啤酒花多酚类化合物提取工艺
啤酒花多酚类化合物提取方法的研究
摘要：本实验以确定酒花中多酚类化合物的最佳提取工艺为目的。通过单因素实验分析了浸提剂---丙酮的浓度、料液比、浸提时间、浸提温度四个因素对酒花多酚提取量的影响，通过正交实验确定出酒花中多酚类化合物的最佳提取条件为：浸提剂---丙酮浓度为70 %，料液比1︰25（g/mL），回流温度45℃，回流时间1h，在此提取条件下提取量达到最大为47.36mg/g。关键词：啤酒花多酚
The research of a method in distilling the polyphenol of humulus lupulus
Abstract:The aim is to ascertain the optimum distilling condition of polyphenol from humulus lupulus. Single factor trail showed that impregnant’s type、distilling temperature、time、impregnant’s concentration have infection to humulus lupulus，distilling ratio． Hand over experiment ascertain the optimum condition of the polyphenol of humulus lupulus：impregnant’s concentration 70%、the ratio of materiel and impregnant 1：25(g/mL) 、temperature 45℃、time 1h and distilling quantity achieve crest：47.36mg/mL．
Key words：humulus lupulus；polyphenol
酚类化合物广泛地存在于植物中，具有多种保健功能，其中最重要的是它的抗氧化功能。它不仅对活性氧自由基具有很强的捕捉能力，而且可以对由氧自由基诱发的生物大分子损伤起到保护作用。具有明显的抗突变、抗诱变、抗肿瘤、抗病毒、抗微生物、抗衰老等功能[1-3]。
啤酒是一种受消费者欢迎的低醇饮料，它含有多种对人体有益的化学物质，酚类化合物是其中最重要的一类[4-5]。啤酒中的酚类化合物部分来源于啤酒花[6]。酚类化合物不仅与啤酒的风味和口感有关，而且与啤酒的化学特性及货假期有很大的关系[6-7]。所以，以往人们对酒花的研究主要集中在它对啤酒质量及风味的影响上[8-9]，对其提取条件的研究报道甚少。本文先通过单因素实验确定出最佳的提取溶剂、温度、料液比、提取液浓度、时间，再以提取剂、浓度、时间、料液比、温度设计四因素三水平正交试验确定出酒花多酚的最佳提取工艺。以开发其在医药、食品、保健品、饮料、化妆品等行业中的应用。
1.实验部分
1.1材料与仪器
材料：
啤酒花由天龙啤酒厂提供
主要试剂：
丙酮酒石酸钾钠硫酸亚铁 Na2HPO4 NaH2PO4单宁酸等均为分析纯
主要试验仪器：
sp-2102uvpc紫外分光光度计（上海光谱仪器有限公司），AL204型电子天平（Mettler Toledo Group ）回流加热装置恒温水浴锅
1.2实验方法
1.2.1实验样品处理方法
酒花经粉碎后，取出部分测定水分，其余小量分装于离心管中，密封后置冰箱保存备用。
1.2.2酒花多酚总量的测定
标准曲线的绘制
酒花多酚测定用酒石酸亚铁法[10]，以单宁酸为标样，测定波长为540nm，具体方法如下：标准曲线绘制：精确配制0.1mg/mL的单宁酸标准溶液，分别精确吸取0，1，2，3，4，5，6mL 的单宁酸标准溶液，置于25mL的容量瓶中，各加水4mL，酒石酸亚铁试剂5mL，用PH7.5的磷酸缓冲液定容至25mL，混匀后，在540nm的波长处测其光密度，然后以单宁酸标准液的浓度为横坐标，以光密度为纵坐标作标准曲线如图1。
酒花中总多酚的测定：称取样品1g，先用石油醚加热回流1h，以70%的丙酮20mL为溶剂，45℃浸提1h后过滤，以62%的丙酮定容为50mL，取样液1mL测定，从上述标准曲线计算相应的多酚含量。
1.2.3酒花多酚的提取工艺
1.2.3.1酒花多酚提取的单因素实验
1.2.3.1.1浸提剂的选择
有机溶剂浸提：准确称取1g啤酒花样品2份，分别用无水丙酮、无水乙醇20mL在45℃加热回流1h后过滤，溶液定容至50mL。用1.2.2中的方法测定多酚的含量。如表2所示。
水浸提：准确称取1g样品置于100mL的三角瓶中，用70mL的蒸馏水置沸水浴中浸提1h 后趁热过滤，滤液定容至100mL，测定多酚的含量。
1.2.3.1.2最佳浸提剂浓度的选择
准确称取1g酒花样品5份，分别用10%、30%、50%、70%、90%的丙酮液20mL45℃下加热回流1h后过滤，滤液定容至50mL，测定多酚含量。如图2所示。
1.2.3.1.3浸提料液比的确定
准确称取1g酒花样品3份，分别用70%的丙酮液10mL、20mL、30mL在45℃水浴中加热回流1h后过滤，滤液定容至50mL，测定多酚含量。如表3所示。
1.2.3.1.4浸提温度的确定
准确称取1g酒花样品4份，用70%的丙酮液20mL分别在30℃、40℃、50℃、60℃下加热回流1h后过滤，滤液定容至50mL，测定多酚含量。如图3所示。
1.2.3.1.5浸提时间的确定
准确称取1g酒花样品4份于四个锥形瓶，分别用70%的丙酮液20mL，在45℃下分别加热回流1h、2h、3h、4h后过滤，滤液定容至50mL，测定多酚含量。如图4所示。
1.2.3.2酒花多酚提取的正交试验
根据1.2.3.1实验所得结果，按表1所列的因素水平设计L9(34)正交实验。
确定酒花多酚的最佳提取条件。
2.试验结果：
2.1单宁酸标准曲线
2.2多酚提取的单因素实验
2.2.1提取溶剂的选择
表2：提取溶剂对多酚提取率的影响
溶剂水无水丙酮无水乙醇
提取量（mg/g）7.62919.89715.361
表2表明，酒花多酚可以溶于水、无水丙酮和无水乙醇中，提取率关系为无水丙酮＞无水乙醇＞水，从而确定出最佳的提取溶剂为丙酮。
2.2.2提取液浓度的选择
图2显示浸提剂浓度对酒花多酚的提取率有一定的影响，酒花多酚的最佳浸提液----丙酮的最佳浸提浓度为70%。原因是洒花多酚是一个简单多酚、聚醅酸酯类和聚黄烷醇类多酚的混合体，故丙酮和水组成的复合体系最适合酒花多酚的提取。当浓度超过70%时，酒花的溶解度减少：同时一些杂质、色素等成分溶出量增加，这些成分与酒花多酚类化合物竞争同丙酮-水分子结合，从而导致酒花多酚类化合物的提取量下降。
2.2.3料液比的选择
表3：料液比对多酚提取率的影响
料液比（g/mL）1：101：201：301：40
提取量（mg/g）34.5747.1149.8649.92
由表3可以看出，随着料液比的增大，提取量逐渐增大。这是因为增加溶剂容量，有利于酒花多酚由原料向浸提液扩散，增大酒花多酚的浸出率。当溶剂用量继续增大时，原料表面与浸提液之间的浓度差不再是影响酒花浸出率的主要因素，这时酒花浸出率增加趋于平缓。溶剂溶解的蛋白质、碳水化合物、果胶等物质也增多，会影响后续工作的进行。同时从节约提取记得角度考虑，选择1：20为酒花多酚提取的最佳料液比。
