多角形）、气孔类型（不等式、不定式、平轴式、垂轴式等）、毛茸特征（星状毛、人字毛、T形毛）和着生情况，通常用钟表镊子夹住叶片或果实的表面，轻轻撕取（叶片可沿叶脉撕取、果实可沿果柄撕取）其表皮置于载玻片上的水、甘油或水合氯醛试液内，注意其上表面朝上方，加盖玻片观察。 4．绘图要领 在中药的性状和显微鉴定工作中，图可以集中的突出表现实物的主要特征，有些特征比摄影照片效果还好，因此除去用文字记录观察到的外形、组织、细胞及内含物特征外，有时还需要绘出中药材的外形和显微图，以补充文字叙述的不足，因此绘图是中药鉴定和研究工作中的一项基本技能 注意：①绘制精确的图形要根据观察的实物 ②绘图有显微描绘法和徒手法两种 ③按绘图工具常分，铅笔绘图法和墨线绘图法两种 其中绘显微组织图和粉末图要用通用的代表符号。见下图 对中药形状图要求富有立体感，不能随意夸张和任意涂影，必须要有一定的透视知识如：前大后小、近明远暗、透视方向要一致等基础知识。 （1）绘图原则 ①一切结构均用线条来表示 ②不能借助工具，必须徒手作图，与建筑设计图相区别 ③显示立体结构可用透视线来表示，可以用圆点衬托明暗光线，不能涂影，点要小而圆，
石蜡切片的制作
石蜡切片的制作 试验药品和仪器 试验药品：酒精、二甲苯、石蜡、番红、固绿、冰醋酸、甲醛、明胶、甘油、石碳酸、中性树胶。 试验仪器：石蜡切片机、组织包埋机、水浴锅、染缸、烘箱。 试验方法 1 叶片组织结构的观察 对叶片组织结构的观察采用石蜡切片法。具体操作步骤如下： 1. 取材。选取生长良好的叶片，用水清洗干净，擦干，沿主脉切取2mm x 5mm 的小段。 2. 固定。将切取的植物材料立即放入FAA 固定液中（材料与固定液比例1:20），用真空泵抽气（使固定液尽快渗入材料中，并排除材料内气泡的干扰），固定时间 48h以上。FAA固定液配方：50%酒精、冰乙酸、甲醛（37%-40%）按18:1:1的比例配置。 3. 冲洗。材料从固定液中取出后，用70%的酒精冲洗3次，每次间隔2h,并在70%酒精中过夜。 4. 脱水。酒精为常用脱水剂，它既能与水相混合，又能与透明剂相混，为 了减少组织材料的急剧收缩，应使用从低浓度到高浓度递增的顺序进行：70%酒精一80%酒精一95%酒精一无水酒精一无水酒精，每级酒精中放2h，无水酒精分2次，一次2h。 5. 透明。纯酒精不能与石蜡相溶，还需用能与酒精和石蜡相溶的媒浸液，替换出组织内的酒精。材料块在这类媒浸液中浸渍，出现透明状态，此液即称透明剂，透明剂浸渍过程称透明。通常组织先经纯酒精和透明剂各半的混合液浸渍 1?2小时，再转入纯透明剂中浸渍。具体为：1/3二甲苯+2/3无水酒精（加番红染色，以便透明后找到材料）一1/2二甲苯+1/2无水酒精一2/3二甲苯+1/3无水酒精一二甲苯一二甲苯，每级二甲苯中放2h，纯二甲苯分2次，每次放1h。材料进入无水的透明剂
徒手切片的基本要求
、目的与要求 1、学习并掌握临时装片的制作方法和步骤。 2、学习徒手切片技术。 3、了解细胞基本结构和厚角组织的特点。 二、材料和用品 1、自备材料：解剖器（镊子、解剖针、单面刀片或双面刀片）；洋葱鳞茎、青红椒、芹菜叶柄、女贞叶片或其它植物的叶片、胡萝卜块等。 2、其它材料和用品：显微镜、盖玻片、载玻片、纱布、蒸馏水、吸水纸、10%甘油水溶液、50%甘油水溶液、纯甘油、碘—碘化钾稀溶液、培养皿、吸管。 