水飞蓟素总结报告
江苏省科技计划项目
验收报告
项目名称：水溶性水飞蓟素提取加工技术研究及产品开发项目编号：BE2006321
项目负责人：何尔群
承担单位：江苏健佳药业有限公司
起止年限：2006年1月～2008年12月
目录
一、原计划合同内容
二、项目实施工作总结报告（包括技术总结）
1．水溶性水飞蓟素提取工艺研究
2．水溶性水飞蓟素提取与加工技术路线
3．水溶性水飞蓟素化学成分的分析
4．水溶性水飞蓟素产品质量标准的研究与制定三、技术成果
1．研究论文发表情况
2．专利申请情况
3．技术特点
四、经费使用情况
五、附件
一、原计划合同内容
1、主要研究内容
本项目是从水飞蓟籽中提取水溶性水飞蓟素。通过对原料的预处理、水溶性水飞蓟素的提取、包合技术、澄清、分离、浓缩、干燥等过程的研究与改进，确定水溶性水飞蓟素的提取工艺条件，明确该产品的含量指标及一般理化指标，并完成中试，使水溶性水飞蓟素产品达到工业化生产水平。
制定水溶性水飞蓟素的质量标准，填补国内这一领域的空白。
2、主要技术指标
(1) 确定水溶性水飞蓟素提取工艺条件，完成中试，达到工业化生产水平；
(2) 制定水溶性水飞蓟素的质量标准；
(3) 发表论文2～3篇。
3、参加人员
4、经费预算
1). 经费来源预算
单位：万元
2). 项目经费支出预算
单位：万元
二、项目工作总结（包括技术总结）
1、水溶性水飞蓟素提取工艺研究
(1) 原料的预处理
水飞蓟种子榨油。水飞蓟油可以制作色拉油具有色清、味纯、沸点低、易被人体吸收等特点，有保肝养胃功能，无任何毒副作用，是一种高级保健食用油。榨油后的水飞蓟饼用于提取水溶性水飞蓟素。提取水溶性水飞蓟素后渣饼富含淀粉、蛋白质，因不含任何有机溶剂，经适当加工后即能形成营养成份较高的天然饲料，是养禽、养猪、喂养水产品的极佳饲料。
(2) 水溶性水飞蓟素的提取
采用碱水的醇溶液为溶剂，以水溶性水飞蓟素的得率和水飞蓟宾含量为工艺考察指标，以提取时间、提取温度、溶剂用量、pH值为实验因子，通过单因素试验和正交试验，研究并优选出了水溶性水飞蓟素的最佳提取工艺条件。
材料与仪器
水飞蓟种子采自于江苏东台本公司种植基地，由江苏省中国科学院植物研究所李维林研究员鉴定为菊科植物水飞蓟(紫花) ( Silybum marianum (L.) Gaertn) 的种子。
Mettler AE240 电子天平，KQ-100DE型数控超声仪（昆山市超声仪器有限公司），北京普析通用TU-1901紫外-可见分光光度计，Shimadzu 高效液相色谱仪（LC-20A泵，SPD-20A紫外检测器）等。
水飞蓟宾标准品（含量>99.5％，HPLC纯，中国药品生物制品检定所），其余试剂均为分析纯。
方法与结果
水溶性水飞蓟素提取工艺的单因素试验
1).pH值对水溶性水飞蓟素得率和水飞蓟宾含量的影响
分别称取水飞蓟饼500g，分别加入不同pH值的30%的碱乙醇1500ml，于80℃提取3遍，合并滤液，浓缩成到流膏，体积在500ml 时，加入40g 101澄清剂，搅匀，静置1h后，分离上清液，浓缩真空干燥，得粗品，再加入20倍体积纯化水，充分溶解，离心分离上清液，真空浓缩得成品。
称取成品重量，计算得率。
另取成品50mg，精密称定，置100ml量瓶中，加甲醇适量，水浴加热使溶解，冷却至室温，加甲醇稀释至刻度，摇匀，精密量取对照品溶液和供试品溶液各5ml，分别置25ml量瓶中，分别精密加2，4-二硝基苯肼溶液（取2，4-二硝基苯肼0.5g，置50ml量瓶中，加硫酸1ml使溶解，加甲醇稀释至刻度，摇匀）2ml，置50-55℃水浴中反应50分钟，冷却，加氢氧化钾-甲醇溶液（取氢氧化钾10g，置100ml量瓶中，加水30ml使溶解，加甲醇稀释至刻度，摇匀）稀释至刻度，摇匀，离心10分钟，精密量取上清液5ml，置25ml量瓶中，用甲醇稀释
至刻度，摇匀，照分光光度法（中国药典2005年版地附录ⅣＡ），在490nm的波长处分别测定吸收度，计算，即得水飞蓟素含量。
另取本品0.11g，精密称定，置50ml量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，精密量取5ml，置50ml量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，作为供试品溶液；另精密称取经60℃减压干燥3小时的水飞蓟宾对照品适量，加甲醇溶解并定量稀释制成每1ml中约含0.1mg的溶液，作为对照品溶液。精密吸取上述两种溶液各5μl，分别注入液相色谱仪，记录色谱图，按外标法以水飞蓟宾与异水飞蓟峰面积之和计算。试验结果如下图所示。
由图可以看出，随着碱水pH值的下降，水飞蓟素和水飞蓟宾的含量明显上升，可能是由于pH太高会破坏黄酮母核，导致含量下降，故碱水提取的pH采用在8-8.5为宜。
2). 提取温度对水溶性水飞蓟素得率和水飞蓟宾含量的影响
分别称取水飞蓟饼500g，加入pH值为8的30%的碱乙醇1500ml，于90℃、80℃和70℃各提取3遍，合并滤液，浓缩成到流膏，体积在500ml 时，加入40g 101澄清剂，搅匀，静置1h后，分离上清液，浓缩真空干