2.2.4浸提温度的选择
在料液比为1：20，丙酮浓度为70%，提取时间为1h的条件下，考察温度对酒花多酚类化合物提取的影响，如图3所示。从图3中可以看出，温度在30℃~40℃之间时，随着温度的升高酒花多酚的浸出量逐渐增大，这是因为升高温度有利于酒花多酚溶解度的增大。但温度过高，由于多酚类物质性质不稳定，受热易被破坏，且杂质的溶出量增加，使提取量下降。从而，确定出酒花多酚的最佳浸提温度为40℃。
2.2.5提取时间的选择
在料液比为1：20，丙酮浓度为70%，温度为40℃的条件下，考察时间对酒花多酚浸提率的影响，如图4所示。由图4可以看出，提取时间在1h左右时效果最好。时间过长，原料中的多酚向溶液中扩散的速度与溶液中多酚向原料中扩散的速度达到平衡，同时多酚发生氧化或降解。所以选定最佳的浸提时间为1h。
2.3酒花多酚提取的正交实验
表1：酒花多酚提取工艺的因素---水平
水平
因素
提取液浓度（%）料液比（g/ml）时间（h）温度（℃）
1 2 3
6
5
7
7
1：15 0.5
1：20 1
1：25 1.5
35
40
45
5
表4：酒花多酚提取的正交实验结果
1
2
3
4
5
6
7
8
9
∑K1∑K2∑K3 K1 K2 K3 R 65
65
65
70
70
70
75
75
75
91.894
125.09
106.76
30.63133
41.69667
35.58667
11.06533
35
40
45
35
40
45
35
40
45
100.034
102.17
121.54
33.34467
34.05667
40.51333
7.168667
0.5
1
1.5
1
1.5
0.5
1.5
0.5
1
109.584
112.17
101.99
36.528
37.39
33.99667
3.393333
1：15
1：20
1：25
1：25
1：15
1：20
1：20
1：25
1：15
100.274
95.36
128.11
33.42467
31.78667
42.70333
10.91667
26.0138
25.95
39.93
47.22
35.26
42.61
26.8
40.96
39.00
表4表明，在四个影响因素中，A＞D＞B＞C，即提取剂浓度的影响最大，其次是料液比、温度，最后是时间。同时可由正交实验确定出酒花多酚的最佳提取条件为A2B3C2D3：即浸提液----丙酮的浓度为70%、温度为45℃、时间为1h、料液比为1：25。此条件下啤酒花多酚的提取量达到最大为47.36mg/g。
3.实验结论
1）酒花多酚的提取量随提取溶剂的不同有较大的差别。丙酮和水组成的复合体系最适合酒花多酚的提取。
2) 浸提剂、浸提剂的浓度、浸提时间、料液比、温度对啤酒花多酚的提取率均有一定的影响，其中影响最大的是浸提剂的浓度。
3）啤酒花多酚提取的最优条件：浸提液是浓度为70%的丙酮，温度为45℃，料液比为1：25，提取时间为1h左右，在此条件下多酚的最大提取量达到最大为47.36mg/g。
参考文献：
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茶多酚及提取工艺
茶多酚 学名:Camellia sinensis 简称:GTP 别名:茶鞣质、茶单宁 英文名：tea Polyphenol，简称TP 定义:是茶叶中儿茶素类、丙酮类、酚酸类和花色素类化合物的总称。 成分:可分为黄烷醇类、羟基-[4]-黄烷醇类、花色苷类、黄酮类、黄酮醇类和酚酸类等。其中以儿茶素最为重要，约占多酚类总量的60%-80%；儿茶素类主要由EGC、DLC、EC、EGCG、GCG、ECG等几种单体组成。茶多酚在茶叶中的含量一般在15％－－20％。在茶多酚中各组成份中以黄烷醇类为主，黄烷醇类又以儿茶素类物质为主。儿茶素类物质的含量约占茶多酚总量的70％左右。茶多酚的理化性质 物理性状： 1 外观：棕黄、淡黄或淡黄绿色粉末。 2 性状：易溶于水及乙醇，味苦涩。 稳定性：在PH4-8 稳定。遇强碱、强酸、光照、高热及过渡金属易变质。最高耐热温度在1个半小时内，可达250℃左右，在三价铁离子下易分解。 安全性评价：无毒 茶多酚具有很强的抗氧化作用，其抗氧化能力是人工合成抗氧化剂BHT、BHA 的4-6倍，是VE的6-7倍，VC的5-10倍，且用量少：0.01-0.03％即可起作用，而无合成物的潜在毒副作用；儿茶素对食品中的色素和维生素类有保护作用，使食品在较长时间内保持原有色泽与营养水平，能有效防止食品、食用油类的腐败，并能消除异味 【药理作用】 1．具有很强的消除有害自由基的作用。 2．抗衰老作用。 3．抗辐射作用。 4．对癌细胞的抑制作用。 5．抗菌、杀菌作用。 6．对艾滋病病毒的抑制作用。 【主要用途】 实际上茶叶的许多作用都是因为茶叶中的茶多酚在起作用。茶多酚可用于食品保鲜防腐，无毒副作用，食用安全。茶叶能够保存较长的时间而不变质，这是其他的树叶、菜叶、花草所达不到的。茶多酚参入其他有机物（主要是食品）中，能够延长贮存期，防止食品退色，提高纤维素稳定性，有效保护食品各种营养成份。其主要用途如下:
最有效的多糖多酚植物RNA提取方法
华越洋多糖多酚植物RNA提取试剂盒 （Quick RNA isolation Kit) 由于一些植物组织中富含多糖、多酚类物质,细胞破碎后多酚类物质极易被氧化成红褐色物质,然后和核酸不可逆地结合;多糖与RNA共沉淀,对RNA提取造成很大的干扰。另外,RNA 极不稳定,易降解,因此,从富含多糖、多酚植物组织中获得高质量的RNA比较困难。针对多糖、多酚植物组织RNA的提取,华越洋自主研发生产，博取众家之长，根据多年来市场反馈不断进行技术升级和改良得来。具有操作步骤少，实验快捷，RNA产量纯度高，充分满足后续实验要求的需要，适用提取样品广泛等特点。 产量：每100mg样品提取的RNA平均值在20-50ug不等。 纯度：OD值一般在1.9以上。得到的RNA无DNA污染，可直接用于反转录，实时荧光定量PCR（尤其对RNA溶液中DNA非常敏感）等所有后续实验。 1、快速：本试剂盒提取RNA的整个实验操作步骤简化快捷从时间因素考量上最大限度的防止RNA在提取中的降解（一般样品十多分钟就能完一个样RNA的提取，大大缩短了一般试剂盒提取所需要的半小时甚至更长的时间，）。 2、高产量：试剂盒拥有超强细胞裂解液，保证后续RNA提取的得率。（能完全通过化学方法彻底裂解细胞让RNA释放完整，并且有效成分能抑制内源RNA酶的降解作用）。 3、高纯度：进口吸附柱具有的专一吸附特性和强吸附力。三管齐下保证所提取RNA的产量和纯度，前期得到的高质量RNA才能保证后续实验成功，尤其是对荧光定量PCR实验等。