三、实验内容 1、临时装片的制作方法 2、徒手切片方法 四、实验方法 要观察、研究植物细胞、组织和器官的微细结构，以及一些很微小的藻、菌植物等，这些用肉眼是无法看到的，必须借助于显微镜来观察，要用显微镜观察，首先必须制成各种制片，放在显微镜下才能观察。制片的方法很多，这里着重介绍临时装片法和徒手切片的方法技术。 1、临时装片的制作方法 临时装片法是用少量的新鲜植物材料，如单个细胞、薄的表皮或切成的薄片以及其它小的或扁平的材料（如丝状或叶状的藻类、菌类、蕨类的原叶体和孢子囊、纤细的苔藓植物等等），把这些材料放在载玻片的水滴中，再盖上盖玻片做成玻片标本的方法。这种方法制成的标本，可以保持材料的生活状态和天然的色彩。此法一般多做为临时观察使用，也可根据需要选择适宜的染料染色，制成永久制片或用某些化学试剂作组织化学反应。 临时装片的制作方法和步骤如下： （1）清洁玻片：将盖玻片和载玻片用清水洗净，再用纱布擦干，擦玻片时用左手食指和拇指夹住玻片的两边，右手食指和拇指包住纱布，同时擦到的玻片的两面，用力要均匀。 注意：由于盖玻片很薄，所以擦盖玻片时要特别小心，用力要轻，右手食指和拇指要轻轻捻动，以免把盖玻片捏破。 （2）放置材料：先将载玻片平放在桌面上，于载玻片中央滴一滴蒸馏水或稀甘油，然后用镊子镊取或吸管吸取少量要观察的材料（如洋葱鳞叶表皮或水绵……），放在载玻片中央的水滴或甘油中，再用镊子和解剖针将材料展平或分散开，勿使材料折叠或干燥。（3）加盖玻片及其它处理：为了避免产生气泡，盖盖玻片时，应该以大拇指和食指拿着盖玻片的两个角或用镊子夹住其一端，使盖玻片的一边先与载玻片上的水滴边缘接触，而后徐徐放下另一边，当盖玻片被夹持的一边将贴近载玻片时，则可放手或抽出镊子，使其自然轻轻复盖，这样可以使盖玻片下的空气挤出，免生气泡。注意载玻片中央的液滴要适中，既要使其充满盖玻片，又要不会使盖玻片浮动或使液滴从盖片下外溢，假如水不够，可用吸管小心地从盖玻片的边上再滴入一小滴水，使它和盖玻片下面的水相接触；如果水太多，溢出盖玻片，则可用吸水纸吸去，盖玻片的上面，一定不能被水浸湿，如果发生这种情况，应该小心地取下盖玻片，擦干以后，再按上述方法重新盖上。这样做好的装片，便可在显微镜下进行观察。根据需要，临时水装片做好后还可以进行简单的染色（例如用碘—碘化钾或番红等来染色），其方法是直接在盖玻片的一侧加一滴染液，用吸水纸条在盖玻片的另一侧吸水，引入染液，以使盖片下的材料染上色。
石蜡切片的制作过程(精)
石蜡切片的制作 目的要求:了解生物制片的基本原理和方法;了解石蜡切片制作的基本过程;学会制作石蜡切片。 一、生物制片的基本原理 (一生物制片的目的与发展概况 生物制片是研究生物有机体微观结构的基础方法,其目的是提供在显微镜下以适度的样品,有效地对其进行形态和功能观察研究。 (二生物制片的方法 当我们研究生物体的组织或细胞时,除了某些生物体可用相差显微镜或偏光显微镜等方法达到观察目的外,其余大部分生物体,因为组织较厚,光线不易透过内部等关系而达不到观察的要求,为了达到此目的,就必须将生物体的组织切成薄切片或不切片,经过一系列处理,使光线易于透过,即可进行观察。因此,根据标本的制作方法分为切片法和非切片法两种。这些方法,各有优缺点,应该适当的配合使用,才能获得比较理想的结果。 1.切片法 (1切片法的种类 切片法就是利用锐利的刀具,将器官组织或幼小个体分割成许多极薄的薄片,而制成切片标本的一种方法。切片法在切成薄片以前必须设法使组织内渗透某种支持物质。使组织保持一定的硬度,然后利用切片机进行切片。根据所用支持物质的不同切片法又可分为石蜡切片法、火棉胶切片法、冰冻切片法、炭蜡切片法等类型。现分述如下: ⅰ.石蜡切片法
