糖尿病行为学异常及STZ糖尿病小鼠模型
Advances in Clinical Medicine 临床医学进展, 2020, 10(7), 1348-1352
Published Online July 2020 in Hans. https://www.360docs.net/doc/b78238141.html,/journal/acm
https://https://www.360docs.net/doc/b78238141.html,/10.12677/acm.2020.107203
Behavioral Abnormalities of Diabetes
Mellitus and Streptozotocin-Induced
Diabetic Mouse Model
Yilong Gao1, Lingling Yuan2*
1Clinical Class 6, Grade 2018, Medical College of Zhengzhou University, Zhengzhou Henan
2Department of Endocrinology, The Second Hospital of Hebei Medical University, Shijiazhuang Hebei
Received: Jul. 1st, 2020; accepted: Jul. 14th, 2020; published: Jul. 21st, 2020
Abstract
Diabetes Mellitus and related morbidity and mortality are increasing at an alarming rate, and di-abetic patients can show abnormalities, they include behavioral abnormalities and psychological abnormalities. Both behavioral and psychological abnormalities can reduce the quality of life of diabetic patients and increase medical costs. Early identification of diabetic abnormalities can help patients improve their quality of life and reduce medical costs. Diabetic animal models main-ly include type 1 and type 2, among which streptozotocin-induced diabetic mouse model is the most widely used.
Keywords
Diabetes Mellitus, Behavior, Model, Streptozotocin
糖尿病行为学异常及STZ糖尿病
小鼠模型
高逸龙1，袁玲玲2*
1郑州大学医学院2018级临床6班，河南郑州
2河北医科大学第二医院内分泌科，河北石家庄
收稿日期：2020年7月1日；录用日期：2020年7月14日；发布日期：2020年7月21日
*通讯作者。
高逸龙，袁玲玲
摘
要
糖尿病发病率及病死率逐年升高，糖尿病患者可表现出行为学异常，行为学异常包括行为异常和心理异常，无论是行为异常还是心理异常均降低了糖尿病患者的生活质量、提高了医疗成本，早期识别糖尿病行为学异常可帮助患者提高生活质量、降低医疗成本。糖尿病动物模型主要包括1型糖尿病模型及2型糖尿病模型等，其中诱发性1型糖尿病模型中的链脲佐菌素诱导的糖尿病小鼠模型应用最为广泛。
关键词
糖尿病，行为，模型，链脲佐菌素
Copyright ? 2020 by author(s) and Hans Publishers Inc. This work is licensed under the Creative Commons Attribution International License (CC BY 4.0). https://www.360docs.net/doc/b78238141.html,/licenses/by/4.0/
1. 引言
糖尿病(Diabetes Mellitus, DM)是由遗传和环境因素共同作用引起的临床综合征，其基本病理生理机制是胰岛素分泌缺陷和(或)胰岛素作用缺陷引起糖、脂肪、蛋白质、水和电解质等代谢紊乱，临床以高血糖为主要特征[1]。40年来，随着我国人口老龄化与生活方式的变化，糖尿病从少见病变成一个流行病，糖尿病患病率从1980年的0.67%飙升至2013年的10.4%，2007年我国糖尿病患者人均直接医疗成本是非糖尿病人的2.47倍，2011年我国年糖尿病相关死亡人数近113.2万例，约占全球糖尿病死亡人数的1/4
[2] [3]。早期发现糖尿病行为学异常对后期的诊疗有重大意义，可以降低医疗成本并提高居民生活质量，链脲佐菌素(Streptozotocin, STZ)是国内外使用较多的制造糖尿病动物模型的方法，本文就糖尿病可能会出现的行为学异常及STZ 糖尿病小鼠模型做一综述。
2. 糖尿病患者行为学异常
2.1. 糖尿病患者行为异常
糖尿病可分为1型糖尿病、2型糖尿病、特殊类型糖尿病和妊娠期糖尿病。1型糖尿病、2型糖尿病是临床常见类型糖尿病，1型糖尿病多表现为多尿、口干、多饮、多食和体重下降(“三多一少”)等特征性症状，2型糖尿病多表现为疲乏无力。
糖尿病急性并发症包括糖尿病酮症酸中毒、高血糖高渗综合征、糖尿病乳酸性酸中毒；糖尿病酮症酸中毒可以表现为“三多一少”症状加重，恶心呕吐，头痛、烦躁、嗜睡，呼气中有烂苹果味。高血糖高渗综合征可表现为脱水及意识障碍。糖尿病乳酸性酸中毒可表现为，疲乏无力、恶心厌食或呕吐，呼吸深大、嗜睡等。
糖尿病慢性并发症包括糖尿病大血管病变、微血管病变和其他。糖尿病大血管病变包括冠心病、脑血管病和周围血管病变，糖尿病微血管病包括糖尿病肾病、视网膜病变、周围神经病变、植物神经病变和心肌病。冠心病可表现为胸闷、气短、胸痛，脑血管病可表现为偏瘫、饮水呛咳、失语等，周围血管病变可表现为间歇性跛行、静息痛等。糖尿病肾病可表现为尿中泡沫增多、水肿、高血压、面色苍白；糖尿病视网膜病变可表现为飞蚊症、食物模糊、失明；糖尿病周围神经病变可表现为麻木、双足踏棉花Open Access
高逸龙，袁玲玲
感、虫咬感、疼痛；植物神经病变可表现为恶心、呕吐、呃逆，腹泻与便秘相交替，泌汗异常；糖尿病心肌病可表现为不能平卧、活动耐力下降[2]。
2.2. 糖尿病患者心理异常
