体外抑菌实验方案

体外抑菌实验方案
体外抑菌实验方案

体外抑菌实验方案

体外实验室是筛选抗菌药物或测试新药抗菌性能的重要环节。药物对细菌代谢的影响,可以使细胞呼吸量减低,或酶系统受到抑制等,因而出现细菌停止生长或部分抑制,借以判断药物对细菌有无抗菌作用或抗菌范围。体外实验是细菌与药物直接接触,没有机体诸因素参与,故体外和体内实验的结果不一定完全一致,需两方面综合分析进行评价。

一、体外实验的准备

(一)实验菌株的选择

一般使用实验室保存的典型菌株和临床分离菌株。

(二)培养基的制备

选择适合细菌生长繁殖的营养物质的培养基

(三)实验器皿的准备

抗菌实验的步骤需用无菌操作,应用的试管、平皿、吸管等与细菌接触的器皿,均需经过高压灭菌后应用。

(四)药物的准备

实验时称取一定量的药物,铵盐基折算成效价/mg,配成溶液或制成均匀的混悬液,pH调至中性。

(五)菌液制备

抗菌药物实验是针对细菌的作用,实验菌株不能含其他杂菌。

(六)细菌计数

将菌稀释至OD值为0.002(实验时1ml菌液加1ml药液OD值降为0.001)二、体外抗菌实验(试管稀释法)

(一)1ml药液采用8个梯度:500、100、50、25、10、5、2.5、1.25(ug)。

配置方法:

每个药液浓度为1ml,8个梯度总共694ug,取整700ug。

(1)称取700ug待测物,溶解在1.4ml溶剂中得到500ug/ml的药液。

(2)从500mg/ml的药液中取0.4ml,加入1.6ml溶剂得到100ug/ml的药液。(3)从100mg/ml的药液中取1ml,加入1ml溶剂得到50ug/ml的药液。

(4)从50mg/ml的药液中取0.5ml,加入0.5ml溶剂得到25ug/ml的药液。(5)从50mg/ml的药液中取0.5ml,加入2ml溶剂得到10ug/ml的药液。

(6)从10mg/ml的药液中取1ml,加入1ml溶剂得到5ug/ml的药液。

(7)从5mg/ml的药液中取1ml,加入1ml溶剂得到2.5ug/ml的药液。

(8)从2.5mg/ml的药液中取1ml,加入1ml溶剂得到1.25ug/ml的药液。

(图示如下图)

(二)1ml菌液采用OD值0.002的菌液

配置方法:菌悬液在600nm波长下测定其OD值,根据具体的OD值按10倍稀释使菌悬液的OD值接近0.002,在接近0.002后缩小稀释倍数使菌悬液OD 值为0.002。

(三)菌药混合培养

取稀释药液各1ml分装于小试管内(从稀到浓可不换吸管),做好标记,然后取经培养16-18h细菌培养液,每管1ml,每小试管总量为2ml,置37℃培养箱内培养16-18h,检查结果。

(四)结果分析

如加入细菌的药液管仍未澄清,即表明无细菌生长,则该管药物有抗菌作用;如为浑浊,即表明细菌已生长,该管药物无抗菌作用。以完全无细菌生长的最低药物浓度作为细菌对药物的敏感度,即为该药物最小抑菌浓度。

实验室建设规划方案

实验室建设规划方案 院(部)(盖章) 年月日

一、实验教学中心概况 含:二级学院概况(学科、专业、生师数等); 实验中心概况(中心设置、实验室数、面积数、设备总值等); 人员概况(专任管理员和实验教学老师等) 用1-2段文字叙述。 二、实验室建设指导思想 1、基本原则和依据 2、建设思路(含总体规划:分三阶段进行建设) 3、实验中心组织结构图(如下例)

三、实验室管理队伍 实验室管理人员概况简述 XXX学院实验室管理人员一览表 注:实验教学中心主任应由具有副高及以上职称教师担任,同一人不能兼任两个及以上中心主任。 四、实验室建设规划平面图(详附件1) 实验大楼实验室要求用CAD格式

五、实验室建设规划阶段 建设阶段规划概述 实验室建设规划一览表

六、特色实验室或特色实验项目介绍 各学院应根据本学科专业特点,结合学校应用型人才培养定位,有针对性的重点建设若干间特色鲜明,能体现我校地方性和应用性人才培养特色实验室,并开设一些特色实验项目。在此做300-800字左右的介绍。 七、实验室建设情况 (一)XXX实验教学中心 1、XXX实验室 按各实验教学中心,对各实验室进行介绍,主要包括: (1)实验室简介 (2)在人才培养过程中所起的作用,如实验室服务的专业、承担的实验课程等内容。 (3)实验项目开设情况一览表。 XXX实验室实验项目开设情况一览表 注:1、实验类型分为:演示/验证/综合/设计性实验; 2、实验隶属课程信息应按按人才培养方案填写;其中课程类型分为:公共基础、学科基础、专业(核心和拓展)、专业方向。简写为“基础/学科/专业/方向”。 (二)XXX实验教学中心 1、XXX实验室 ……..

抗菌实验方法

一、抗菌实验 字体[大][中][小] (一) 体外抗菌实验 1. 实验前的准备工作 (1) 培养基的准备:肉汤琼脂培养基、真菌琼脂培养基等均可按药典规定的方法配制。 (2) 药液的准备:一般采用中草药水煎液,经滤过浓缩成1:10~1:1的浓度,试验前的药液需灭菌,以免污染影响结果。 (3) 试验菌株的选择及制备:一般使用典型的菌株,或从临床分离经鉴定后取得的菌株,如金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、痢疾杆菌、绿脓杆菌、链球菌、肺炎双球菌、白色念珠菌、酵母菌及真菌等。 细菌菌液的制备:将斜面菌种接种于普通肉汤培养基中,肺炎双球菌及溶血性链球菌须在上述培养基中加入5%~10%血清,或加入25%(V/V)或20%猪血水,37℃培养6~8小时或16~18小时。 真菌菌液的制备:将菌种接种于大试管中,并在22℃~25℃培养24小时或7天(视菌种及生长速度而定),然后用灭菌生理盐水10mL洗脱制成混悬液。 菌液的浓度一般先采用培养液,如不显示抗菌作用,可再稀释成一定浓度。金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、绿脓杆菌、痢疾杆菌可用1:1000浓度,肺炎双球菌、溶血性链球菌、白色念珠菌、酵母菌可用1:10或1:100浓度。 2. 实验方法 (1) 平碟法:取熔化后的培养基,每平碟(培养皿)倒入15mL,待凝固后,在培养基表面划线接种试验菌株,在划线的中间位置安放一个灭菌的不锈钢圈,在圈内滴入试验药液。也可采用打洞法,即在凝固的培养基上用已灭菌的打孔器打孔挖去琼脂块,将药液滴在洞内。用灭菌陶盖盖好,细菌在37℃、真菌在22℃~25℃培养18~20小时,观察细菌生长情况,如全线生长则认为该浓度的药液无抗菌作用,如细菌或真菌划线为药液所切断,则认为该浓度药液有抗菌作用。 (2) 平碟稀释法:先将中药药液2mL加入平碟内,再加入已溶化的培养基8mL,充分摇匀,待凝固后,划线接种菌株,同时用水2mL代替药液制作空白对照平碟,方法同样,接种后,将平碟倒置,在37℃(真菌在22℃~25℃) 培养18~20小时,观察结果。如对照碟长菌、药液碟不长菌,则认为有抗菌作用。 (3) 试管法:取试管12支,在每一试管中加入培养基5mL,于第1管中加被试药液5mL,混合均匀,吸出5mL加到第2管中,混合均匀,再吸5mL加到第3管中,依次操作,直到第10管,将第10管混合均匀后吸出5mL弃去,其药液稀释依次为1:2,1:4,1:8,……1:1024,再于前11管中各加入适当浓度的菌液0.1mL,第11管作为菌液对照,第12管不加菌液,加被试药液0.1mL,作为药液对照。将其全部在37℃(真菌22℃~25℃)培养16~24小时(真菌24~72小时),观察各管菌株生长情况。如菌液对照管浑浊,表示菌株生长良好;药液对照管澄明,表示药液没有染菌。再将试验管与对照