4、无DNA污染可直接用于荧光定量PCR：目前市面上的试剂盒大多提出的RNA会出现DNA污染其结果严重影响后续实验，特别是非常灵敏的荧光定量PCR的实验。一些市面上单独卖的去DNA污染的试剂，效果不稳定，去除DNA污染不彻底。本产品操作简单，去除DNA 彻底，得到的RNA样品可直接用于荧光定量PCR，反转录等各种后续实验。 5、产品整合了在提取过程中去除干扰物的技术，有去除多糖多酚类的植物RNA提取试剂盒，已成功用于葡萄，中草药等多糖含量高的样品，成功用于棉花等多酚含量高的样品。华越洋还开发了有强力去腐殖酸型的土壤DNA，RNA提取试剂盒，技术国内领先。另外华越洋还开发了糖类清除剂，腐植酸去除剂，核酸提取优化剂，样品核酸稳定剂，组织核酸保存液等核酸提取辅助产品。 6、适用材料广泛：本产品尤其适合植物组织，全血和病毒等样品的RNA提取，另有专门针对难提材料的RNA升级版试剂盒（已成功用于棉花、葡萄、番茄等多糖多酚类植物，小麦，水稻，玉米等农作物，果实、干枯树皮、病毒、全血、微量细胞、水溶液、土壤、粪便、岩石样本等），动物组织，微量细胞等45种复杂样品的核酸提取。 另有microRNA．SiRNA提取试剂盒。 姊妹产品推荐：Trizol 用法和质量与进口同类产品一致，华越洋常年特价销售。 反转录试剂盒（RT）：用于第一连CDNA合成，低拷贝基因的检测。本试剂盒所含的反转录酶与市面上的常用的反转录酶相比有更高的效率和延伸能力和稳定性。合成CDNA长度最高可达15KB。 普通PCR扩增用MIX：本混合液优化了体系中Taq酶，DNTP，Mg离子浓度，电泳染料等各种试剂比例，用户不需要摸条件只需要引物和模板就可轻松完成PCR的扩增。 荧光定量PCR试剂（一般实验室常用版本）：属于经典的SybrGreen荧光染料的高效高活性荧光定量检测试剂。用于绝大多数的CDNA模板和不同长度的CDNA片段高质量扩增。
茶多酚提取精制工艺及含量测定-溶剂萃取法
综合实训绿茶茶多酚的提取精制工艺及含量测定 [实验目的] 了解茶多酚性质、用途及植物天然产物常规提取和精制方法；掌握茶多酚提取和精制的原理和方法；讨论方法的影响因素和改进条件； [实验材料和仪器] 磁力搅拌器、离心机、pH计、真空干燥箱、抽滤瓶、真空浓缩蒸发装置、真空泵、天平、水浴锅、紫外-可见分光光度计、烘箱、分液漏斗、移液管氯化钠、碳酸氢钠、柠檬酸、硫酸铝、盐酸、亚硫酸氢钠、乙酸乙酯、维生素C、磷酸氢二钠、磷酸氢二钾、硫酸亚铁、酒石酸钾钠、硫酸 Ⅰ工艺过程及操作方法 [实验原理] 茶多酚(Tea polyphones，简称TP)是从天然植物茶叶中分离提纯的多酚类化合物总称。其抗氧化活性高于一般非酚性或单酚羟基类抗氧化剂。茶多酚由表儿茶素、表没食子儿茶素及它们的没食子酸酯类等组成，在干茶叶中的含量一般在20％一30％左右。研究表明，茶多酚具有许多生理活性和药理作用，如抗氧化、抗衰老、清除自由基、降血脂血糖、降血压、抗辐射、抗癌防癌等。食品中的很多添加剂如柠檬酸、苹果酸等，对其抗氧活性存在协同效应，因而茶多酚作为食品抗化等领域也具有广阔的应用前景； 可采取溶剂法、沉淀法、树脂吸附法、超临界流体萃取法等方法提取绿茶茶多酚。由于茶多酚容易溶于热水，因此首先用热水在一定温度下将茶多酚从茶叶中提取出来，然后对茶叶浸提液盐析除去部分杂质，利用某些金属离子与茶多酚形成络合物在一定pH下溶解度最低的特性，将茶多酚从浸提液中沉淀出来，经过稀酸转溶将茶多酚游离出来后，用对茶多酚有很好选择性的有机溶剂再次萃取分离，最后对茶多酚进行真空浓缩和干燥得到成品。常用的金属离子有Al3+、Ca2+、Fe2+、Mg2+、Zn2+等，其中Al3+、Zn2+是较适宜的弱酸性沉淀剂。 [实验步骤] 1.浸提：称取一定量过20目的茶叶，加入其重量15-25倍70-90℃的热水，搅 拌下恒温浸提20-60min，过滤得到茶叶浸提液。取样分析浸提液中茶多 酚的含量，计算浸提液中茶多酚总量、茶多酚浸提率。 2.盐析：加氯化钠于浸提液中，使其质量分数为2-6%，静置盐析0.5-1.5h后 过滤。 3.沉淀：在上述滤液中加入茶叶重量2-5%的亚硫酸氢钠，然后加入茶叶重 量15-25%的硫酸铝饱和水溶液，加热至70-80℃，用10-20%的碳酸氢钠溶 液在快速搅拌下调节pH至5-6，此时有大量沉淀析出，沉淀自然沉降一段 时间后过滤，最后用等体积70℃的热水洗涤沉淀3次； 4.酸溶：将沉淀在快速搅拌下放入茶叶重量1-3倍的pH=2.5-4.5的盐酸水溶 液中溶解沉淀，控制酸转溶液pH=2.5-4.5，酸溶时间10-50min，少量胶状 沉淀经过离心分离除去。取样分析酸转溶液中茶多酚的含量和总量，计 算茶多酚经过盐析、沉淀和酸溶后的回收率； 5.萃取：加入茶叶重量2-5%的碳酸氢钠至酸转溶液中，然后用其体积0.3-1.5
植物蛋白质提取方法总汇
植物蛋白质提取方法总汇 一、植物组织蛋白质提取方法 1、根据样品重量(1g样品加入3.5ml提取液，可根据材料不同适当加入)，准备提取液放在冰上。 2、把样品放在研钵中用液氮研磨，研磨后加入提取液中在冰上静置(3-4小时)。 3、用离心机离心8000rpm40min4℃或11100rpm20min4℃ 4、提取上清液，样品制备完成。蛋白质提取液：300ml 1、1Mtris-HCl(PH8) 45ml 2、甘油(Glycerol)75ml 3、聚乙烯吡咯烷酮(Polyvinylpolypyrrordone)6g这种方法针对SDS-PAGE，垂直板电泳！ 二、植物组织蛋白质提取方法 氯醋酸—丙酮沉淀法 1、在液氮中研磨叶片 2、加入样品体积3倍的提取液在-20℃的条件下过夜，然后离心(4℃8000rpm以上1小时)弃上清。 3、加入等体积的冰浴丙酮(含0.07%的β-巯基乙醇)，摇匀后离心(4℃8000rpm以上1小时)，然后真空干燥沉淀，备用。 4、上样前加入裂解液，室温放置30分钟，使蛋白充分溶于裂解液中，然后离心(15℃8000rpm 以上1小时或更长时间以没有沉淀为标准)，可临时保存在4℃待用。 5、用Brandford法定量蛋白，然后可分装放入-80℃备用。 药品：提取液：含10%TCA和0.07%的β-巯基乙醇的丙酮。裂解液：2.7g尿素0.2gCHAPS 溶于3ml灭菌的去离子水中(终体积为5ml)，使用前再加入1M的DTT65ul/ml。 这种方法针对双向电泳，杂质少，离子浓度小的特点！当然单向电泳也同样适用，只是电泳的条带会减少！ 三、组织：肠黏膜 目的：WESTERN BLOT检测凋亡相关蛋白的表达 应用TRIPURE提取蛋白质步骤： 含蛋白质上清液中加入异丙醇：(1.5ml每1mlTRIPURE用量) 倒转混匀，置室温10min
植物总多酚常用的含量测定方法有Folin