燥，得粗品，再加入20倍体积纯化水，充分溶解，离心分离上清液，真空浓缩得成品。
同1)法分别测定水溶性水飞蓟素得率和水飞蓟宾含量。试验结果如下图所示。
由图中可以看出，随着温度的降低，水飞蓟素和水飞蓟宾含量在80℃达到最高，且此时水和乙醇的公沸点接近，故采用提取温度在80℃为宜。
提取水溶性水飞蓟素的正交试验
在前期经验的基础上，选择碱水的乙醇液为溶剂，以乙醇用量、乙醇浓度、提取时间为实验因素，每个因素设3个水平，进行L9(34)正交实验。
正交实验的因素和水平
水平
因素
溶剂用量（倍）A 乙醇浓度（%）B 提取时间（h）C
1 6+6+4 40 1.0+1.0+1.0
2 8+8+6 35 1.5+1.5+1.5
3 10+10+8 30 2.0+2.0+2.0
取榨油后的水飞蓟饼，分别精密称取9份，各500.00g。按表选择的条件分别加入pH＝8的碱水的乙醇液，于80℃提取3遍，合并滤液，浓缩成流膏，体积在500ml时，加入40g 101澄清剂，搅匀，静置1h后，分离上清液，浓缩真空干燥，得粗品，再加入20倍体积纯化水，充分溶解，离心分离上清液，真空浓缩得成品。加热回流提取，合并提取液，过滤，浓缩，回收乙醇，水浴（60℃）蒸至近干，再于真空干燥箱中（60℃）干燥，干燥器中冷却0.5h后迅速称重，粉碎成粉末。
水飞蓟宾的含量测定方法（HPLC法）及水飞蓟素的含量测定方法（UV法）同上1)法。
对照品溶液的配制和标准曲线的建立
精密称取水飞蓟宾标准品适量，以甲醇溶解并配制成含水飞蓟宾浓度为0.216 mg·ml-1的溶液。
取对照品溶液10，12，14，16，18，20μl，分别进样，按上述色谱条件测定峰面积积分值，以峰面积积分值为纵坐标，对照品进样量为横坐标绘制标准曲线，计算回归方程。Y=4.30664×105X+ 2.9658×104，r=0.9999。结果表明水飞蓟宾在2.16~4.32μg内线性关系良好。
数据处理及结果
对正交实验结果采用综合评价方法，即以水飞蓟宾的含量加权系数0.6、水溶性水飞蓟素成品得率加权系数0.4作为综合评价指标。综合评价分值=水飞蓟宾含量×0.6+水飞蓟素×0.4，结果下表。
方差分析结果见表，表明乙醇浓度、提取时间对实验结果有显著
影响，其中乙醇浓度（B）影响最大，其次是提取时间（C），溶剂用量（A）影响较小。由表2直观分析综合评价R值，最佳提取工艺是A3B2C2，即30%乙醇提取三次，每次提取2h，前两次加8倍量乙醇，第三次加6倍量乙醇。
以最佳工艺进行验证实验，结果表明该工艺重复性和稳定性好，适于大生产。
正交实验结果
实验号
影响因素
水飞蓟宾(%) 水飞蓟素(%) 综合评价A B C D
1 1 1 1 1 9.21 19.6 13.366
2 1 2 2 2 8.89 21.7 14.014
3 1 3 3 3 9.45 20.8 13.990
4 2 1 2 3 10.23 22.6 15.178
5 2 2 3 1 10.34 23.8 15.724
6 2 3 1 2 11.28 25.2 16.848
7 3 1 3 2 10.67 24.3 16.122
8 3 2 1 3 12.09 25.9 17.614
9 3 3 2 1 11.76 25.6 17.296
K110.895 10.780 10.829 11.047
K211.987 11.372 10.190 11.043
K311.194 12.924 11.054 10.984
R 0.299 0.592 0.362 0.063
方差分析
方差来源SS f S F P 溶剂用量A 0.140454 2 0.07023 17.7008 >0.05 乙醇浓度B 0.571414 2 0.28571 72.0128 <0.05
提取时间C 0.20078 2 0.10039 25.3035 <0.05
误差项D 0.007935 2 0.00397
故最终确定水溶性水飞蓟素的最佳提取条件为：提取时间为2小时，提取3遍，温度控制在80℃，溶剂量为物料8倍，pH为8-8.5，如pH太高，会破坏黄酮母核，含量会下降，太低又会影响产品收率。
(3) 包合技术：由于碱水提取时，总含量均大于40％，但由于不断去杂，精制时，黄酮损失很大，所以在提取完成后加入按成品量1倍的包合剂，将有效成分进行包合，确保有效成分不损失且水溶性又好。
(4) 澄清：以加入澄清剂后所产生的絮状物的重量为指标，通过试验确定澄清剂的加量为提取溶媒的1％，澄清条件为pH＝8-8.5。
(5) 分离：根据水溶性水飞蓟素的特点，首先采用高速旋转分离，转速16000转/分钟，进料速度800L/h，直接去除大颗粒杂质，接着采用0.22μm微孔膜，进一步膜滤，使滤液出来完全达到注射级标准。
(6) 浓缩：由于水溶性水飞蓟素不宜在高温环境下长时间受热，我们采用了旋转刮板浓缩，使得物料在整个过程中始终处于一个动态作用下，不易结垢，不易炭化。通过试验确定浓缩的条件为温度60℃，蒸汽压力＜0.1MPa，真空度＞-0.08MPa。
