酶法水解乳清蛋白工艺研究

酶法水解原淀粉

(翻译)酶法水解原淀粉 摘要：原淀粉颗粒存在半微晶结构能抵抗淀粉酶的水解，但是当淀粉糊化时很容易被水解和转化为糖和糊精。影响酶在体内和体外水解的速率和历程的各因素是相互关联的，在这方面的研究也是很复杂的。本文试图讨论一下这方面的问题并给读者提供一些跟这些特征有关的重要信息资源，文章中的每个不同的标题都可以转换成一个综述，因此应该根据文章素材选择性的阅读。 内容 1.引言. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 2.颗粒大小. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 3.颗粒形状. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 4.混合颗粒. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 5.直链淀粉的含量. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 6.脂质的量. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 7.磷酸盐含量. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 8.结晶度和双螺旋. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 9.结构. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 10.环境. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 11.糊化. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 12.淀粉酶的来源. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 13.其它影响因素. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 14.结论. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 1.引言： 加工过的淀粉已经从半微晶的结构转变为无定型结构，而原淀粉则不然，因此原淀粉颗粒可以抗酶解，淀粉类食品在烹调时可以保存较高的营养价值。细菌、真菌、植物、动物和人类生产的α-淀粉酶（尽管不一定有相同的化学结构）是一种内切酶，从分子内部任意的水解α-1, 4键，可以降低淀粉分子的分子量（直链淀粉和支链淀粉）。经过大量的水解，淀粉最终转化为糖和糊精，称为各种DE糖浆，在这里，水解能力是以水解产物（每单位质量）当作葡萄糖量来结算的。商业葡萄糖浆就是利用这种方法生产的，过去葡萄糖浆的生产多用无机酸来水解淀粉，酶处理可以生产更高质量的产品。 如上所述，α-淀粉酶在自然界中到处都存在。许多动物（包括人类）是在唾液或胰腺中分泌酶的，许多动物的胰腺（该胰腺进入人类的十二指肠）将食品淹没时，利用其中的淀粉酶将淀粉水解，此时所生成的任何葡萄糖都可以被小肠直接吸收，刷状缘酶（生产麦芽糖的麦芽糖酶和水解糊精α-1,6键的糊精酶）和α-淀粉酶使葡萄糖的消化过程继续进行，更多的葡萄糖被人体吸收。考虑到α-淀粉酶水解淀粉颗粒的产物，读者会提到更多细节性的工作。没有被消化的淀粉被输送到动物的大肠内，在肠内被肠内菌群发酵（产生气体），热量以短链脂肪酸的形式释放随可能被吸收掉。据一些作者（Dobreva and Ivanova, 1989).）报道直链和支链淀粉水解的方式是不同的。 α-淀粉酶水解原淀粉的控制与水解机制将在下面进行论述。 很多评论是建立在体外研究的基础上的，这些研究与体内研究有着不同的的动力

玉米秸秆酶水解工艺的初步研究

玉米秸秆酶水解工艺的初步研究 本实验以酶水解产生的还原糖含量为指标来评价纤维素酶水解效果，研究了温度、pH值、酶浓度、底物浓度、及酶解时间等单因素对玉米秸秆水解效率的影响，结果表明：酶水解的最佳温度为50℃～55℃，酶浓度为0.9g/L，pH5.0，底物浓度为50g/L，最佳反应时间为48h。根据单因素试验结果，设计了五因素四水平正交实验，通过正交实验得出酶水解玉米秸秆的最佳工艺是：pH5.0，反应时间36h，温度60℃，酶浓度0.9g/L，底物浓度为50g/L。 标签：玉米秸秆酶水解纤维素酶正交试验 一、实验材料与方法 1.实验材料 1.1主要原料：玉米秸秆[1] 1.2主要试剂：：DNS（3，5-二硝基水杨酸）试剂、0.1mol/L的柠檬酸溶液、0.1mol/L的柠檬酸钠溶液、3%的NaOH水溶液 2.实验方法 2.1 原料的预处理：粉碎→碱浸泡→抽滤→干燥 2.2 还原糖的测定方法：本研究采用DNS法[2]。 2.3 葡萄糖标准曲线的绘制 2.4 纤维素酶水解条件的优化 影响木质纤维原料酶水解的因素主要包括：底物浓度、酶浓度和反应条件（如温度、pH值等）[3]。为了提高葡萄糖的产量和纤维素的水解率，本文在优化水解工艺和提高纤维素酶的活性方面作了大量的实验研究。 2.4.1 底物对酶水解影响的研究 底物（经预处理的玉米秸秆）可以影响酶水解速率和发酵糖的得率[4]。实验条件为：在6只150mL的锥形瓶中分别加入质量为0.4g、0.6g、0.8g、1.0g、1.2g、1.4g的经过预处理的玉米秸秆原料，并加入20mL的蒸馏水，再用移液管加入15mL、pH为5.0的柠檬酸-柠檬酸钠缓冲溶液，摇匀，在锥形瓶瓶口盖上保鲜膜，并用橡皮筋绷紧。取5只试管，分别加入5mL，0.3g/mL的酶液，与锥形瓶一起放入设定温度为50℃的恒温水浴锅中分别预热5min。预热5min后取出将装在5只试管中5mL，0.3g/mL的酶液分别倒入5只锥形瓶中，摇匀，重新

大豆蛋白水解液脱苦的研究_百度文库.