植物总多酚常用的含量测定方法有Folin- Ciocalteu 法, 酒石酸亚铁法, 普鲁士蓝法和高锰酸钾法等。 1.福林试液的配制： 取钨酸钠10g与钼酸钠2.5g，加水70ml、85％磷酸5ml与盐酸10ml,置200ml 烧瓶中,缓缓加热回流10小时，放冷，再加硫酸锂15g、水5ml与溴滴定液1滴煮沸约15分钟，至溴除尽，放冷至室温，加水使成100ml。滤过,滤液作为贮备液。置棕色瓶中,于冰箱中保存。临用前，取贮备液 2.5ml，加水稀释至10ml，摇匀，即得。 用10mL乙醇溶液溶解0.5000g没食子酸，定容至100mL，分别移取3.0mL 到100mL容量瓶中，用蒸馏水定容。加入福林－薛卡多（Folin-Ciocalteu）试剂显色，在765nm波长下测定吸光度。每个浓度做三个平行试验，取平均值，根据标准曲线。 取样品溶液1mL，按照上述的制作方法，测定其吸光度，每个样品做三个平行试验，取平均值，计算样品中的多酚含量。 反应原理为酚类化合物在碱性条件下可以将钨钼酸还原，生成蓝色的化合物，颜色的深浅与酚类化合物含量呈正相关，在波长760 nm左右有最大吸收。 2. 酒石酸亚铁比色法。 其测定原理是茶多酚类物质能与亚铁离子形成紫蓝色络合物。用分光光度法测定其含量。 茶多酚标准溶液的配制称取提取纯品0.2500g,加水溶解定容至250mL,混匀,即为每毫升含1mg提取纯品的标准溶液(mg/mL) 。 茶多酚的含量。茶多酚标准曲线的绘制。分别吸取茶多酚标准溶液1. 0mL、2. 0mL、3. 0mL、4. 0mL 于4 个50mL 容量瓶中,各加水至10mL,再加酒石酸亚铁溶液10mL,加入pH为7. 5的磷酸缓冲液至刻度,混匀后用1㎝比色皿,以空白试剂作参比,于波长540nm处测定吸光度(A) ,绘制出标准曲线。
茶多酚的提取
茶多酚的提取、精制工艺及产品中茶多酚的定量分析 【实验目的】 1、了解茶多酚的性质及用途； 2、了解植物天然产物常规提取和精制的方法； 3、掌握茶多酚提取与精制的原理和方法； 4、掌握茶多酚的分析检测方法。 【实验材料和仪器】 1、仪器 电动搅拌器离心机酸度计真空干燥箱抽滤瓶真空蒸发浓缩装置水环式真空泵电子天平水浴锅紫外分光光度计电热恒温干燥箱 分液漏斗微量吸管器 2、试剂 氯化钠碳酸氢钠柠檬酸硫酸铝盐酸亚硫酸氢钠乙酸乙酯 维生素C 磷酸氢二钠磷酸二氢钾硫酸亚铁酒石酸钾钠硫酸 没食子酸丙酯 Ⅰ、工艺过程及操作方法 【实验原理】 茶多酚是茶叶中30 多种多酚类物质的总称，是一类富含于茶叶中、主要由 表儿茶素、表没食子儿茶素及没食子酸酯类等组成的多羟基化合物，含量约占茶叶干物质总量的20％～30％。茶多酚分子中带有多个活性羟基(-OH)，可终止人体中自由基链式反应，清除超氧离子，类似SOD 之功效。茶多酚对超氧阴离子与过氧化氢自由基的清除率达98％以上，呈显著的量效关系，其效果优于维生素E和维生素C。茶多酚还有抑菌、杀菌作用，能有效降低大肠对胆固醇的吸收，防治动脉粥样硬化，是艾滋病毒(人类免疫缺陷病毒，HIV)逆转录酶的强抑制物，有增强机体免疫能力，并具抗肿瘤、抗辐射、抗氧化、防衰老机理。茶多酚安全、无毒，是食品、饮料、药品及化妆品的天然添加成分。目前茶多酚已在医药、饮料、食品、保健等行业中广泛应用。 由于茶多酚易溶于热水，因此本实验首先用热水在一定温度下将茶多酚从茶叶中提取出来；然后对茶叶浸提液盐析处理除去部分杂质；再利用某些金属离子与茶多酚形成的络合物在一定pH值下溶解度最低的特性，将茶多酚从浸提液中沉淀出来并高效地与咖啡碱等杂质分离；经过稀酸转溶将茶多酚游离出来后，用对茶多酚具有很好选择性的有机溶剂再次对其进行萃取分离；最后将茶多酚萃取液通过真空浓缩、真空干燥得到茶多酚精品。 【实验步骤】 1、浸提：称取一定重量过20目的茶叶末，加入其重量20倍的70℃～95℃的热水，搅拌下恒温浸提60min，过滤得茶叶浸提液。取样分析浸提液中茶多酚的含量，计算浸提液中茶多酚的总量、茶多酚的浸提率。 2、盐析：加氯化钠于茶叶浸提液中，使其质量分数为6％，静置盐析1.5h后过滤。
天然植物提取浓缩步骤分享
天然植物提取浓缩步骤分享
天然植物提取浓缩步骤如何?天然植物提取浓缩具体的步骤可以参考以下内容： 1、第一提取阶段：将原料投入第一搅拌提取罐中，得到的物料通过第一浓浆泵打入第一卧式螺旋离心机中进行固液分离，得到的固体进入第二搅拌提取罐，得到的物料通过第二浓浆泵打入第二卧式螺旋离心机中固液分离。得到的液体进入第二提取液暂存罐中，加入下一批物料到第一搅拌提取罐中。 2、第二提取阶段：第二提取液暂存罐中的液体进入第一搅拌提取罐中作为溶剂，重复步骤1)过程。可进行第N次提取。 3、浓缩阶段：将第一提取液暂存罐中的液体转入浓缩罐同时回收出溶剂到第二接收罐中，用于下次提取再利用。 4、尾气吸收阶段：降膜吸收塔中装入水，进行循环，吸收第一冷凝器、第二冷凝器、第一提取液暂存罐、第二提取液暂存罐的甲醇尾气，蒸馏出甲醇用于下次提取再利用。 5、废渣处理阶段：将步骤1中得到的固体运输进耙式真空干燥机中对固体进行加热真空干燥，同时回收溶剂到第一接收罐中，用于提取阶段再利用。 所述步骤1中原料进入第一搅拌提取罐中，以原料量量计，加入2-10倍的甲醇，开启搅拌并加热升温至40-50℃搅拌并提取3h。步骤
3中液体进入浓缩罐中在60℃以下进行减压浓缩。所述步骤1中固体进入第二搅拌提取罐中，以原料重量计，加2-10倍的甲醇至第二搅拌提取罐中，开启搅拌并加热升温至40-60℃搅拌并提取3h。 所述固体进入耙式真空干燥机，加热温度至50-100℃干燥。所述降膜吸收塔中，按罐的体积计，加入20-60%体积的水，进行循环吸收甲醇尾气。 德兰梅勒利用膜分离技术为生物制药、食品饮料、发酵行业、农产品深加工、植物提取、石油石化、环保水处理、空气除尘、化工等行业提供分离、纯化、浓缩的综合解决方案，满足不同客户的高度差异化需求。帮助客户进行生产工艺的上下游技术整合与创新，帮助企业节省投资、降低运行费用、减少单位消耗、提供产品质量、清洁生产环境，助力企业产业升级。
多酚提取方法
1.1溶剂提取法 多酚就是多羟基化合物,它的结构特点决定多酚易溶或可溶于水、醇类、醚类、酮类、酯类等,所以,溶剂提取法主要有水溶剂提取与有机溶剂提取两种。水溶剂提取植物多酚类物质早90年代就有报道,该法由于工艺简便、成本低、纯度高而被广泛使用,但此法提取率低。有机溶剂提取就是利用多酚在不同溶剂中的溶解度不同进行回流提取,常用的溶剂有甲醇、乙醇、丙酮、乙酸乙酯等,此法可提高提取率、缩短反应时间。姚永志[2]等人在比较水溶剂及乙醇溶剂提取花生红衣多酚物质的研究中报道,当以水作溶剂提取花生红衣多酚物质时,最佳工艺:水浴温度40℃、液料比75、提取时间lh、提取率为6.41％,而乙醇作溶剂时最佳工艺:乙醇浓度55％、水浴温度60℃、提取时间0.5 h、料液比1:37.5,提取率达到7.858％。但有机溶剂成本高、回收困难,有毒易燃,不利于安全生产。 1.2微波辅助提取 微波辅助提取技术就是利用微波能来提高提取率的一种技术。在微波提取过程中,微波辐射能 够导致植物细胞内的极性物质吸收微波能,产生大量热量,使细胞内温度迅速上升,液态水汽化,从而使产生的压力在细胞膜与细胞壁上形成微小孔洞,使胞外溶剂可以进入细胞内溶解并释放出胞内物质,因此可以有效的提高产率,降低反应时间,减少溶剂的使用量。由于目前微波的设备比较普遍,因此,微波提取植物多酚的方法为更多的人所接受与使用。宋薇薇等[3]人用微波辅助法提取石榴皮多酚类化合物,确定了石榴皮多酚提取的最优工艺条件:40％(体积分数)乙醇作溶剂,料液比(g:m1)l:35,微波功率为242 W,提取时间60 s,提取三次,以该优化条件提取时,多酚粗提物得率26.52％,这个结果较贾冬英[43以20％(体积分数)乙醇作溶剂,料液比(g:mL)1:20,温度50℃,提取时间1 h,以该优化条件提取所得石榴多酚得率22.86％高,与醇提法相比,微波辅助提取能强化浸取过程,体系受热均匀,提取物中多酚含量高,提取时间较短等优点。 