(7) 干燥：在试制过程中，采用喷雾干燥，使水溶性水飞蓟素瞬间受热，这样既不破坏有效成分又使物料不炭化，确保产品在水中有极好的溶解性。通过多次试验，确定干燥的条件为进口温度140℃，出风温度80℃，进料速度150L/h。
2、水溶性水飞蓟素提取与加工技术路线
综合以上研究结果，制定水溶性水飞蓟素提取与加工的工艺技术路线如下：
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（1）用碱水提取水溶性水飞蓟素时，碱水的浓度对提取过程有很大的影响。若碱液浓度过高，在提取加热时会破坏黄酮。而在加酸酸化时，酸性也不宜过强。若酸性过强，会使析出的黄酮类化合物又重新溶解，降低产品收率。
（2）工厂化生产采用多功能提取罐生产，而水飞蓟饼一旦遇到水即会形成浆糊状，从底部很难出液，从而形成出液效率低，产品收率低及诸多不利因素。现有的提取罐不适合水溶性水飞蓟素的提取。本项目将对提取罐底部进行改造，设计出一种专用提取罐用于水溶性水飞蓟素的工业化提取。
（3）澄清剂的选择及其用量对产品中有效成分的含量及澄清度有很大影响。澄清剂选择不当，会影响水溶性水飞蓟素的得率及其纯度。
3、水溶性水飞蓟素化学成分的分析
（1）水飞蓟宾的分离与纯化
仪器与材料
柱层析用硅胶(青岛海洋化工厂产品)；Buchi RⅡ旋转蒸发仪。
实验方法
①柱层析分离洗脱剂的选择
取5 mg水溶性水飞蓟素溶于少量乙醇，硅胶板点样，分别用乙酸乙酯、氯仿：甲醇(20：1)、氯仿：甲醇(10：1)、氯仿：乙醇(9：1)、
乙酸乙酯：石油醚(1：1)为展开剂，碘蒸汽显色，做薄层检验。通过薄层层析分析，选择乙酸乙酯或氯仿：甲醇(20：1)作洗脱剂。
②柱层析分离水飞蓟宾
用硅胶填充柱：将100-200目柱色谱硅胶用乙酸乙酯(或氯仿：甲醇=20：1)搅拌均匀，将玻璃柱均分为6等分，灌入约4/6柱高的硅胶，下口用脱脂棉塞住。
拌水溶性水飞蓟素硅胶粉：将30 g水溶性水飞蓟素溶于乙酸乙酯(或甲醇)中，滤去不溶解的杂质，向滤液中加入约等于1/6柱的硅胶，充分拌匀。使溶剂挥干，装入柱中，上面用脱脂棉塞住。
浇柱：用洗脱剂浇柱，用锥形瓶接收淋洗液，直至淋洗液无色透明为止。
浓缩：淋洗液经旋转蒸发浓缩后，用薄层色谱检测单斑的为纯品水飞蓟宾，将接收瓶中含纯品的液体合并，回收溶剂，浓缩干燥得白色晶体即为纯品水飞蓟宾。
结果与分析
经薄层色谱检验，观察了硅胶板上各点的高度，比较不同的展开剂的Rf值，并与标准品对照。通过比较选用乙酸乙酯或氯仿：甲醇(20：1)作洗脱剂进行试验。结果用乙酸乙酯作洗脱剂由于溶剂极性很大，其流出速度太快，效果不是很理想。n(氯仿)：n(甲醇)=20：1效果比较理想，因此选用n(氯仿)：n(甲醇)=20：1作洗脱剂。
（2）水飞蓟宾的鉴定
状态：白色晶体，熔点：164.5-165.6℃ (显微熔点测定仪)，与标准
品对照一致。
HCl-Mg粉试验：玫瑰红色；与NaOH溶液反应：深黄色；与浓H2SO4反应：黄色。
UV：λmax (MeOH) = 288 nm，λ＝330 nm处有肩峰，与文献谱图一致。
薄层色谱检验：用色谱用硅胶板(青岛海洋化工厂产品)，其Rf = 0.44 (氯仿：乙醇=9：l展开剂，碘蒸气显色)。
IR：3150、1650、1520、1470、l380、1285、1200、1175、1135、1090、1045、1030、1005、965、830、800处有峰(cm-1)。
4、水溶性水飞蓟素产品质量标准的研究与制定
（1）水溶性水飞蓟素产品质量标准的研究
材料与仪器、试剂
水飞蓟宾标准品（含量>99.5％，HPLC纯，中国药品生物制品检定所）；水溶性水飞蓟素产品由本公司自制，批号为20070921、20071108、20071209。
岛津LC-10A高效液相色谱仪；日本岛津SPD-10A检测器；浙江大学N2000色谱工作站；METTLER AE240电子天平。
甲醇为色谱纯，水为纯净水，其余试剂均为分析纯。
方法与结果
色谱条件
色谱柱AichromBond-C18(5μm，4.6× 250 mm)；以甲醇-水-冰醋酸（50：50：0.5）为流动相，检测波长为288nm，理论板数按水飞蓟峰计算应不低于5000。
对照品溶液的制备
精密称取经60℃减压干燥3小时的水飞蓟宾对照品适量，加甲醇溶解并定量稀释制成每1ml中约含0.1mg水飞蓟宾的溶液，作为对照溶液。
供试品溶液的配制
取本品0.11g，精密称定，置50ml量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，精密量取5ml，置50ml量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，作为供试品溶液。
线性关系考察
取对照品溶液2、4、6、8、10μl，分别进样，按上述色谱条件测定峰面积积分值，以峰面积积分值为纵坐标，对照品进样量为横坐标绘制标准曲线，计算回归方程得水飞蓟宾：Y=871.66X-0.4488，r=0.9999。结果表明水飞蓟宾含量在0.020～0.100μg内线性关系良好。
精密度实验