约四分之一的2型或1型糖尿病患者存在抑郁症状或抑郁障碍[4]。有研究表明焦虑症与2型糖尿病患者的抑郁症高度并存，并且与高成本资源的使用独立相关，改善糖尿病患者焦虑症管理的策略具有降低医疗保健成本的潜力[5]。糖尿病患者血糖控制不达标、皮下注射胰岛素、糖尿病神经疼痛[6]，以及对发生并发症的担忧会导致患者生活质量降低、抑郁和焦虑症状。肥胖症本身与儿童和青少年焦虑和抑郁的风险有关，有研究纳入瑞典的6~17岁的12507名肥胖儿童，得出肥胖仍然是儿童和青少年焦虑和抑郁的重要危险因素，与一般人群中的女孩相比，肥胖人群中的女孩患焦虑和抑郁的风险高43% [7]。对肥胖的糖尿病患儿来说，专业规范的减重治疗有利于患儿焦虑抑郁症状的缓解[8]。
糖尿病患者除焦虑抑郁外，还有可能表现为认知功能障碍[9]、人格、饮食[4]、睡眠、性功能等障碍。
心理健康是糖尿病管理中的一部分，改善糖尿病患者的抑郁、焦虑情绪，帮助患者及早摆脱不良心理、恢复自信，不但有助于提高患者的生活质量，也有助于糖尿病的控制[10]。有研究显示加强体育锻炼、给予糖尿病的自我保健教育以及在医疗和社会计划方面的帮助可有效降低抑郁症的发生。一项关于抑郁症与体育锻炼的研究显示：糖尿病患者抑郁症状的加重与体育锻炼的减少有关[11]。由于治疗资源的匮乏以及残疾，自杀和痴呆症的风险，预防生活在中低收入国家的老年人的抑郁很重要，一项在印度的研究表明：给予患者对糖尿病的自我保健教育以及在医疗和社会计划方面的帮助，可有效预防患有亚症候群症状的老年人的严重抑郁症发作[12]。
3. 糖尿病动物模型
糖尿病动物模型主要包括1型糖尿病模型及2型糖尿病模型等，1型糖尿病鼠模型包括自发性1型糖尿病模型和诱发性1型糖尿病模型。本文重点阐述诱发性1型糖尿病模型中的STZ诱导的糖尿病小鼠模型。
3.1. 自发性1型糖尿病模型
NOD小鼠：NOD小鼠是由13本ICR (瑞士种)小鼠近亲交配而得到的非肥胖糖尿病近交品系[13]。
这个品系的大多数小鼠会患有胰腺炎，但并不是所有的都发展为糖尿病，该品系具有雌性易感性。当出现严重的高血糖症和糖尿时，小鼠即表现出多尿、口干和消瘦，目前已有完整的小鼠糖尿病状态的检测程序[14]。
BB大鼠：Bio-Breeding大鼠是1974年从加拿大的一个商业性鼠群中的Wistar大鼠远交系衍生的糖尿病倾向品系[15]。这种疾病的特点是胰腺B细胞的自身免疫破坏导致胰腺炎，导致胰岛素分泌不足。
3.2. 诱发性1型糖尿病模型
手术切除胰腺方法：手术将胰腺的大部分或全部切除，造成胰岛素的完全缺乏，主要应用的是大动物。手术切除胰岛是研究高血糖症最直接的方法，现在这种方法已不常用。应用化学药物破坏胰腺方法：采用一次性大剂量注射或多次小剂量注射化学药物来破坏胰岛β细胞造成胰岛素的完全缺乏。常见的胰岛β细胞毒剂有STZ、四氧嘧啶、环丙庚哌和水合阿脲，其中应用最为广泛的是STZ和四氧嘧啶[16]。
STZ由于对机体组织毒性相对较小，动物存活率高，造模长期稳定性好，是目前国内外使用较多的制备糖尿病动物模型的方法。STZ是一种氨基葡萄糖–亚硝基脲，是一种DNA烷基化试剂，可通过葡萄糖转运蛋白2在胰岛β细胞中积累，是细胞毒性葡萄糖类似物[16]。STZ对一定种属动物的胰岛β细胞有
高逸龙，袁玲玲
选择性破坏作用，能诱发许多动物产生糖尿病，一般采用大鼠和小鼠制造动物模型。国外有学者报道选用雄性大鼠制造模型的成模率明显高于雌性大鼠[17]。Ⅰ型糖尿病模型：静脉或腹腔一次大剂量注射STZ 所制得的大速发型糖尿病系胰岛β细胞的直接损害，55 mg/kg大鼠腹腔注射STZ，致胰岛分泌减少而致血糖升高，出现糖尿病的表现[18]。多次小剂量注射所制得的迟发型糖尿病模型则与T淋巴细胞介导的β细胞不断破坏有关：30 mg/kg多次注射STZ诱导，这样建立的模型与人类胰岛素依赖型糖尿病更接近[19]。四氧嘧啶(2,4,5,6-嘧啶四酮)是嘧啶的一种含氧衍生物，在水溶液中以水合物形式存在，是最早被命名的有机化合物之一，常用于糖尿病小鼠的造模。
啮齿动物自身免疫性1型糖尿病：鉴于实验证实STZ诱导的小鼠自身免疫性1型糖尿病比大鼠更接近类似于人类自身免疫性1型糖尿病，因此，美国糖尿病并发症动物模型协会采纳自身免疫性1型糖尿病小鼠模型来研究人类自身免疫性1型糖尿病及其并发症，并给出了相应的操作规范(AMDCC, http:https://www.360docs.net/doc/b78238141.html,)。常用的小鼠模型有C57BL6J、CD-1、BALB/c等。
据国内外文献报道，实验性啮齿类大、小鼠1型糖尿病动物模型，其成模的血糖值标准各异。近年来专家达成共识，已基本倾向于认定空腹或非空腹血糖值> 11.1 mmol/L或> 16.7 mmol/L，并伴“三多一少”作为实验性啮齿类大、小鼠1型糖尿病动物模型成模标准[20]。实验性STZ诱导的啮齿类1型糖尿病小鼠动物模型，因其具有造模简便、成模率高，模型稳定性好等特点，目前已广泛应用于糖尿病研究各领域中。1型糖尿病肾病[21]、心肌病[22]、认知功能障碍[23]、周围神经病变[24]的研究均采用STZ 方法制备1型糖尿病小鼠模型。
4. 研究展望
当患者表现出“多尿、口干、多饮、多食、体重下降”的症状，或“呼气中有烂苹果味、嗜睡、疼痛、失明、水肿、食物模糊”等，这些糖尿病本身及其及急、慢性并发症所导致的症状时，我们应该提起高度重视，及早筛查患者是否有糖尿病，当患者确诊糖尿病后我们要关注其焦虑、抑郁、肥胖、睡眠、饮食、性功能障碍等与心理健康有关的情况，只有这样我们才能提高患者生活质量、降低医疗成本。对于糖尿病动物模型的选择来说，我们可以选用对机体组织毒性相对较小、动物存活率高、造模长期稳定性好的STZ诱导的1型糖尿病小鼠模型进行试验观察和研究。在1型糖尿病小鼠模型中，如何准确地掌握糖尿病合并酮症、糖尿病视网膜病变、糖尿病肾病等急慢性并发症的时机，并给予证实，还需要再做更详细的工作。希望通过对糖尿病行为学及STZ糖尿病小鼠动物模型的研究，为广大糖尿病患者带来福音。
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2型糖尿病大鼠模型研究概况
2型糖尿病大鼠模型研究概况 【摘要】目的：综述近年来2型糖尿病(T2DM)大鼠模型的研究进展及对其优缺点进行评价和未来同类模型的展望。方法：主要对T2DM大鼠模型的建立技术和方法进行综合性评价。结果：T2DM大鼠模型目前可以分为自发性T2DM 和实验性T2DM模型,且仍有较大发展空间。结论：经过综合评价研究，认为各种建模方法均有优缺点，目前较认可的是实验性T2DM大鼠模型，因价格低廉，造模方便而广受欢迎，但仍缺乏一定的造模标准。 【关键词】2型糖尿病；动物模型；研究概况 随着经济社会的发展，人们的饮食结构、生活方式等发生了很大改变，糖尿病发病率显著上升，尤其T2DM占了较高比例，大概占了糖尿病发病率的90%。T2DM是因人体胰岛素分泌相对不足或靶细胞对胰岛素敏感性降低继而引发糖、蛋白质、脂肪和水电解质等代谢紊乱所导致的疾病。患者典型表现为三多一少，即多饮、多食、多尿表现，同时还伴有身体消瘦、疲乏、烦躁、口渴等临床症状。 