石蜡切片法即用石蜡作为支持剂进行切片的方法。石蜡切片法是一般组织学、病理学等常规制片方法,因此用得最多,它有很多优点:比较省时间,容易操作,可切成极薄的切片(4um 以下,能制作连续切片,组织块可包埋在石蜡中永久保存。缺点是只能用于较小的组织块,较大的组织块不易切好,容易破碎,组织在脱水透明过程中产生收缩并易变脆。制片时间太长。 ⅱ.火棉胶切片法 火棉胶切片法是以火棉胶为支持剂进行切片的方法。此法的优点是包埋过程中不用二甲苯及石蜡,不经高温,可避免组织收缩及变脆,适于精细材料(如脑的切片,也引火棉胶有韧性切片不知有折卷或破裂,适宜于大块组织及多空洞的组织(脑、眼球,硬度较高的组织(骨、肌腱。缺点:手续麻烦、费时间,切片不能切薄,起码在10um以上,不能作连续切片,因此,在生物制片技术上已经不经常采用。 ⅲ.冰冻切片法 冰冻切片法是利用液体二氧化碳或其它药剂(如氯乙烷在变成气体时吸收大量的热使组织迅速结成冰块而后再进行切片的方法。目前国内外用半导体致冷调节器来代替二氧化碳的冰冻,冷冻速度更快更为方便。 冰冻切片法的优点是较前两种方法简便,组织不经脱水、透明、包埋等手续即可切片,因而可节省很多时间,十分钟左右即能制成切片。常用于临床病理手术诊断,银材料不经溶媒处理就可直接进行切片,材料不受试剂的激烈刺激及温度影响,所以组织没有显著的收缩,细胞形态不致有大的改变,也引冰冻切片不需有机溶剂处理,所以能保存脂肪、类脂等成分,所以冰冻切片法常用于组织化学,尤其是神经组织,临床病理学等方面的研究。 新鲜的组织或已经固定的组织,经短时间处理后即可进行切片。用任何固定及处理的材料均适合冰冻切片,但一般的经验用福尔马林固定的材料最适合冰冻切片,而用酒精、甘油保存的材料必须充分水洗后才易于冰冻,否则不易切成完整的切片
组织切片制作步骤
徒手切片法： 徒手切片法是指手持刀片将新鲜的或固定的实验材料切成薄片的制作方法。徒手切片法是指不需要专门的仪器设备，试样也不需要特殊的化学试剂处理，而直接将新鲜的或固定的材料(一般为木质化程度较低的植物)切成薄片的方法。 基本信息： 徒手切片前，应先准备好一个盛有清水的培养皿。在切片时，用左手的拇指与食指、中指夹住实验材料，大拇指应低于食指2～3mm，以免被刀片割破。材料要伸出食指外约2～3mm，左手拿材料要松紧适度，右手平稳地拿住刀片并与材料成垂直。然后，在材料的切面上均匀地滴上清水，以保持材料湿润。将刀口向内对着材料，并使刀片与材料切口基本上保持平行，再用右手的臂力（不要用手的腕力）向自身方向拉切。此时，左手的食指一侧应抵住刀片的下面，使刀片始终平整。连续地切下数片后，将刀片放在培养皿的水中稍一晃动，切片即漂浮于水中。当切到一定数量后，可在培养皿内挑选透明的薄片用低倍镜观察检查。好的切片应该是薄且比较透明、组织结构完整，否则要重新进行切片。 对经检查符合要求的切片，如果只作临时观察，可封藏在水中进行观察。若要更清楚地显示其组织和细胞结构，可选择一些切片进一步通过固定、染色、脱水、透明及封藏等步骤，做成永久玻片标本。 徒手切片技巧 如果不想切斜，要注意两点，一个是左手拿的露出来那截要短，