取对照品溶液，在上述色谱条件下重复进样6次，每次5μL，水飞蓟宾的峰面积RSD为1.09%，说明该方法精密度良好。
重复性试验
取水溶性水飞蓟素产品（批号20070921）共6份，分别前述样品溶液制备方法和色谱条件操作，计算含量。结果显示水飞蓟宾的平均含量为11.129%，RSD=1.1%，说明该方法有良好的重复性。
加样回收率测定
准确称取水溶性水飞蓟素产品（批号20070921，其中水飞蓟宾含
量为11.129%）5份，每份10.0mg，分别精密加入水飞蓟宾对照品溶液25ml（浓度为0.010032mg·ml-1），精密加入甲醇至50ml, 按前述样品溶液制备方法及色谱条件和测定方法，进行含量测定。结果显示水飞蓟宾平均回收率为97.28%，RSD=1.0%，说明该法回收率良好。
样品分析
精密称取各批次样品各3份，按前述样品溶液制备方法及色谱条件和测定方法，测定水飞蓟素含量，用外标法，根据峰面积计算含量，结果其含量分别为11.364%，10.865%，11.250%。
结论与讨论
在本实验所确定的条件下，水溶性水飞蓟素产品中的主要成分水飞蓟宾能很好地分离，且重现性、精密度较好，可以作为水溶性水飞蓟素的质量控制方法。
（2）水溶性水飞蓟素产品质量标准的制定
根据以上研究结果，制定水溶性水飞蓟素产品质量标准如下：
水溶性水飞蓟素质量标准
本品为菊科植物水飞蓟(Silybum Marianum (L.) Gaertn)的果实，经提取所得的松散粉末，按干燥品计含水飞蓟素以水飞蓟宾计算(C25H22O10) 不得少于25.0%，含水飞蓟宾和异水飞蓟宾不得少于10.0%。
［性状］本品为淡黄色至浅棕色的松散粉末，在水中溶解。
［鉴别］取本品0.1克，加甲醇10ml，振摇，滤过，取滤液，照下
述方法试验。
(1) 取滤液1ml，加锌粉少许及盐酸数滴，即显玫瑰红色。
(2) 取滤液2ml，加醋酸铅试液1ml，即产生黄色沉淀。
(3) 取滤液适量，用甲醇稀释制成每1ml中约含16ug的溶液，照分光光度法(中国药典2005年版二部附录ⅣＡ) 测定，在288 nm的波长处有最大吸收。
［检查］溶解性取本品1克，加纯化水200ml振摇溶解，应澄清。
干燥失重取本品，在70℃减压干燥3小时，减失的重量不得超过5.0%（中国药典2005年版二部附录ⅧＬ）
炽灼残渣不得过0.5%（中国药典2005年版二部附录ⅧＮ）
重金属取炽灼残渣项下遗留的残渣，依法检查（中国药典2005年版二部附录ⅧＨ第二法），含重金属不得过20ppm。
［含量测定］水飞蓟素（总黄酮）对照品溶液的制备取水飞蓟宾对照品约10mg，精密称定，置25ml量瓶中，加甲醇适量，水浴加热使溶解，冷却至室温，加甲醇稀释至刻度，摇匀，即得。
供试品溶液的制备取本品50mg，精密称定，置100ml量瓶中，加甲醇适量，水浴加热使溶解，冷却至室温，加甲醇稀释至刻度，摇匀，即得。
测定法精密量取对照品溶液和供试品溶液各5ml，分别置25ml 量瓶中，分别精密加2，4-二硝基苯肼溶液（取2，4-二硝基苯肼0.5g，置50ml量瓶中，加硫酸1ml使溶解，加甲醇稀释至刻度，摇匀）2ml，置50-55℃水浴中反应50分钟，冷却，加氢氧化钾-甲醇溶液（取氢氧
化钾10g，置100ml量瓶中，加水30ml使溶解，加甲醇稀释至刻度，摇匀）稀释至刻度，摇匀，离心10分钟，精密量取上清液5ml，置25ml 量瓶中，用甲醇稀释至刻度，摇匀，照分光光度法（中国药典2005年版地附录ⅣＡ），在490nm的波长处分别测定吸收度，计算，即得。
水飞蓟宾照高效液相色谱法（<<中国药典>>2005年版二部附录V D）测定。
色谱条件与系统适用性试验用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇-水-冰醋酸（50：50：0.5）为流动相，检测波长为288nm，理论板数按水飞蓟峰计算应不低于5000。
测定法取本品0.11g，精密称定，置50ml量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，精密量取5ml，置50ml量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，作为供试品溶液；另精密称取经60℃减压干燥3小时的水飞蓟宾对照品适量，加甲醇溶解并定量稀释制成每1ml中约含0.1mg 水飞蓟宾的溶液，作为对照品溶液。精密吸取上述两种溶液各5μl，分别注入液相色谱仪，记录色谱图，按外标法以水飞蓟宾与异水飞蓟宾峰面积之和计算。
［类别］肝病辅助用药。
［贮藏］遮光，密闭，在阴凉处保存。
［制剂］针剂，冲剂。
［有效期］2年。
三、技术成果
1、研究论文发表情况
(1) Yong-ping Pei, Jian Chen, Wei-lin Li, et al. Progress in Research and
Application of Silymarin. Medicinal and Aromatic Plant Science and Biotechnology, in press
(2) 陈剑，李维林，任冰如等. 水溶性水飞蓟素提取工艺的改进与探讨.