【优质】实验设计方案怎么写-优秀word范文 (5页)

本文部分内容来自网络整理,本司不为其真实性负责,如有异议或侵权请及时联系,本司将立即删除! == 本文为word格式,下载后可方便编辑和修改! == 实验设计方案怎么写 实验设计方案怎么写 首先要知道实验目的,然后找到适合的实验方法,再根据实验方法设计实验步 骤(如果是现成的方法更好),根据步骤归纳总结所需要的仪器试剂等,最后 按照实验目的,实验原理,实验方法,仪器试剂,实验步骤,数据处理这几部 分进行总结即可。 开放实验室管理系统设计方案怎么写 在学校实验室的管理中,发现了一些问题,其中如:在统筹安排各班级上实验 课的时间需要人工实现,而且经常会出现同时有多个班级要使用实验室的冲突,并且调课后没有及时通知老师和班级同学。为了方便实验室的管理,我们提出 利用网络来管理实验室的上机情况。以学校的网络实验室为背景,开发一个开 放实验室管理系统设计方案......... 六. 实验室管理信息系统??功能描述:??实验室的使用情况、查看实验信息、增加实验项目、增加实验材料。实验室的管理员通过本系统可以清楚的掌握实 验室当时的使用情况;同时管理员还可以通过系统的操作界面清楚地了解其中 任何一个实验室的试验信息(例如:实验项目的个数、预约的实验时间、实验 项目的名字、所需要的实验器材、实验人数等);当外界人员需要申请在某一 实验室做项目时,管理员可以通过查看实验室的使用情况而合理的给申请者安 排做实验的时间;为了方便增加实验项目输入实验信息,在系统中备份一些实 验常用的实验器材,但是每个实验对器材的要求是不一样的,在系统中我们可 以任意的加进实验所需器材,为了提高管理效率系统将器材分为大型中型和小 型三类 学校下周让交一份自己设计的实验方案!基本要求??a、实验题目。(如测量某一物理量)??b、写出实验的理论依据及实验公式的推导过程。??c、根据实验 要求合理选择所需仪器。??d、实验步骤、注意事项。??e、对结果进行分析, 得出结论。??当然不是自己做的也差不多,推荐些网址也行。 实验目的:验证上端开口盛水容器底部小孔出水速度v与小孔离液面高度h之 间的关系??实验器材:底部侧面钻有小孔的大容器、米尺、软木塞、铅直器。??实验步骤:??1.用软木塞封闭小孔;??2.将容器置于一定高度H处,并向其 中加深度为h的水,??3.拔开软木塞让水流流动一小段时间后再封闭小

抑菌活性实验设计方案

八宝景天抑菌活性实验方案 1 材料与仪器 1.1 材料 八宝景天(茎、叶、花),采摘于吉林农业大学校园,去离子水洗净,阴干,经粉碎机粉碎(过40~60 目筛),所得植物粉用密封袋于遮光处保存备用。 1.2 微生物 真菌:黄瓜枯萎病菌(Fusarium oxysporum)、黄瓜黑星病菌(Cladosporium cucumerinum)、辣椒炭疽病菌(Colletotrichum nigrum)由吉林省蔬菜花卉科学研究院提供。番茄叶霉病菌( Fulvia fulva )、番茄早疫病菌(Alternaria solani)、甜瓜茎腐病菌(Fusarium gramimearum)、水稻立枯病菌(Rhizoctonia solani Kuhn)、番茄灰霉病菌(Botrytis cinerea)、黄瓜菌核病菌(Sclerotinia sclerrotium) 均由吉林农业大学农学院植物病理研究室提供。 1.3 试剂与仪器 95%乙醇分析纯国药集团化学试剂有限公司 葡萄糖分析纯国药集团化学试剂有限公司 琼脂粉生化试剂天津科密欧化学试剂有限公司 马铃薯 JFSD-100粉碎机上海淀久中药机械制造有限公司 JJ200型精密电子天平美国双杰兄弟有限公司常熟双杰测试仪器厂HH-S数显恒温水浴锅江苏省金坛市医疗仪器厂 RE-2000旋转蒸发器上海亚荣生化仪器厂 SHZ-III型循环水真空泵上海亚荣生化仪器厂 TDL-5A低速大容量离心机上海悦丰仪器仪表有限公司 生化培养箱SPX-250型上海跃进医疗器械厂 ZKF035电热真空干燥箱上海实验仪器厂有限公司 KQ5200B型超声波清洗器昆山市超声仪器有限公司 不锈钢手提式灭菌器上海申安医疗器械厂 超净工作台上海生物科技有限公司