选择一些合适的动物模型进行动物试验成了我们研究糖尿病的良好途径，我们可以从中比较一些糖尿病药物的作用效果以及其药动学的特点，在临床用药上对评价某套治疗方案的可行性及预后等具有十分重要的参考意义。 目前研究的临床T2DM动物模型主要集中在大鼠上，这可能是由于大鼠作为T2DM动物模型相对较稳定且与人T2DM表现相似的优点。因此我们在下面综述近几年来国内外有关临床T2DM大鼠模型研究的情况。 总体上来说，目前临床T2DM研究的大鼠模型主要分为两类，一类是自发性T2DM大鼠模型，另一类则是实验性T2DM大鼠模型，考虑到成本及方便程度，目前以后者居多。 1 实验性T2DM大鼠模型 1.1 单纯高脂高糖引发的T2DM 在试验中，通过较长时间给予大鼠过量的高糖高脂饮食，发现能够诱导出较满意的T2DM大鼠模型，从而能为进一步研究奠定良好的基础。目前认为其机理可能是高糖高脂饲料会导致胰岛B细胞超负荷，进而使胰岛细胞发生损伤、萎缩甚至死亡，胰岛的功能因此下降，继而建立起伴胰岛素抵抗的T2DM模型。鲁瑾[1]等采用61%的高脂饮食，饲养大鼠7周后，大鼠就出现了高胰岛素血症，且形成了明显的胰岛素抵抗，是一个十分可靠的胰岛素抵抗模型。张丽锋[2]等给予W istar大鼠脂肪热比为59%的饲料, 喂养4周，均出现胰岛素抵抗，多项研究试验表明高脂饮食可以诱发产生可靠的糖尿病大鼠模型。 1.2 应用STZ药物诱导产生的大鼠模型由于高糖高脂饲料相对用时较长，且饲料成本相应较高，因此合理使用链脲菌素(STZ)是目前许多研究者所推崇的
Ⅱ型糖尿病模型
Ⅱ型糖尿病模型:高糖高脂喂养1~2个月的大鼠，再加小剂量一次腹腔注射STZ，剂量在25~40mg/Kg或参考文献(鼠均重不同，本剂量以200克均重为例)。 柠檬酸(FW:210.14)2.1g加入双蒸水100mL中配成A液。 柠檬酸钠(FW:294.10)2.94g加入双蒸水100mL中配成B液。 链脲佐菌素配制液 用时将A、B液按一定比例混合(1:1.32也有按1:1的)，PH计测定ph值，调节ph=4.2-4.5，即是所需配置STZ的柠檬酸缓冲液。 注射时用柠檬酸缓冲液以1%的浓度溶解STZ，按空腹体重注射相应的STZ，在30分钟内注射完毕。★STZ容易失活，STZ快速称取后仍要求干燥避光，推荐用干燥铝箔(或锡箔)纸。 禁食12小时以上(一般过夜禁食，不禁水)。禁食的时间越长，STZ对胰岛β细胞的破坏力越明显，即药效越高。所以相对禁食时间延长，可以降低STZ的用量。尾部注射即静脉注射，药物利用率较高，同比腹腔注射，可以节省药量，缺点是操作起来不如腹腔注射方便。 过夜禁食后称重，按大鼠总重量比称取STZ，放一干燥灭菌瓶内，外用锡纸包好，将柠檬酸缓冲液及装STZ的瓶子置冰浴，一起带到动物房，如果注射操作技术不熟练，应两组交替注射，建议分组溶解STZ，比如10只或15只鼠/组。推注的速度快，更容易形成高血糖，推注的速度慢，相对的危险性较低，但也不容易成模，常规操作中多要求快速注射。当然，STZ 的剂量是决定血糖高低的主要因素。 死鼠问题的解决 鼠的个体差别和空腹(低血糖)抵抗力的差异而致死亡率的不同，开始死亡率高可能主要是血糖突然升高，鼠不适应，或发生了DKA(即酮症酸中毒)。 首先，一定要保证足够的饮水量(饮水量不足容易导致死鼠); 其次，高血糖和低血糖都会造成死鼠，避免死鼠可以通过注射胰岛素或暂时补糖，两种途径:1、常见为血糖过高。补胰岛素法，补一些中效胰岛素。例如给诺和灵n或NPH(中性鱼精蛋白锌胰岛素)，每次2--3个单位，过了3-5天，大鼠一般死亡率就低了;2、补糖法，禁食后的鼠，注射的时候已经处于低血糖状态，造模4小时后腹腔注射百分之20的葡萄糖，可避免因注射时血糖过低死鼠; 再次，防止动物自相残杀。食物缺乏和供水不足的情况下，会互相厮杀、啃食同类，所以食物和饮水要供应充足，最好是两路供应; 最后，防止感染。糖尿病大鼠尿量多，垫料潮湿，需要勤换垫料，所以糖尿病大鼠较其他大鼠容易出现感染，特别是泌尿道感染和腹腔感染。腹腔注射、皮下注射及采血测血糖等侵入性操作前后，要注意消毒工作。如每次采血测血糖后可用四环素(或金霉素眼药膏)局部涂抹处理伤口预防感染。 模型不达标者，三天后补注STZ(以10mg-20mg/kg体重剂量腹腔注射)，也很容易成模，或让血糖恢复正常后再常规剂量注射;但要达到理想的效果，往往是恢复到正常状态下重新造模。保存方法 2-8℃，干燥避光保存。(注:本品易潮解，如需反复取量过程中，应避免接触其受水受潮，受潮后30分钟后失效，这和注射时要求其快速注射是一个道理，即其水溶液不稳定)。 链脲佐菌素(Streptozotocin，STZ)对机体组织毒性相对较小，动物存活率高，是目前国内外使用较多的制备糖尿病动物模型的药物。
大鼠二型糖尿病造模方法
大鼠二型糖尿病造模方法 Prepared on 22 November 2020
大鼠2型糖尿病模型建立方法讨论 专业：药理班级：六班姓名：刘畅学号：150517 摘要：据国际糖尿病联合会（InternationalDiabetesFederation，IDF）估计，现在全球约%的成年人患有糖尿病。到2035年，该病患者人数预计会上升至亿。在2013年，全球约有亿成年人患有糖尿病，中国的糖尿病患者人数居全球之首，调查统计人数为亿。糖尿病导致约510万人死亡，平均大约每6秒钟就有1人死于糖尿病。2012年1月9日，中国健康教育中心公布的“中国慢病监测及糖尿病专题调查”结果显示，我国18岁及以上居民糖尿病患病率为2。6%，60岁以上老年人患病率高达%。因此，为治疗糖尿病建立简单、稳定、经济的动物模型非常重要。因2型糖尿病患者人数占糖尿病患病人数的90%以上，本文主要综合讨论高糖高脂饲料联合链脲佐菌素大鼠2型糖尿病模型的建立方法和注意事项。得出结果为：使用体重在190g~240g之间的雄性SD大鼠，通过连续两次腹腔注射小剂量链脲佐菌素并辅以去抗氧化剂处理，合理饲养并通过尾静脉采血方法建立的2型糖尿病模型较理想。 关键词：2型糖尿病，SD大鼠模型，链脲佐菌素STZ， 糖尿病（diabetes）是一种以胰岛素分泌缺陷和胰岛素作用不足所致的以高血糖为特征的葡萄糖、蛋白质、脂质代谢紊乱的综合征，基本治疗方案包括饮食治疗、运动治疗、药物治疗、糖尿病监测及糖尿病教育。病因主要有遗传因素、病毒感染、肥胖等，临床表现为“三多一少”即多尿、多饮、多食和体重减轻。长期的高血糖最终会引起很多严重的并发症，包括心脑血管疾病、糖尿病神经病变、糖尿病视网膜病变，糖尿病肾病、糖尿病足、感染、糖尿病酮症酸中毒、高渗性昏迷等[1]。 糖尿病分为1型糖尿病（Type1diabetes）和2型糖尿病 （Type2diabetes）两种，1型患者因自身免疫β细胞破坏所致，每日胰岛素分泌量非常少，空腹基值及糖刺激后峰值均明显低于正常值，表现为绝对分泌不足。2型糖尿病细分为两类：体重正常患者胰岛素分泌量低于正常人，糖刺激后峰值低并且延迟出现；肥胖糖尿病人胰岛素分泌量大于正常人，空腹基值和糖刺激后高峰明显高于正常人，但延迟出现，因此，表现为相对性胰岛素分泌不足且释放反应迟钝。胰岛素分泌不足的原因可能为：遗传因素、自身免疫、胰岛素拮抗。糖尿病患者中约有90%～95%属于2型糖尿病。 2型糖尿病，即非胰岛素依赖型糖尿病（non-insulin-dependentdiabetesmellitus，NIDDM），根据体重可分为肥胖和不出现肥胖两