植物资源与环境学报，已接收
2、专利申请情况
专利申请号200710106033.4
3、技术特点
（1）目前国内普遍的水溶性水飞蓟素提取方法是加入葡甲胺，让水飞蓟素和葡甲胺进行化学合成所得，产品虽然溶于水，但副作用较大，对人体肾功能有阻碍作用，在国际上不能被客户接受。本项目研究利用了黄酮类物质在碱水中溶解的特性，再在无有机溶剂的条件下及时包合，保证黄酮在后道工序不被破坏，所得产品溶于水，副作用较小，在国际上能够被客户接受。
（2）提出了水溶性水飞蓟素的提取新工艺，并制定了相应的产品质量标准，明确了该产品的含量指标及一般理化指标，填补了国内这一领域的空白。
（3）本项目的研究技术在实施时，可以产生两个极富利用价值的副产品—水飞蓟色拉油和水飞蓟饼饲料，有利于水飞蓟的综合利用。
四、经费使用情况
单位（万元）
利加隆(水飞蓟素片)
利加隆(水飞蓟素片) 【药品名称】 商品名称：利加隆 通用名称：水飞蓟素片 英文名称：Silymarin T ablets 【成份】 为菊科植物水飞蓟Silybum marianum (L) Geatn。干燥果实中提取的水飞蓟素。水飞蓟素为水飞蓟宾（Silibinin）、异构水飞蓟宾、水飞蓟丁（Silicristin）及水飞蓟宁（Silidianin）的混合物。 【适应症】 中毒性肝脏损害；慢性肝炎及肝硬化的支持治疗。 【用法用量】 严重患者：每日三次，一次二片，于饭前服用。维持剂量与中等程度肝病患者：每日三次，一次一片。或请遵医嘱。 【不良反应】 偶尔发现有轻度腹泻现象。 【禁忌】 对本品过敏者禁用。 【注意事项】 药物治疗不能替代对导致肝损伤（例如：酒精）因素的排除。对于出现黄疸的病例（皮肤浅黄或暗黄，眼巩膜黄染），应咨询医师。此药不适用于治疗急性中毒。 【特殊人群用药】
儿童注意事项： 无可靠参考文献。 妊娠与哺乳期注意事项： 尚无本品用于孕妇和哺乳期妇女的经验。因此，孕妇和哺乳期妇女慎用。 老人注意事项： 未进行该项实验且无可靠参考文献。 【药物相互作用】 未进行该项实验且无可靠参考文献。 【药理作用】 药理作用：已经证实在各种毒性肝损害病理模型中，水飞蓟素对以下物质具有抗毒作用：毒蕈素、α-鹅膏菌素（在鬼笔鹅膏真菌中发现毒性物质）、四氯化碳、半乳糖胺、硫代乙酰胺和肝病毒FV3。水飞蓟素的疗效归功于其具备数个作用点和作用机制：由于其自由基的捕获能力，水飞蓟素具有抗过氧化活性。脂类化合物过氧化的病理生理过程（造成细胞膜的损坏），被水飞蓟素阻断或预防，并且在已经遭受损伤的肝细胞内，水飞蓟素刺激蛋白质的合成并使磷类脂代谢正常化。水飞蓟素最大的作用是对肝细胞膜有稳定作用，它阻止溶解的细胞成分（例如各种转移酶）流失。水飞蓟素可限制某些肝毒性物质（如：α-鹅膏菌素）穿透进入细胞内部。蛋白质合成能力的增强是由于水飞蓟素刺激细胞核中RNA聚合酶Ⅰ的活性，因此导致肝细胞中核糖体RNA合成增加，同时导致结构和功能蛋白质（酶）的大量合成。水飞蓟素的作用是增强了肝细胞的修复能力和再生能力。毒理研究：水飞蓟素的特点为特别的低毒性，并可以按治疗剂量长期服用。急性毒性：大鼠和小鼠单剂量口服证明水飞蓟素无毒，LD50大于2000mg/kg。慢性毒性：分别让大鼠和狗按2500mg/kg及1200mg/kg的剂量连续口服12个月，实验结果及尸体解剖均未显示有任何毒性影响。生殖毒性：用大鼠和
水飞蓟素生产工艺探讨
水飞蓟素生产工艺探讨 徐 勇 马成芳 张荣桂 (江苏东台市罗布麻厂,东台224243) 摘要 分析比较水飞蓟素的两种现行生产工艺——醇提法和乙酸乙酯提法的利弊,对乙酸乙酯提取工艺采用了分子筛技术提高和稳定溶剂质量,使产品质量稳定提高,生产成本下降。 关键词 水飞蓟素;乙酸乙酯;分子筛 水飞蓟素(Silym arin )为菊科植物水飞蓟(紫花)Silybum m arianum (L .)Gaertn 的果实,经提取,精制而得到的淡黄色到棕黄色粉末,主要成份为水飞蓟宾Silyb in (二氢黄酮醇类与苯丙素衍生物缩合而成的黄酮木脂素)及其异构体。采用结晶法从水飞蓟素中获得水飞蓟宾,再半合成水飞蓟宾葡甲胺盐,具有保肝和降血脂等作用,且易被人体吸收。主要用于肝炎、肝硬化和中毒性肝损伤等症。近几年又扩展应用到保健和美容化妆品等领域。国际市场货紧、价扬、供不应求。为利用有限的资源生产出更好更多的产品造福于人类,提高生产企业的经济效益。我们对水飞蓟素的生产工艺进行了探讨和改进。 1现行生产工艺及其存在问题 111醇提法工艺分析 11111醇提法工艺流程 : 11112工艺分析 由于水飞蓟素在乙醇中的溶解度比乙酸乙酯大,所以,醇提法提取速度较快,提取较完全;饼渣干燥度不够,对提取收率、产品质量影响不大,这是该工艺的主要优点。但醇提取物的杂质多,必须干燥后以乙醇乙酯重提取,才能达到质量要求。所以,此法与乙酸乙酯提法相比,存在工艺流程长,设备投资大,能耗高,生产周期长,成本高等多方面的问题。 43水飞蓟素生产工艺探讨
112乙酸乙酯提法工艺分析 11211乙酸乙酯提法工艺流程 : 11212工艺分析 该工艺流程短,投资省,能耗低,在控制好乙酸乙酯质量的前提下,产品质量、收率都比较理想。但产品质量收率对乙酸乙酯质量很敏感,随其质量波动幅度较大,这是该生产工艺的关键弱点。乙酸乙酯损耗是生产成本的主要构成部分,生产过程中必须充分回收,反复使用。饼渣和系统中的水份也就不断进入乙酸乙酯中,引起逆反应,生成乙醇和乙酸,改变了溶剂极性和溶解性能,使产品质量、收率下降。在生产过程中解决这一问题的通常办法是将回收的乙酸乙酯定期精馏。这一措施虽能基本解决问题,但普通精馏难以使乙酸乙酯达到工业一级的技术指标,损耗也比较大。 21采用分子筛技术优化乙酸乙酯提取工艺 醇提法存在的弱点,我们认为一时难以克服,因而选定通过提高、稳定乙酸乙酯质量来完善优化乙酸乙酯提取工艺。 提高、稳定生产过程中乙酸乙酯质量,并尽量减少损耗。