中图分类号:TQ645.9+9;文献标识码:A;文章篇号:1007-2764(200401-0012-032 大豆蛋白水解液脱苦的研究 朱海峰 1 班玉凤 1 周克仲 2 (1.沈阳工业大学辽阳校区化工学院,辽阳 111003 (2.辽阳石油化纤公司,辽阳111003 摘要:大豆蛋白酶解常常会产生苦味,蛋白质水解物苦味肽的苦味是长期困扰其应用的问题。本文研究了酶法与微生物法对大豆蛋白水解液脱苦的效果。结果表明:采用端肽酶黑曲霉酸性蛋白酶(3000u/g与内切酶枯草杆菌碱性蛋白酶(Alcalase 2.4L协同作用水解大豆蛋白可有效降低水解液苦味,并且由酿酒酵母对水解液进一步处理后,大豆蛋白水解液的苦味降至更低。 关键词:大豆蛋白水解液;脱苦;黑曲霉酸性蛋白酶;酿酒酵母 大豆蛋白是植物性食物中氨基酸组成比例最合理的蛋白质。通过水解大豆蛋白制成蛋白肽混合物可以提高大豆蛋白的加工性能、营养性以及生理保健功能。但水解后,原来处于蛋白质内部的疏水性氨基酸就会暴露出来,使水解产物呈现出一定的苦味,限制了水解产物的最终应用,因此必须将苦味消去。脱苦的主要方法有选择性分离法、掩盖法、膜分离法、和酶法。文献中报道的在大豆蛋白水解液中多采用活性炭吸附法或活性炭吸附法与包埋法结合法进行脱苦 [1~2], 但在脱苦过程中营养成分会有所损失。本文在制取大豆蛋白肽工艺中采用酶法和微生物法来脱除大豆蛋白水解液的苦味。 1 材料与方法 1.1 实验原料及药品 枯草杆菌(Alcalase 碱性蛋白酶 2.4L :食品级 (酶活力 2.4AU/g ,丹麦 NOVO 公司出品;

黑曲霉酸性蛋白酶:食品级 (酶活力 3000u/g,北京房山酶制剂厂出品; 大豆蛋白(含水量 7.35%,蛋白质含量 69.6% :市售; 酿酒酵母:大连理工大学生化实验室提供; 其它试剂为国产试剂。 1.2 实验仪器 精密酸度计:pHS-2型,上海雷磁仪器厂; 台式离心机:80-1型, 江苏省金坛市医疗仪器厂; 超级恒温水浴:501型,上海市实验仪器厂; 水夹套式三口玻璃发酵罐:250ml ,自加工; 磁力搅拌器:78-1型,国华电器有限公司。收稿日期:2003-10-29 作者简介:朱海峰(1970~ ,男,讲师,研究方向为生物酶催化 1.3 工艺流程 大豆蛋白→酶解→灭酶→离心→水解液→脱苦→脱色→ 浓缩→喷雾干燥 1.4 实验方法 1.4.1 酶解反应 将大豆蛋白在 105℃下干燥至恒重,称取一定量上述原料加入发酵罐 (置于磁力搅拌器上 , 按照设计的底物浓度向发酵罐中补适量自来水。连接发酵罐和超级恒温水浴,启动磁力搅拌器和超级恒温水浴,然后在搅拌下以一定方式加入蛋白酶(单酶或双酶进行水解。水解结束后,水解液经过高温灭活(95℃下加热 5min ,在 4000 r/min的条件下离心 10min ,取适量上清液供分析用,同时小心取出全部残渣经充分干燥后用于测定降解率 HR 。 HR 定义为:(底物投料量-剩余残渣量 /底物投料量。 1.4.2 蛋白质水解度(HD 测定 根据文献[3~5]介绍的甲醛滴定法测定。水解度的定义为在水解过程中打开的肽键占蛋白质肽键总数的百分比。

大米蛋白质的酶法水解及其性质研究

大米蛋白质的酶法水解及其性质研究注 王章存姚惠源 (江南大学食品学院,无锡214036) 摘要本文通过三种蛋白酶催化反应动力学特性的比较,确定用碱性蛋白酶Alcalase作为水解大米分离蛋白的酶制剂,并通过正交试验分别获得高溶解性、高发泡性、高乳化性大米蛋白水解物的酶反应条件。本实验所得到的大米蛋白水解物最大溶解度为50.2%,最大发泡力为50m L,最大乳化力为73.6mL/g。 关键词大米蛋白蛋白酶蛋白质水解 0前言 大米蛋白以其合理的氨基酸组成、较高的生物利用率及特有的低敏性等特点被视为优质蛋白质11-32。而在味精和淀粉生产中的大量副产品蛋白质未被充分利用,其主要原因是大米蛋白的水溶性较差,为此大米蛋白的开发利用被列入国家十五科技攻关课题。目前国内外对大米蛋白的提取多采用碱溶技术。作者认为对大米蛋白的开发利用宜首先获得高纯度大米蛋白,然后采用不同的改性方法使其适用于不同的用途。为此作者曾制备蛋白含量达90%的大米分离蛋白粉。当然该分离蛋白的物化功能尚不能满足食品加工的需要。为此本文探讨酶法水解大米分离蛋白(RPI)改善其物化功能性的技术措施。 1材料和方法 1.1材料 大米分离蛋白:由本实验室制备,蛋白质含量89.5%,粗灰分1.2%。 蛋白酶为诺维信公司产品,酶制剂品种是Pro-tamex,Alcalase和Neutrase(标示每g酶活力分别为1. 5,3.0和1.5安森单位)。 市售纯正花生油。 1.2试验方法 1.2.1三种蛋白酶的比较(复合酶Protamex、碱性酶 注:国家十五科技攻关项目 收稿日期:2003-03-11 王章存:男,1963年出生,博士研究生,副教授,粮油食品生物技术研究Alcalase、中性酶Neutrase) 配制5%的大米分离蛋白的悬浊液(pH值为7.0、7.5、7.0分别用于复合酶P(Protamex)、碱性酶A(A-l calase)和中性酶N(Neutrase)试验),酶的用量分别为0.1%(E/S),于50e下保温,每隔30min取样一次,沸水浴中灭酶3min,离心(1000r/min@5min)后,测定上清液中蛋白质含量。 1.2.2酶水解反应条件的优化 采用正交试验方法,以获得高溶解性、高发泡性、高乳化性的蛋白水解物为目的,考查的影响因子是蛋白浓度、酶添加量和反应时间。 每组试验结束后在45e以下真空浓缩和干燥。所得产物用于溶解、发泡和乳化性能指标的测定。1.2.3测定方法 蛋白质含量测定:采用Folin-酚试剂法142。 蛋白质溶解度:以上清液中蛋白质含量占反应体系中蛋白总量的百分比表示。 起泡性测定:取3g样品加50mL去离子水,用0.05mol/LNaOH或HCl调pH7后搅拌30min,再加去离子水至100mL作为测试液(水温为35e),于1000r/min转速下搅拌3min,立即测定泡沫体积。放置30min后测定下层析出液体的体积,以判断泡沫的稳定性。 乳化性测定152:取1%的蛋白质溶液50mL加入纯花生油,并用电导仪监测至电导率下降为零时停止加油,此时滴加花生油的总量即为该蛋白质样品的最大乳化量,以每g蛋白质乳化油的毫升数表示(mL/ g)。 2003年10月第18卷第5期 中国粮油学报 Journal of the Chinese Cereals and Oils Association Vol.18,No.5 Oct.2003