糖尿病动物模型简介
糖尿病动物模型 转载请注明来自丁香园 发布日期: 2006-07-10 19:22 文章来源: 丁香园 关键词: 糖尿病糖尿病动物模型 2.7 db/db小鼠 db/db小鼠糖尿病发病系瘦素受体突变所致，呈常染色体隐性遗传。该鼠在10～14日龄时就出现多食、高胰岛素血症，但4周龄时血糖仍维持正常，随后该鼠体重逐渐增加，出现高血糖。2～3月龄时尽管胰岛素水平为正常时的6～10倍，但血糖水平可达22～33mmol/L；约3～6月龄时胰岛素水平逐渐下降至低于正常水平，该期小鼠体重明显下降，并出现酮症，组织学显示显著的β细胞坏死，如缺乏胰岛素治疗，该小鼠存活不超过10月。db/db小鼠另一个特点为：其血清胰高糖素的水平较正常对照升高2倍以上[22.23]。db/db小鼠是适用于研究2型糖尿病发病机制的动物模型。 2.8 ob/ob小鼠 ob/ob小鼠为2型糖尿病动物模型,属常染色体隐性遗传。ob/ob小鼠糖尿病发病是由于ob基因突变，造成其编码的蛋白leptin缺乏,引起肝脂肪生成和肝糖原异生显著增加，高血糖又刺激胰岛素分泌，引起胰岛素抵抗，刺激脂肪的形成，ob/ob小鼠体重可达90克之多。ob/ob小鼠症状的轻重取决于遗传背景，纯合体动物表现为肥胖，明显的高血糖及高胰岛素血症，而ob/ob/6J小鼠胰岛素水平可达正常小鼠的10～50倍，但其血糖常只有轻度的升高。组织学显示ob/ob小鼠胰岛β细胞显著增生、肥大，而胰岛A细胞、D细胞及PP细胞数量明显减少[24.25]。 2.9 KK鼠 KK小鼠是日本学者培育的一种轻度肥胖型2型糖尿病动物，后与C57BL/6J小鼠杂交，并进行近亲繁殖，得到Toronto－KK（T－KK）小鼠。将黄色肥胖基因(即Ay)转至KK小鼠，得KKAy鼠，与KK小鼠相比，KKAy鼠有明显的肥胖和糖尿病症状。KK小鼠有明显的多食，从5周龄起,血糖、血胰岛素水平逐步升高，至5月龄时体重可达50克，非空腹血糖常低于17mmol/L，非空腹血胰岛素可达1200ug/mL，1岁龄时，多食、高血糖、高胰岛素血症、肥胖及肝脏对胰岛素的敏感性可自发恢复正常，但糖尿病KK小鼠生命常明显缩短。此外，KK小鼠空腹胰高糖素水平升高，且不受葡萄糖抑制。组织学显示B细胞有脱颗粒和糖原浸润,随后出现胰岛肥大和肝脂肪化和脂肪组织增多[26.27]。 【其他DM动物模型】 1.激素性DM动物模型：注射垂体前叶提取物、生长素、肾上腺皮质激素、甲状腺素或胰高血糖素均可直接或间接产生DM。 2.病毒性DM动物模型：利用脑-心肌炎病毒（EMC－M病毒）和柯萨基病毒等使某些种属的小鼠胰岛β细胞脱颗粒、坏死，导致胰岛β细胞破坏，产生类似的1型DM。 3.免疫性DM动物模型：静脉注射抗胰岛素抗体或用同种或异种胰岛素的弗氏佐剂复合物及抗血清免疫;或用同种或异种胰腺+弗氏佐剂免疫动物均可在数小时后产生一过性高血糖。其机制是内源性胰岛素与输入的抗体结合导致内源性胰岛素降低而致DM。 4.下丘脑性DM动物模型：用电凝法或注射硫代葡萄糖金损伤丘脑下部腹内侧核（VMH）饱中枢，可使成熟动物产生过度摄食、肥胖，直至产生DM。
2型糖尿病动物模型的建立
内容提要 糖尿病是一类由遗传、环境、免疫等因素引起的以高血糖为特征的代谢性疾病。近年来发病率显著上升，2003年国际糖尿病联盟(IDF)报告全球糖尿病病人已超过1.94亿，预计到2025年这个数字将增加近一倍(3.33亿)。其中2型糖尿病的发生，在国外占整个糖尿病比例的85%~95%以上，而国内则更高，达98%以上。因此，建立比较理想的2型糖尿病动物模型对于糖尿病防治药物的研究具有十分重要的意义。本研究采用先高脂喂养实验动物一段时间再给予链脲佐菌素(STZ)的方法建立糖尿病动物模型。研究结果表明：高脂喂养SD大鼠28天后一次性腹腔注射链脲佐菌素 40mg/kg，可以建立稳定的具有高血脂和胰岛素抵抗为特征的2型糖尿病大鼠模型；高脂喂养ICR小鼠21天后一次性腹腔注射链脲佐菌素100mg/kg，可以建立稳定的具有高血脂和胰岛素抵抗为特征的2型糖尿病小鼠模型；在链脲佐菌素和高脂饮食协同作用下可肝脏、肾脏和胸腺等器官指数发生改变；综合分析用大鼠比用小鼠建立糖尿病动物模型更有优势。因此，本研究已经成功建立了2型糖尿病动物模型，并且筛选出最佳的实验动物。 关键词：糖尿病；动物模型；大鼠；小鼠；链脲佐菌素；血糖；胰岛素
英文缩写 DM糖尿病 NIDDM非胰岛素依赖性糖尿病IDDM胰岛素依赖性糖尿病STZ链脲佐菌素 TC总胆固醇 TG甘油三酯 LDL低密度脂蛋白 HDL高密度脂蛋白 ip腹腔注射 iv静脉注射 sc皮下注射 IR胰岛素抵抗 INS胰岛素敏感指数 GFR肾小球滤过率 Ccr肌酸清除率 ESRD终末期肾病 DN糖尿病肾病 DR 糖尿病性视网膜并发症SCH 慢性持续性高血糖症IDF 国际糖尿病联盟
小白鼠学习记忆行为的研究方法
动物行为学作业 学院：生命科学与技术学院班级：13级生物科学汉班学号：20131106301 姓名：任晓英
小白鼠学习记忆行为的研究方法 一、实验目的 1.学习小白鼠学习记忆行为检测方法。 2.学习BA-200小鼠避暗自动测试仪的使用方法。 3.了解影响学习记忆功能的一个因素。 二、实验原理 啮齿类动物系夜行性动物，喜欢黑暗的地方，而回避光亮之地。它将设法逃向暗处，此时在暗处给予其电刺激，小鼠会被迫逃回明亮处，并获得记忆。根据此原理设计的实验为一次性被动回避反应实验。被动回避反应为二十世纪60年代后期发展起来的、普遍用于检测小动物学习记忆能力的一种动物模型。反应特征：动物必须学会躲避可怕的事件，而抑制其天然本性。被动回避反应有：避暗法、跳台法。 三、实验器材 小白鼠、常用手术器械、亚硝酸钠、东莨菪碱、生理盐水、35 %酒精 四、实验步骤 1. 实验仪器 BA-20小鼠避暗自动测试仪购自成都泰盟科技有限公司，由控制器和活动箱两部分组成，可同时对6只小鼠进行实验。明暗实验箱之间有一小门供动物进出，当动物进入暗室被电击时，它可自动记录小鼠第一次从明室进入暗室的潜伏期和受到电击的次数，还可通过按键灵活地选择刺激电压和设置实验时间。 2. 实验程序： 2.1适应：将动物头朝室壁放入明室，两室之间的门洞敞开，让动物在两室内自由活动2-3分钟，取出后放回饲养笼。 2.2训练：第二天, 将动物放入明室, 它很快钻入暗室, 连接两室的门洞关闭，同时启动电刺激器, 动物足部受电击。如果动物在第一次训练时超过100秒不进暗室, 淘汰之或用手把它轻轻赶进暗室。 记录指标：（1）记录动物自明室进入暗室的潜伏期，可作为判断给药后动物行为是否有变的一个指标。若药物致使动物镇静，则潜伏期显著长于对照组。（2）记录动物受到电击后的反应，如剧烈嘶叫并跳跃，评为A级反应；微弱尖叫，评为B级反应；不叫，评为C级反应。受到电击后动物一般均跳跃。C级反应常伴动物跳跃，动物虽不尖叫，但正常动物均能感受电击疼痛，显示好的记忆成绩。C 级反应多见于雄性动物。A级反应多见于雌性动物。该记录可作为动物痛域是否变化的一个辅助观察指标。 2.3重测试：训练后24小时（第三天），再次将动物放入明室，进行重测试。记录指标：（1）记录动物进入暗室的潜伏期，为步入潜伏期。最大潜伏期设为300秒。(2）记录动物300秒内进入暗室的错误次数，包括第一次错误进入暗室的次数。 五．实验结果 1.在暗处给予其电刺激，小鼠会被迫逃回明亮处，并获得记忆。 2.给药物后动物行为有变化。 3.动物受到电击后，反应级别不同。反应级别高者多见于雌性。反应级别低者多见于雄性。 4.动物进入暗室，最大潜伏期为300秒。