一是要尽量减少进入提取系统中的水份,这可以通过控制原料水份,采用干热空气回收残渣溶剂来解决;二是要及时除去进入乙酸乙酯中的水份,堵绝乙酸乙酯逆反应的条件。 我们通过多次实验,比较理想的方法是,在回流循环连续提取装置的冷凝器与渗漉柱之间加装分子筛柱,使回收冷凝的乙酸乙酯立即通过分子筛,去除水份和逆反应生成物,再进入渗漉柱。这种方法,只要能及时再生分子筛,能始终保证乙酸乙酯的质量指标达到工业一级以上,逆反应很少,因此而损耗的乙酸乙酯甚少。 分子筛吸附达饱和吸附值的80%时(通量大时应相应降低)需及时再生。再生方法:用压缩空气由上而下压出乙酸乙酯,以85—90℃的干热空气由下而上蒸出残留的乙酸乙酯(回收利用),再将干热空气逐渐升温到200℃,到出口温度达150℃以上。然后通入干冷空气,冷却至室温,备用。 3小结 我们取车间回收的乙酸乙酯,水份和游离酸都超过工业二级品的限制指标,先使其通过分子筛柱,然后按上述介绍的方法用玻璃仪器组装成回流循环提取的实验装置,共实验12个批号,每批之间间隔2—3天,有意将实验总时间延长到40多天。结果,试样质量和收率,前后相差甚微,无统计学意义,含量均在82%以上,收率达319%,乙酸乙酯消耗仅为水飞蓟饼的15%左右,比车间实际损耗少40%。 此法对提高稳定水飞蓟素的质量、收率,减少溶剂损耗效果明显,有应用到工业化生产上的可能,如能应用成功,可产生显著的社会效益和经济效益。目前,我们正在做这方面的准备工作。 531996年第4期 中国野生植物资源
水飞蓟素的药理学研究进展_喇明平
水飞蓟素的药理学研究进展 喇明平1 陈梅花2 (1中国人民解放军第二军医大学生药学院,上海 200000;2海师范大学生命与地理科学学院,青海西宁 810008) 摘 要:系统查阅近年来有关水飞蓟素的药理学研究报道,总结了草本植物水飞蓟的活性成分 水飞蓟素的药理学研究进展,综述了水飞蓟素的成分对免疫系统的调节作用、抗肝纤维化、对乳腺癌细胞系的抑制作用、对糖尿病大鼠主动脉非酶糖化及氧化的抑制作用、预防顺铂肾毒性而不影响其抗癌活性、对糖尿病植物神经病变以及保护肝细胞膜,促进被损伤肝细胞合成DNA及结构蛋白等药理作用。本文还展望了水飞蓟素的良好应用前景。 关键词:水飞蓟;水飞蓟素;药理学 中图分类号 Q946 91;Q949 783 5 文献标识码 B 文章编号 1007-7731(2007)06-35-02 Proceeding of Phar m acological R esearch on silym arin La m i ngp ing Ch en m eihua Ab strac t:A fter scanning m any m ater i a l about sil yma ri n i n recen t years,t he article sum phar m acolog i ca lR esearch on sily m a ri n such as effect o f Sil ym ari n on diabetic autono m ic neuropathy,the e ffect of sil y m a ri n on the i nh i b iti on o f nonenzym ati c g l y cation and ox i dati on i n aorta of streptozoc i n-i nduced d i abeti c ra ts,inh i bito ry effect o f sily m ar i n d iffe rent breast cancer cell li nes and assoc iated m olecu lar m echan is m,pro tecti ve e ffect o f sily m ar i n on c i sp l a ti n-i nduced nephrotox icity w it hout i nte r fering w it h its antitu m our activity,pro tect li ver ce ll,i m prove relation to DNA and so on,the a i m is tha t sily m ar i n has a good fut ure K ey words:Sil ym ari n;phar m aco log ical 水飞蓟是菊科草本植物,其活性成分 水飞蓟素, 近年来多用于肝病的治疗,因此倍受关注,但它还在其它 方面有独特的作用,本文就水飞蓟的活性成分、药理作用 等进展作一总结。 1 水飞蓟素的活性成分 水飞蓟所含活性成分主要存在于种子中,是一种类黄 酮(flavono i d),称水飞蓟素(sil y m ari n),由水飞蓟宾(s il y b i n,s il yb i n in)、水飞蓟宁(silid i an i n)、水飞蓟丁(s ili chri s ti n)3种同分异构体组成。水飞蓟宾尚有另一种异构体, 称为异水飞蓟宾(isos il yb i n,isos ili b i n i n)。这些同分异构体 的分子式为C 25H 22 O 10 ,分子量约482。水飞蓟宾是由1分 子紫杉素(tax if oli n)和1分子松柏醇(con ifery1alcol ol)构成,因此水飞蓟素又被取名为类黄酮木酚素(flavonoli g nans)。在水飞蓟素中,水飞蓟宾:异水飞蓟宾:水飞蓟宁:水飞蓟丁 3 1 1 1[1],其中水飞蓟宾含量最多,活性也最高。由于水飞蓟素的水溶性较差,因此,常用其N-甲基葡萄胺盐或双氢琥珀酸二钠盐[2]。 2 水飞蓟素的药理学研究 2.1 抗肝纤维化作用 肝细胞坏死和肝组织炎症被认为是大多数情况下肝纤维化的启动因素,这一病理过程中产生的炎症介质可激活肝Kupff er细胞,淋巴细胞。