五种血小板抗体检测方法的比较及其优化
磊铆戈学
同等学力申请硕士学位论文
（２００５届）
五种血小扳抗体检测方法的比较及其优化
Ｃｏｍｐａｌａｔｉｖｃｓｔｕｄｉｅｓｂｙｆｉｖｅｍｅｔｈｏｄｓａｎｄｍｏｄｉｆｉｃａｄｖｅａｐｐｌｉｃａｌｉｏｎ０１１ｄｃｔｃｃｔｉｏｎｏｆｐｌａｔｅｌｅｔａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ
周晓华
研究生姓名
指导教师捌名
申请学位级别
专业名称——鱼——垂——堂—一
研究方向血液免症
论文提交日期２００５年１０月
五种血小板抗体检测方法的比较及其优化第一部分２．１标本制备
实验中所需血小板悬液采用本单位多人份Ｏ型献血员机采血小板，经ＴＥＮ洗涤两次后备用；患者标本及对照标本分离取血浆。
２．２ＭＡＳＰＡＴ法检测
ＭＡＳＰＡＴ法也即单克隆抗体固相血小板抗体实验，其操作如下：调整血小板悬液为不低于Ｏ．１４×１０８／Ｌ。向微孔中加入５０ｕｌ血小板悬液，１０００ｒｐｍ离心５ｍｉｎ。用ＰＢＳ洗涤６次，每次洗涤时旋转并轻摇微孔板。加入２滴ＬＩＳＳ试剂，再加入５０川被检血浆，轻摇１０ｓｅｃ，３７。Ｃ孵育３０ｍｉｎ。用ＰＢＳ洗涤６次，立即加５０ｌａｌＭＡＳＰＡＴ抗人ＩｇＧ，并加入１滴指示细胞，轻轻震荡，１０００ｒｐｍ离心５ｍｉｎ看结果。如果指示红细胞聚集在微孔中部，表示阴性结果，如果指示红细胞结合到血小板层上，表示阳性结果。
见图１．２所示
图１．２ＭＡＳＰＡＴ法检测血小板抗体结果
（指示红细胞聚集在微孔中部，表示阴性结果，指示红细胞结合到血小板层上平铺散开，表示阳性结果。）
血小板抗体检测 宣传
血小板抗体检测项目（固相凝集法） 一、基本原理： 血小板抗体检测是检测患者血清中是否存在针对血小板的免疫性抗体，包括三类：1.ABO血型系统和HLA系统产生的血小板相关抗体，2.血小板特异性抗原（HPA）产生的特异性抗体，3.药物所致的血小板抗体 二、血小板抗体检测的临床应用 (一)在临床辅助诊断中的作用 1、特发性血小板减少性紫癜（ITP）：ITP的临床症状很重要，但仍为排除性诊断。如结合血小板抗体检测，则对ITP的确诊有重要价值。 2、血液系统疾病辅助诊断：对白血病、再生障碍性贫血、骨髓异常增生综合症、溶血性贫血、新生儿血小板减少症有辅助诊断意义。 3、孕期流产风险评估：血小板抗体筛查可对孕期流产风险做出评估，尤其适用于有多次妊娠史、习惯性流产史以及不孕不育情况查因。（二）在临床输血治疗中的应用 1、预防红细胞输注中非溶血性发热反应：血小板抗体阳性患者输注红细胞悬液后发生非溶血性发热反应明显高于阴性者，对于血小板抗体阳性采取干预措施后非溶血性发热反应明显降低，极大提高了输血的安全性。 2、预防血小板输注无效：血小板抗体是引起免疫性血小板输注无效最重要的原因，特别是多次输血后出现的血小板输注无效。检测血小板抗体对提高血小板治疗效率和保证输血安全有重要意义。 三、血小板抗体检查的筛查对象 1、血液肿瘤科病人：评价患者体内血小板抗体水平，辅助诊断血液系统疾病：如白血病、再障、溶血性贫血、血小板减少性疾病、骨髓异常增生综合症。 2、需治疗性输注血小板患者：特别是需多次输注血小板患者，建议提前筛查血小板抗体，防止血小板输注无效。 3、妇产科孕检：评价孕期流产风险，尤其适用于有多次流产史患者查因。
血小板计数
血小板计数 实验目的 掌握血小板的显微镜目视计数方法 实验原理 血液经稀释按一定的比例稀释和破坏红细胞后，滴入血细胞计数板中，在一定的范围内计数血小板的数量，经过换算求出每一升血液中的血小板的数量。 实验器材 1.试管试管架 2.吸管洗耳球 3.微量吸管胶吸头干脱脂棉 4.玻棒 5.改良牛泡板盖玻片绸布
实验试剂 10g/L草酸安稀释液；草酸铵10g EDTA~Na0.12g溶于1000ml蒸馏水中，混匀 实验操作 1.吸取稀释溶液准确吸取10g/l草酸铵多的稀释液0。38ml于小试管里 2.采血加血常规消毒无名指，穿刺后，让血液自然流出，准确采取20ul置于含有草 酸铵的稀释液中，充分的混匀。 3.稀释待完全溶血后混匀1min 4.冲液静置去混匀的血小板混匀液充入计数池，静置10~15min，使血小板充分的下沉。 保持计数池的湿润， 5.计数用高倍镜计数中央大方格的五个角以及中央的共五个中方格内的血小板的数 量 6.计算血小板数量/L=N*5*10*20*1000000=N*100000000000 参考值 注意事项
1.稀释液的要求定期检查稀释液的质量，检测前要用稀释液空白计数，计数值为零时 方可以充液计数。草酸安要洁净，无细菌，没有尘埃污染 2.制备悬浮液时一定要混匀，不可有气泡，要摇动试管至少200次，不可以剧烈摇动 3.计数时光线要求计数时光线不可太强，注意微有折光性的血小板与尘埃的鉴别，附 着在细胞旁的血小板也要计数在内。 4.器材要求器材要标准化。草酸安质量要达到AR或是GR的级别如使用CP级别溶血 的效果是差的 5.药物影响检测前患者要避免服用阿司匹林及其他的抗血小板药物。
[资料]血小板抗体检测意义