蛋白酶水解蛋清的工艺研究_王彩丽

[收稿日期]2009-02-16 [基金项目]湖北省科技攻关项目(2006AA201C56) [第一作者简介]王彩丽(1977),女,陕西渭南人,实验师,硕士研究生,主要从事生物化学与分子生物学研究. doi:10 3969/j.issn.1673-1409(S).2009 02 020 蛋白酶水解蛋清的工艺研究 王彩丽 (长江大学生命科学学院,湖北荆州434025;甘肃农业大学农学院,甘肃兰州730070) 方正武 (长江大学农学院,湖北荆州434025) 荣 俊 (长江大学生命科学学院,湖北荆州434025) [摘要]选用木瓜蛋白酶、碱性蛋白酶和复合风味蛋白酶3种酶分别对鸡蛋蛋清进行水解,研究了酶水解鸡蛋蛋清的工艺。结果表明:用复合风味蛋白酶水解蛋清效果最好,其水解最佳条件为:温度50 ,pH 6.0,底物浓度25%,酶用量0.8mL /g (5200U /g)水解12h,水解度可达61.66%。[关键词]蛋清;木瓜蛋白酶;碱性蛋白酶;复合风味蛋白酶;水解[中图分类号]T S201 1 [文献标识码]A [文章编号]1673-1409(2009)02-S072-03 蛋清含有丰富的蛋白质和人体所需要的多种氨基酸,且其组成比例非常适合人体的需要,是人体内利用率最高的蛋白质之一[1]。用蛋白酶处理后的蛋清水溶液,具有口感好、无腥味、营养丰富、耐储存,又保持着鸡蛋的特有风味等优点[2],而且用酶处理后的蛋清透明水溶液,其中蛋白质已局部降解,有利于人体的消化吸收,不会引起消化不良,可用作保健饮料,符合现代人们对饮品的要求,尤其适宜于作为老人和婴儿的营养品,具有广阔的应用前景。为此,本研究探讨了蛋清的蛋白酶水解工艺条件,以期为鸡蛋的深加工奠定理论基础。 1 材料与方法 1.1 试验材料 鸡蛋为市售,复合风味蛋白酶(Flavourzym e)、碱性蛋白酶(Alcalase)和木瓜蛋白酶(Papain)均为诺和诺德公司产品。1.2 水解液的制备 将鸡蛋蛋清取出并用纱布过滤,以5g 鸡蛋蛋清加25mL 水配制成蛋清水溶液作为酶水解底物,调节pH ,加入水解所需要量的酶,在反应所需温度下水解一定时间,沸水浴20m in 以终止酶反应,待冷却后离心分离,收集上清液。同时做对照试验(不加酶液)。1.3 酶水解工艺 (1)最佳用酶的选择 蛋清水解选用木瓜蛋白酶、碱性蛋白酶和复合风味蛋白酶分别对蛋清进行水解并分别在其各自的最适温度、pH 、用量(均按诺和诺德公司提供,作适当调整)的条件下,对底物进行水解,8h 后测定各酶水解产物中蛋白质的水解度,根据各酶对蛋清的水解度大小,确定最佳用酶。 (2)水解温度的确定 对于选定的最佳用酶,测定其在不同的水解温度下酶水解产物中蛋白质的水解度,根据测定的水解度大小,确定酶反应的最适温度。 (3)水解pH 的确定 在酶反应的最适温度下,测定其在不同的水解pH 下酶水解产物中蛋白质的水解度,根据测定的水解度大小,确定酶反应的最适pH 。 (4)酶用量的确定 加入不同的酶量,在酶反应的最适温度和pH 下,测定其各水解产物中蛋白质的 72 长江大学学报(自然科学版) 2009年6月第6卷第2期:农学 Journal of Yangtze University(Nat Sci Edit) Jun 2009,Vo l 6N o 2:A gr i Sci