活化的Kup ffer细胞可分泌多种细胞因子(c ytok i nes,CK),其中对肝纤维化的发生最重要的是转化生长因子 (tra nsfor m i ng gro w th factor TGFB ),TGF 可激活贮脂细胞(I To,即星状细胞)向成纤维细胞转化,后者可分泌各种成纤维基质组分,如胶原蛋白(collagens),蛋白聚糖(proteogl yca ns)以及纤维结合素(fi bronecti n)等,从而导致肝纤维化。成纤维细胞也可分泌TGF ,加快贮脂细胞的转化。研究表明,应用水飞蓟素治疗后确实能降低血清III型前胶原肽(procoll age n-III pe p ti de,PIII P)水平,而后者是目前反映肝纤维化程度的一个较好指标。水飞蓟素抗肝纤维化的主要机理可能是通过抑制ROS的活性,从而减轻其介导的肝细胞损伤和肝组织炎症,阻抑其对肝纤维化过程的触发[3]。 另外,肝纤维化过程一旦被触发便可形成自身恶性循环而不必依赖于细胞坏死和炎症的持续存在,脂肪肝等并无明显炎症过程却也可发生肝纤维化,使胆管完全闭塞所诱发的继发性胆汁肝纤维化(secondar y b iliary li ver fi bro sis)亦无明显炎症过程,因此,推测水飞蓟素也可能具有直接抗肝纤维化的作用[4]。 2.2 对乳腺癌细胞系的抑制作用 水飞蓟素对两种乳腺癌细胞M CF-7和SK-BR-3有不同程度的抑制,其中对M CF-7细胞的作用较强,而对SK-BR-3作用较弱。 H er-2抑制剂AG825可增加S K-BR-3细胞对药物的敏感性,抑制了水飞蓟素作用后该细胞在软琼中集落的形成,因此,SK-BR-3细胞中H er-2的高表达可能是对水飞蓟素敏感性差的原因,而水飞蓟素也可能通过H er-2调节某个或某几个下游分子起作用[5]。 2.3 对糖尿病大鼠主动脉非酶糖化及氧化的抑制作 35 安徽农学通报,Anhu iAgri Sci Bu ll 2007,13(6):35-36 作者简介:喇明平(1979-),中国人民解放军第二军医大学生药学院05级生物化学研究生。 收稿日期:2006-12-01
水飞蓟素
中文名水飞蓟素 英文名silymarin 别名益肝灵 水飞蓟宾 西利马林 2,3-二氢-3-(4-羟基-3-甲氧基苯基)-2-羟甲基-6-(3,5,7-三羟基-4-氧代苯并吡喃-2-基)苯并二氧六环 英文别名Silibinin Silybin silymarin group 2,3-Dihydro-3-(4-hydroxy-3-methoxyphenyl)-2-(hydroxymethyl)-6-(3,5,7-trihydroxy-4-oxobenzo pyran-2-yl)benzodioxin Silybum marianum Silybum Extract (2R,3R)-3,5,7-trihydroxy-2-[(2R,3R)-3-(4-hydroxy-3-methoxyphenyl)-2-(hydroxymethyl)-2,3-dih ydro-1,4-benzodioxin-6-yl]-2,3-dihydro-4H-chromen-4-one (2R,3R)-3,5,7-trihydroxy-2-[(2S,3S)-3-(4-hydroxy-3-methoxyphenyl)-2-(hydroxymethyl)-2,3-dih ydro-1,4-benzodioxin-6-yl]-2,3-dihydro-4H-chromen-4-one CAS 22888-70-6 65666-07-1 EINECS 245-302-5 化学式C25H22O10 分子量482.436 inchi InChI=1/C25H22O10/c1-32-17-6-11(2-4-14(17)28)24-20(10-26)33-16-5-3-12(7-18(16)34-2 4)25-23(31)22(30)21-15(29)8-13(27)9-19(21)35-25/h2-9,20,23-29,31H,10H2,1H3/t20-,23-,24-,25 +/m0/s1 密度 1.527g/cm3 沸点793°C at 760 mmHg 闪点274.4°C 蒸汽压 1.63E-26mmHg at 25°C 折射率 1.684 物化性质 产品用途具有明显的保肝作用，适用于急慢性肝炎、早期肝硬化等 危险品标志Xi - 刺激性物品 风险术语R36/37/38 - 刺激眼睛、呼吸系统和皮肤。 安全术语S26 - 不慎与眼睛接触后，请立即用大量清水冲洗并征求医生意见。 S37/39 - 戴适当的手套和护目镜或面具。 水飞蓟素- 性质 白色结晶粉末。无臭，味微苦，有吸湿性。难溶于水和氯仿，易溶于碱性水溶液，微溶于甲醇和乙醇，可溶于丙酮和乙酸乙酯等有机溶剂。熔点167℃，加热至180℃左右分解。比旋光度为+11（丙酮） 水飞蓟素- 制法 一般以紫花水飞蓟种子为原料提取。取5kg紫花水飞蓟种子粉碎，用石油醚(30～60℃)脱脂
水飞蓟素药学研究进展