[资料]血小板抗体检测意义 血小板抗体检测意义 因血小板抗体引起的临床问题和疾病已引起全社会的严重关注，成为临床亟待解决的问题。 血小板抗体检测(或筛选)包括白细胞特异性和组织相容性抗体和血小板特异性和组织相容性抗体。 白细胞、血小板抗体是引起临床非溶血性发热性输血反应的最主要原因，非溶血性发热性输血反应是临床很常见的输血不良反应，文献报道输注红细胞为 2,6%，输注血小板为20,30%，多次输血患者高达 27,,63,，而非溶血性发热性输血反应与血小板抗体密切相关，是影响临床安全输血的严重因素。血小板抗体的检测对于预防和减少非溶血性发热性输血反应非常有意义。 (一)输注红细胞悬液: 1.血小板抗体检测阳性患者的非溶血性发热反应明显高于血小板抗体检测阴性患者;血小板抗体检测阳性患者经干预后非溶血性发热反应明显下降。 2. 干预措施: 1)建议使用去白的红细胞(血库型或床旁型白细胞滤器) 2)建议使用洗涤的红细胞 3)使用药物 (二) 输注血浆: 1)输血性急性肺损伤(transfusion related acute lung injury， TRALI): 文献报道，输血后发生的一系列严重呼吸窘迫病,其80%病例输入的血液中含有血小 抗体。研究已经证实:血小板抗体是引起TRALI的重要因素之一。
上海市血液中心杨颖教授认为中国免疫性TRALI发病虽少，但严重型较多。 2)不同国家TRALI发生\死亡率 UK SHOT 德国丹麦法国加拿大 1996-2003 1995 – 2002 1999 – 2002 1994 –1998 2000 –2003 例数 139 101 6 34 21 发生率% 7 3 7 0-15 0-5 死亡率% 9 NR NR 20 9 检测患者、供者血液的血小板抗体是可行的、必要的，目的是进一步保证输血安全。 (三)输注血小板 临床血小板输注无效发生率为30%,70%，其中免疫因素引起的血小板输注无效约为20%。 血小板抗体是临床引起免疫性血小板输注无效的最主要原因，文献报道20,80%多次 输血的患者出现免疫性血小板输注无效，血小板输注无效会导致昂贵的血液和医疗资源的极大浪费，同时给患者造成较大的经济损失和身体损害。 血小板抗体的检测是临床诊断和治疗与血小板抗体有关的疾病的重要依据，其对不孕 不育和因子宫肌瘤引起死胎都有极大的影响。 鉴于血小板抗体对临床的重要价值，为此该项目得到2011年11月1日卫生厅质量检 查组的充分肯定。目前我省兄弟医院已相继开展，有浙一、浙二、邵逸夫医院、浙江省中医院、浙江医院，我市有李惠利医院、市一、鄞州医院、鄞州二院等。收费:
血小板抗体检测输血科篇4稿
血小板抗体检测和交叉配型项目推广要点（输血科） 一、临床背景 随着输血科学科建设的高速发展，如何指导临床安全、合理、科学、有效的血液成分（主要是红细胞和血小板）输注，是提高输血科学科地位，保障临床输血安全的重要工作。 在国内临床常规输血工作中红细胞和血小板的输注和输注前检测都是在输血科完成，而采供血机构供给临床的红细胞存在滤白细胞和未滤白细胞并存的现象，即使是滤白细胞虽然其白细胞大多数被滤除但血小板仍然存在未被滤除，这样的红细胞供给临床会带来非溶血性输血不良反应的风险。而目前国内血小板的输注则更为不规范，99%以上的临床机构血小板输注仍然采用随机输注（即“盲输”），不相合的血小板输入患者体内后迅速被机体免疫系统破坏清除，导致血小板输注无效症频繁发生，不仅浪费了宝贵的血小板资源，而且延误了患者的最佳治疗时机，还增加了患者痛苦和经济负担，危害极大。 二、在输血科开展血小板抗体检测和交叉配型的临床意义 1.预防血小板输注无效症的发生：通过对患者进行血小板抗体筛查和与血小板供者的交叉配型试验，筛选和患者血小板抗原配合性高的血小板供者，以提高血小板输注有效率，防止血小板输注无效症的发生。 2.指导临床输血，保障输血安全：在输血科常规术前备血的血型鉴定中加入血小板抗体筛检，可对临床输血中出现发热、黄疸、急性肺损伤等非溶血性输血不良反应的风险作出评估,同时可响应国家号召，
指导临床精准输血，节约血液资源，合理控制输血费用。 3.临床拓展 血液病科 1）.预防血小板输注无效症的发生：通过对患者进行血小板抗体筛查和与血小板供者的交叉配型试验，筛选和患者血小板抗原配合性高的血小板供者，以提高血小板输注有效率，防止血小板输注无效症的发生。 2）.自身免疫性疾病的辅助诊断：检测患者血清和血浆中自身血小板抗体的水平和特异性，可辅助诊断自身免疫性疾病如白血病、再生障碍性贫血、骨髓增生异常综合症、血小板减少症、多发性骨髓瘤、淋巴瘤、特发性血小板减少性紫癜等。 3）.药物性抗体的检测：某些药物的存在如肝素、奎宁、奎尼丁、环磷酞胺、甲氨蝶呤、阿司匹林、水杨酸钠等，选择性的抑制了骨髓巨核细胞造血功能，使血小板的生成减少，同时应用某种药物后，产生药物相关抗体，药物抗体复合物附着血小板膜上与补体结合，使血小板聚集破坏，一些药物进入人体后也可直接破坏血小板，造成血小板破坏增多，从而引发血小板减少。 妇产科 1).反复流产、不孕不育查因：对于反复和习惯性流产史（尤其是孕早期）和不孕不育史的患者，检测患者血清和血浆中血小板抗体的水平，可对其造成流产和不孕不育的原因作出辅助诊断。 2).产检（尤其针对高龄和二胎产妇）
血小板抗体检测试剂盒(固相凝集法)使用操作说明