酶水解法应用于高淀粉含量食品中亚硝酸盐测定

酶水解法应用于高淀粉含量食品中亚硝酸盐测定 ----样品前处理方法的探讨 [摘要]：针对GB 5009.33-2010《食品安全国家标准食品中亚硝酸盐与硝酸盐的测定》中，高淀粉含量样品在样品前处理时常因淀粉糊化导致过滤液含有可溶性淀粉而呈现浑浊，影响测定结果。文章通过采用α-淀粉酶温水水解样品后水浴加热提取亚硝酸盐作为前处理方法。排除滤液浑浊的干扰，旨在提高检测结果的准确度。结果表明：加标回收率为97.5%--99.1%，相对标准偏差（RSD）＜10.0%，结果准确，精密度高。 [关键词]：婴幼儿米粉；亚硝酸盐；α-淀粉酶 目前检测食品中亚硝酸盐的检验依据是GB 5009.33-2010 《食品安全国家标准食品中亚硝酸盐与硝酸盐的测定》[1]，该标准第一法为离子色谱法，样品在经过沉淀蛋白质、除去脂肪后，再使用几种固相萃取柱（碳十八柱、银柱、钠柱）提取，这些萃取柱价格较高，使用中还需要固相萃取装置，在基层单位不容易开展。该标准第二法为分光光度法（亚硝酸盐采用盐酸萘乙二胺法），该法适用于腌腊肉类、酱卤肉类、腌菜类等食品，该标准第三法为乳及乳制品中亚硝酸盐与硝酸盐的测定。 在实际工作中，各种肉制品和乳制品都能很好的采用相应的检验依据，得到良好的实验结果。但是当遇到婴幼儿米粉时，无论采用第二法或第三法测定，均不能得到透明的过滤液，在样品前处理的试验过程中发现在加入亚铁氰化钾与乙酸锌溶液后，沉淀不完全，过滤液中任然含有可溶性淀粉而呈现浑浊，严重影响测量结果。 文章通过采用α-淀粉酶温水水解样品后再水浴加热提取亚硝酸盐，作为

样品的前处理方法。

解决了在检测过程中由于过滤液浑浊进而影响比色的困扰，取得满意的结果。 1 试验部分 1. 1 原理 1.2仪器 7200 型分光光度计，上海尤尼柯。 1.3试剂 α-淀粉酶，亚硝酸钠标准溶液5μg/mL，饱和硼砂溶液: 50 g / L ; 乙酸锌溶液:220 g /L ; 亚铁氰化钾溶液: 106 g / L ;对氨基苯磺酸溶液：4 g/ L;盐酸萘乙二胺溶液: 2 g / L。 1.4 操作步骤 1.4.1样品处理 取样品10 g 于150 mL烧杯中, 加α-淀粉酶0. 2 g ,搅拌均匀, 加入约60度的蒸馏水100 mL, 再次搅拌均匀, 静置10~ 15 min, 加入50g/ L饱和硼砂溶液12. 5 mL, 将试样转移至250 mL 容量瓶中, 于沸水浴中加热15 min, 取出冷却后分别加入220 g / L 乙酸锌溶液5 mL, 106 g / L亚铁氰化钾溶液5 mL,加水至刻度, 摇匀, 放置30 min, 过滤, 滤液备用。同时做试剂空白。 1.4.2 测定 取25.00 mL样品处理液于50 mL具塞比色管中,另取0. 00, 0. 20, 0. 40,0. 60, 0. 80, 1. 00, 1. 50, 2. 00, 2. 50 mL亚硝酸钠标准溶液, 分别置于50 mL 具塞比色管中。于标准管与试验管中分别加入对氨基苯磺酸溶液2 mL, 混匀静置3 ~5 min, 再加入盐酸萘乙二胺溶液1mL, 加水至刻度, 混匀静置15 min, 用

酶法水解鸡蛋白蛋白的工艺条件研究

大学 毕业论文 题目 学院生命科学与工程学院专业班级食工 学生姓名 指导教师 成绩 2009 年 6 月20 日

摘要 鸡蛋是比较理想的全价蛋白质，其结构与人体蛋白质组成结构相似，生物学价值高，但由于一些行业的特殊需求，蛋黄的需求量较大，在生产过程中，蛋清没有得到很好地利用，既造成了蛋清资源的极大浪费，又造成了环境的污染。酶法水解蛋清蛋白质制备活性肽能有效地利用我国丰富的蛋清资源，将产生巨大的经济和社会效益。 本论文以鸡蛋清为原料，研究了酶法水解鸡蛋白蛋白的工艺条件。通过筛酶实验，以水解度、抗氧化性为指标，筛选出酶解蛋清蛋白的最佳酶是复合蛋白酶（动物酶庞博公司），通过单因素实验和正交实验得出复合蛋白酶（动物酶）酶解蛋清的最佳条件是：pH=8.5、温度=50℃、[s]=3%、[E]/[S]=4/100、T=5h。 关键词：鸡蛋白蛋白；蛋白酶；水解；多肽；水解度；抗氧化性

Abstract Eggs is the full price of a good protein. Its structure and composition is similar to human proteins and the biological value is high. but because of eating habits and some of the special needs of some industries, the demand for large egg yolk, the egg white has been discarded as waste in the production process , causing a great waste of the egg white resources and caused environmental pollution. Preparation of enzymatic hydrolysis of egg white protein peptides are effective in the using of egg white rich resources in China which will have a huge economic and social benefits． In this paper, egg for raw materials to study the enzymatic hydrolysis of egg albumin conditions. Enzyme experiments through sieve to yield peptide hydrolysis, the antioxidant enzyme selected as an index of the best egg white protease enzyme is a compound (animal enzymes), by single factor experiments and orthogonal test compound derived protease (animal enzyme ) the best conditions for hydrolysis of egg white are：pH = 8.5, temperature = 50 ℃, [s] = 3%, [E] / [S] = 4 / 100, T = 5h． Key words: egg albumin; protease; hydrolysis; peptide; degree of hydrolysis; antioxidant 目录