尽量只能连续切2刀的样子(一般是可以切4，5刀的），一个是切口一定要水平，同时右手的刀片也要水平，拉刀的时候保持在一个平面上（拉快点容易做到）。这是根和茎的切法，不过每次的量会有所减少。对于叶，有三种切法，一个是直接切；一个是卷成管状，当茎来切；还有就是用三层刀片夹起来。其中，第一种适合于裸子植物那种针叶，方法要领和上面说的差不多；第二种适合于比较软的叶片，要领是要卷的细，中间的洞不要太大（大了容易斜）；第三种适用于比较坚韧，硬的叶片，绝对要放在载玻片之类的地方，要用划的，凌空切会很不顺，容易切不断。还有一种特殊的方法是切成小块的先，再夹到萝卜里面（事先挖个洞或切条槽），再一起切，这个适用于全部，根茎叶，软的硬的均可（就是那种针叶不太好用它，我都切不好）。所以克服柔软就是要注意，想办法使它变厚变硬（对叶：卷，夹，或者垫玻璃；对根茎，夹，或者用左手捏紧一点，捏上面一点，使它不会晃）。至于弯曲，我觉得不用太在意，要么舍弃掉这一段，要么用手压紧，关键只是上面要平。还有，如果切含有楞或者有叶脉的部分，一定要从这些地方开始切，先切硬的部分（朝向刀口）。平时切两到三层差不多，一层的细胞会破损，有空洞；这样也比较适合染色。 徒手切片的优缺点 徒手切片是用手持双面刀片或剃刀，将新鲜材料或预先固定好的材料（切前水洗）切成薄片，不经染色或经简单染色后，用水封片作临时装片观察。徒手切片法的优点是不需要复杂的设备，方法简便，制片迅速，而且能观察到植物组织的自然色泽和活体结构，常用于研
石蜡切片制作过程
（一）材料与用具 1．材料： 鱼皮肤、性腺、肠、肝胰脏等。 2．用具： 溶蜡箱、蜡杯、不同熔点的石蜡、酒精灯等。 （二）实验内容与步骤 1．取材及固定 取动物体上的小块组织成为组织块。组织块的大小以不超过 0.5立方厘米为宜。切去组织块时动作要轻，切忌用力牵引或挟持，以免组织内部发生变化。 组织块取下后，先用 0.85％的生理盐水漂洗以洗去血液与污渍，如果是管状组织则必须把管腔中污物洗净，可用注射器自一端向管腔中注射生理盐水数次，使其管腔冲洗干净，切忌不可用刀或其他器具刮之。 由动物身上切取的组织必须是新鲜的，材料越新鲜越好，一般不应超过死后24小时。 如果是管状器官或是其中有分泌之消化液，则死后应迅速采取，以免组织自溶或上皮剥落。 材料由动物体取下后应当迅速固定，固定的目的是尽快使固定液渗入组织内部，将组织固定，以保持其原有的结构。不同的组织应选用适当的固定液。固定液的用量与组织块体积之比一般在20：1。不应使组织块贴于容器壁上，应记录固定液的名称，材料的种类，动物品种及开始固定的时间。 2．冲洗
固定后的组织块在进行脱水前必须用流水洗去固定液。组织块应用纱布包好，注名，放金属水洗网中用流水冲洗，甲醛固定液固定的组织一般水洗24小时，Bouins固定液固定的组织水洗24小时。AFA固定液则不需要水洗。 3．脱水和硬化 经过固定后的组织在水洗后要进行脱水，脱水的目的将组织内的水分用酒精或其他溶剂置换出来，使组织逐渐变硬，便于油类或其他透明及浸入，为熔化的石蜡浸渗到组织中创造条件。 常用的脱水剂是不同浓度的酒精，因为酒精与水有很大的亲和力，酒精浓度可以逐渐升高，置换出组织中的水。脱水必须充分，脱水不充分会影响透明和浸蜡。脱水过程要逐级上升，不能操之过急，跳级脱水会引起组织块强烈的收缩变形。 