血小板抗体检测试剂盒（固相凝集法）使用操作方法 1、平衡室温 取出血小板抗体检测试剂盒（固相凝集法）、血小板抗体检测用指示红细胞（固相凝集法）、血小板抗体筛检细胞（冻干粉）放在室温中平衡至室温。 2、检测样本准备 将血浆（血清）3000转离心5-10分钟。 3、配制浓缩洗涤液 将浓缩洗涤液以1：24比例与蒸馏水混合（满瓶20ML浓缩洗涤液兑480ML蒸馏水）。 4、配制血小板抗体筛检细胞（冻干粉） 将冻干粉依比例与生理盐水混合（冻干粉0.5ML与0.5ML生理盐水混合），混合后放置5分钟，使用前轻轻摇匀。 5、标识 由包装内取出一条反应板，平衡至室温。标记阳性对照、阴性对照、检测样本序号。 6、加血小板 向反应板孔中各加入1滴（约50μl）混匀的血小板悬液，轻摇反应板约10秒钟。 7、固着 将反应板用平板离心机以50g离心5分钟（专用血小板离心机用程序1）。 8、洗涤 将反应板用洗涤液洗3至4次，洗涤过程中轻摇微孔板，然后再轻轻甩掉洗涤液。最后一次洗涤后将残余液体蘸干。 9、加样 先向各孔中加入2滴（100μl）低离子强度溶液，再分别滴加1滴（50μl）阳性对照、阴性对照、检测样本。 10、孵育 将反应孔用封口胶纸封好，轻摇混匀后置湿盒中37℃孵育30分钟（或气浴孵育35至40分钟）。 11、洗涤(同步骤8)反复洗涤5至6次。 12、加指示物 立即向上述各孔加入1滴抗人IgG（50μl）和1滴（50μl）混匀的血小板抗体检测用指示红细胞悬液，轻轻振荡混匀。 13、离心 将反应板以200g离心5分钟（专用血小板离心机用程序2）。 14、结果判定 观察并记录实验结果。阳性反应为指示红细胞黏附在反应孔底部表面，而阴性反应为指示红细胞在离心力的作用下聚集于反应孔底部中央，弱阳性反应格局介于两者之间。
血小板计数
编写：伍海波 制定日期：2011.01.01 审核：周可成 核准：伍海波 修订日期：2012.06.01 1．项目名称: 血小板计数 2．测定原理： 用稀释液将血液稀释一定倍数，红细胞及白细胞在稀释液作用下破裂或溶解，剩下血小板。混匀后充入计数池中，计数一定体积内血小板，即可算得每升血液血小板数。 3．标本要求： 用含EDTA.K 2抗凝剂塑料管抽取静脉血1.5ml ，混匀，镜下无PLT 聚集 4．试剂： 4.1 1%草酸铵稀释液：草酸铵 1g 福尔马林（40％甲醛液）0.1ml 枸橼酸钠 0.5g 蒸馏水加至100ml 溶解后过滤即可 4.2 保存条件：2-8℃。放冰箱可保存稍长。 5．仪器和材料： 显微镜、计数板、试管、吸管 6．操作程序： 6.1 在试管中加血小板稀释液0.38ml ； 6.2 CBC 管充分混匀，取血标本20ul ，轻轻加入已盛稀释液试管底部，吸上清液洗吸管三次，轻轻混匀，置10-30分钟待红细胞溶解； 6.3 取干净计数板，试管轻轻振摇，用吸管吸悬液充池，避免产生气泡或溢出，充好液计数板放置10-15分钟； 6.4 低倍找到计数池中央大格，换高倍镜计数全部大方格（400小格）内血小板 6.5 注意事项： a. 全部用具和稀释液要特别清洁； b. 血小板易聚集，充池前要充分混匀，但又不宜用力过猛； c. 一定要等血小板完全下沉后计数； d. 仪器计数高于300×103/ul 或低于60×103/ul 须做直接计数（排除试管内血小板聚集）。 7．计算和参考值 计算：1个大方格内所数血小板数×200=血小板数/ul 。 正常参考值：100×109～300×109/L 警示值：〈10×109/L 8. 参考文献 全国临床检验操作手册
血小板抗体检查及配血操作规程
【口的】Capture-??是设计用来检测血小板IgG抗体的固相系统。可为血小板输注无 效患者进行血小板配血。 【适用范圉】血小板输注无效患者血小板输注前配血 【检测原理】 Capture-P是一个固相抗体检测系统，是曲Rachel等人4、Juji等人5和 Sh让毗&等人6发表的检测过程改良而来。患者或供体血小板首先结合于聚苯乙烯微孔表面。然后用它们来捕获患者或供体血浆中的血小板抗体。血清在结合有血小板的微孔中进行简短孵育，使抗体与血小板结合（如果抗体存在）。把微孔中游离的IgG 冲洗掉，并加入结合抗IgG指示红细胞。进行离心，这样会使指示红细胞与结合于固定的血小板上的 抗体接触。阳性检测中，在指示红细胞和结合血小板抗体间形成了抗免疫球蛋口G桥 联，从而阻止了指示红细胞向微孔底部的移动。作为这种桥联的结果，指示红细胞会形成一个汇合单层从而覆盖固定的血小板。相反，如果是阴性检测，当不存在血小板抗原-抗体反应时，指示红细胞的移动就不会被阻止，就会被离心到微孔底部，进而形成紧密圧缩、清晰的细胞扣。可以使用事先经过冲洗和保存的血小板，这个步骤是可以选择的。使用血小板冲洗和储存洛液洗涤血小板，使之不含污染性血浆蛋口和非血小板细胞成分，这样的血小板可以用来制备Capture-P检测微孔的单分子层。 【主要组成成份】 Capture-P检测微孔板：1X8微带板，坚硕U型底部，表面覆盖特异性血小板粘合剂。每个微带板可以进行8个单独的检测。这些微带板保存于一个可重复性密封的铝箔袋中， 铝箔袋中含有干燥剂和湿度计。微带板可以单使用，也可以多个使用。未使用的微带板.干燥剂和湿度计要立即谨慎重新密封于铝箔袋中，以免暴露于湿气中使粘合剂失效。Capture检测微孔的辅助试剂：（另行购买） Capture LISS：低离子强度溶液，含有甘氨酸、漠甲酚紫染料和防腐剂叠氮化钠（0. 1%）* O Capture-P指示红细胞：结合有兔抗人IgG抗体的红细胞悬液。红细胞悬浮在缓冲溶液（预先加入氯霉素（0. 25 mg/mL）,新霉素（0.1 mg/mL）和庆大霉素（0.05 mg/mL））中。如果指示红细胞出现轻微的聚集，这是正常现象。 Capture-P阳性对照血清（弱）：含有血小板抗体。加入叠氮化钠（0. 1%）作为防腐剂*o Capture-P阴性对照血清：不含有血小板抗体。加入叠氮化钠（0. 1%）作为防腐剂叫进行Capture-P 试验的组分（Capture-P指示红细胞，Capture LISS, Capture-P对照 血清，Capture-P检测微孔）在有效期内可以交替使用，而不用管它们的批号（前提是 这些组分都在有效期内）。 【储存条件】在不使用微带板时，在1-10摄氏度下保存。其它辅助试剂在1—10 摄氏 度下保存。 【样本要求】 血小板来源：源自供体血小板的样本应该采集于加有EDTA, ACD, CPD或CPDA-1的容器内。不能使用已凝固的血样。样本釆集后，富含血小板的血浆必须储存在20°C至 25°C。检测必须在48小时内进行。从血小板浓缩袋中取出的密封小辫片段必须在釆集 日期24小时内进行检测。