1.3超声波辅助提取 超声波辅助提取法就是利用超声波产生的强烈振动、高加速度、强烈的空化效应、搅拌作用等,可加速有效成分进入溶剂,从而提高提取率,缩短提取时间,并可避免高温对提出成分的影响。超声波提取的操作具有简便快捷、提取温度低、时间短、提取率高、提取物结构不易被破坏的特点.该法的缺点就是获得产品纯度不高。陶令霞c5]等人对苹果渣中多酚的超声辅助提取工艺条件进行了优化研究,确定最佳工艺条件为:70％乙醇,提取时间50 min,提取功率200 W,料液比1:15,提取温度35℃,提取2次,苹果多酚得率为4.29g／kg。同时,超声波辅助提取方法在荷叶多酚大麦多酚、以及诃子多酚中也有相应的报道。 1.4生物酶解提取 生物酶解提取技术就是根据酶反应具有高度专一性的特点,选择相应的酶,水解或降解细胞壁组成成分纤维素、半纤维素与果胶,从而破坏细胞壁结构,使细胞内的成分溶解、混悬或交溶于溶剂中,达到提取目的。酶法提取最大的优势就是反应条件温与。由于酶法提取就是在非有机溶剂下进行,所得产物纯度、稳定性、活性都较高,无污染,解决了有机溶剂提取法有机溶剂回收困难、用量大等缺点。此外,酶法提取在缩短提取时闻、降低能耗、降低提取成本等方面也具有一定优势[6]。刘军海等人[7]以低档绿茶为原料,采用复合酶法在较低温度下提取茶多酚。以单因素试验考察了酶用量、提取温度、提取时间及pH对茶多酚提取率的影响。通过正交试验优化并确定最佳提取工艺条件:酶用量为0.20％、提取温度为60℃、提取时间80 min、pH为4.6,在此工艺下茶多酚提取率为13.6％,其中儿茶素占茶叶干重的含量比沸水提取法高出 2.31％。1.5离子沉淀法离子沉淀法就是利用多酚能与金属离子络合生成沉淀,使其在浸提液中与其它物质分离而出,从而得到纯度较高多酚。目前常用金属离子有A13+、Zn2+、Fe2+、M92+、Ba2+、Ca2+等,其中A13+、Zn2+较为理想。离子沉淀法优点就是不使
茶多酚的提取实验设计[1]
1茶多酚的提取实验设计（单因素设计） 一、实验原理 1.超声波提取技术 超声波是指频率为20千赫～50兆赫左右的电磁波，它是一种机械波，需要能量载体—介质—来进行传播。超声波在传递过程中存在着的正负压强交变周期，在正相位时，对介质分子产生挤压，增加介质原来的密度；负相位时，介质分子稀疏、离散，介质密度减小。也就是说，超声波并不能使样品内的分子产生极化，而是在溶剂和样品之间产生声波空化作用，导致溶液内气泡的形成、增长和爆破压缩，从而使固体样品分散，增大样品与萃取溶剂之间的接触面积，提高目标物从固相转移到液相的传质速率。在工业应用方面，利用超声波进行清洗、干燥、杀菌、雾化及无损检测等，是一种非常成熟且有广泛应用的技术。 2.超声波萃取的原理 超声波萃取中药材的优越性，是基于超声波的特殊物理性质。主要是主要通过压电换能器产生的快速机械振动波来减少目标萃取物与样品基体之间的作用力从而实现固--液萃取分离。（1）加速介质质点运动。（2）空化作用。超声波在液体介质中传播产生特殊的“空化效应”，“空化效应”不断产生无数内部压力达到上千个大气压的微气穴并不断“爆破”产生微观上的强大冲击波作用在中药材上，使其中药材成分物质被“轰击”逸出，并使得药材基体被不断剥蚀，其中不属于植物结构的药效成分不断被分离出来。加速植物有效成份的浸出提取。（3）超声波的振动匀化（Sonication）使样品介质内各点受到的作用一致，使整个样品萃取更均匀。 3..超声波萃取的特点 适用于中药材有效成份的萃取，是中药制药彻底改变传统的水煮醇沉萃取方法的新方法、新工艺。与水煮、醇沉工艺相比，超声波萃取具有如下突出特点： （1）无需高温。在40℃－50℃水温F超声波强化萃取，无水煮高温，不破坏中药材中某些具有热不稳定，易水解或氧化特性的药效成份。（2）常压萃取，安全性好，操作简单易行，维护保养方便。（3）萃取效率高。超声波强化萃取20～40分钟即可获最佳提取率（4）具有广谱性。适用性广，绝大多数的中药材各类成份均可超声萃取。（5）超声波萃取对溶剂和目标萃取物的性质（如极性）关系不大。（6）减少能耗。由于超声萃取无需加热或加热温度低，萃取时间短，因此大大降低能耗。（7）药材原料处理量大，成倍或数倍提高，且杂质少，有效成分易于分离、净化。（8）萃取工艺成本低，综合经济效益显著。 微波萃取机理
绿茶茶多酚的提取精制工艺优化
绿茶茶多酚的提取精制工艺优化 一、实验目的 了解茶多酚性质、用途及植物天然产物常规提取和精制方法“掌握茶多酚提取和精制的原理和方法：讨论方法的影响因素和改进条件。 1、茶多酚是茶叶中儿茶素类、丙酮类、酚酸类和花色素类化合物的总称。白色晶体，易溶 于水及有机溶液，味苦涩。在pH4-8 稳定。遇强碱、强酸、光照、高热及过渡金属易变质。最高耐热温度在1个半小时内，可达250℃左右，在三价铁离子下易分解。 学名：Camellia sinensis茶叶简称： GTP 别名:茶鞣质、茶单宁 CAS号: 84650-60-2 分子式: C17H19N3O 分子量: 281.36 EINECS号: 200-053-1 2、原理 茶多酚是茶叶中多酚类物质的总称，含量约占茶叶干重的百分之二十至三十，茶多酚可以消除超氧阴离子和过氧化氢自由基，同时具有抑菌，杀菌，有效降低大肠对胆固醇的吸收，增强机体免疫能力等功能。目前，茶多酚被广泛的用作食品，饮料、药品和化妆品的天然添加成分。 （离子沉淀法）茶多酚易溶于热水，与一些金属离子形成络合物，并在一定PH值下溶解度很低，形成的金属离子络合物溶于酸溶液后，茶多酚再次转变成游离状态，再对茶多酚有更好选择性的溶剂进行萃取、浓缩和干燥，即可得茶多酚的纯品。 二、实验内容 1、茶多酚地提取精制 茶叶预处理：将干燥的茶叶去杂研碎备用 超声波辅助浸提：准确称取2.0000g茶叶末在30ml容量瓶中，按料液比1:15加入65% 的乙醇，放入超声波清洗机中设定浸提温度50℃，浸泡30min，浸提2次;将浸提液过滤并入100ml容量瓶中，蒸馏水定容。 2、茶多酚提取率测定：取0.4ml提取液加入25ml容量瓶中，加入4ml蒸馏水和5ml酒石酸 亚铁溶液，再用磷酸缓冲液定容，静置10min。在540nm处测吸光度A,按公式计算茶多酚的含量。 3、茶多酚的沉淀：按沉淀剂：茶叶=2:30加入沉淀剂，用1mol/L的NaHCO3调节ph=6.0， 在50℃下进行沉淀，沉淀后迅速离心分离。 沉淀转熔：在得到的沉淀中加入25%HCl溶液转溶，适当震荡至沉淀消失。
植物内生菌DNA提取方法