脱水所用的酒精浓度及过程如下： 30％—→50％—→70％—→80％—→90％—→95％—→100％(Ⅰ)—→100％(Ⅱ)组织块在各级较低浓酒精（小于70％）中脱水的时间应视组织块的大小而定，大小不超过 0.5立方厘米的组织块脱水时间为6～12小时，在高浓度酒精中（大于70％）脱水时间为3小时左右。组织块在无水酒精中需经过两次处理，以保证脱净水分。由于无水酒精有使组织变脆的缺点，故在无水酒精中脱水的时间不宜过长，一般应在15～30分钟左右。 在脱水瓶中酒精的量与组织块之比约为50：1。 简化步骤如下： 70%（一夜）——80%（1小时）——90%（30分）——95%（30分）——100%（15分）——酒精+二甲苯（15分）——二甲苯（3分）——石蜡+二甲苯（30分）——石蜡（80分） 4．透明
实验九 徒手切片法制片技术
实验九徒手切片法制片技术 一、目的要求 徒手切片法是观察植物内部结构的简易制片法。所需的仪器用具简单，药品经济，操作方便，费时较短，且易于保持材料的天然色泽和活体结构，必要时，也可经过脱水、染色制成永久制片而保存。但是徒手制片对于体积过小，质地太软或太硬的材料，则难于处理，同时，也不能制成连续切片，这些均为不足之处。 二、材料、用品 1、用品 显微镜、剃头刀（或刀片）、毛笔、镊子、培养皿、染色皿（或小酒杯）、吸管、载玻片、盖玻片、吸水纸。1%番红水溶液（或50%酒精溶液），0.5%固绿95%酒精溶液，70%、85%、95%酒精，纯酒精、二甲苯和中性树胶或加拿大树胶等。 三、方法与步骤 1、选材 所用材料不宜太软或太硬。一般植物幼嫩的根茎或一些植物的叶片、叶柄等均可使用此法。质地较薄的材料，如叶片，可沿主脉两侧切成宽约5～6毫米，长1～1.5厘米的小块，夹在夹持物(如胡萝卜根或马铃薯块茎等)中进行切片。使用夹持物时，先将夹持物的中央切成两半，然后将切好的材料夹入，合拢夹持物进行切片，也可将叶片卷成筒状再切。 2、切片 （1）盛清洁的水于培养皿中。然后用左手的拇指及食指、中指夹住材料，拇指的位置要低于食指，并使材料的上端伸出指外2～3毫米，材料的切面必须保持水平方向。 (2)右手执刀(剃头刀或刀片)，平放在左手食指之上，刀口向内，自左前方向右后方滑行切割，要用臂力，不要用腕力，不可向内平切。 (3)拉切的速度宜快，一次切下，不要中途停顿或似拉锯式，以免损伤材料或切得不平。 (4)切片过程中，如发现由于用力不均而使材料表面倾斜时，必须立即削平。 (5)刀片或剃刀必须锋利，材料及切片均需经常沾水，以保持材料湿润、润滑。 (6)切下的薄片可随时涮入培养皿的水中，以备观察;等切到相当数量后;再选择其中最薄的透明度最大的做成临时玻片观察。如想短期保存，可用水或甘油封藏。如希望长期保存所切的材料，则还要经过以下几个步骤做成永久玻片标本。 3、固定 挑选出符合要求的切片，用毛笔移入盛有70%酒精的染色皿中进行固定。固定时间为16分钟或更长时间。 4、染色、脱水、透明 （1）用吸水管吸去70%酒精，染以1%番红（50%酒精溶液）约30分钟。 （2）再用吸管吸去番红，换用70%→85%→95%酒精进行冲洗、脱水，每级酒精3～5分钟。（3）复染色。吸去酒精，用0.5%固绿(95%酒精溶液)进行复染色，时间为0.5分钟。 （4）冲洗、脱水。用95%酒精冲洗1次，时间10秒。后移入纯酒精中脱水2～3次，每次3～5分钟。 （5）透明。吸去纯酒精，放入1/2二甲苯—1/2纯酒精溶液中脱水和透明1次，时间5分钟。（6）吸去脱水透明液，换以纯二甲苯透明2次，时间5分钟。 5、封片、贴标签 将已透明材料用镊子或解剖针轻挑于清洁的载玻片上，滴上中性树胶，盖上盖玻片进行干燥。 在已封好的切片左边贴上标签，注明材料名称、制作日期和制作者姓名等项，以便查考。