酶水解技术研究进展

1. 国内外酶水解技术研究进展 酶对有机磷矿化、水解和氧化等过程具有重要作用。相比于传统表征环境样本有机磷形态及其生物有效性的化学提取方法，用酶水解技术表征有机磷可较好地模拟有机磷的潜在生物有效性[1]。酶水解技术最早应用于土壤肌醇六磷酸盐(植酸)生物有效性研究。Jackman和Black [2]二人希望通过酶水解技术确定植酸水解效率是否受植酸溶解性或植酸酶活性限制，或者二者共同限制。结果发现，底物(植酸)溶解性是决定植酸水解效率的主要因子，而不是植酸酶活性。随后，酶水解技术出现于水环境中有机磷生物有效性研究。 Strickland 和Solorzano[3]以无机焦磷酸酶和碱性磷酸酶检测了藻类培养液和海水中酶可水解磷，结果表明酶活性决定着样本中酶可水解磷量。而且，酶制剂纯度和特异性的不足、样本本身存在的酶干扰以及水样中底物浓度较低造成酶水解技术分析水环境样品有机磷难度较大。 近20 年来，酶水解技术被广泛应用于土壤、有机肥料、水体、沉积物、腐殖质等环境样品[4-9]。Turner 等[4]选择碱性磷酸酶、磷酸二酯酶和植酸酶分析了澳大利亚草地水可提取有机磷组成特征，将土壤水可提取有机磷分为3 种类型：(1) 活性正磷酸单酯(碱性磷酸单酯酶水解释放的正磷酸盐量)；(2) 正磷酸二酯(碱性磷酸单酯酶与磷酸二酯酶水解共同作用释放的正磷酸盐量减去活性正磷酸单酯)；(3) 植酸磷(植酸酶水解释放的减去活性正磷酸单酯和正磷酸二酯的和)。后来，Monbet 等[6]对Turner 等的酶水解方法进行了改进，将碱性磷酸酶、磷酸二酯酶和植酸酶进行组合，表征了环境条件下水体溶解性有机磷(DOP)生物有效性。Zhou 等[10]研究了武汉东湖样品磷酸酯酶可水解磷,发现磷酸酯酶可水解磷含量升高会引起磷酸酯酶活性增强。Zhu 等[11]将化学连续提取法与酶水解法结合分析了滇池表层沉积物有机磷形态及其生物有效性，发现滇池沉积物中12.1-27.2%的有机磷具有潜在生物可利用性。 2 湖泊有机磷形态及生物有效性 湖泊有机磷存在于水体和沉积物中，根据溶解性可将其分为溶解态和颗粒态。溶解态有机磷主要由磷脂、磷酸糖类和膦酸盐等组成[12]，颗粒态有机磷主要来自生物体[13]。在湖泊水体中，溶解态有机磷最高可占总磷的50%- 90%[14-15]，有机磷也是湖泊沉积物磷的主要形态[16]。湖泊水体有机磷研究多通过膜过滤将有机磷分为溶解性有机磷(DOP)和颗粒态有机磷，然后采用分子光谱学、原子光谱学、酶水解法等方法分析溶解性有机磷[17]。此外，采用超滤、膜透析和反渗透等前处理技术预先对溶解性有机磷进行分子量分级[12][18-19]，可以在不破坏溶解性有机磷原有结构的前提下表征不同有机组分的性质差异和生物有效性，获悉溶解性有机磷组分构成和官能团信息。 湖泊沉积物有机磷形态研究主要采用土壤有机磷化学连续分级方法，它以不同特性的提取剂(溶解性、氧化还原性和酸碱性等)连续对沉积物分级提取，通过各级提取液中有机磷含量可以得出各形态有机磷迁移转化能力、活性及潜在生物有效性等信息[20]。Sommers 等[21] (1972)最早采用连续分级提取方法将沉积物有机磷分为碱性、中性和酸性三种形态。Bowman 和Cole[22] (1978)最早提出了相对系统的土壤有机磷分级提取体系，将其分为活性、中活性、中稳性和高稳性有机磷。Oluyedun 等[23] (1991)将上述两种方法应用于北美洲的安大略湖沉积物有机磷形态研究，发现两种提取方法可提取有机磷总量相似，而各分级提取的有机磷含量上存在差异。同时，Oluyedun 等[24]研究也表明土壤有机磷形态连续提取方法适合于湖泊沉积物中有机磷形态分析。然而，早期有机磷提取方法存在提取方法较繁琐、有机磷提取率不高等缺陷。于是，Ivanoff 等[20] (1998)对早期有机磷连续分级提取方法进行了改进，将有机磷分成活性、中活性和非活性有机磷，增加了对残渣态有机磷的分析，弥补了前人对有机磷提取回收率不高的缺陷。