血小板抗体检测及交叉配血
血小板抗体检测及交叉配 血 Last revision on 21 December 2020
邹平县人民医院血小板抗体检测及交叉配血一、目前血小板输注状况 随着输血技术的发展、成分输血的推广,血小板输注是预防和治疗因血小板减少或血小板功能缺陷引起的出血、并可降低放疗和化疗后血小板减少导致出血的病死率的一种有效措施,近年来在临床上的应用日益普遍,但多次输血或输多次及多人份的血小板可以导致血小板输注无效(platelet transfusion refractoriness, PTR),这也引起了全世界的关注。 血小板上的非特异性抗原中HLA-I类抗原及ABH抗原在血小板输注中具有临床意义。供者与受者之间HLA抗原不合可能产生HLA抗体，而HLA抗体是导致PTR最常见的免疫性原因。血小板特异性抗体（HPA抗体）常和HLA抗体共存，单独由血小板特异性抗体引起的PTR 比较少见。由于本院输注血小板的病人多为血液病病人，这些病人输注血小板的量大且比较频繁，但长期输注后由于免疫因素或其他因素（如发热、严重感染、脾肿大和脾功能亢进、DIC、消耗性凝血障碍等）导致PTR的发生频率也比较高，这为开展血小板抗体检测提供了条件。 由于ABO、HLA、HPA等抗原不合是引起PTR的主要免疫因素，因此对于存在HLA和HPA抗体的患者，比较满意的治疗方案是选择ABO同型、血小板HLA和HPA交叉配型相合的单一供者的血小板输注，即相容性血小板输注，取代目前临床上普遍采用的随机血小板输注。 二、输血科开展的新项目 1.血小板抗体筛查：使用HLA抗体筛查试剂盒，采用ELISA方法筛查 HLA I类IgG抗体。
血小板抗体检测意义
血小板抗体检测意义 因血小板抗体引起的临床问题和疾病已引起全社会的严重关注，成为临床亟待解决的问题。 血小板抗体检测（或筛选）包括白细胞特异性和组织相容性抗体和血小板特异性和组织相容性抗体。 白细胞、血小板抗体是引起临床非溶血性发热性输血反应的最主要原因，非溶血性发热性输血反应是临床很常见的输血不良反应，文献报道输注红细胞为2?6%，输注血小板为 20?30%，多次输血患者高达27%?63%,而非溶血性发热性输血反应与血小板抗体密切 相关，是影响临床安全输血的严重因素。血小板抗体的检测对于预防和减少非溶血性发热性输血反应非常有意义。 （一）输注红细胞悬液： 1. 血小板抗体检测阳性患者的非溶血性发热反应明显高于血小板抗体检测阴性患者；血小板抗体检测阳性患者经干预后非溶血性发热反应明显下降。 2. 干预措施： 1）建议使用去白的红细胞（血库型或床旁型白细胞滤器） 2）建议使用洗涤的红细胞 3）使用药物 （二）输注血浆： 1）输血性急性肺损伤（transfusion related acute lung injury , TRALI）：文献报道,输血后发生的一系列严重呼吸窘迫病,其80%病例输入的血液中含有血小 抗体。研究已经证实：血小板抗体是引起TRALI 的重要因素之一。 上海市血液中心杨颖教授认为中国免疫性TRALI 发病虽少,但严重型较多。 2）不同国家TRALI 发生死亡率 德国丹麦法国加拿大UK SHOT 1996-20031995 - 20021999 - 20021994 -19982000 -2003 例数139********
发生率% 7370-150-5 死亡率% 9NR NR209检测患者、供者血液的血小板抗体是可行的、必要的,目的是进一步保证输血安全。 （三）输注血小板 临床血小板输注无效发生率为30%?70%，其中免疫因素引起的血小板输注无效约为20%。 血小板抗体是临床引起免疫性血小板输注无效的最主要原因，文献报道20?80%多次 输血的患者出现免疫性血小板输注无效，血小板输注无效会导致昂贵的血液和医疗资源的极大浪费，同时给患者造成较大的经济损失和身体损害。 血小板抗体的检测是临床诊断和治疗与血小板抗体有关的疾病的重要依据，其对不孕不育和因子宫肌瘤引起死胎都有极大的影响。 鉴于血小板抗体对临床的重要价值，为此该项目得到2011年11月1日卫生厅质量检查组的充分肯定。目前我省兄弟医院已相继开展，有浙一、浙二、邵逸夫医院、浙江省中医院、浙江医院，我市有李惠利医院、市一、鄞州医院、鄞州二院等。 收费： 1 白细胞特异性和组织相容性抗体： 1）针对HLA- I类抗原（HLA-A、HLA-B 抗原和少量HLA-C 抗原）的HLA- I类抗体 （50-80% ）。 2）物价收费目录：编码—260000016 ；项目名称—白细胞特异性和组织相容性抗体检测； 价格—90 元/次。 3）现医保限定支付范围：无限定支付范围；甲乙分类—甲。 2 血小板特异性和组织相容性抗体： 1）针对血小板特异性抗原（HPA 抗原）的HPA 抗体（17-25%）。 2）物价收费目录：编码—260000017 ；项目名称—血小板特异性和组织相容性抗体检测；价格—90 元/次。 3）现医保限定支付范围—限列入支付范围的器官移植；甲乙分类—甲。（输血就是器官移 植的一种） 收费参考文件： 《浙江省基本医疗保险医疗服务项目名称》，浙江省劳动和社会保障厅，2005 年版，第65 页。