在提取植物内生菌之前，植物需要表面灭菌，其具体操作为将植物浸泡在添加了0.02%的Tween-20的质量分数为1%的次氯酸钠溶液中1 min，再将植物浸泡在70%酒精中1 min，然后用硫代硫酸盐/Ringer’s（林格氏液）清洗3次，每.次1 min。根和茎（土表面以上1 cm处）都要灭菌处理，将根茎切成片状。为了更好地分析细菌的位置，灭菌后茎表皮撕下，茎内部按照之前的方法灭菌。表皮组织和根最后一次淋洗液中的细胞都用来提取DNA。 植物不同组织的内生菌群落DNA提取通过直接研磨植物组织，步骤为溶解、提取和纯化步骤（方案一），或者在DNA提取前从片状植物组织中淋洗出细胞（方案二）。 东南景天表面灭菌方法：整株植物用自来水冲洗30 min，用蒸馏水洗3次，每次3 min。用吸水纸吸去植物表面水分，用无菌剪刀在根基部将根系剪下，与植物地上部分开。将根系用70 %酒精浸泡2 min，无菌水洗3次，3 % NaClO浸泡2次，每次1 min，然后用无菌水冲洗3次，每次2 min，最后一次清洗液涂LB平板。 1. 将2 g左右消毒后植物组织于无菌研钵中，加5 mL磷酸钠缓冲液（19.9 g Na2HPO4·H2O，1.27 g NaH2PO4·2H2O，H2O 定容到1 L）研磨至匀浆。 2. 将植物匀浆转移至50 mL无菌离心管中，摇床200 rpm振荡1-2 h，使细菌细胞尽可能的从植物组织中释放出来。 3. 取4 mL悬液于新的无菌离心管中，12 000×g离心10 min收集菌体细胞。 4. 弃上清，将收集的菌体细胞重新溶于550μL 1×TE buffer（Tris-EDTA；pH8）中加入10 mg mL-1溶菌酶10μL，37℃水浴1-4h。 5. 加入50μL 20% SDS和8μL 20 mg mL-1蛋白酶K，混匀，65℃水浴3h，期间轻轻上下颠倒混匀数次。 6. 加入200μL 5M NaCl，涡旋振荡15 s，12000×g离心10 min。 7．取上清液，并向上清液中加入等体积的氯仿-异戊醇（24:1），彻底混匀，12000×g离心10 min。 8. 上清液转移至新的无菌离心管中，重复步骤7一次。 9. 上清液转移至新的无菌离心管中，加入0.6倍体积（0.6 vol）的冰冷的异丙醇，4℃放置1 h。 10. 4℃，12000×g离心10 min，弃上清。 11. 沉淀用70%冰乙醇清洗，离心，弃上清。 12. DNA沉淀室温风干后，用无菌超纯水溶解。 13. DNA纯化采用TIANquick Midi Purification Kit。
植物多酚提取方法
植物多酚提取方法 1.1溶剂萃取法 原理：溶剂萃取是根据被提取成分在不同溶剂中的溶解性差异，选用适当的溶剂将有效成分从提取原料中分离出来的过程。 注意：除溶剂极性大小外，溶剂萃取法还易受到溶剂pH值、提取温度、提取次数、溶剂体积和样品颗粒大小等多种因素的影响。 1.2超声辅助提取 原理：利用超声波的机械破碎和空化作用，物料周围空穴形成、增大和闭合回产生极大的冲击波和剪切力，使细胞破碎，增加有效成分的溶出速度和数量，加速多酚等浸提物从原料向溶剂的扩散速度，从而提高了有效成分的浸提率，缩短浸提时问，浸提液采用与传统工艺相同处理精制过程取得产品。 优势：浸提所需的时间短，因此避免了长时间处于高温下茶多酚的氧化，收率和产品质量都较传统方法高。 1.3微波辅助提取 原理：利用在微波场中分子发生高频的运动，扩散速率增大，因此多酚等浸提物在微波的辐射作用下可快速浸取出来。 优点：大大的减少了多酚长时间在高温下的氧化，提高品质与收率。微波技术应用于多酚的提取具有短时、高效、节能等优点，微波结合水浴提取，不仅茶多酚浸出率高，优于乙醇、水提取，而且降低了成本和减少了污染。 1.4超临界流体萃取 原理：在超临界状态下，流体对被萃取物的萃取能力和选择性较之常温常压条件下大大的提高。一般情况下，超临界流体萃取技术采用CO为超临界流体溶剂。然而单一组分的超临界溶剂存在一定的局限性，因此可加入一定量的夹带剂来提高萃取效果。常用的夹带剂有水、丙酮、乙醇、甲醇等。
优点：超临界流体萃取低黏度、高扩散性，具有更高的传质效率；可以实现定量萃取和完全萃取；可以通过调节压力与温度实现对流体溶解能力大小的调控；超临界流体萃取在接近室温下操作，特别适合热敏性天然产物的提取分离甚至于发现新物质。 1.5离子沉淀提取 原理：利用茶多酚能与某些金属离子络合成结晶性沉淀物的特点，使其从浸提液中分离出来，实现分离。目前，已有 Ca2+、Mg2+、Ba2+、Fe2+、Zn2+、Al3+等多种离子用于沉淀提取茶多酚的工艺报道。 优点：原料经热水浸提后，加入沉淀剂即得多酚与金属离子的结晶性沉淀物，不必浓缩浸提液，同时由于这些沉淀的选择性较高，得到茶多酚的纯度相对较好。缺点：在其后的稀酸转溶过程中茶多酚损失较大且沉淀剂有的是有一定毒性的金属离子，有的偏碱性易造成多酚的氧化，因此在产品的纯度、收率、成本及安全性上仍不是完全令人满意。 1.3吸附分离提取 原理：将原料加热水浸提后合并提取液。提取液通过高分子吸附剂进行吸附，然后用95%乙醇洗脱，使吸附剂上吸附的GTP脱附于乙醇中，经减压蒸馏，浓缩液经真空干燥或喷雾干燥得到多酚。 特点：工艺技术简单、能耗低，但需要对GTP选择性强的高吸附量的吸附剂。 植物多酚分离方法 1.1制备HPLC 原理：一是将儿茶素粗品用亲脂性凝胶或吸附树脂多次层析纯化；另一种是制得粗品后直接用制备HPLC法分离纯化（用丙酮和水洗脱）。 特点：方法一操作过程复杂，周期长，条件不易控制；方法二难以得到大量的多种高纯儿茶素，而H柱子总负载量巨大，制备效果不高，色谱柱容易污染，寿命短。把两种方法结合起来，将粗提是先经柱层析分离，再用制备HPLC纯化精制，
(推荐)多酚提取方法
1．1溶剂提取法 多酚是多羟基化合物，它的结构特点决定多酚易溶或可溶于水、醇类、醚类、酮类、酯类等，所以，溶剂提取法主要有水溶剂提取和有机溶剂提取两种。水溶剂提取植物多酚类物质早90年代就有报道，该法由于工艺简便、成本低、纯度高而被广泛使用，但此法提取率低。有机溶剂提取是利用多酚在不同溶剂中的溶解度不同进行回流提取，常用的溶剂有甲醇、乙醇、丙酮、乙酸乙酯等，此法可提高提取率、缩短反应时间。姚永志[2]等人在比较水溶剂及乙醇溶剂提取花生红衣多酚物质的研究中报道，当以水作溶剂提取花生红衣多酚物质时，最佳工艺：水浴温度40℃、液料比75、提取时间lh、提取率为6．41％，而乙醇作溶剂时最佳工艺：乙醇浓度55％、水浴温度60℃、提取时间0．5 h、料液比1：37．5，提取率达到7．858％。但有机溶剂成本高、回收困难，有毒易燃，不利于安全生产。 1．2微波辅助提取 微波辅助提取技术是利用微波能来提高提取率的一种技术。在微波提取过程中，微波辐射能够导致植物细胞内的极性物质吸收微波能，产生大量热量，使细胞内温度迅速上升，液态水汽化，从而使产生的压力在细胞膜和细胞壁上形成微小孔洞，使胞外溶剂可以进入细胞内溶解并释放出胞内物质，因此可以有效的提高产率，降低反应时间，减少溶剂的使用量。由于目前微波的设备比较普遍，因此，微波提取植物多酚的方法为更多的人所接受和使用。宋薇薇等[3]人用微波辅助法提取石榴皮多酚类化合物，确定了石榴皮多酚提取的最优工艺条件：40％(体积分数)乙醇作溶剂，料液比(g：m1)l：35，微波功率为242 W，提取时间60 s，提取三次，以该优化条件提取时，多酚粗提物得率26．52％，这个结果较贾冬英[43以20％(体积分数)乙醇作溶剂，料液比(g：mL)1：20，温度50℃，提取时间1 h，以该优化条件提取所得石榴多酚得率22．