发布日期20041201 栏目中药药物评价>>中药质量控制 标题水飞蓟素药学研究进展 作者李计萍 部门 正文内容 审评一部李计萍 水飞蓟素是由菊科植物水飞蓟Silybum Marianum L.果实中提取得到的水难溶 性黄酮类化合物（总黄酮）。1968年H.Wagner等从中提取得黄酮类化合物, 命名为水飞蓟素（Silymarin)。药理实验证明,Silymarin对多种肝脏毒物引起的 肝脏损伤有明显的保护作用。其靶器官为肝脏,进入体内后主要与血浆蛋白结合, 以结合型水飞蓟素的形式存在于血浆、胆汁及尿液中。对抗肝损伤药物具有稳 定细胞膜,改善肝功能的作用,对急慢性肝炎、肝硬变和代谢中毒性肝损伤具有较 好的疗效。近年来发现这一天然药物不仅具有保肝利胆作用,而且还有明显的抗 脂质过氧化,抗辐射,清除自由基和抗胃溃疡等作用。其毒性小,无致畸和诱变作 用,在降血脂、防治动脉粥样硬化,预防脑缺血,抗血小板聚集等方面显示出可喜 的效果[1]。由于水飞蓟素难溶于水及一般有机溶剂,口服吸收差，其生物利用度 较低,从而影响了其临床疗效。国内外研究工作者正在积极开发研制其复合物， 或是通过其它途径改善其生物利用度，或是研究其注射剂，以提高疗效，扩大 应用范围。 下面就对其化学成分、检测方法及制剂等研究状况作一综述。 1 化学成分及其理化性质[2] 1．1 化学成分 20世纪60-80年代末，以H.wagner为代表的西德药学家从水飞蓟中分离提取 得有效成分，称之为水飞蓟素，是一类新型的具有C－9取代基的黄酮类化合 物，即以二氢黄酮醇和苯丙素类衍生物缩合而成的黄酮木脂素类。主要有水飞
蓟宾(Silybin)、异水飞蓟宾、水飞蓟宁(,Silydianin)、水飞蓟亭（SilyChristin)、水飞蓟醇等。1975年竹本常松等从水飞蓟种子中除获得了水飞蓟宾等异构体外，还获得了两种新黄酮醇木脂素，经红外、紫外及核磁共振等分析，确定其结构为2，3-脱氢水飞蓟宾和2，3-脱氢水飞蓟亭。1979年Merlini等分离得到异水飞蓟宾，并推测水飞蓟宾和异水飞蓟宾可能分别为两个非对映体的混合物（C2、C3为同一结构，C2’、C3’是反式结构）。其中三种主要成分为水飞蓟宾、水飞蓟宁、水飞蓟亭。分别存在其立体异构体,比例为1:1。这些同分异构体的分子式为C25H22O10,分子量为482。在水飞蓟素中,水飞蓟宾:异水飞蓟宾:水飞蓟宁:水飞蓟亭比例为3:1:1:1,其中水飞蓟宾含量最高,活性也最高。我国于1972年，由德国引进水飞蓟，在各地推广种植取得成功。常凤岗等研究了我国引种的水飞蓟化学成分，得到两个单体，并与国外的栽培品种进行了比较，经IR、UV、13H、13C、MS等鉴定为水飞蓟宾和水飞蓟宁。 1．2理化性质 由丙酮加石油醚所得水飞蓟宾，为含1分子水之晶体,mP167℃,180℃分解。由甲醇加水所得水飞蓟宾，熔点180℃。0.25g在l00m1丙酮+乙醇中[α]D20为+11,UVλmax（甲醇）288nm（lg E4.33)。水飞蓟宾溶于丙酮、乙酸乙酯、甲醇、乙醇,微溶于氯仿,不溶于水。蓝其田等将适量水飞蓟宾纯品溶于无水乙醇中,于288±lnm处测得吸收系数E288为456±1.8。张南生等将水飞蓟素溶于甲醇中,在288±lnm处测得吸收系数E为475.0,RSD=0.02%。王鸿辰等研究了水飞蓟素在不同溶媒中的溶解量,以PEG-400为最高,依次为乙醇、丙二醇、甘油。陈大为等测得了水飞蓟素在水中的溶解度为0.0401mg/ml。 2 定量分析方法 目前水飞蓟素的测定方法主要有分光光度法、薄层扫描法、HPLC法。 2．1 分光光度法 国家标准收载的水飞蓟素原料药主要采用的是分光光度法（比色法），以水飞蓟宾计测定水飞蓟素总黄酮的含量。主要是加甲醇溶解，加2、4-二硝基苯肼溶液，λnm=490nm下测定。部颁及国家标准中收载的益肝灵片和胶囊分别采用加甲醇超声处理，滤过，在288nm下,以水飞蓟宾计测定水飞蓟素总黄酮的含量[3]。李凤前等用一阶导数分光光度法对水飞蓟素固体分散体中总黄酮进行了测定，该法可以排除PEG-6000载体对固体分散体中总黄酮测定的干扰。[4] 2．2 薄层扫描法 吴知行等[5]采用CS-910型薄层扫描仪在硅胶G-0.6%CMC板上,以氯仿-丙酮
水飞蓟素总结报告
江苏省科技计划项目 验收报告 项目名称：水溶性水飞蓟素提取加工技术研究及产品开发项目编号：BE2006321 项目负责人：何尔群 承担单位：江苏健佳药业有限公司 起止年限：2006年1月～2008年12月
目录 一、原计划合同内容 二、项目实施工作总结报告（包括技术总结） 1．水溶性水飞蓟素提取工艺研究 2．水溶性水飞蓟素提取与加工技术路线 3．水溶性水飞蓟素化学成分的分析 4．水溶性水飞蓟素产品质量标准的研究与制定三、技术成果 1．研究论文发表情况 2．专利申请情况 3．技术特点 四、经费使用情况 五、附件
一、原计划合同内容 1、主要研究内容 本项目是从水飞蓟籽中提取水溶性水飞蓟素。通过对原料的预处理、水溶性水飞蓟素的提取、包合技术、澄清、分离、浓缩、干燥等过程的研究与改进，确定水溶性水飞蓟素的提取工艺条件，明确该产品的含量指标及一般理化指标，并完成中试，使水溶性水飞蓟素产品达到工业化生产水平。 制定水溶性水飞蓟素的质量标准，填补国内这一领域的空白。 2、主要技术指标 (1) 确定水溶性水飞蓟素提取工艺条件，完成中试，达到工业化生产水平； (2) 制定水溶性水飞蓟素的质量标准； (3) 发表论文2～3篇。 3、参加人员
4、经费预算 1). 经费来源预算 单位：万元 2). 项目经费支出预算 单位：万元
二、项目工作总结（包括技术总结） 1、水溶性水飞蓟素提取工艺研究 (1) 原料的预处理 水飞蓟种子榨油。水飞蓟油可以制作色拉油具有色清、味纯、沸点低、易被人体吸收等特点，有保肝养胃功能，无任何毒副作用，是一种高级保健食用油。榨油后的水飞蓟饼用于提取水溶性水飞蓟素。提取水溶性水飞蓟素后渣饼富含淀粉、蛋白质，因不含任何有机溶剂，经适当加工后即能形成营养成份较高的天然饲料，是养禽、养猪、喂养水产品的极佳饲料。 (2) 水溶性水飞蓟素的提取 采用碱水的醇溶液为溶剂，以水溶性水飞蓟素的得率和水飞蓟宾含量为工艺考察指标，以提取时间、提取温度、溶剂用量、pH值为实验因子，通过单因素试验和正交试验，研究并优选出了水溶性水飞蓟素的最佳提取工艺条件。 材料与仪器 水飞蓟种子采自于江苏东台本公司种植基地，由江苏省中国科学院植物研究所李维林研究员鉴定为菊科植物水飞蓟(紫花) ( Silybum marianum (L.) Gaertn) 的种子。