人抗血小板抗体
人抗血小板抗体IgG/M/A（PA-IgG/M/A）酶联免疫分析 试剂盒使用说明书 本试剂盒仅供研究使用 预期应用 ELISA法定量测定人血清、血浆或其它相关液体中血小板抗体IgG/M/A含量。 实验原理 本试剂盒应用双抗体夹心酶标免疫分析法测定标本中血小板抗体水平。用纯化的抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入血小板抗体、生物素化的抗人血小板抗体抗体、HRP标记的亲和素，经过彻底洗涤后用底物TMB显色。TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的血小板抗体呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），计算样品浓度。 试剂盒组成及试剂配制 1.酶联板：一块（96孔） 标准品（冻干品）：2瓶，每瓶临用前以样品稀释液稀释至1ml，盖好后静置10分钟以上，然后反复颠倒/搓动以助溶解，其浓度为500ng/ml，做系列倍比稀释后，分别稀释成500ng/ml ，250ng/ml，125ng/ml，62.5ng/ml，31.2ng/ml，15.6ng/ml，7.8ng/ml样品稀释液直接作为标准浓度0ng/ml，临用前15分钟内配制。 如配制250ng/ml标准品：取0.5ml500ng/ml的上述标准品加入含有0.5ml样品稀释液的Eppendorf管中，混匀即可，其余浓度以此类推。 2.样品稀释液：1×20ml/瓶。 3.检测稀释液A：1×10ml/瓶。 4.检测稀释液B：1×10ml/瓶。 5.检测溶液A：1×120ul/瓶（1：100）临用前以检测稀释液A1：100稀释，稀释前根据预先计算好的每次实验所需的总量配制（每孔100ul），实际配制时应多配制0.1-0.2ml。如1ul
浅析血小板计数异常的原因及解决办法
浅析血小板计数异常的原因及解决办法 发表时间：2012-07-16T15:39:47.547Z 来源：《中外健康文摘》2012年第9期供稿作者：吴守义 [导读] 消除临床医务人员及患者对结果的质疑，而达到和谐的医患关系，促进科室健康发展。 吴守义 (甘肃省会宁县中医院检验科甘肃会宁 730700) 【中图分类号】R445【文献标识码】A【文章编号】1672-5085（2012）9-0166-02 【摘要】寻找血小板计数异常的各种原因，提高实验室对血小板计数检测的准确性，为临床医生提供可靠的诊断依据和疾病的治疗依据，确保用药的安全，需加强对标本的验收，仪器影响，治疗等过程中引导起变化进行分析，从主观和客观因素两方面进行严格要求，尽而减少分析异常，而得到准确结果，就必须对分析仪器进行监测、纠正系统误差、严把标本接收关，对治疗前后标本做好时间与用药的备注，及时与临床进行联系，确保结果真实可靠。 【关键词】血小板异常原因 随着现代检验医疗设备的飞速发展，血球分析仪已成为各医院进行血细胞计数的主要工具，已基本取代了过去传统的手工做法，具有快速、方便、准确、重复性好的优点。因此血小板计数的准确性也得到相应提高。但是在某些因素的影响下，血小板计数的结果出现较大的异常，仪器却无法直接体现。由于检验工作量大，实验室呈流水线形式报告，而个别标本的抽查和手工复查也未能完全防止异常结果的产生。因此，检验人员对仪器各种性能掌握，对血小板影响因素的了解就显得十分重要，只有掌握这些影响因素，才能对结果做出准确判断，查找原因，及时进行纠正，避免异常报告发出，确保临床诊断和治疗。多年来，笔者对住院及门诊病人就血小板结果出现较大异常进行原因查找，从中对患者的准备、标本质量、仪器本身、药物作物四方面进行了探讨，现做如下分析： 1 患者的准备 采血前患者应尽量减少运动保持平静。住院患者应在早晨卧床时取血，冬天门诊患者从室外进入室内，应等其暖和后采血。患者的精神状态、样本采集时间、吸烟、季节等因素，对血小板计数结果均有一定影响。 2 加强对标本的验收查对，是确保血小板计数准确的主要因素 2.1 抗凝剂的使用要求标本是否用EDTA-K2进行抗凝且抽取的血量是否符合抗凝剂比例要求，不适宜的抗凝剂以及血量过多直接影响血小板计数结果偏低。接收标本时要仔细查对。 2.2 正确的采血方法抽血时避免反复穿刺将组织液抽出或将气泡混入，抽血时要求流畅，避免在淤血、伤口、溃疡等附近采血，使用压脉带时间不宜过长，避免血小板总数结果不降，坚决杜绝输液侧进行抽血。对于预稀释血进行测定时，采血针刺应稍深，使血自然流流出，避免因挤压而产生结果异常。 2.3 标本的转运对于采集的标本要在半小时内送检，避免血小板因聚集、黏附破坏等因素而造成结果偏低，红细胞大量破坏，细细胞碎片增加，而使血小板计数结果假性升高，因此应避免不正确的抽血和标本时间过长导致红细胞破坏的主观因素。 3 由仪器因素引起血小板计数结果的异常 3.1 试剂要求对于使用的溶血素必须在有效期内，避免使用过期、失效、变质的溶血剂，对溶血素的加样必须准确。否则因红细胞的破坏不全，使红细胞碎片及小红细胞计入血小板总数而引起血小板假性增高，在血小板直方图20fl处出现上扬不与横坐标重合，而红细胞直方图左侧出现一小峰。此时应对仪器进行清洗维护并校标溶血素加样器，再进行标本测定，避免出现成批异常结果。 3.2 计数仪的安装及工作环境 血小板的测定是通过电压变化形成脉冲信号或光散射进行检测计数，因此，必须要求有稳压器并有良好的接地线，否则产生静电脉冲信号而使血小板的起点左偏，并有许多小峰形成。