药配方治疗实验性糖尿病小鼠的研究
论文编号： 华南师范大学 本科毕业论文（设计） 题目： 姓名： 学号： 系别： 专业班级： 指导教师： 2013年 4 月18 日
学位论文原创性声明 本人郑重声明：所呈交的学位论文，是本人在导师的指导下，独立进行研究工作所取得的成果。除文中已经注明引用的内容外，本论文不含任何其他个人或集体已经发表或撰写过的作品或成果。对本文的研究做出重要贡献的个人和集体，均已在文中以明确方式标明。本声明的法律结果由本人承担。 论文作者签名：日期： 2013 年 4 月 18 日
目录 中文摘要 (1) Abstract (1) 引言 (2) 1.实验材料 (2) 1.1 材料 (2) 1.2仪器 (3) 1．3 药品 (3) 2.实验方法 (3) 2.1 中药配方1的制备 (3) 2．1．1 中药配方1药粉的制作 (3) 2．1．2 粗多糖的提取 (3) 2．1．3 粗多糖的提取（Sevag法除蛋白质） (4) 2.2 中药配方2的制备 (4) 2．2．1 黑木耳多糖的制备 (4) 2．2．2 鹿茸提取物的制备 (4) 2．2．3 黄莲溶液的制备 (4) 2．3小鼠模型的建立 (4) 2．3．1 正常小鼠血糖测定 (4) 2．3．2四氧嘧啶致糖尿病小鼠模型的建立 (5) 2．3．3 香焦花蕊多糖溶液降血糖作用的研究 (5) 2.3.4葡萄糖标准溶液的测定 (5) 2.3.5灌胃 (5) 3.实验结果 (6) 3.1 葡萄糖标准曲线 (6) 3.2 中药溶液 (6) 3.3 治疗前后血糖值变化 (6) 3.4 治疗前后体重变化 (7) 4.结果分析与讨论 (7) 4.1 结果分析 (7) 4．1．1 降血糖效果分析 (7) 4．1．2 降血脂效果分析 (8) 4.2 讨论 (9) 4.3 前景及建议 (9) 参考文献 (11) 致谢 (12)
糖尿病小鼠模型的制备
、糖尿病的概念及分类 糖尿病已成为全人类继恶性肿瘤和心脑血管病之后的严重威胁人类健康的第三大非传染 性疾病。目前我国己成为世界第一糖尿病大国。 糖尿病是一类由遗传、环境、免疫等因素引起的、具有明显异质性的慢性高血糖症及其并 发症所组成的综合征，并非单一病因所引起的单一疾病（多原因引起的综合症）。糖尿病分 为：i型糖尿病、n型糖尿病和其它特异性糖尿病。I型糖尿病即胰岛B细胞大量破坏，常导 致胰岛素绝对性缺乏，以往称为胰岛素依赖型糖尿病、青年发病型糖尿病，“三多一少”症状明显。本型病因及发病是由于胰岛B细胞受到细胞介导性自身免疫性破坏。n型糖尿病由于胰 岛素抵抗并胰岛素分泌不足所致，以高血糖高血脂为显著特点。以往称为非胰岛素依赖型糖尿病、成年发病型糖尿病，常伴有明显的遗传因素，但遗传机制尚未阐明。其它特异性糖尿病 包括，B细胞功能的基因缺陷、胰岛素作用的基因缺陷、胰腺外分泌疾病、内分泌疾病、药物或化敏学制剂所致的糖尿病、感染、非常见型免疫介导性糖尿病以及有时并发糖尿病的其它遗传综合症。 （糖尿病是无法根治的，现在随着人们生活水平的提高，饮食习惯，生活方式的改变糖尿病的发病率节节攀升，成为威胁人类健康的一大难题。人们曾经一度把糖尿病称为富贵病这也是有一定道理的。为了提高人们的生活质量，近几年对糖尿病的研究日益加深） 二、糖尿病模型的建立 近年来，随着国内外对糖尿病治疗药物研究的深入开展，建立比较理想的糖尿病动物模型 显得尤为重要。目前常用的动物模型有实验性动物模型和自发性动物模型。自发性模型应用价 值较高，但因价格昂贵，饲养、繁殖条件要求严格，而不能得到广泛应用。实验性模型则应用比较广泛，实验性糖尿病动物模型的建立，是用各种方法损伤动物胰脏或胰岛B细胞导致胰岛 素的缺乏，或用化学药物对抗胰岛素作用，导致动物出现高血糖形成糖尿病。实验性糖尿病动 物模型的建立主要有6种方法：胰腺切除法致糖尿病、免疫性糖尿病、激素性糖尿病、下丘脑损伤性糖尿病、化学性糖尿病、病毒性糖尿病。由于化学性糖尿病动物模型诱发简便、来源广，应用较广泛。目前多采用注射化学诱导剂（链脲佐菌素或四氧嘧啶）的方法，引起短时间 内胰岛B细胞大量损害而诱发糖尿病动物模型的建立。 1糖尿病模型小鼠
自发性2型糖尿病动物模型 灵长类
自发性2型糖尿病动物模型 作者：万玉玲， 刘晓明， WAN Yu-ling， LIU Xiao-ming 作者单位：广东省昆虫研究所,广州,510260 刊名： 医学综述 英文刊名：MEDICAL RECAPITULATE 年，卷(期)：2008，14(14) 被引用次数：0次 参考文献(20条) 1.William TC Animal Models of Type 2 Diabetes:Clinical Presentation and Pathophysiological Relevance to the Human Condition 2006(03) 2.Portha B.Giroix MH.Serradas P Beta-cell function and viability in the spontaneously diabetic GK rat:Information from the GK/Par colony 2001(z1) 3.Shafrir E.Ziv E.Kalman R Nutritionally induced diabetes in desert rodents as models of type 2 diabetes:Acomys cabirinus(spiny mice) and Psammomys obesus(desert gerbil) 2006(03) 4.Butler AE.Jang J.Gurlo T Diabetes due to a progressive defect in beta-cell mass in rats transgenic for human islet amyloid polypeptide (HIP Rat):a new model for type 2 diabetes 2004(06) 5.Feldhahn JR.Rand JS.Martin G Insulin sensitivity in normal and diabetic cats 