抗菌抗病毒常用实验研究方法知识

抗菌抗病毒常用实验研究方法 细菌、病毒性疾病是目前国内外流行的主要传染病,尤其是近两年来,由冠状病毒引起的SARS及由流感病毒引起的禽流感给动物及人类带来的严重危害,是人所共知的"由于各种疫苗的不断出现,虽然一些细菌、病毒病已得到了有效的控制,但是其治疗尚无有效的解决方法因此研制高效、低毒的新型中药抗菌、抗病毒制剂已成为巫待解决的问题。 1、常用的抗菌方法 1、1稀释法 1、1、1试管稀释法 培养基内抗生素的含量按几何级数稀释并接种适量的细菌,经孵育后,观察能引起抑菌作用最低抗生素浓度,称最低抑菌浓度(MIC)为该菌对药物的敏感度。稀释法所获得的结果比较准确,常被用作校正其他方法的标准。如以下黄贝贝等的青钱柳抗菌作用的实验研究和黄利权等的火绒草的抗菌活性研究的实验方法: 1、应用试管稀释法,测定青钱柳提取物对试验菌的抑菌效果,检验不同浓度下青钱柳提取物对细菌、霉菌的抗菌作用。结果:青钱柳提取物在体外对金黄色葡萄球菌、乙型溶血性链球菌等革兰氏阳性菌具有较强的抗菌作用;而对大肠埃希氏菌、铜绿假单孢菌等革兰氏阴性菌的抗菌作用不明显;对黄曲霉、烟曲霉等霉菌的抗菌作用不明显[1]。 2、采用试管稀释法,分别测定了火绒草水煎液、水提醇沉液、醇提物、醇提石油醚部分、醇提乙酸乙酯部分、醇提正丁醇部分、醇提水溶部分等7种提取物对大肠杆菌C83882、大肠杆菌C8390 3、大肠杆菌C8391 4、沙门氏菌C79-20、金黄色葡萄球菌Newbould S-30 5、金黄色葡萄球菌临床分离株等6株病原菌的最低抑菌浓度(MIC)和最低杀菌浓度(MBC)。试验结果表明,火绒草醇提物及其石油醚部分和乙酸乙酯部分对两种金黄色葡萄球菌具有较强的抑制作用,其MIC为0114 mg/ml生药浓度,MBC为0127 mg/ml生药浓度,而其它部分对金黄色葡萄球菌的抑制作用较弱。火绒草醇提正丁醇部分和水溶部分对3株大肠杆菌和1株沙门氏菌具有较强的抑制作用,其MIC为2170 mg/ml生药浓度,MBC为2170 mg/ml 生药浓度,显示了较强的抗菌活性[2]。 1、1、2肉汤稀释法 以水解酪蛋白(M-H)液体培养基将抗生素作不同浓度的稀释,然后种入待检细菌,定量测定抗菌药物抑制或杀死该菌的最低抑菌浓度(MIC)或最低杀菌浓度(MBC)。 如刘菁菁的研究蓝玉簪龙胆对耐甲氧西林金黄色葡萄球菌( MRSA) 的体内外抗菌活性。蓝玉簪龙胆分别以乙醇、氯仿、正丁醇、蒸馏水提取,得到极性不同的4部分产物,利用肉汤稀释法测定其对 MRSA 和甲氧西林敏感金黄色葡萄球菌( MSSA) 的最低抑菌浓度( MIC) ; 体内实验部分: 采用腹腔注射 MRSA 法建立小鼠感染模型,分别给予蓝玉簪龙胆水提液高、中、低剂量,银黄胶囊治疗 15 d,并与模型对照组比较,观察存活率。结果:体外实验: 蓝玉簪龙胆各极性组分对 MRSA 和 MSSA 菌株均有不同程度的抑菌作用,其中正丁醇组分抑菌作用最强,其次为乙醇、水层组分; 体内试验: 除了蓝玉簪龙胆大剂量组,其余各治疗组存活率均高于模型对照组,而蓝玉簪龙胆中剂量组存活率最高。结论蓝玉簪龙胆对 MRSA 和 MSSA 均具有一定的抗菌作用,而且敏感性差异无显著性; 对MRSA 感染小鼠有一定治疗作用[3]。胡景玉等为了了解衡水地区大肠埃希菌的药

测绘实验室建设思路与规划实施方案

一、建设意义 1998年,美国副总统戈尔首次以美国政府的名义提出数字地球的概念,测绘科学在原有的基础上,密切集成了空间技术、计算机技术、通讯技术、信息技术等多种现代高新技术,从而得以迅猛发展。它已不再是简单意义上的以获取地理坐标为目的的测量工程,而是成为一项重要的与地理相关的信息产业。测绘行业的服务范围和对象在不断扩大,已经从单纯的测绘基本地形图扩大到国民经济和国防建设中与空间数据有关的各个领域,包括农业、林业、水利、军事、城市规划、环境、交通、土地利用等等。美国劳工部在Nature上发表文章,将测绘技术、纳米技术、生物技术并称为21世纪最具发展前途的三大技术,是劳动力需求增长最快的领域之一,这一点已经从日益流行的地球空间查询系统“Google Earth”上得到证实。现在,通过“Google Earth”上的高分辨率卫星图像,加上功能强大的信息管理功能,可以很方便地查找到任何一个地面建筑,小到楼梯口,甚至马路上的窨井盖。强大的微软公司也不惜代价开发了类似的基于测绘信息的虚拟地球系统“Virtual Earth”,以求在这一极大的潜在市场中占有一席之地。可以预计,未来的几年中,真实世界中的整个空间将会大量地出现在虚拟的计算机世界中,而这一切都离不开最基础的空间测绘数据和地理信息技术。 我国也同世界先进国家一样,充分认识到基础空间测绘技术的重要性,在863计划中,特别在近年增加了“对地观测与导航领域,成为863计划的十大领域之一。由于我国耕地的稀缺性和重要性,为了保住18亿亩耕地的底线,国家在两年之内要完成第二次全国土地详查,并在以后进行常规性土地变更调查;此外,由于我国的城市化建设还处于开始阶段,公路、铁路、各种输电、输油管路等大量基础设施建设项目也持续增长;这一切都离不开大量的测绘人才。因此,许多高校或职业技术学院或者增设了测绘专业,或者在相关专业中增设了测绘相关的课程,以满足日益增长的测绘人才需求。 江苏省“两个率先”的全面建设,淮海经济区的迅猛发展和振兴徐州老工业基地的快速推进都需要大批实践能力强、综合素质高、极富创新精神的测绘专门人才和相关专业人才。徐州师范大学作为苏北地区的省属重点建设的高水平大学,将会在社会经济的诸多方面承担自己的人才培养、科学研究、服务社会的责任,对苏北地区乃至整个淮海经济区的经济发展,尤其是科学技术文化的发展,起到重要作用。 测绘学科是一个以应用为基础的工程学科,基础测绘数据的采集离不开大量的野外测量或室内计算机处理;测绘与地理信息技术的结合,是现代测绘服务于社会的重要形式。无论是在基础测绘数据采集,还是在地理信息服务的过程中,都需要大量的测绘仪器操作或计算机应用软件使用。这些特性决定了测绘专业人才必须要具有强大的实践能力和与时俱进的创新能力。作为拥有江苏省“测绘工程”特色专业的徐州师范大学测绘学院,在基础课实验教学示范中心的建设过程中,将会进一步增强学生实践能力的培养,提高学生的专业技术水平,从而适应经济发展和社会需求。