计数仪必须安装在干净清洁，避免阳光直射的地方，远离电滋波及噪音对仪器的干扰，确保计数准确可靠。 3.3 加强仪器维护保养，定期进行液路管道系统检查 科室要有专人对仪器进行维护保养，避免堵孔半堵孔现象。定期检查液路管道系统，对老化变形的管道及时清洗或更换，避免血小板因黏附和聚集而导致计数结果异常变化，影响计数准确性。 4 疾病在治疗中引起计数结果的异常变化 4.1 输血因素对于输血后的患者，其血小板出现大小不一，计数后结果常常现出错误提示（R）。表现为血小板直方图血小板宽度增大，重复测定时会出现很大差距，从而使结果极不可靠。对于多次输血的患者体内产生外源性抗原的同种免疫，再次输入后产生血小板特异性抗原—抗体复合物，使输入的血小板及自身血小板受到破坏，而使计数结果不够稳定。 4.2 脂肪乳的影响对于输入脂肪乳的患者，由于脂肪乳的颗粒很小，直径约为2-4微米，而血小板的测试范围为2-20微米，因此测定结果计入了脂肪乳颗料而使总数假性增高。过于输入脂肪乳患者如需进行血常规检测，建议在5—6小时后再进行采血检查，确保计数准确。 4.3 药物因素对于长期使用青霉素、地高辛、双氢克尿塞、甲基多巴等药物的患者，这些药物与血浆蛋白结合形成抗原，刺激机体产生血小板抗体，有的药物还可引导起血小板卫星现象，从而使血小板总数减少。 综上所述，做为一名检验人员不权要求具有扎实的专业理论基础知识和熟练的操作技能，更应该有丰富的实验经验，严谨细致的工作作风。在日常工作中随时观察和分析处理问题，不能盲目的进行操作测试和签发报告。只有对合格标本进行正确的测定，科学合理的检测结果，才能为病人提供真实可信的实验数据，满足临床诊断和治疗的需求，这就要求我们加强业务学习，随时结合临床实际，及时查找出现问题的原因，并加以分析解决。消除临床医务人员及患者对结果的质疑，而达到和谐的医患关系，促进科室健康发展。参考文献 [1]BC-5380血液细胞计数仪操作. [2]叶应妩，王毓三，申子瑜.全国临床检验操作规程. [3]钱敏，张杰、童明庆.病人输脂肪乳后血小板计数准确性的探讨[J].临床检验杂志.2011，19（4）:252-253.
血小板检查
第三节血小板检查 一、选择题 【A题型】 1.血小板计数的适应证不包括· A.不明原因的出血 B.排除血友病 C.监测病人的化疗和放疗过程 D.疑为骨髓增生 E.疑为血小板破坏增加 2.血小板计数首选的稀释液是 A.高铁氰化钾 B.复方碘 C.草酸钱 D.复方尿素 E.稀盐酸 3.血小板计数的参考方法为 A.普通光学显微镜直接计数法 B.普通光学显微镜间接计数法 C.免疫法 D.血细胞分析仪法 E.相差显微镜直接计数法 4.血小板计数的稀释液必须具备的条件不包括 A.能有效抑制血液凝固 B.能防止血小板形态变化 C.能完全破坏红细胞 D.组成复杂并易于保存 E.不利于细菌生长 5.可导致血小板假性减少的是 A.巨大血小板 B.小红细胞 C.红细胞碎片 D.淋巴细胞核碎片 E.细胞质碎片 6.可导致血小板假性增多的是 A.卫星现象 B.红细胞碎片 C.巨大血小板 D.异常蛋白血症 E.血小板聚集或凝集 7.血小板计数规范化操作不包括 A.充液前必须轻轻摇动血小板悬液2分钟 B.显微镜下观察光线要亮 C.器材必须洁净、干燥 D.灌人计数池后静置15分钟再计数 E.采血1小时后完成计数 8.血小板计数生理性变化正确的是 A.午后低，早晨高 B.春季低，冬季高 C.月经后低，月经前高 D.静脉血低，毛细血管血高 E.妊娠中晚期低，分娩后高 9.可引起自发性出血的血小板计数小于 A. 400 X 109/L B.200 X 109/L C. 100 X 109/L D.60 X 109/L E. 10 X 109/L 10.常有血栓形成危险的血小板计数大于 A. 1000 X 109/L B.400 X 109/L C. 300 X 109/L D.100 X 109/L E. 60 X 109/L 11.血小板增多常见于 A.慢性粒细胞性白血病 B.血栓性血小板减少性紫癜 C.脾功能亢进 D.急性白血病 E.放射性损伤 12.血小板反应性增多见于 A.慢性粒细胞性白血病 B.原发性血小板增多症 C.急性化脓性感染 D.真性红细胞增多症 E.脾切除 13.不能导致血小板生成障碍的是 A.急性白血病 B.系统性红斑狼疮 C.再生障碍性贫血D巨幼细胞性贫血 E.恶性肿瘤骨髓转移 .14.导致血小板消耗过多的是 A.脾肿大 B.血液被稀释C一巨大血小板综合征 D.脾功能亢进 E.弥漫性血管内凝血 15.不是原发性血小板增多的是 A.常见脾肿大 B.为干细胞缺陷 C.血小板功能减低 D.并发症少 E.血小板常大于1000 X 109 /L 16.不是继发性血小板增多的是 A.多为反应性 B.脾肿大罕见 C.并发症多见 D.血小板功能正常 E.血小板常小于1000 X 109 /L 17.血小板计数质量保证的主要原则是 A.可选用尿素稀释液 B.避免血小板被激活一和破坏 C.准确辨认血小板 D.可用肝素抗凝血 E.血标本可以低温保存 18.普通光镜直接计数血小板，首选的是 A.生理盐水 B.复方尿素稀释液 C.草酸按稀释液 D.高铁氰化钾稀释液 E.自动血细胞分析仪稀释液 19.关于血小板的主要功能，错误的是 A.粘附功能 B.聚集功能 C.促进血块收缩 D.维持血管内皮完整 E.抗凝血功能 二、问答题 1.血小板计数的稀释液必备的条件有哪些? 2.如何鉴别原发性血小板增多和继发性血小板增多? 3.如何评价普通显微镜直接计数血小板的方法?