关于酶水解法测定玉米中淀粉含量方法的探讨

酶水解法测定玉米中淀粉含量方法的探讨 刘海明，王旭艳 承德避暑山庄企业集团有限责任公司质检部，河北、承德067500 摘要：测定玉米中淀粉含量的方法很多，我们按GB/T5514－2008[1]标准用酶水解法对玉米中的淀粉含量进行测定，由于测定结果偏低、偏差较大，我们对此标准中的关键环节的条件进行了实验调整。并对实验中存在的问题进行了分析和探讨，对玉米淀粉含量的准确测定起到重要的作用，希望给同行的朋友带来帮助。 关键词：玉米淀粉含量酶水解 前言：玉米淀粉是淀粉的主要品种，占世界淀粉总量80%，广泛用于食品、制糖、发酵、医药和化工等，玉米淀粉主要在玉米胚乳中，由单一的葡萄糖分子脱水聚合而成的，葡萄糖分子以a-1,4一糖苷键,a-1,3一糖苷键、a-1,6一糖苷键链接而成的天然物质，质量分数在70%～80%之间，淀粉含量的测定方法有酸水解法，酶水解法和旋光法等，我们主要探讨一下酶水解法，依据是GB/T5514－2008标准方法，为保证淀粉含量测定的准确性，对标准中的相关环节进行了实验，对标准方法中存在的问题和不足之处一一分析，提出了问题的解决办法，为进一步完善本标准提出了建议。供大家商榷。 正文： 1 实验原理：试样经除去脂肪及可溶性糖类后，其中淀粉经淀粉酶水解成小分子糖，再用盐酸水解成还原性单糖，最后按GB/T5009.7测定还原糖，并折算成淀粉含量。 2 实验试剂（除非另有说明，均使用分析纯试剂）： 2.1 淀粉酶溶液:称取耐高温a-淀粉酶0.5 g，加100 mL水溶解，临用现配 2.2 碘溶液:称取 3.6 g碘化钾溶于20 mL水中，加人1.3 g碘，溶解后加水稀释至100 mL。 2.3 甲基红指示液:称取0.1 g甲基红用95%乙醇溶液定容至100mL 2.4 6mol/L盐酸:取浓盐酸100mL加水至200mL, 2.5 200g/L氢氧化钠溶液。 2.6 水:应符合GB/T 6682中三级水的要求。 2.7 碱性酒石酸铜甲液：称取15g硫酸铜(CU S04?5H2O)及0.050g 亚甲基蓝，溶于水中并定容至1000 mL.保存于棕色瓶中。 2.8 碱性酒石酸铜乙液：称取50 g 酒石酸钾钠和75 g 氢氧化钠，溶于水中，再加入4g亚铁氰化钾，完全溶解后，用水定容至1000 mL，贮存于橡胶塞玻璃瓶内. 2.9 葡萄糖标准溶液（1mg/mL）：称取1 g(精确至0.0001 g) 经过98－100℃干燥2h 的葡萄糖，加水溶解后加入5mL盐酸，并以水定容至1000 mL. 此溶液每毫升相当于1.0mg葡萄糖。 3 材料与方法 3.1 材料 3.1.1玉米：本单位收购的玉米，产地：东北和承德，种类：粉质和胶质玉米。 3.1.2酶制剂：酶活力为14万U/mL耐高温a一淀粉酶 3.2 实验仪器设备 3.2.1 粉碎机:粉碎样品，使其完全通过孔径0.45 mm(40目)筛。 3.2.2 回流冷凝装置: 接受瓶为250 mL 3.2.3 天平:分度值0.001g 3.2.4 三角瓶:150mL 3.2.5 容量瓶:250mL 3.2.6 分样筛：孔径0.45 mm(40目) 3.3 实验方法

Alcalase酶解作用四种蛋白源制备蛋白水解物反应条件的初探

２００４学术年会 ３小结 ３．１试验结果表明，饲粮中添加酶制剂、活菌制剂比对照组和金霉素组提高日增重１１．９７％～８．６１％，饲料报酬提高４．８８％。即有较好地提高生产性能的作用。 ３＿２饲粮中添加酶制剂、活菌制剂可降低猪粪中的氨气含量，且减少抗生素对环境的污染。这与活菌制剂能有效地调节消化道的菌系，维持有益菌群的平衡并减少ＮＨ３与胺的形成有关。 ３．３本次研究表明，饲粮中添加酶制剂可显著降低粪便中的氨含量。说明复合酶中的纤维素酶、木聚糖酶、Ｂ一葡聚糖酶和果胶酶等可显著提高饲料中蛋白质消化、吸收率，减少粪便中氮的排出。３．４四个处理粪便中钙、磷和粗灰分无显著影响。 Ａｌｃａｌａｓｅ酶解作用四种蛋白源制备蛋白水 解物反应条件的初探 张晶，单安山‘，李牧 东北农业大学动物营养研究所，哈尔滨１５００３０ １引言和目的： 在我国，去皮大豆粕、玉米蛋白粉、鱼粉、肉粉资源较为丰富，来源广阔，已经用于仔猪饲料中。但随着仔猪早期隔离断奶日龄的不断提前和技术的积极推广，需要易吸收、营养价值高的饲料作为营养源。目前肽研究已经越来越深入，已知肽的营养作用有促进氨基酸的吸收，提高日粮蛋白在体内的沉积；提高动物的生产性能；促进矿物质元素的吸收利用。有试验表明，有的寡肽可以直接被肠壁吸收，起到～定的功能性作用，如阿片肽类、免疫调节肽、酪蛋白磷酸肽、抗血凝肽和抗高压肽等（李富伟，２００３）。以去皮大豆粕、玉米蛋白粉、鱼粉、肉粉为蛋白源酶解法制备蛋白水解物（包含多肽、寡肽和小肽）为早期隔离断奶仔猪提供营养源。 ２材料和方法： Ａｌｃａｌａｓｅ酶由丹麦的诺维信中国公司提供，属碱性蛋白酶，是由选育出的地衣芽孢杆菌（Ｂａｃｉｌｌｕｓｌｉｃｈｅｎｉｆｏｒｎａｉｓ）生产而得，主要应用于水解各种蛋白质，是一种高效的细菌蛋白酶。该酶的主要有效成分枯草杆菌蛋白酶Ａ（枯草杆菌蛋白酶Ｃａｌｓｂｅｒｇ）是一种内切蛋白酶。Ａｌｃａｌａｓｅ的最佳工作条件为温度５５～７０。Ｃ，因底物类型而异；ｐＨ值为６．５—８．５。催化部位为丝氨酸。采取三因素正交试验设计，去皮大豆粕和玉米蛋白粉采取Ｌ９（３３）正交试验设计，鱼粉和肉粉采取Ｌ１６（４３）正交试验设计，研究水解反应中底物浓度、酶浓度、温度、时间、ｐＨ五因素中三个因素对肽制剂生成的影响。去皮大豆粕酶解条件设定：底物浓度２％、５％、８％，酶浓度３．０％、４．５％、６．Ｏ％，温度４０℃、４５。Ｃ、５０℃，时间４．５ｈ，ｐｎ８．Ｏ：玉米蛋白粉酶解条件设定：底物浓度８％，酶浓度３Ｏ％、３３％、３．６％，温度４０。Ｃ、４５℃、５０℃，时间４．５ｈ，ｐＨ９５、９．８５、１０２０（李升福，２００３）；鱼粉酶解条件设定：底物浓度８％， ＋通迅地址：东北农业大学动物营养研究所，１５００３０