实验七杀菌剂生物活性测定方法——抑菌圈法

v1.0 可编辑可修改 1 实验七杀菌剂生物活性测定方法——抑菌圈法 一、实验目的 学习并掌握杀菌剂的离体活性测定方法——抑菌圈法。 二、实验原理 抑菌圈法即水平扩散法基本原理是在已接种供试菌的琼脂培养基上施以少量抗菌性物质或杀菌剂,使之接触培养基和病菌,经定温培养一定时间后,因药剂的渗透扩散作用,施药部位周围因杀死了病菌而抑制了其在培养基上的生长,从而产生了抑菌圈。在一定范围内,抑菌圈直径的平方或面积与药剂浓度的对数呈直线函数关系,从而可比较供试样品杀菌活性大小。其最大优点是精确度高,操作简单,能较快得出结果。但测定结果受药剂溶解性和扩散能力影响很大,具一定局限性。根据药剂施加在琼脂培养基表面方式不同,又分为管碟法(牛津杯法)、滤纸片法、孔碟法、滴下法等,其中以管碟法和滤纸片法应用最广。 三、实验材料 供试药剂:速克灵或扑海因。供试病原菌:番茄灰霉病菌。 实验器材:无菌水、无菌接种针、灭菌三角瓶、玻璃珠、灭菌双层纱布、75%酒精棉球、消毒摄子、移液管、试剂瓶、吸耳球、超净工作台、胶头滴管、尺子。 四、实验方法 采用管碟法。将供试药剂加于放置在琼脂培养基表面的用不锈钢制成的小圆筒(又称为牛津杯,一般为外径8 mm,内径6 mm,高10 mm)内,定温培养一定时间后测量抑菌圈大小。 1.配制药液:用灭菌蒸馏水将供试药剂配成一系列梯度浓度,一般5-7个浓度。灭菌蒸馏水为对照。2.制备一定“浓度”的供试菌悬浮液:如真菌,则宜用孢子悬浮液。在培养好的菌种上倒入10 mL灭菌水,用接种针轻轻刮动平面孢子悬浮,倾于灭菌三角瓶内(事先装数粒玻璃珠)摇动5 min,将孢子悬浮液用灭菌双层纱布过滤入另一灭菌三角瓶内。用低倍(15×20倍)显微镜检查,调节孢子浓度,每视野80-100个孢子为宜;以上操作应在无菌条件下进行,动作要迅速准确。 3.浇制双层培养基:将装在试管内已灭菌的清水琼脂培养基10 mL溶化后,趁热倒入9 cm直径培养皿中,水平冷凝。将适合供试菌生长发育的100 mL培养基熔化后冷至45-50℃左右后,迅速吸取10 mL菌液加入培养基中,充分混匀后,立即吸取5 mL带菌培养基加在已凝固的清水琼脂培养基上,并使之均匀地铺在底层上。 4.注药用消毒镊子夹取不锈钢小管(即牛津杯,外径8.0mm、内径6.0mm、高10mm),每皿内按合适的间隔放置6个不锈钢小管,其中1个小管为对照,其余5管为5种不同浓度的药液(药液加至在管口形成凸面),在适合的温度下培养。 6.结果检查培养一定时间后,取出用十字交叉法测量抑菌圈直径,并以抑菌圈的有无及抑菌圈大小评价杀菌活性。若抑菌圈直径呈椭圆形,长短之差超过一个单位,最好舍去不要。

药物的体外抑菌试验

实验五药物的体外抗菌试验 药物的抗菌试验是为了检查药物的抗菌能力。该项试验方法已广泛应用于新药研究和指导临床用药。如抗菌药物的筛选,提取过程的生物追踪、抗菌谱的测定、耐药谱的测定、药敏试验、药物血浓度测定等各个方面。 药物的体外抗菌试验在实验室进行,优点是方法简便、需时短、用药量少,不需要活的动物、实验条件容易控制。因此,药物的体外抗菌试验已广泛应用各种测定了。 药物的体外抑菌试验是常用抗菌试验方法,其中最常用的方法用系列稀释法和琼脂扩散法。 (一)稀释法(结果示教) 稀释法有液体培养基连续稀释法和固体稀释法(斜面法)两种。这两种方法都可以用来测定药物的最小抑菌浓度(MIC):是指该药物能抑制细菌生长的最低浓度,通常用μg∕ml或U/ml表示。 (二)琼脂扩散法 它是将抗菌药物加至接种试验菌的平板表面,抗菌药物在琼脂胶内向四周自由扩散,其浓度随扩散距离增大而降低,在药物一定的扩散距离内,由于药物的抗菌效应,试验菌不能生长,此无菌生长的范围称为抑菌圈,抑菌圈的大小与药物的抑菌效应成正比。琼脂扩散法常有纸片法、管碟法、打洞法和挖沟法。 滤纸片法(K-B纸片法)-学生操作 滤纸片法是最常用的方法,适用于新药的初筛试验(初步药物是否有抗菌作用)及临床的药敏试验(细菌药物第三性试验、以便选择用药)。滤纸片分湿、干两种,可以在试验时用无菌纸片沾取药物溶液放在含菌的平板表面,也以预先做成一定浓度的干燥纸片。一般来说预先做成的干燥纸片实用一些而且准确一些。 至于干燥纸片的制备方法:选用吸水力强而且质地均匀的滤纸,用打洞机制成6mm直径的圆纸片,120℃干燥灭菌2小时。然后把配制好的各种适宜浓度的抗生素溶液,每100张纸片加入0.5ml药液,使它均匀浸润,放在无菌平皿中,

抑菌试验方案

利用吸附法测定壳聚糖无纺布抑菌性能试验方案 一、实验原理:本实验参考了国标GB/T20944方法,根据我们的材料特性进行了微调。即:选取革兰氏阴性菌(大肠杆菌(25922))和革兰氏阳性菌(金黄色葡萄球菌(25923))两类代表性指示微生物。将测试材料浸泡在活化好的菌悬液(浓度控制为107CFU/ml)中,设置不同处理时间,稀释涂布,平板单菌落计数,计算无纺布材料的抑菌性能。 二、实验方法: 2.1试验菌种的活化 1)冻干粉接种至大豆蛋白肉汤(TSB)培养基,37℃培养24h。一部分用于抑菌试验,另一部分用于划线接种至斜面或平皿冷藏保藏(可保藏1个月)。 2)培养液稀释。活化好的菌悬液用稀释液稀释20倍,取1ml培养液添加到19ml稀释液(应提前灭菌)中。 3)式样预处理。大小合适的试样饱和吸水,灭菌处理。(周教授负责) 4)菌悬液洗涤。将稀释好的菌悬液转移到试样中,分别震荡15min 和30min,为防止微生物传代,影响试验结果,立即放入冰箱冷藏。 5)洗涤液梯度稀释。处理后的洗涤液立即梯度稀释到10-1, 10-2,10-3,10-4和10-5。具体方法:取1ml洗涤原液加入9ml稀释液此时为10-1梯度;取1ml稀释后的10-1菌液加入到9ml稀释液,此时为