血小板计数的参考方法
WS 中华人民共和国卫生行业标准 WS/T 244—2005 ___________________________________________________ 血小板计数的参考方法 Reference method for platelet counting 2005-5-16发布2005-12-1实施 ___________________________________________________________中华人民共和国卫生部发布
WS/T 244-2005 前言 为了保证血小板的计数结果具有溯源性和准确性，特制定本标准。 本标准从2005年5月16日起实施。 本标准由卫生部医政司提出。 本标准起草单位：卫生部临床检验中心 本标准主要起草人：彭明婷、申子瑜、陆红、谷小林、杨振华。 本标准由卫生部委托卫生部临床检验中心负责解释。
中华人民共和国卫生行业标准 血小板计数的参考方法WS/T 244—2005 Reference method for platelet counting _____________________________________________________________________ 1 范围 本标准规定了血小板计数参考方法的技术要求。 本标准适用于建立血小板计数参考方法的实验室。 2 规范性引用文件 国际血液学标准化委员会（ICSH）-2001 血小板计数的参考方法 3 定义 参考方法（Reference method） 一种可清楚和准确描述的用于特定检测的技术，该技术要有依据，可提供足够准确和精密的实验数据以评价其他实验方法检测结果的有效性。若有决定性方法，参考方法的准确性必须与决定性方法进行比较。参考方法应溯源至一级计量标准并且须标示不准确度和不精密度。 4 总则 4．1本标准采用间接法计数血小板（Platelet，PLT）。即用荧光标记PLT后，用流式细胞仪检测红细胞（Red blood cell，RBC）和PLT的比值，同时用单通道阻抗原理的半自动细胞计数仪准确计数RBC，用RBC除以RBC和PLT的比值得出PLT的计数值。 4. 2 为了保证参考方法检测结果的精密度和准确性，建立参考方法的实验室必须进行比对。 5 血小板计数参考方法的原理 首先将EDTA抗凝血标本用无菌缓冲液进行预稀释，再用特定的荧光抗体对PLT进行染色。溶液中已染色的血小板被稀释成计数浓度，用流式细胞仪检测血小板和红细胞，根据荧光强度和散射光强度将阈值设在可从RBC中区分PLT的
血小板抗体检测及交叉配血
血小板抗体检测及交叉 配血 Company number：【0089WT-8898YT-W8CCB-BUUT-202108】
邹平县人民医院血小板抗体检测及交叉配血一、目前血小板输注状况 随着输血技术的发展、成分输血的推广,血小板输注是预防和治疗因血小板减少或血小板功能缺陷引起的出血、并可降低放疗和化疗后血小板减少导致出血的病死率的一种有效措施,近年来在临床上的应用日益普遍,但多次输血或输多次及多人份的血小板可以导致血小板输注无效(platelet transfusion refractoriness, PTR),这也引起了全世界的关注。 血小板上的非特异性抗原中HLA-I类抗原及ABH抗原在血小板输注中具有临床意义。供者与受者之间HLA抗原不合可能产生HLA抗体，而HLA抗体是导致PTR最常见的免疫性原因。血小板特异性抗体（HPA抗体）常和HLA抗体共存，单独由血小板特异性抗体引起的PTR 比较少见。由于本院输注血小板的病人多为血液病病人，这些病人输注血小板的量大且比较频繁，但长期输注后由于免疫因素或其他因素（如发热、严重感染、脾肿大和脾功能亢进、DIC、消耗性凝血障碍等）导致PTR的发生频率也比较高，这为开展血小板抗体检测提供了条件。 由于ABO、HLA、HPA等抗原不合是引起PTR的主要免疫因素，因此对于存在HLA和HPA抗体的患者，比较满意的治疗方案是选择ABO同型、血小板HLA和HPA交叉配型相合的单一供者的血小板输注，即相容性血小板输注，取代目前临床上普遍采用的随机血小板输注。 二、输血科开展的新项目 1.血小板抗体筛查：使用HLA抗体筛查试剂盒，采用ELISA方法筛查 HLA I类IgG抗体。
血小板抗体(固相凝集法)检测标准操作规程
1目的为规范血小板抗体检测操作，保证检测的有效性及临床用血的安全性，依据《输血实验室管理规程》4.19.4条款的要求制定本规程。 2适用范围适用于医疗机构输血科（血库）进行血小板抗体检测。 3职责医疗机构输血科(血库)技术人员负责血小板抗体的检测。 4原理微孔板反应孔中包被有抗血小板单克隆抗体（针对血小板表面糖蛋白IIb/IIIa、Ib/V/IX），血小板悬液经离心洗涤后可在反应孔底部表面形成血小板单层。加入受检血清或血浆，在孔中经过孵育后，若该血清或血浆中含有血小板抗体，则该抗体和反应孔中的血小板单层结合，未结合的成分通过洗涤被去除。加入抗IgG及IgG致敏红细胞（指示红细胞），经离心后指示红细胞通过抗IgG的桥连与血小板单层上的血小板抗体结合，因此阳性反应为指示红细胞黏附在反应孔底部表面，而阴性反应为指示红细胞在离心力的作用下聚集于反应孔底部中央。 5设备与材料 5.1材料血小板抗体检测试剂盒（固相凝集法）、血小板抗体筛检细胞（冻干粉）、 血小板抗体检测用指示红细胞（固相凝集法）。 5.2设备平板离心机、血型血清学专用离心机、电热恒温水浴箱。 6检测环境室温应控制在18-25℃，湿度应控制在30%-70%。 7操作步骤 7.1血标本采集及处理 7.1.1检测样本准备 7.1.1.1采集患者静脉血2ml，乙二胺四乙酸二钾（EDTA-K2）或枸橼酸钠抗凝， 经3000rpm离心5分钟，分离出血浆进行检测。 7.1.1.2如果患者血标本为如果患者血标本为不抗凝血，经3000rpm离心5-10 分钟，取上清进行检测。 7.1.1.3如果患者血标本为血浆（血清），3000转离心5-10分钟。 7.1.2血标本处理样本4℃可保存7天。若需长期保存，应离心后分离血清或血浆，