86％高，与醇提法相比，微波辅助提取能强化浸取过程，体系受热均匀，提取物中多酚含量高，提取时间较短等优点。 1．3超声波辅助提取 超声波辅助提取法是利用超声波产生的强烈振动、高加速度、强烈的空化效应、搅拌作用等，可加速有效成分进入溶剂，从而提高提取率，缩短提取时间，并可避免高温对提出成分的影响。超声波提取的操作具有简便快捷、提取温度低、时间短、提取率高、提取物结构不易被破坏的特点．该法的缺点是获得产品纯度不高。陶令霞c5]等人对苹果渣中多酚的超声辅助提取工艺条件进行了优化研究，确定最佳工艺条件为：70％乙醇，提取时间50 min，提取功率200 W，料液比1：15，提取温度35℃，提取2次，苹果多酚得率为4．29g／kg。同时，超声波辅助提取方法在荷叶多酚大麦多酚、以及诃子多酚中也有相应的报道。 1．4生物酶解提取 生物酶解提取技术是根据酶反应具有高度专一性的特点，选择相应的酶，水解或降解细胞壁组成成分纤维素、半纤维素和果胶，从而破坏细胞壁结构，使细胞内的成分溶解、混悬或交溶于溶剂中，达到提取目的。酶法提取最大的优势是反应条件温和。由于酶法提取是在非有机溶剂下进行，所得产物纯度、稳定性、活性都较高，无污染，解决了有机溶剂提取法有机溶剂回收困难、用量大等缺点。此外，酶法提取在缩短提取时闻、降低能耗、降低提取成本等方面也具有一定优势[6]。刘军海等人[7]以低档绿茶为原料，采用复合酶法在较低温度下提取茶多酚。以单因素试验考察了酶用量、提取温度、提取时间及pH对茶多酚提取率的影响。通过正交试验优化并确定最佳提取工艺条件：酶用量为0．20％、提取温度为60℃、提取时间80 min、pH为4．6，在此工艺下茶多酚提取率为13．6％，其中儿茶素占茶叶干重的含量比沸水提取法高出2．31％。1．5离子沉淀法离子沉淀法是利用多酚能与金属离子络合生成沉淀，使其在浸提液中与其它物质分离而出，从而得到纯度较高多酚。目前常用金属离子有A13+、Zn2+、Fe2+、M92+、Ba2+、Ca2+等，其中A13+、Zn2+较为理想。离子沉淀法优点是不使用大量有机溶剂，工艺较简单，生产安全性好，在一定程度上可降低能耗，部分
植物DNA提取方法
1.2实验方法 1.2.1 茶花基因组DNA的提取 采用CTAB法[8]提取DNA，所有试剂（有机溶剂除外）和器皿都经高压灭菌，主要步骤如下： （1）取两片幼嫩新鲜叶片，置于预冷的研钵中，倒入适量液氮，迅速研磨成粉末状，随后加入3ml预热的2%CTAB抽提缓冲液和50ul抗氧化剂2-巯基乙醇，继续研磨成略有流动性的糊状或粥状，转入1.5ml的离心管中，于65℃水浴锅中保温约60min. (2)待混合物冷却至室温后加入等600ul的CI（氯仿：异戊醇=24：1）溶液混匀，轻轻颠倒离心管几次使管内混合物成乳浊液，常温下10000rpm离心10min,取上清液转入另一干净的离心管中。 （3）重复步骤（2）一次。 （4）取步骤（3）上清液加入2.5倍体积无水乙醇，仔细混匀，-20冰箱30min以上，沉淀DNA 4℃，12000rpm离心10min. (5)弃去上层有机溶剂，加500ul75%乙醇洗涤沉淀，4℃下8000rpm离心5min,弃去上清，洗涤沉淀3次。 （6）倒置或者37度培养箱烘干. (7)加50ulTE缓冲液溶解DNA，于-20℃冷藏备用。 1.2.2 DNA含量和质量的测定 （1）紫外分光光度法：取4ml提取的DNA，将之稀释200倍，测定提取的DNA在260nm 和280nm处的吸光度值，得出OD260/280的值以及DNA和蛋白质浓度。如蛋白质浓度过高，需纯化。 （2）琼脂糖凝胶电泳：配制1.0%琼脂糖凝胶，在0.5×TBE缓冲液中，电压5V/cm电泳约60min，溴化乙锭染色20min,在凝胶成像系统上观察并拍照。 1.2.3 PCR扩增 (1)PCR反应在Biometro PCR仪上进行，反应体系为25ul:ddH2O 14ul,10×Buffer 2.5ul,MgCl(25mM) 2.5ul,dNTPs(2.5mM) 2.0ul,primer(2.0uM) 1.0ul,DNA 2.7ul(约
磁珠法(多糖多酚)植物组织基因组DNA提取试剂盒
磁珠法多糖多酚植物组织基因组DNA提取试剂盒MagBeads Polysaccharide & Polyphenol Plant Genomic DNA Extraction Kit 【目录号】PTDE-6005、PTDE-6030； 【运输条件】2~25℃； 【保存条件】磁珠分散液、β-巯基乙醇2~8℃；蛋白酶K -20℃；其它组分室温保存； 【试剂盒组成】 【注意事项】 1. 使用前请检查裂解液（组分①）和结合液（组分②）是否出现结晶，如有结晶请置于 65℃温浴至重新溶解完全； 2. 初次使用全新试剂盒前，请按照结合液（组分②）标签标注量加入异丙醇，稀释备用； 3. 磁珠悬浮液（组分③）不可反复冻融或离心，使用前需充分摇匀； 4. 蛋白酶K（组分⑤）于-20℃长期保存，避免反复冻融；融化后4℃保存，并尽快使用； 5. 请仔细阅读本说明书，并按照操作指南建议操作。
【产品简介】 本试剂盒采用针对富含多糖多酚植物组织进行杂质去除的特殊磁珠，配合高性能缓冲液体系，可从各种富含多糖多酚植物组织样本中高质量的分离纯化基因组DNA。 特殊技术包埋的磁珠在特定条件下对核酸具有极强的亲和力，而当条件改变时，磁珠会释放所吸附的核酸，从而达到快速分离纯化核酸的目的。提取所得的基因组DNA产物片段大、纯度高、质量稳定可靠，尤其适合高通量仪器自动化提取，特别是本公司生产的各类型号自动化核酸提取仪或工作站。使用本试剂盒纯化所得核酸产物可适用于各种常规分子生物学下游实验，如：酶切、PCR、荧光定量PCR、文库构建、Southern杂交、芯片检测和高通量测序等。 【试剂盒说明】 【自备仪器及耗材】 研钵&研磨棒(或者研磨机、匀浆机)、水浴锅、涡旋混合仪、高速离心机、EP管（1.5mL 或2.0mL）、EP管配套用磁力架、核酸提取仪（仪器自动版操作步骤需准备）。 【自备试剂】 液氮、乙醇(80%, v/v)、异丙醇、RNase A溶液(100mg/mL，分散液10mM Tris-HCl, 1mM EDTA, pH值8.0)。 【仪器自动法版操作步骤】 该方法配合磁棒法核酸提取仪使用，以英芮诚ETP-300型全自动核酸提取仪为例，可同步完成32份植物样本提取工作。 1. 准备96孔板 注：1）每次吸取磁珠悬浮液前尽量摇晃均匀；2）为提高效率建议使用排枪。 2. 组织样本前处理和裂解 取适量(≤100mg)植物组织样本，液氮研磨至粉末状，尽量完全转移至EP管中。加入400μL 裂解液、0.8μL β-巯基乙醇和20μL蛋白酶K，涡旋振荡1~3min至混合均匀，呈云雾状。65℃温浴15min，每隔5~10min上下颠倒混匀一次。 注：1）若样本量大于100mg，但不超过400mg，需增加裂解液使用量，可按照每增加100mg组织样本增加150μL裂解液使用量，并延长裂解时间，其余试剂用量不变； 2）若样本个数较多，可预先将蛋白酶k、β-巯基乙醇和裂解液提前混合备用；
茶叶中茶多酚的提取与含量测定方案(精选.)