10-2梯度;······。 6)涂布。分别取10-3,10-4和10-5的稀释液200ul涂布到平板(计数培养基,简称EA),每个处理做2个平行,37℃,培养24-48h,计数。 7)抑菌效果评价。参照GB/T20944。 三、试验简易流程 注:如果活化后的菌液浓度较高,可取10-4、10-5和10-6梯度稀释液涂布。

试验室建设实施方案{项目}

长城路桥建设集团有限公司工地试验室临建方案 编制: 复核: 审核: 宜宾至彝良高速公路南绕三分部 2015年5月

目录 一、前言................................. 错误!未指定书签。 二、选址................................. 错误!未指定书签。 三、规划................................. 错误!未指定书签。 四、环境建设............................. 错误!未指定书签。 五、其他设施............................. 错误!未指定书签。 六、标牌、标志........................... 错误!未指定书签。 七、人员配备............................. 错误!未指定书签。 八、设备配置............................. 错误!未指定书签。 九、办公设施............................. 错误!未指定书签。 十、交通工具............................. 错误!未指定书签。十一、体系建设........................... 错误!未指定书签。十二、试验室平面图....................... 错误!未指定书签。

工地试验室建设方案 一、前言 根据厅质监字〔2012〕200号交通运输部办公厅关于印发工地试验室标准化建设要点的通知和川交函〔2011〕98号关于四川省高速公路工地标准化建设指导意见,结合公路工程工地试验室标准化指南和该项目的实际内容,本着工地试验室标准化建设坚持因地制宜、务求实效和经济适用的工作原则,保证试验检测数据的客观和准确性,不盲目过分加大投入,片面追求表面效应的基本要求,特制定此实施方案。 二、选址 1、本着安全、环保、交通便利、及工程质量管理要求等因素,试验室驻地选址在佛现山隧道出口驻地区,周围无山体崩塌、滑坡、泥石流、地面坍陷、地裂缝、地面沉降等隐患。房屋采用7.5彩钢活动板房,两层,位于佛现山隧道出口办公楼后面,相距8M。 2、安全环境均满足标准化要求,交通畅通,有水源、能源、信息交换和协作条件、通信畅通,满足信息化办公需求。 三、规划 1、试验室根据工作、生活所需面积,结合实际情况合理利用地形、地貌、地物和空间以及现有的设施等合理规划。 2、试验室新建房屋一栋两层,其中一楼为功能区,一楼功能区房间共九间,二楼为办公室资料室和试验室职工宿舍。功能室分别为

抗菌肽体外抑菌实验方法

微量肉汤稀释法(borth microdilution method) 实验方法: 1.用无菌蒸馏水在聚丙烯离心管中将抗菌肽和抗生素溶解制成1280 g/L的储 备液,然后用等量无菌的0.02%乙酸(含0.4% BSA)稀释,在用0.01%乙酸(含0.2% BSA)溶液对等量稀释后的溶液在进行一系列的双倍稀释,得到质量浓度为640,320,160……1.25 mg/L的共10个梯度的系列稀释液, 4 ?C下保存备用。 2.将待测细菌在灭菌MH肉汤琼脂平板上过夜培养,挑取菌落接种于灭菌试管 中的MH肉汤,37 ?C,180 r/min过夜培养。将培养后的菌液稀释至2*10^5-7*10^5 CFU/mL,向无菌的96孔平板中的1-11孔各加入100 μL的菌液,12孔不加入菌液而加入100 μLMH肉汤,然后从1~10孔逐一加入相应的待测抗菌肽,11孔作为扫描对照组不加肽。37 ?C,90 r/min培养18-24 h,这样待测抗菌肽的终质量浓度分别为64,32,16,……0.125 mg/L。(不知道待测抗菌肽添加量是多少,最终抗菌肽的终浓度怎么缩小了10倍) 3.最小抑菌浓度MIC(mininmal inhibitory concentration)就是能阻止50%以 上细菌生长的最小肽浓度。用酶标仪在490 nm下对平板进行扫描,肽的MIC 的确定按照比对照孔(11孔)的浑浊程度低50%以上的最小质量浓度计算。 4.最小杀菌浓度MBC(minimal bactericidal concentration)就是能抑制任何残 余菌落生长的肽的最低浓度。从没有细菌生长的平板孔中的内容物中取10 μL涂布到MH琼脂平板上,37 ?C培养18 h,以此来确定肽的MBC。 参考文献: 【1】汪以真,抗菌肽与抗生素的体外抗菌效果比较[J].中国兽医学报,2004,24(3):270-273. 抗菌肽的体外抑菌实验(平板法) 1.稀释:将一定效价的抗菌肽做6个浓度的稀释,将抗生素按正常使用剂量同 样做6个浓度的稀释 2.指示菌:指示菌用液体LB培养基培养24 h后稀释至10^6 CFU/mL