大豆蛋白的组成

大豆蛋白的组成 大豆, 蛋白 根据蛋白质的溶解性进行分类，大豆蛋白可分为两大类：清蛋白（非酸沉蛋 白）和球蛋白（酸沉蛋白）。 根据蛋白质分子大小，用超离心沉降法对水解浸出脱脂粕所得的蛋白进行测定，按溶液在离心机中沉降速度来分，可分为四个组分，即：2S，7S,11S，15S （S为沉降系数），每一组分是一些重量接近的分子混合物。如果将每一组分的蛋白质进一步分离，可以获得蛋白质单体或相类似的蛋白质。 主要成分是7S和11S，占全部蛋白质的70%以上。约有80%的蛋白质分子量在 10万以上。 （1）2S组分：低相对分子质量的2S组分含有胰蛋白酶抑制素、细胞色素C和两种局部检定的球蛋白等，在N-末端结合有天冬氨酸。这些低相对分子量的蛋白通常存在于乳清中，常常需要进行加热以消除不良作用而有利于消化。（2） 7S组分：7S组分有四种不同种类的蛋白质组成，即：血球凝集素、脂肪氧化酶、β-淀粉酶和7S球蛋白，其中7S球蛋白所占的比例最大。占7S组分 的1/3，占大豆蛋白总量的1/4。 7S球蛋白是一种糖蛋白，含糖量约为5%，其中3.8%甘露糖，1.2%的氨基葡萄糖。与11S球蛋白相比，色氨酸，蛋氨酸，胱氨酸含量略低，赖氨酸含量较高，因此7S蛋白更能代表大豆蛋白氨基酸的组成。 据分析，7S蛋白质是一个具有9个亚基的四元结构。7S多肽是紧密的折叠起来的，其中α-螺旋，β-折叠型和不定型绕圈装等亚基结构，分别占5%，35%和60%。在三级结构中，一个分子只有3个色氨酸残基侧链，全部处于分子表面，35个酪氨酸残基侧链几乎全部处于分子内部的疏水区；4个胱氨酸残基侧链中每2个结合在一起，形成-S-S-结合。 （3）11S组分：组分比较单一，到目前为止只发现一种11S球蛋白。 11S球蛋白也是一种糖蛋白，只不过糖的含量比7S少得多，只有0.8%。11S球蛋白含有较多的谷氨酸、天冬酰胺的残基以及少量的谷氨酸、色氨酸和胱氨酸，它的二级结构与7S球蛋白几乎没有什么区别。在三级结构中，一个分子有86个酪氨酸残基侧链和23个色氨酸残基侧链，，其中有34-37个酪氨酸、10个色氨酸处于立体结构的表面，其余的则处于立体分子的疏水区域。另外，在一个分子中，大约有44个胱氨酸残基侧链，其中一部分以-SH基形式存在，一 部分以-S-S-形式存在。 11S组分有一个特性，即冷沉性。脱脂大豆的水浸出蛋白液在0-2℃水中放置后，约有86%的11S组分沉淀出来，利用这一特征可分离浓缩11S组分。

酶解法制取蛋白

酶解法生产蛋白 1 蛋白原料 动物性蛋白与植物蛋白相比，原料中脂肪含量较高，不仅影响水解反应的进行，而且所得水解液颜色混浊，影响最终分离效果。因此，在酶解前用丙酮、乙醚对原料进行脱脂处理，对水解反应的进行有促进作用。余礼碧等（2000）研究表明，脂肪磷脂去除的越干净，蛋白质反应中心暴露得越充分，利于酶解反应的进行，并且水解终点明显，固液易于分离。 2 预处理 为了提高酶解效率，一般对原料蛋白作变性预处理，主要方法包括：①热处理。在沸水浴中煮10～60min 后，直接酶解加工或离心收集沉淀。Margearet（1997）认为酶解前的热处理只能提高反应的水解度，而对产物的生理活性没有影响。②强酸处理。用适当浓度强酸处理蛋白原料，离心收集沉淀，并用水悬浮洗涤沉淀数次，去掉余酸。李春美等（2005）研究表明，鱼鳞未经酸处理时水解效果很差，经粉碎并用酸处理后，酶解效率大大提高。蛋白质经变性处理后会充分暴露其水解作用的位点，易于酶的水解作用，进而提高水解度。但谭斌等（2005）的试验结果表明，蛋白质在不同变性程度时对水解度影响很大，变性程度过高反而不利于水解。因此需要根据水解时间长短在保证水解液不变质的条件下适当预处理。 3 酶解 3.1 蛋白酶的选择根据蛋白酶的来源，常选用的蛋白酶分为：动物性蛋白酶（胰蛋白酶，胃 蛋白酶等）、植物蛋白酶（木瓜蛋白酶，菠萝蛋白酶等）和微生物蛋白酶（枯草杆菌蛋白酶，黑曲酶等）；根据蛋白酶作用的最适pH 值来分，可分为酸性蛋白酶、中性蛋白酶和碱性蛋白酶。由于蛋白质水解液中一些苦肽氨基端的暴露而使得水解液带有苦味，因此，一些风味酶也常常被用于产品风味的调节加工中。一般根据蛋白原料的组成、酶的特性，以及实验目的选择合适的蛋白酶。由于不同蛋白酶的特异性不同，而蛋白原料的蛋白较复杂，使用单一的酶难以提高最终的水解度，对蛋白质进行有效的酶解（朱志伟等，2004）。试验中多以水解度，小肽得率以及产品风味为指标对蛋白酶进行比较筛选或选用复合酶进行水解。 3.2 水解方式研究报道，把酶解与膜分离技术结合在一起，形成连续式水解工艺，对酶的利用率高，产品质量稳定（Chang-Kee 等，2000；Javier等，2000；Juan等，2000）。邹超等（2002）设计了酶解反应+双膜分离的方法酶解酪蛋白，不仅提高了水的利用率，而且有利于产品的分离纯化。朱少娟等（2005）报道，利用超声波预处理酶解底物，水解效率能得到显著提高。 3.3 最适水解条件的研究水解过程中的反应pH、反应时间、反应温度和酶- 底物浓度比是酶 解工艺的重要参数。酶对pH 值的变化非常敏感，一般将初始pH 值固定在所选酶的最适pH 值范围内。随反应的进行，反应液p H 值会有变化，一般采用加碱或配制缓冲液的方法以恒定溶液pH 值。林伟峰等（2005）认为，加碱恒定反应体系pH值将会导致水解产物中盐分含量增加，而不利于降低产品成本和提高产品纯度，并且保持pH 值恒定只对水解度和总氮得率有利，而对肽得率影响不大。在所选酶的最适温度范围内，水解度会随着温度升高而增大，然而当温度超过一定范围时，水解度则会迅速下降。这主要是因为温度过高导致酶迅速失活（龙彪等，2005）。酶加量和底物浓度对水解作用的影响是相对的。有报道认为，加酶量低时，主要为酶控制反应；当加酶量高时，主要为底物控制反应（张琦，2003）。在蛋白酶最适反应条件下，水解度随着水解时间的推移而增大。有报道，蛋白质的酶解程度会影响其水解产物的功能特性Qualia等，1984；Mcnairney 等，1987）。McNairney( 1977)发现过度酶解会损害蛋白质的功能性。这是由水解产生的肽单位的分子大小决定的。随着水解时间的延长，产物逐渐增加，酶的活力会受到抑制，水解速度降低。龙彪等（2005）研究表明，为得到较多的肽含量，水解时间不能过长也不能过短，一般在3～5h内。通过单因素试验确定反应pH、反应时间、反应温度和酶-底物浓度比等4种因素