1999(02) 6.Bellinger DA.Merricks EP.Nichols TC Swine models of type 2 diabetes mellitus:insulin resistance,glucose tolerance,and cardiovascular complications 2006(03) 7.Tigno XT.Gerzanich G.Hansen BC Age-related changes in metabolic parameters on nonhuman primates 2004(11) 8.Wagner J D.Kavanaugh K.Ward GM Old World primate models of type 2 diabetes mellitus 2006(03) 9.Franks PW.Brage S.Luan J Leptin predicts a worsening of the features of the metabolic syndrome independently of obesity 2005(08) 10.Tan KCB.Xu A.Chow WS Hypoadiponectinemia is associated with impaired endothelium-dependent vasodilation 2004(02) 11.Wagner JD.Cline JM.Shadoan M K Naturally occurring and experimental diabetes in cynomolgus monkeys:A comparison of carbohydrate and lipid metabolism and islet pathology 2001(01) 12.Meis PJ.Kaplan JR.Koritnik DR Effects of gestation on glucose tolerance and plasma insulin in cynomolgus monkeys(Macaca fascicularis) 1982(05) 13.Kavanagh K.Koudy WJ.Wagner JD Naturally occurring menopause in cynomolgus monkeys:Changes in hormone,lipid,and carbehydrate measures with hormonal status 2005(04) 14.Shadoan MK.Zhang L.Wagner JD Effects of hormone replacement therapy on insulin signaling proteins in skeletal muscle of cynomolgus monkeys 2004(05) 15.Kaplan JR.Manuck SB Status,Stress,and atherosclerosis:The role of environment and individual behavior 1999 16.Cefalu WT.Wang ZQ.Bell-Farrow AD Caloric restriction and cardiovascular aging in cynomolgus monkeys (Macaca fascicularis):Metabolic,physiologic,and atherosclerotic measures from a 4-year intervention trial 2004(10)
糖尿病小鼠模型的制备
一、糖尿病的概念及分类 糖尿病已成为全人类继恶性肿瘤和心脑血管病之后的严重威胁人类健康的第三大非传染性疾病。目前我国己成为世界第一糖尿病大国。 糖尿病是一类由遗传、环境、免疫等因素引起的、具有明显异质性的慢性高血糖症及其并发症所组成的综合征，并非单一病因所引起的单一疾病(多原因引起的综合症）。糖尿病分为：Ⅰ型糖尿病、Ⅱ型糖尿病和其它特异性糖尿病。Ⅰ型糖尿病即胰岛β细胞大量破坏，常导致胰岛素绝对性缺乏，以往称为胰岛素依赖型糖尿病、青年发病型糖尿病，“三多一少”症状明显。本型病因及发病是由于胰岛β细胞受到细胞介导性自身免疫性破坏。Ⅱ型糖尿病由于胰岛素抵抗并胰岛素分泌不足所致，以高血糖高血脂为显著特点。以往称为非胰岛素依赖型糖尿病、成年发病型糖尿病，常伴有明显的遗传因素，但遗传机制尚未阐明。其它特异性糖尿病包括，β细胞功能的基因缺陷、胰岛素作用的基因缺陷、胰腺外分泌疾病、内分泌疾病、药物或化敏学制剂所致的糖尿病、感染、非常见型免疫介导性糖尿病以及有时并发糖尿病的其它遗传综合症。 （糖尿病是无法根治的，现在随着人们生活水平的提高，饮食习惯，生活方式的改变糖尿病的发病率节节攀升，成为威胁人类健康的一大难题。人们曾经一度把糖尿病称为富贵病这也是有一定道理的。为了提高人们的生活质量，近几年对糖尿病的研究日益加深） 二、糖尿病模型的建立 近年来，随着国内外对糖尿病治疗药物研究的深入开展，建立比较理想的糖尿病动物模型显得尤为重要。目前常用的动物模型有实验性动物模型和自发性动物模型。自发性模型应用价值较高，但因价格昂贵，饲养、繁殖条件要求严格，而不能得到广泛应用。实验性模型则应用比较广泛，实验性糖尿病动物模型的建立，是用各种方法损伤动物胰脏或胰岛β细胞导致胰岛素的缺乏，或用化学药物对抗胰岛素作用，导致动物出现高血糖形成糖尿病。实验性糖尿病动物模型的建立主要有6种方法：胰腺切除法致糖尿病、免疫性糖尿病、激素性糖尿病、下丘脑损伤性糖尿病、化学性糖尿病、病毒性糖尿病。由于化学性糖尿病动物模型诱发简便、来源
糖尿病模型
STZ 诱发糖尿病动物模型原理如下: STZ对一定种属动物的胰岛β细胞有选择性破坏作用，能诱发许多动物产生糖尿病，一般采用大鼠和小鼠制造动物模型。国外有学者报道选用雄性大鼠制造模型的成模率明显高于雌性大鼠。1型糖尿病与2型糖尿病动物模型的制备与STZ注射的剂量有关系：大剂量注射时，由于直接引起胰岛β细胞的广泛破坏，可造成1型糖尿病模型；而注射较少量STZ时，由于只是破坏一部分胰岛β细胞的功能，造成外周组织对胰岛素不敏感，同时给予高热量饲料喂养，两者结合便诱导出病理、生理改变都接近于人类2型糖尿病的动物模型。 造膜前的喂养： Ⅰ型糖尿病模型成模比较快，通常大鼠在普通饲料适应性喂养2周后即可开始造模 Ⅱ型糖尿病模型：高脂饮食诱导加小剂量STZ。造模前喂以高脂(高糖)饲料，诱发出胰岛素抵抗。 高脂(高糖)饲料： 高脂(高糖)饲料成分：其中含10蔗糖，10猪油，5胆固醇 由基础鼠饲料加蔗糖、炼猪油和蛋黄按比搭配制作高脂高糖饲料：其比例为猪油18 ,蔗糖20 ,蛋黄3 ,基础饲料59 。 预实验的重要性： 很重要。