中草药提取有效成分及抑菌试验的实验方案

题目:中草药提取有效成分及抑菌试验的实验方案 顾建凯,李威,宗凯,唐勇,吴杰 (生物技术0901) 一、问题的提出 西药抗生素的抗菌作用不容置疑,但其毒副作用、所引起的过敏反应、二重感染及细菌的耐药性等使其应用受到一定限制;单味中药抗菌谱一般较窄,其效用难以适应复杂而多变的病情;中药复方制剂因含多种有效成分,具有多方位的综合效用,抗菌谱广,且高效、低毒、不易产生耐药性等特点与优势,日渐受到学者们的重视。我小组想通过单味中药与中药复方制剂抑菌效果的对比,来验证中药复方的效果。 二、实验假设与理论依据 中医复方的抗菌作用所以优于单味药,主要在于通过配伍发挥了药物间的相辅相成作用,从而明显增强复方的抗菌效能。 三、实验目标 1.了解中药的抑菌作用 2.学习中药有效成分的提取方法 3.验证中药复方制剂的抑菌效果优于单味中药; 四、实验对象、方法及手段 1.实验对象 实验室中老师所准备的各种微生物 2.实验方法 目前中药包括复方制剂杭菌作用的测定方法大部分是沿用抗菌素的研究方法,主要分为体外抗菌作用和体内抗菌作用两个方面。体外抗菌作用的测定方法又分为三类:一是连续稀释法,包括肉汤连续稀释法即试管两倍稀释法,肉汤琼脂斜面连续稀释法,肉汤琼脂平板连续稀释法;二是扩散法,包括纸片法,小杯法、打孔法等;三是熏蒸法,因其只限于挥发性物质抗菌作用研究,所以在复方制剂抗菌研究中很少使用。体内抗菌作用的测定多用动物实验性感染治疗模型,该模型均系注射大量细菌引起暴发型感染如小鼠致死性感染,家兔腹膜炎等。 五、实验内容(实验步骤) 1.中草药提取液的制备。将各中草药烘干、粉碎,用35%的酒精于50℃萃取48h,将提 取液离心后,减压浓缩.用35%酒精定容,使最终质量浓度为1g/ml。置于0-4℃冰箱中,备用; 2.培养基制备。○1按改良液体 马丁培养基常规制备方法 配制,用于测定中药M IC 值的培养基加入微量酚红(0 001%)。○2牛肉膏蛋白胨琼

试验室标准化建设方案样本

试验室标准化建设方案 1.试验室基础建设 1.1.设置原则 1.1.1.一施工单位原则上设置一处工地试验室, 如果施工单位线路 跨度较大, 应根据具体情况设置分试验室。 1.1. 2.工地试验室应设置在监理、施工项目经理部驻地或集中拌合 场内, 其周边场所、交通通道均应硬化。 1.2.选址要求 1.2.1.工地试验室应选择在交通相对便利, 尽量靠近公路。通信、 电力相对畅通, 满足信息化管理的基本要求。 1.2.2.严禁设置在泥石流、滑坡体、洪水位下等危险区域, 避开 取土、弃土场、坍方、落石、危岩等地段。必须距离集 中爆破区域500m以外。 1.3.硬件设施及环境要求 1.3.1.工地试验室原则上采用院落式封闭管理, 且生活区、工作区 必须分设。工作区设置科学合理, 办公区与功能室各功能区 面积应满足规定要求, 区内场地及主要通路应做硬化处理, 排水设施完善, 庭院适当绿化, 做到环境优美整洁。 1.3. 2.办公区内应设试验室主任办公室、技术员办公室、试验员 办公室、资料室等。功能室应根据工地内容和规模分设样品 间、土工室、集料室、化学分析室、水泥室、水泥混凝

土室、力学室、沥青室、沥青混合料室、检测室、标准 养护室等功能室。夏季在办公室设置防暑降温设施, 冬季在 办公室设置取暖设施。 1.3.3.工地试验室如采用板房, 其结构设计应考虑空间跨度、风雪 等极端气候的影响, 必要时应进行加固处理, 保证其使用周 期内安全可靠。对砖混结构房屋, 其墙面抹灰刷白, 地面硬 化, 镶贴地板砖。 1.3.4.混凝土压完试件应划定集中区域, 集中管理。 1.4.工地试验室具体要求 1.4.1.功能室总面积应≥355m2, 其中样品间面积应≥20m2, 土工 室面积应≥35m2, 集料室面积应≥30m2, 化学分析室面积应 ≥15m2, 水泥室面积应≥30m2, 水泥混凝土室面积应≥30m2, 力学室面积应≥30m2, 沥青室面积应≥25m2, 沥青混合料室 面积应≥35m2, 检测室面积应≥20m2, 标准养护室面积应≥ 30m2。另外, 办公室面积应≥40m2, 资料室面积应≥15m2。1.4.2.仪器设备安装应符合以下规定: ①设备应按照设备使用说明 书或试验规程相关要求进行安装。②设备需要安设基座与其 固定的, 应在试验室建设时根据布局设计设置基座, 基座顶 面应保持水平, 待设备就位调平后采用地脚螺栓进行固定。 对基座有隔振要求的应设立不与其它建筑物直接相连的独立 混凝土台座, 周围存在振源时应在地面与台座间设5mm厚橡 胶垫。③压力机、万能材料试验机等力学设备应设置金属

实验七杀菌剂生物活性测定方法——抑菌圈法.doc

v1.0可编辑可修改实验七杀菌剂生物活性测定方法——抑菌圈法 一、实验目的 学习并掌握杀菌剂的离体活性测定方法——抑菌圈法。 二、实验原理 抑菌圈法即水平扩散法基本原理是在已接种供试菌的琼脂培养基上施以少量抗菌性物质或杀菌剂,使之接触培养基和病菌,经定温培养一定时间后,因药剂的渗透扩散作用,施药部位周围因杀死了病菌而抑 制了其在培养基上的生长,从而产生了抑菌圈。在一定范围内,抑菌圈直径的平方或面积与药剂浓度的对 数呈直线函数关系,从而可比较供试样品杀菌活性大小。其最大优点是精确度高,操作简单,能较快得出 结果。但测定结果受药剂溶解性和扩散能力影响很大,具一定局限性。根据药剂施加在琼脂培养基表面方 式不同,又分为管碟法(牛津杯法)、滤纸片法、孔碟法、滴下法等,其中以管碟法和滤纸片法应用最广。 三、实验材料 供试药剂:速克灵或扑海因。供试病原菌:番茄灰霉病菌。 实验器材:无菌水、无菌接种针、灭菌三角瓶、玻璃珠、灭菌双层纱布、75%酒精棉球、消毒摄子、移液管、试剂瓶、吸耳球、超净工作台、胶头滴管、尺子。 四、实验方法 采用管碟法。将供试药剂加于放置在琼脂培养基表面的用不锈钢制成的小圆筒(又称为牛津杯,一般 为外径 8 mm,内径 6 mm,高 10 mm)内,定温培养一定时间后测量抑菌圈大小。 1.配制药液:用灭菌蒸馏水将供试药剂配成一系列梯度浓度,一般5-7 个浓度。灭菌蒸馏水为对照。 2.制备一定“浓度”的供试菌悬浮液:如真菌,则宜用孢子悬浮液。在培养好的菌种上倒入10 mL 灭菌水,用接种针轻轻刮动平面孢子悬浮,倾于灭菌三角瓶内(事先装数粒玻璃珠)摇动 5 min ,将孢子悬浮液用灭菌双层纱布过滤入另一灭菌三角瓶内。用低倍(15× 20 倍)显微镜检查,调节孢子浓度,每视野 80-100 个孢子为宜;以上操作应在无菌条件下进行,动作要迅速准确。 3.浇制双层培养基:将装在试管内已灭菌的清水琼脂培养基10 mL溶化后,趁热倒入9 cm直径培养皿中, 水平冷凝。将适合供试菌生长发育的100 mL培养基熔化后冷至45-50 ℃左右后,迅速吸取10 mL菌液加入培养基中,充分混匀后,立即吸取 5 mL 带菌培养基加在已凝固的清水琼脂培养基上,并使之均匀地铺在 底层上。 4.注药用消毒镊子夹取不锈钢小管(即牛津杯,外径8.0mm、内径 6.0mm、高 10mm),每皿内按合适的间隔放置 6 个不锈钢小管,其中 1 个小管为对照,其余 5 管为 5 种不同浓度的药液(药液加至在管口形成 凸面),在适合的温度下培养。 6.结果检查培养一定时间后,取出用十字交叉法测量抑菌圈直径,并以抑菌圈的有无及抑菌圈大小评价 杀菌活性。若抑菌圈直径呈椭圆形,长短之差超过一个单位,最好舍去不要。 1