显微镜标本切片的制作方法
1.涂片、铺片、磨片标本的制备 涂片标本的制备;涂片（smear）法是常用的一种方法，如血液等可直接涂于载玻片上制成涂片标本，干燥后进行固定、染色及封固。 铺片标本的制备;（stretched preparation）法用于疏松结缔组织、神经等柔软组织或肠系膜等薄层组织，可将其铺于载玻片上，撕开、展平制成铺片标本，待干燥后进行固定染色。 磨片标本的制备;（ground section）法是用于坚硬组织的标本制作，如骨和牙等坚硬组织除用酸（如稀硝酸）脱钙后再按常规制成切片标本外，也可直接将其磨成薄的磨片标本进行观察。 2.切片标本的制备 观察机体各部的微细结构时，首先要制成薄片，就是切片法，其中以石蜡切片（Paraffin section）最为常见。其制备程序大致如下： ①取材与固定：取材要尽量以人体材料为主，辅以动物材料。取得新鲜材料后，切成适当的小块1.0立方厘米大小）立即投入固定剂（fixative）中进行固定，使组织中蛋白质迅速凝固，防止组织自溶或腐败，以保持生活状态下的结构。常用的固定剂有甲醛、酒精、醋酸、苦味酸、饿酸等。 ②脱水（dehydtation）、透明（clearing）与包埋（embedding）:把固定好的材料用乙醇将组织内的水分脱掉，经二甲苯透明后，再浸入已融化的石蜡中进行浸透、包埋。 ③切片（section）与染色（staining）：用切片机（microtome）切成5～10μm的薄片，贴于载玻片上，脱蜡后进行染色，最常用的染色法是苏木精（hematoxylin,haematoxylin)和伊红（eosin）染色简称HE染色。配制后的苏木精染波呈碱性，可使细胞核内的染色质及细胞质内的核糖体等染成蓝紫色，称嗜碱性（basophilia)；伊红是酸性染料，可使多数细胞的细胞质染成粉红色，称嗜酸性（acidophilia）；耐碱性和酸性染液亲合力都不强的，称为中性（neutroPhilia）； ④封固（mounting）：切片经脱水、透明后，于切片上滴加中性树胶和盖片进行封固后，贴标签备用。 除HE染色外，还有多种染色方法。有的能特异性的显示细胞内某些结构，如使用雷锁辛品红 （resorcin-fuchsin)染液显示组织内的弹性纤维；有的细胞经重铬酸盐处理后，呈棕褐色，称嗜铬性（chromaffinity）；有的组织成分经硝酸银处理时，可使硝酸银还原，形成银微粒附着在组织中呈棕黑色，该特性称为亲银性（argentaffin）；有的组织结构成分，本身不能使硝酸银还原，需加还原剂方能使硝酸银还原，形成棕褐色很微粒附着在组织结构上，这种性质称为嗜银性（argyrophilia）；如肥大细胞中的颗粒经甲苯胺蓝（tofuidine blue）等碱性染料染色后,呈紫红色，这种现象称异染性(metachromasia），其原理可能是染料在溶液中以单体存在时呈蓝色，当它与颗粒中具有大量阴离子的多糖成分耦合后，聚合成多聚体而呈紫红色。 除石蜡切片外，在制作较大结构（如眼球、睾丸等）的切片时，常用火棉胶包埋法；骨和牙等坚硬的组织，可用弱酸（稀硝酸）脱钙后，用石蜡或火棉胶切片（celloidin section）法制成切片标本；还有，为了较好地保存细胞内的酶活性或尽快制成切片标本的需要，可选用冷冻切片（frozen section），它是将组织先在低温下快速冻结，经直接切片后进行染色，或将组织块置入液氮（-196℃）内快速冷冻，用恒冷箱切片（cryostat section）后进行染色。