设计性实验 茶叶中茶多酚的提取与含量测定 实验方案 新疆农业大学食品科学与药学学院 班级：葡工162班 姓名：王勇峰 学号：220162712 指导老师：阿不都热依木
茶叶中茶多酚的提取与含量测定 一.实验目的及要求 1.用无害溶剂从茶叶中提取茶多酚。 2.分离、纯化茶多酚粗品，掌握溶剂提取法提取茶多酚的原理及方法。 3.定量分析茶多酚产品含量。 二.实验原理 有机溶剂萃取法：有机溶剂萃取法是传统的提取工艺。是利用茶叶中不同化合物在不同溶剂中的溶解度不同进行提取分离。在粗茶叶萃取溶液中，除含有茶多酚以外，还含有咖啡碱、酯质、色素、植物多糖、有机酸、以及悬浮物，且茶多酚含量仅为25%～40% ，所以大多数工艺用乙酸乙酯、氯仿等有机溶剂反复萃取的方法进一步除杂、纯化、精制。 茶水用氯仿萃取可得到水层和有机层，咖啡碱存在于有机层，而茶多酚则存在于水层中，根据萃取及过滤原理，将有机层和水层分别进行浓缩、萃取，即可得到相应粗产物。 三.实验仪器及药品 仪器：天平；分析天平；铁架台；抽滤装置；超级恒温水浴槽；长颈漏斗一个；滤纸若干张；分液漏斗一个；100毫升的烧杯（三个）；玻璃棒一个；药品： 1.乙醇水溶液（50％）； 2.干茶叶原料； 3.氯仿（分析纯）； 4.Na2SO4溶液馏水
四.实验步骤 1、温度设定:打开超级恒温水浴电源开关，使温度达到90℃ 2、称量：称取30克干茶叶，放在100毫升小烧杯中。 3、溶解：用量筒量取40毫升50％乙醇水溶液，倒入小烧杯中，用玻璃棒轻轻搅拌，使干茶叶完全浸润在乙醇溶液中。 4、加热：将干茶叶和乙醇水溶液的混合液置于超级恒温水浴槽中，加热20分钟。 5、过滤：将加热完毕的混合液取出，冷却到室温； 用长颈漏斗对混合液进行过滤，滤除茶叶残渣。再对残渣进行乙醇萃取. 6、分离萃取： 1)对分液漏斗进行试漏，调整好铁架台高度； 2)用量筒量取20毫升氯仿①，置于100毫升小烧杯中；将茶叶滤液倒入分液漏斗中，再将氯仿倒入其中，再倒入少量Na2So4溶液②，轻轻摇匀，使之混合充分，静置，分层，上层应为茶多酚水溶液，呈茶色，下层为氯仿乙醇混合液，为无色。 3)将下层溶液小心放至小烧杯中，上层溶液从分液漏斗上口倒至100毫升小烧杯中； 7、抽滤浓缩： （1）安装好减压抽滤装置； （2）将布氏漏斗里的滤纸用少量茶多酚水溶液润湿，开启抽气阀，一边缓慢倒入液体，一边抽滤。
植物DNA提取经典方法
植物DNA提取经典方法：CTAB法原理 植物DNA提取经典方法：CTAB法原理 植物DNA提取经典方法CTAB法 标题:植物DNA提取经典方法：CTAB法原理 摘要: CTAB(hexadecyltrimethylammonium bromide,十六烷基三甲基溴化铵)，是一种阳离子去污剂,具有从低离子强度溶液中沉淀核酸与酸性多聚糖的特性。在高离子强度的溶液中(>0 7mol L NaCl),CTAB与蛋白质和多聚糖形成复…… 关键词:植物DNA提取经典方法CTAB法 最专业的生命科学学术交流论坛 CTAB(hexadecyltrimethylammonium bromide,十六烷基三甲基溴化铵)，是一种阳离子去污剂,具有从低离子强度溶液中沉淀核酸与酸性多聚糖的特性。在高离子强度的溶液中(>0.7mol/L NaCl),CTAB与蛋白质和多聚糖形成复合物，只是不能沉淀核酸.通过有机溶剂抽提，去除蛋白、多糖、酚类等杂质后加入乙醇沉淀即可使核酸分离出来。 注：CTAB溶液在低于15℃时会形成沉淀析出，因此，在将其加入冰冷的植物材料之前必须预热，且离心时温度不要低于15℃。 一、CTAB提取缓冲液的经典配方： Tris-HCl (pH8.0)提供一个缓冲环境，防止核酸被破坏； EDTA螯合Mg2+或Mn2+离子，抑制DNase活性； NaCl 提供一个高盐环境，使DNP充分溶解，存在于液相中； CTAB溶解细胞膜，并结合核酸，使核酸便于分离；
β-巯基乙醇是抗氧化剂，有效地防止酚氧化成醌，避免褐变，使酚容易去除。 二、CTAB提取缓冲液的改进配方： (1) PVP(聚乙烯吡咯烷酮)是酚的络合物，能与多酚形成一种不溶的络合物质，有效去除多酚，减少DNA中酚的污染；同时它也能和多糖结合，有效去除多糖； (2) 蛋白质的去除：酚/氯仿抽提使用变性剂变性(SDS、异硫氰酸胍等)高盐洗涤蛋白酶处理核酸分离，纯化； (3)多糖的去除：高盐法：用乙醇沉淀时，在待沉淀溶液中加入1/2体积的5M NaCl，高盐可溶解多糖。用多糖水解酶将多糖降解。在提取缓冲液中加一定量的氯苯(1/2体积)，氯苯可以与多糖的羟基作用，从而去除多糖。用PEG8000代替乙醇沉淀DNA：在500 μL DNA液中加入200μl 20% PEG8000 (含1.2 M NaCl)，冰浴20min.核酸分离，纯化； (4) 多酚的去除:在抽提液中加入防止酚类氧化的试剂：β-巯基乙醇、抗坏血酸、半胱氨酸、二硫苏糖醇等加入易与酚类结合的试剂：如PVP(聚乙烯吡咯酮),PEG(聚乙二醇)，它们与酚类有较强的亲和力，可防止酚类与DNA的结合； (5) 盐离子的去除：70%的乙醇洗涤核酸吸附,沉淀和溶解使用合适的吸附材料吸附核酸，其它的杂质均被洗掉，达到纯化DNA的目的另一种方式加入1/10体积的NaAc(pH5.2,3M)，用预冷的乙醇或异丙醇沉淀RNA吸附或沉淀后应用70%的乙醇洗涤，以除去盐离子等若长期储存建议使用TE缓冲液溶解TE中的EDTA能螯合Mg2+或Mn2+离子，抑制DNasepH值为8.0，可防止DNA发生酸解。 三、基因组DNA提取常见问题 DNA中含有蛋白、多糖、多酚类杂质。DNA在溶解前，有酒精残留，酒精抑制