试验室建设方案.docx

. 长城路桥建设集团有限公司工地试验室临建方案 编制: 复核: 审核: 宜宾至彝良高速公路南绕三分部 2015 年 5 月

目录 一、前言 (1) 二、选址 (1) 三、规划 (1) 四、环境建设 (2) 五、其他设施 (3) 六、标牌、标志 (3) 七、人员配备 (4) 八、设备配置 (4) 九、办公设施 (5) 十、交通工具 (6) 十一、体系建设 (6) 十二、试验室平面图 (7)

工地试验室建设方案 一、前言 根据厅质监字〔 2012 〕200 号交通运输部办公厅关于印发工地试 验室标准化建设要点的通知和川交函〔 2011 〕98 号关于四川省高速 公路工地标准化建设指导意见,结合公路工程工地试验室标准化指南 和该项目的实际内容 ,本着工地试验室标准化建设坚持因地制宜、 务求实效和经济适用的工作原则,保证试验检测数据的客观和准确性,不盲目过分加大投入,片面追求表面效应的基本要求,特制定此实施方案。 二、选址 1、本着安全、环保、交通便利、及工程质量管理要求等因素, 试验室驻地选址在佛现山隧道出口驻地区,周围无山体崩塌、滑坡、 泥石流、地面坍陷、地裂缝、地面沉降等隐患。房屋采用7.5cm 彩 钢活动板房,两层,位于佛现山隧道出口办公楼后面,相距8M 。 2、安全环境均满足标准化要求,交通畅通,有水源、能源、信 息交换和协作条件、通信畅通,满足信息化办公需求。 三、规划 1、试验室根据工作、生活所需面积,结合实际情况合理利用地 形、地貌、地物和空间以及现有的设施等合理规划。 2、试验室新建房屋一栋两层,其中一楼为功能区,一楼功能区房 间共九间,二楼为办公室资料室和试验室职工宿舍。功能室分别为

体外细菌实验方案

评价药物的抗幽门螺旋杆菌活性等指标 ⑴检测药物对幽门螺旋杆菌标准菌株的最小抑菌浓度。 ⑵检测药物对幽门螺旋杆菌标准菌株的最小杀菌浓度。 ⑶检测药物对临床各种幽门螺旋杆菌耐药菌株的最小抑菌浓度。 ⑷评价药物对临床一线治疗幽门螺旋杆菌药物甲硝唑、阿莫西林、克拉霉素 等是否具有协同作用。 ⑸评价幽门螺旋杆菌标准菌株对药物是否耐药及耐药频率是多少?该药物与 临床治疗幽门螺旋杆菌一线药物是否存在交叉耐药。 ⑹评估药物的毒性。 ⑺看是否可以构建幽门螺旋杆菌的持留菌模型,以检测药物对处于持留状态 的幽门螺旋杆菌是否具有杀灭作用。 ⑻评价在酸性条件下,药物对幽门螺旋杆菌是否也具有抑制作用。 实验方法 药物对幽门螺旋杆菌标准菌株及临床各种耐药菌株最小抑菌浓度(Minimum 甲硝唑ibitory concentration, MIC)的测定药物对幽门螺旋杆菌最小抑菌浓度MIC是评价药物活性一个非常重要的指标。具体方法如下: 1培养细菌到达对数期,此时OD600应该在0.6-0.8之间。 2取菌液2ml至2个1.5ml的EP管内。 38,000rpm离心10min,去除上清,用新鲜配制的培养基洗涤一次。 4调节菌浓度至OD600=0.1,此浓度与0.5McFarland相当,约1×107 cfu/mL(所用培养基为1×)。另一个EP里调节菌浓度至OD600=0.2,相当于2×107 cfu/mL (所用培养基为2×) 5用相应浓度培养基稀释菌液100倍至浓度为1×105 cfu/mL和2×105 cfu/mL。6溶解药物。 7取灭菌96孔圆底微孔板,在板四周每孔加200μl灭菌去离子水,目的是减少检测孔内的培养基蒸发。 8在第二列孔B至G内,加100μl已经调节为2×105 cfu/mL浓度的待检测菌液(所用培养基为2×)。其余孔内B3至G11加入100μl已经调节为1×105 cfu/mL浓度的待检测菌液菌液(所用培养基为1×)。 9在第二列孔内分别加入100μl药物药物。充分混匀后,取100μl菌液加入到下一个孔内,依次类推。加到G10时取出100μl弃掉。G11不加药物做为对照。

实训室建设方案模板

土木工程专业实训室建设方案 为贯彻教育部《教育振兴行动计划》精神,实现“培养德智体美全面发展、基础理论厚实、知识结构合理、富有创新精神和实践能力的高素质应用型人才”的人才培养目标,紧扣学校发展的整体战略目标,确保具有“前瞻性、科学性、先进性、可行性”,本着“突出学科优势,合理调整布局,优化资源配置,强化科学管理,提高投资效益”的原则,坚持“整合基础、优化专业、强化学科”的建设方针。建工学院根据实践教学需要,结合本学校实际情况,特申请建设建工校内实训中心。 一、服务对象 建设校内实训中心,面向土木工程、建筑工程技术、道路与桥梁工程技术、工程造价、建筑学、建筑环境与设备工程等专业,共7个专业。其中本科4个专业,专科3个专业。 二、建设目标 实训中心建设完成后,可以同时进行100人的工程实训。实训内容主要有:钢筋工实训、模板架子工实训、砌筑抹灰工实训等。用以锻炼学生的生产技能,了解生产流程,学习工程生产的质量规范验收1 要求。同时可承担社会工人技能培训,职业技能鉴定等公共