血小板计数方法-血涂片法不容忽视
血小板计数方法-血涂片法不容忽视 摘要】目的探讨血涂片血小板计数方法的意义。方法取抗凝静脉血制成血涂片，经瑞氏染色后普通光学显微镜下间接数血小板，将其结果血细胞分析仪上测出血 小板计数和手工法计数进行比较。结果配对t检验比较，血小板降低组血涂片法 与血细胞分析仪计数进行比较，差异有统计学意义（P＜0.01），与手工法计数血 小板结果相比较，差异无统计学意义（P＞0.05），血小板正常组和增高组用血涂 片法分别与血细胞分析仪计数和手工法计数进行比较，各方法间差异无统计学意 义（P＞0.05）。结论结果显示，对血小板正常或升高的标本，血细胞分析仪计 数结果比较准确，但对血小板降低的标本，计数结果准确性较差。血涂片法间接 计数血小板直观、准确，具有一定的临床应用价值，对血细胞分析仪有复核作用。【关键词】血小板计数血涂片法血细胞分析仪手工法 作为血常规检查项目之一的血小板计数，临床医生和患者都越来越关心其检 查结果的准确性。因此，迫切要求准确计数血小板，保证实验室所测得的血小板 数是患者体内血小板数的真实体现。另一方面引起人们对血小板计数结果关注的 原因是目前所有的血小板计数方法都存在不少缺陷。迄今为止，所有计数血小板 的方法对于血小板减少的标本的准确性都比较差，亟需研究改进。本文采用两种 血涂片间接计数血小板的方法，将其结果与自动血细胞分析仪和手工法计数结果 进行比较，探讨血涂片法计数血小板的临床意义。 1 材料与方法 1.1标本采集收集2006年10月至2009年10月在本院住院及门诊患者标本 共150例。以同期血细胞分析仪所做质控结果为标准，根据血小板数量将患者标 本分成3组：血小板降低组（血小数小于100×109/L）50例；血小板正常组[血小 板数（100-300）×109/L]50例；血小板增高组（血小板数大于300×109/L）50例，所有标本均为乙二胺四乙酸抗凝静脉血。 1.2仪器与试剂日立牌CA-800型血细胞分析仪、普通显微镜、血细胞计数板。瑞氏染液、10g/L草酸铵稀释液。 1.3方法 1.3.1血涂片法取抗凝血10uL涂片，经瑞氏染色后分别用两种方法计数血涂 片中的血小板数。（1）血涂片A法：选择血涂片上细胞分布均匀的区域，在计 数1000个红细胞的同时计数血小板数，求得血小板与红细胞比值，将此比值乘 以同一份标本经血细胞分析仪测定所得的红细胞数，得到该血涂片法计数的血小 板数[3]。（2）血涂片B法：计数血涂片上100个白细胞的同时计数血小板数， 求得血小板与白细胞数，得到该血涂片法计数的血小板数[4]。 1.3.2血细胞分析仪法采用CA-800型血细胞分析仪测定标本的血小板、红细胞、白细胞数，所有标本采集后于1h内完成检测。 1.3.3手工法计数采用草酸铵稀释法同时计数血小板数。 1.4统计学方法数据处理、采用配对t检验比较和P值判断。 2 结果 结果见表1。由表1可见，血小板降低组4种方法两两比较，血涂片A、B法 及手工法分别与血细胞分析仪法比较，差异有统计学意义（P＜0.01），血涂片A、B法与手工法比较，差异无统计学意义（P＞0.05）；血小板升高组4种方法两两 比较，差异均无统计学意义（P＞0.05）；血小板正常组4种方法两两比较，差异 统计学意义（P＞0.05）。
血小板抗体检测及交叉配血
邹平县人民医院血小板抗体检测及交叉配血 一、目前血小板输注状况 随着输血技术的发展、成分输血的推广,血小板输注是预防和治疗因血小板减少或血小板功能缺陷引起的出血、并可降低放疗和化疗后血小板减少导致出血的病死率的一种有效措施,近年来在临床上的应用日益普遍,但多次输血或输多次及多人份的血小板可以导致血小板输注无效(platelet transfusion refractoriness, PTR),这也引起了全世界的关注。 血小板上的非特异性抗原中HLA-I类抗原及ABH抗原在血小板输注中具有临床意义。供者与受者之间HLA抗原不合可能产生HLA抗体，而HLA抗体是导致PTR最常见的免疫性原因。血小板特异性抗体（HPA抗体）常和HLA抗体共存，单独由血小板特异性抗体引起的PTR比较少见。由于本院输注血小板的病人多为血液病病人，这些病人输注血小板的量大且比较频繁，但长期输注后由于免疫因素或其他因素（如发热、严重感染、脾肿大和脾功能亢进、DIC、消耗性凝血障碍等）导致PTR的发生频率也比较高，这为开展血小板抗体检测提供了条件。 由于ABO、HLA、HPA等抗原不合是引起PTR的主要免疫因素，因此对于存在HLA和HPA抗体的患者，比较满意的治疗方案是选择ABO同型、血小板HLA和HPA交叉配型相合的单一供者的血小板输注，即相容性血小板输注，取代目前临床上普遍采用的随机血小板输注。 二、输血科开展的新项目
1.血小板抗体筛查：使用HLA抗体筛查试剂盒，采用ELISA方 法筛查HLA I类IgG抗体。 2.血小板交叉配型：采用双抗体夹心ELISA方法检测针对血小 板GP IIb/IIIa和HLA I类抗原的IgG抗体，方法快速、灵敏，并可区分血小板特异抗体和HLA I类抗体。 三、临床意义 1. HLA抗体检测 （1）对于血小板输注无效的病人，通过检测血小板HLA I类抗体，可以协助医生寻找病人血小板输注无效的原因。 （2）指导医生为HLA I类抗体阳性的病人选择合适的血小板输注方案，使宝贵的血液资源得到合理有效的利用。 （3）对于反复输注血小板的病人，定期测定血清中的HLA抗体可以预测血小板输注效果，并能及时发现导致病人血小板输注无效的免疫性因素。 2. 血小板交叉配型 （1）区分病人血小板抗体的类型。 （2）对于免疫性血小板输注无效的病人，通过进行血小板配型，可以为病人选择相对应抗原阴性的血小板进行输注，从而提高血小板输注效果，并能减轻病人的经济负担。 四、检测说明 采用不抗凝的采血管采集血液标本。标本要求无溶血，无乳糜，无杂物。