小鼠部分组织的石蜡切片制作
小鼠部分组织的石蜡切片制作 一、实验原理：利用脱水剂除去组织中的水分，再用透明剂二甲苯可以去除脱水剂酒精，而二甲苯可以溶解石蜡并将其导入到已脱水的组织细胞中，然后用熔化的石蜡对组织进行包 埋，冷却后即可将柔软的组织包埋在石蜡中，使其具有一定硬度，且不改变其大小和形状。用旋转切片机可将其切为极薄的薄片，经染色、脱水、装片后在显微镜下可以清晰地观察其 组织结构。 二、材料与用具 1 ?材料：小鼠肝脏、脾脏等。 2 ?用具：溶蜡箱、蜡杯、不同熔点的石蜡、酒精灯等。 三、实验内容与步骤 1 .取材及固定 取小鼠，采用拉颈处死或麻醉处死法将其杀死，取其脾脏和肝脏，切为边长约为0.5cm的组 织块。用先用0.85%的生理盐水漂洗以洗去血液与污渍，如果是管状组织则必须把管腔中污 物洗净，可用注射器自一端向管腔中注射生理盐水数次，使其管腔冲洗干净，切忌不可用刀 或其他器具刮之。 由动物身上切取的组织必须是新鲜的，材料越新鲜越好，一般不应超过死后24 hr。如果是 管状器官或是其中有分泌之消化液，则死后应迅速采取，以免组织自溶或上皮剥落。 取下的材料马上进行固定，采用FAA固定液，固定液的用量与组织块体积之比一般在20:1 , 固定时间2 hr以上，超过24hr时可继续浸泡或转入70%酒精中保存。不应使组织块贴于容器壁上，应记录固定液的名称，材料的种类，动物品种及开始固定的时间。 2 .冲洗 固定后的组织块在进行脱水前用70%酒精洗去固定液。 3 .脱水和硬化 经过固定后的组织在水洗后要进行脱水，脱水的目的将组织内的水分用酒精或其他溶剂置换 出来，使组织逐渐变硬，便于油类或其他透明及浸入，为熔化的石蜡浸渗到组织中创造条件。 常用的脱水剂是不同浓度的酒精，因为酒精与水有很大的亲和力，酒精浓度可以逐渐升高，置换出组织中的水。脱水必须充分，脱水不充分会影响透明和浸蜡。脱水过程要逐级上升，不能操之过急，跳级脱水会引起组织块强烈的收缩变形。 脱水所用的酒精浓度及过程如下： 30%> 5C%> 7%> 80%> 9%> 95%> 10（% （I ）> 10（% （n ） 组织块在各级较低浓酒精（小于70% ）中脱水的时间应视组织块的大小而定，大小不超过 0.5立方厘米的组织块脱水时间为6?12 hr，在高浓度酒精中（大于70%）脱水时间为3 hr 左右。组织块在无水酒精中需经过两次处理，以保证脱净水分。由于无水酒精有使组织变脆 的缺点，故在无水酒精中脱水的时间不宜过长，一般应在15?30 min左右。在脱水瓶中酒 精的量与组织块之比约为50:1。 简化步骤如下： 70% （一夜）——80% （1 hr）——90% （30 分）——95% （30 分）——100% （15 分）——酒精+二甲苯（15分）——二甲苯（3分）——石蜡+二甲苯（30分）——石蜡（80分） 4 .透明 透明是石蜡切片法切片前必经的一步。其目的在于用矿物油或植物油等透明剂置换出无水酒 精，以便于熔化的石蜡浸渗到组织间隙中，故透明剂必须是能分别与石蜡和酒精相溶的。经