服务任务。 三、实训室建设计划 本次实训中心建设,主要建设:砌筑工操作实训室,钢筋 工操作实训室,抹灰、镶贴工操作实训室,架子工操作实训室。具体建设及设备配置预估如下: (一)砌筑工操作实训室 1、功能与要求 砌筑工操作实训室是对学生进行砌筑工操作技能训练的教 学场所。使学生通过实训认识常用砌筑施工机械与工具的功能并能进行简单使用,学生通过实训认识常用砌体材料、砂浆材料和其它辅助材料的种类与性能。 帮助学生初步掌握砌筑工操作基本技能。主要完成简易砖墙、砖柱、砖基础的组砌,并通过各种组砌和摆砖,使学生懂得构成砌体的方法。 2、设施配置 学生实训室:1间,面积不小于100平方米(可供24名学生使用)。 贮藏室:1间,面积不小于30平方米(用于存放各类小型工具、设备与材料)。 2 3.设备配置参考方案 单已有((规格设备名型需采 价瓦中12430需采

中草药对大肠杆菌体外抑菌试验

中草药对大肠杆菌体外抑菌试验* 路振香时维静杨用光 (安徽技术师范学院,安徽凤阳,233100) 选用27种不同的中草药制剂(煎剂、挥发油、蒸馏液,以平板稀释法和纸片法对一株肉鸡源的大肠杆菌进行体外抑菌试验。结果表明,有14种中药对此株大肠杆菌有不同程度的抑制作用。试验还表明中药制剂的配方工艺不同,其抑菌的效果亦有不同。 关键词:中药;大肠杆菌; 抑菌作用 中兽医学有着悠久的历史和丰富的应用经验,在抗生素使用以前,对保障家畜健康起着重要作用。随着科学技术的不断发展,西药以其方便快捷的优势逐渐在临床应用中占据主导地位,但由于西药抗生素类的广泛使用,使得病原菌的抗药性日趋增强[1],中草药作为替代抗生素解决抗药性和药残的重要方案,越来越受到重视[2-3],尤其是近年来肉食品中的抗生素残留问题已经被提到了一定的高度,而大肠杆菌又属于多血清型和变异型强的细菌,极易产生抗药性,笔者用不同种类和浓度的中药制剂分别用平板稀释法和纸片法对大肠杆菌进行体外抑菌试验,以期筛选出具有临床应用价值的中药制剂,为畜牧业生产服务。 1材料方法 1.1材料 1.1.1试验菌株 肉鸡源大肠杆菌(安徽技术师范学院动科系预防兽医教研室提供)。 1.1.2 培养基 普通营养琼脂、麦康凯琼脂。按常规方法配制。 1.1.3 单味中药 银花、防风、板兰根、白芷、连翘、杏仁、射干、辛夷、贯众、羌活、荆芥、藿香,每ml相当于1g生药量。中草药的煎制与蒸馏由安徽技术师范学院中药实验室完成。 1.1.4 复方中药 银射煎液、麻杏射防煎液、羌藿连防煎液、辛芷荆煎液、辛芷荆蒸馏液、银射蒸馏液、羌藿连防蒸馏液、麻杏射防蒸馏液,每ml相当于1g生药量。 1.2 方法 1.2.1大肠杆菌对中药(单味、复方)敏感性的体外试验——平板稀释法[4]。 1.2.1.1取1ml原药液为第一支试管;在第二只试管中分别加入0.5ml原药液和0.5ml生理盐水以倍比稀释法稀释至第四支试管;第五支试管为无药对照,每支试管中均含有1ml不同浓度的药液。先把药液倒入无菌的平皿中,然后倒入60℃左右的无菌的普通营养琼脂或麦康凯琼脂,并迅速混合均匀,制成平板。然后以无菌的涂布棒蘸取细菌均匀涂布于平板表面,置37℃培养箱内培养24h后观察结果。 1.2.1.2 在第一支试管加入8ml原药液,第二支试管加入4ml原药液,第三支试管加入2ml 原药液,第四支试管加入1ml原药液,第五支试管为无药对照,在第二支试管至第五支试管中分别加入4ml、6ml、7ml及8ml生理盐水;按照1.2.1.1的方法制成平板,涂布细菌后 *项目基金:安徽技术师范学院稳定人才基金资助(批准号:YRC200316)

抑菌试验方案

一、实验材料的制备 (一)病虫害的制备 1、病虫害的采集 本实验所用材料分病原菌及害虫两类。 其中病原菌分别从宣木瓜和丹皮两种地道药材植物上采集。宣木瓜的病原菌本实验室已有,并且提取了单一菌种。丹皮方面需要我们查阅资料以及请教师姐,把握最佳采集时间和采集类型,然后我们进行实地考察以及集采。采集丹皮根部,连同根部泥土带回。 害虫方面,我们将到野外筛选采集。 2、病原菌的纯种分离 2.1培养基的制备 根据实验需要制备培养病原菌所需培养基,主要为牛肉膏蛋白胨培养基(用来培养细菌)、PDA培养基(用来培养真菌)。 2.2病原菌稀释平板计数 2.2.1. 制备病原菌悬液 将带有土壤的丹皮烂根放入锥形瓶中,加入9ml无菌水中,振荡20min,让菌充分分散,静置5 min. 2.2.2编号 取无菌平皿 9套,分别用记号笔标明10-4、10-5、10-6各3套。另取6支盛有9ml无菌水的试管,排列于试管架上,依次标明10-1、10-2、10-3、10-4、10-5、10-6。 2.2.3稀释 用1ml无菌吸管精确地吸取1ml病原菌悬液放入10-1的试管中,注意吸管尖端不要碰到液面,以免吹出时,管内液体外溢。然后仍用此吸管将管内悬液来回吸吹三次,吸时伸入管底,吹时离开水面,使其混合均匀。另取一支吸管自10-1试管吸1ml放入10-2试管中,吸吹三次,……其余依次类推。

2.2.4取样 用3支1ml无菌吸管分别精确地吸取10-4、10-5、10-6的稀释菌液0.2ml,对号放入编好号的无菌培养皿中。 2.2.5倒平板 于上述盛有不同稀释度菌液的培养皿中,倒入溶化后冷却至45℃左右的牛肉膏蛋白胨琼脂培养基约10—15ml,置水平位置,迅速旋动混匀,待凝固后,倒置于37℃温室中培养。 0.2ml菌液对号接种于不同稀释度编号的培养皿中的培养基上,再用无菌玻璃刮棒将菌液在平板上涂布均匀,平放于实验台上20—30分钟,使菌液渗透入培养基内,然后再倒置于37℃的温室中培养。 2.3划线法分离 2.3.1、倒平板将加热融化的牛肉膏蛋白胨培养基和马铃薯蔗糖培养基分别倒平板,并标明培养基的名称。 2.3.2、划线

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