实验时STZ的给药量应参照预实验的结果，尽量不要盲目按照文献上或他人的给药量来直接使用，鼠均重和空腹(低糖状态)抗药力、禁食时长、注射选时、以及之前饲养过程、测糖选时等都不相同，通过预实验来确定符合自己实验鼠的给药计量，才是最科学的。 常用给药剂量： Ⅰ型糖尿病模型：大鼠剂量为70～65mg/Kg Ⅱ型糖尿病模型：高糖高脂喂养1～2 个月的大鼠,STZ 剂量在25～40mg/Kg 或参考文献（鼠均重不同，本剂量以200克均重为例）。 配置STZ液： 柠檬酸缓冲液的配制： 柠檬酸(FW:210.14) 2.1g加入双蒸水100mL中配成A液 柠檬酸钠(FW:294.10)2.94g加入双蒸水100mL中配成B液 链脲佐菌素配制液：用时将A、B液按一定比例混合（1：1.32也有按1:1的），PH计测定ph值,调节ph=4.2-4.5,即是所需配置STZ的柠檬酸缓冲液。 注射时用柠檬酸缓冲液以1的浓度溶解STZ，按空腹体重注射相应的STZ，在30分钟内注射完毕。★ STZ容易失活, STZ快速称取后仍要求干燥避光，推荐用干燥铝箔(或锡箔)纸。 能否使用其他溶液配置缓冲液： 可以。但我们推荐使用柠檬酸。例如用醋酸等溶液，也可以做出，但其PH值不好控制，而STZ只有在PH4.2-4.5的时候才具有最佳药力活性。
快速老化模型小鼠SAMP8行为学的增龄性变化
https://www.360docs.net/doc/b78238141.html, 快速老化模型小鼠SAMP8行为学的增龄性变化 褚芹于建春潘建明于涛韩景献（指导老师） [摘要]目的对SAMP8老化征象和学习记忆能力的增龄性变化进行比较系统的研究，为利用该模型进行其他研究提供实验依据。方法选用2、4、6、8、10、12月龄SAMP8，以同龄正常老化的SAMR1为对照，应用老化度评分和Morris水迷宫测试SAMP8的老化度和学习记忆能力的增龄性变化。结果SAMP8在4月龄出现明显的老化体征，并在6月龄开始表现出空间学习记忆障碍。结论SAMP8在成熟期（4-6月）过后发生了快速老化，证实SAMP8是研究衰老和老年性痴呆的理想模型。 [关键词]快速老化模型小白鼠（SAM）;SAMP8;老化;Morris水迷宫;学习记忆能力 Age-related Changes in behavior of Senescence Accelerated Mouse SAMP8 Chu Qin,YU Jianchun,Pan Jianming,Y u Tao,Han Jingxian(The First Hospital affiliated to Tianjin University of TCM Tianjin China300193) [Abstract]Objective To observe the age-related changes in aging sign and symptoms, and learning and memory of senescence accelerated mouse SAMP8.Method selecting Senescence Accelerated Mouse SAMP8and normal control SAMR1at six ages from2th month to12th month,age-related changes in aging and learning and memory were studied by“the scores of aging”and Water Morrris Maze.Results The SAMP8appeared obvious aging sign and symptoms at4-month https://www.360docs.net/doc/b78238141.html,pared to SAMR1control group, SAMP8mouse showed significant impairments on learning and memory in hidden platform trial at age of8th month,10th month and12th month.In probe trial and reversal trial,SAMP8began to show significant impairments on learning and memory at age of 6month.Conclusion The results showed that SAMP8began to accelerate senescense after mature period(4-6month)and appeared learning and memory disorder at6-8 months old.It manifested that SAMP8was an ideal model for investigating the mechanism of aging and senile dementia. 基金项目：教育部高等学校博士学科点专项科研基金（20060063006） 作者单位：300193天津天津中医药大学第一附属医院基础研究部（褚芹、于建春、于涛、韩景献），天津中医药大学解剖教研室（潘建明）。联系电话：022-********Email:cq0314@https://www.360docs.net/doc/b78238141.html,
STZ诱导的小鼠糖尿病模型
STZ诱导的小鼠糖尿病模型 糖尿病（diabetes mellitus，DM）是胰岛素抵抗和胰岛素缺乏导致的以高血糖为主要特征表现的代谢紊乱综合征，易发生心、脑、肾等并发症。糖尿病状态下血浆游离脂肪酸异常增高，心肌耗能增加，葡萄糖代谢下降，脂肪酸代谢增加，心脏内过量的脂肪酸摄取和氧化导致心肌内脂肪代谢产物的积聚引起心脏脂质毒性，并在此基袖上出现氧化应激，导致细胞调亡、内皮功能紊乱、炎症反应增加，同时出现心肌的损伤，心肌的结构和功能均发生改变，最后导致糖尿病患者的死亡。 1.实验动物 SPF级Balb/C小鼠，雄性，周龄为4w~6w，体重为20g~22g。 2.实验分组： 实验分六组：正常对照组、模型组、阳性药组、受试药组三个剂量组，每组15只动物。 3.模型周期 24W 4.主要试剂及配制方法 柠檬酸、柠檬酸三钠、链脲佐霉素(Streptozocin,STZ) 1.柠檬酸钠缓冲液配制：将 2.10g柠檬酸加入双蒸水100ml配成柠檬酸母液，称为A液；将2.94g柠檬酸三钠加入双蒸水100ml配成柠檬酸钠母液，称为B液；将A、B液按1:1.32比例混合，pH计测定pH值，调定溶液pH=4.0，即是所需配制STZ的0.1mol/L柠檬酸钠缓冲液。 2.STZ溶液的配制：将STZ溶于0.1mol/L柠檬酸钠缓冲液中，新鲜配制成10mg/mL浓度的STZ溶液，并用0.22μm滤菌器过滤除菌。注意避光配制，现用现配。 5.建模方法 1.术前12h禁食 2.模型组小鼠按照120mg/kg剂量的STZ进行腹腔注射，对照组给予给予相同剂量的柠檬酸钠缓冲液。 3.STZ注射3d后，测空腹血糖，选择血糖高于16.7mmol/L纳入正式实验。