大豆分离蛋白酶法改性研究进展

万方数据

万方数据

万方数据

大豆分离蛋白酶法改性研究进展 作者：肖怀秋， 李玉珍， 兰立新， 李继睿， XIAO Huai-qiu， LI Yu-zhen， LAN Li-xin，LI Ji-rui 作者单位：湖南化工职业技术学院应用化学系,株洲市,412004 刊名： 酿酒 英文刊名：LIQUOR MAKING 年，卷(期)：2007,34(5) 参考文献(21条) 1.刘艳秋;陈光Protamex复合蛋白酶水解大豆分离蛋白的研究[期刊论文]-食品科学 2005(06) 2.Wendee ChiangD Function properties of soy protein hydrolysate producedfrom a continuous membrane reactor system 1999 3.Jin-Yeol Lee;Hyun Duck Lee;Cherl-Ho Lee Characterization of hy drolysatesproduced by mild-acid treatment and enzymatic hydrolysis of defatted soybean flour 2001(34) 4.Nakai s Sturcture-relationship of food proteins with and emphasis on the importance of protein hydrophobicity 1983(04) 5.S Petruccelli;M C Anon Relationship between the Method of Obtention and the Structural and FunctionalProperties of Soy Protein Isolates.l.Structural and Hydration properties 1994 6.赵国华;明建;陈宗道酶解大豆分离蛋白乳化特性的研究[期刊论文]-中国粮油学报 2002(02) 7.陶红;梁歧双酶水解降低大豆寡肤苦味研究[期刊论文]-食品工业科技 2003(zk) 8.张梅;周瑞宝;马智刚醇法大豆浓缩蛋白酶法改性研究[期刊论文]-中国油脂 2003(12) 9.M QI Solubility and Emulsifying Properties of Soy Protein Isolates Modified by Parcreatin[外文期刊] 1997(06) 10.Sook Y Kim Functional Properties of Proteolytic Emzyme Modified Soy Protein Isolate 1990 11.WU Wu Hydrophobicity,Solubility,and Emulsifying Properties of Soy Protein Peptides Prepared by Papain Modification and Ultrafiltration[外文期刊] 1998(07) 12.郭永;张春红大豆蛋白改性的研究现状及发展趋势[期刊论文]-粮油加工与食品机械 2003(07) 13.Zheng Guo;Anders F Vikbjerg;Xuebing Xu Enzymatic modification of phospholipids for functional applications and human nutrition[外文期刊] 2005(23) 14.刘欣;徐红华;李铁晶微生物蛋白酶改性大豆分离蛋白的研究进展[期刊论文]-大豆通报 2005(04) 15.潘进权;刘耘大豆多肽研究概况[期刊论文]-粮油加工与食品机械 2004(07) 16.Garcia M C Composition and Chracterization of soybean and related products 1997(04) 17.Katsumi Studies on the coagulation of soymilk-protein by commercial proteinase 1987 18.卢阳;王凤翼;孔繁东大豆蛋白酶水解物抗氧化性的研究[期刊论文]-大连轻工业学院学报 2001(04) 19.刘大川;杨国燕酶改性大豆分离蛋白的制备及产品功能性的研究[期刊论文]-中国油脂 2004(12) 20.高安全;姬学亮;张二琴大豆蛋白酶法改性研究[期刊论文]-开封大学学报 2004(03) 21.刘景顺;黄纪念;谭本刚大豆分离蛋白的改性研究 1997(04) 本文链接：https://www.360docs.net/doc/d76441379.html,/Periodical_nj200705020.aspx