PD模型行为学实验
行为学实验各组小鼠于实验前5天每日进行2次爬杆、悬挂行为训练。分别于实验前1天(首次注射MPTP前1天),第7天(注射药物后1小时),第14天和第21天上午10:00(天元冲剂灌胃后1小时)进行爬杆和悬挂行为学观察以检测其肢体运动协调情况。 详细为爬杆实验(pole test)[7]: 将一直径为2·5cm的泡沫塑料小球固定于一根长60cm、粗1cm的木杆顶端,木杆上缠2层纱布以防打滑。将小鼠放到球顶,记录以下3个时间: 小鼠爬完杆长的上半部分所需时间; 小鼠爬完杆长的下半部分所需的时间; 小鼠爬完杆长的全长所需时间。按以下标准打分:3秒内完成上述某一动作记3分;6秒内完成记2分;超过6秒记1分。 悬挂实验(traction test)[8]:将小鼠双前肢悬挂于一水平电线上,如小鼠用双后肢抓住电线记3分;仅用一只后肢抓住电线记2分;两只后肢均抓不住记1分;小鼠跌落记为0分 [7]DonnanGA,WillisGL,KaezmarczykSJ,etal·Motorfunetioninth1-methyl-4-phenyl-1,2,3,6-tetrahy dmpyridine-treated mouse[J]·J NeuroS-ci,1987,77:185-19· [8]殷盛明,于德钦·MPTP对小鼠空间学习和记忆能力的影响[J]·中国行为医学科学,2005,14(1):18-20· 自主活动计数参照Kawai H［1］的测试方法，自制30 cm×30 cm×15 cm的有机玻璃盒，底部刻出6 cm×6 cm的格子，在恬静、光线较暗的环境中检测.小鼠适应环境10 min后，计数5 min内小鼠移动的格子数，连续测5次取平均值. 中央格停留时间、跨格数（一三爪或三爪以上进入一格为准）、直立次数、清洁次数及粪便粒数。 Rotarod检测Rotarod实验需要动物在滚轴上保持平衡并连续运动，是广泛采用的检测运动协调性的实验.滚轴直径6 cm，转速20 r/min，连续测20次取平均值. 游泳实验参照Donnan GA［2］的测试方法，将受试小鼠放入一个20 cm×30 cm×20 cm规格的有机玻璃水箱中，水深10 cm，水温为22～25℃.评分标准如下摘要：在1 min内能连续不断游泳者记30分；大部分时间游泳仅偶然漂浮者记25分；漂浮时间占整个受试时间50％以上者记20分；偶然游泳者记15分；偶然用后肢游动并漂浮在水箱一边者记10分.检测5次取平均值. ［1］Kawai H, Makino Y, Hirobe M, et al. Novel endogenous 1,2,3,4tetrahydroisoquinoline derivatives摘要: Uptake by dopamine transporter and activity to induce parkinsonism ［J］. Neurochem, 1998;70摘要:745-751.［2］Donnan GA, Willis GL, Kaczmarczyk SJ, et al.Motor function in the 1methyl4pheny1,2,3,6tetrahydropyridinetreated mouse ［J］.J Neurol Sci, 1987;77(2-3)摘要:185-191. 依据我们对鱼藤酮PD大鼠模型建立的神经行为学评分体系[5],将大鼠行为变化分6个等级记分: ①大鼠出现拒捕行为减弱、竖毛、毛色变黄变脏、弓背、主动活动减少,记1分。 ②有得1分的表现,主动活动减少明显、动作迟缓,并有震颤,或有步态不稳,记2分。 ③有得2分的表现,步态不稳,或不能直线行走、或行步时向一侧旋转,记4分。 ④向单侧斜卧,单侧前肢和(或)后肢瘫痪,行走困难、进食困难,记6分。 ⑤单侧,前肢和/或后肢完全瘫痪,四肢拘挛,体重大幅度减轻,不能进食,记8分。 ⑥濒死状态或死亡,记10分。 [5]陈忻,张楠,赵晖,等.鱼藤酮致帕金森大鼠行为学与黑质病理损伤的关系[J].中国神经精神疾病杂志, 2008, 34(4):232-234·
小鼠糖尿病模型建立的实验设计
发育生物学课程设计 北方民族大学 小鼠糖尿病模型实验设计方案 姓名：徐飞 学号：20103465 生物技术102班
小鼠糖尿病模型实验设计方案 徐飞 （北方民族大学生物科学与技术学院，生物技术，20103465） 【摘要】糖尿病是一种常见的具有遗传倾向的葡萄糖代谢和内分泌障碍,是由于绝对性或相对性胰岛素分泌不足引起的,近半个世纪来,糖尿病患病率和死亡率有明显上升趋势,在我国已成为继心血管疾病、肿瘤之后列第三位的常见病、多发病和慢性非传染性疾病。【关键词】糖尿病；动物模型；实验设计 【Abstract】Diabetes mellitus is a common genetic glucose metabolic and endocrinal disturbance caused by insulindeficiency absolutely or relatively. In the last half century, diabetes has the increasing rates of morbidity and mortality, and has become the third common, frequently occurring and chronic noninfectious disease after cardiovascular disease and cancer. 【key words】Diabetes; Models, animal; Experimental design 引言 糖尿病(diabetesmellitus,DM)属中医学“消渴”范畴,是以多饮、多食、多尿、身体消瘦,或尿浊、尿有甜味为特征的疾病。现代医学认为,糖尿病是一种由多种病因引起的慢性代谢性疾病,是由于体内胰岛素缺乏,或拮抗胰岛素的激素增高,或胰岛素在靶细胞内不能发挥正常生理作用而引起葡萄糖、蛋白质及脂质代谢紊乱的综合征。为探清糖尿病病因,建立理想的DM动物模型是十分必要的,动物模型也可以筛选降糖药物,可以为中医药治疗糖尿病提供实验依据。 动物疾病模型主要用于实验生理学、实验病理学和实验治疗学（包括新药筛选）研究。人类疾病的发展十分复杂，以人本身作为实验对象来深入探讨疾病发生机制，推动医药学的发展来之缓慢，临床积累的经验不仅在时间和空间上都存在局限性，而且许多实验在道义上和方法上也受到限制。而借助于动物模型的间接研究，可以有意识地改变那些在自然条件下不可能或不易排除的因素，以便更准确地观察模型的实验结果并与人类疾病进行比较研究，有助于更方便，更有效地认识人类疾病的发生发展规律，研究防治措施。 糖尿病模型的建立方法很多,如手术法、药物法、自发性DM、转基因动物法等。国外多