EST_SSR及其在植物基因组学研究中的应用

选取体重18～20g健康小白鼠5只,皮下注射多联菌苗0.5ml,逐日观察至第7d,应无由毒性物质而引起的症状或死亡为合格。

1.2.7　异常毒性试验

选取体重18～20g健康小白鼠5只,腹腔注射多联菌苗0.5ml,注射前称取体重,观察7d。观察期内,小白鼠应全部健存,无异常反应。7d后小白鼠体重增加,判为合格。

1.2.8　免疫力试验

多联菌苗免疫体重14～16g小白鼠30只,皮下注射0.5ml,注射2次,间隔7d,末次免疫后10d进行毒菌攻击。免疫组小白鼠腹腔注射1M LD的毒菌,同批饲养体重与免疫组相同的小白鼠3组(每组5只)作为对照,分别于腹腔注射2、1及1Π2M LD的毒菌,观察3d,对照组小白鼠感染2及1M LD者应全部死亡,感染1Π2M LD者要有部分死亡,观察免疫组小白鼠的存活情况。

2　结果与分析

2.1　毒力试验

65株金黄色葡萄球菌中毒力最强的菌株是S018,M LD为3.0×108Πml;9株大肠杆菌中毒力最强的菌株是E004,M LD为1.5×108Πml;5株无乳链球菌中毒力最强的菌株是W002,M LD 为9.0×108Πml。

表1　生产菌株毒力试验结果

菌株最小致死量(M LD)

S018 3.0×108Πml

E004 1.5×108Πml

W0029.0×108Πml

2.2　安全试验

逐日观察至第7d,全部实验小白鼠均存活,无由毒性物质引起的症状,因此判定菌苗安全试验合格。

多联菌苗安全试验结果

小白鼠01号02号03号04号05号

死亡-----

皮肤毒性症状无无无无无

2.3　异常毒性试验

观察期内,实验小白鼠全部健存,无异常反应。7d后每只小白鼠体重均增加,因此判定多联菌苗异常毒性试验合格。表3　多联菌苗异常毒性试验结果

动物编号W0(g)W1(g)W2(g)W3(g)W4(g)W5(g)W6(g)

变化值

(g)

0118.7418.8219.0519.3319.7320.3020.95+2.21 0218.6618.7518.9919.2619.6420.2520.81+2.15 0318.5718.7018.9419.2819.6920.4021.00+2.43 0418.7018.7919.0119.2619.6720.2120.75+2.05 0518.7319.3419.6119.7720.1520.8421.59+2.86 2.4　免疫力试验

对照组小白鼠感染2及1M LD者全部死亡,感染1Π2M LD 者有部分死亡,免疫组小白鼠的保护率为83.3%,超过70%的指标,因此判定多联菌苗免疫力试验合格。表4　多联菌苗免疫力试验结果

组别免疫组2M LD组1M LD组1Π2M LD组首次免疫剂量(ml)0.5---

末次免疫剂量(ml)0.5---

金葡菌攻击浓度(Πml) 3.0×108 6.0×108 3.0×108 1.5×108金葡菌攻击剂量(ml)0.50.50.50.5

实验动物数(只)30555

死亡动物数(只)5552

存活动物数(只)25003

死亡率(%)16.710010040

保护率(%)83.3---

3　讨论

3.1　奶牛乳房炎致病菌有150多种,其中主要以金黄色葡萄球菌、大肠杆菌和无乳链球菌为主,约占整个病例的90%以上[2]。作者从167份临床型乳房炎乳样中筛选出65株金黄色葡萄球菌、9株大肠杆菌、5株无乳链球菌,通过毒力试验选取毒力最强的菌作为生产菌株。

3.2　制成金黄色葡萄球菌类毒素及菌体蛋白、大肠杆菌和无乳链球菌灭活菌苗,将上述成分合理配伍制成多联菌苗。3.3　通过安全试验、异常毒性试验和免疫力试验证实所研制的多联菌苗是一种安全、无毒、高效的新型生物制剂,对免疫组小白鼠的保护率为83.3%,此新型生物制剂完全可以用于预防和治疗奶牛乳房炎,这一结论与石冬梅等人的研究结果相同[6]。当然,仅仅依靠疫苗预防接种是不可能达到完全控制乳房炎的发生,需要实施综合防治措施,才能降低奶牛乳房炎的发病率[11]。

参考文献:

[1]Harm on R.Sym posium.mastitis and genetic evaluation for s omatic cell count [J].J Dairy Sci,1994,77:2103-2122.

[2]王冰,刘明春,吴聪明,等.呼和浩特地区奶牛乳房炎金黄色葡萄球菌的耐药性调查[J].中国兽医杂志,2007,43(3):29-30.

[3]代敏,王雄清,王红宁,等.绵阳市奶牛乳房炎病原菌的分离鉴定及耐药性分析[J].中国兽医杂志,2007,43(3):33-34.

[4]Charls N,Bbins J R.M astitis losses[J].J Am V et Med Assoc,1997, 170:1129-1132.

[5]石正,王根云,凤英,等.生物活性浴剂对奶牛乳房炎临床治疗试验[J].中国动物保健,2007,3:58-59.

[6]石冬梅,皇甫和平.奶牛乳房炎疫苗预防效果试验[J].中国畜牧兽医,2007,34(10):65-67.

[7]G iraudo J.A.,A,Calzulari,et al.Field trials of a vaccine against bovine mastitis.1.Evaluation in heifers[J].Dairy Sci.,1997,80:845.

[8]Calzulari A LDO,A.G iraudo,et al.Field trials of a vaccine against bovine mastitis.2.Evalustion in tw o commercial dairy herds[J].Dairy.Sci.,1997, 80:854.

[9]刘朝,王京仁,张成栋,等.湖北地区奶牛乳房炎病原菌的分离鉴定与耐药性分析[J].中国奶牛,2007,(7):35-38.

[10]王耕,王振刚,杨广林,等.奶牛乳房炎病原菌的分离鉴定与药敏试验[J].兽医临床,2007,7:92-94.

[11]叶芬,曹杰,魏学良.奶牛乳房炎防治研究进展[J].中国牛业科学, 2007,33(5):53-55.

专题综述

RE VIEW ARTIC LES

EST-SSR及其在植物基因组学研究中的应用

李卫国,常天俊,龚红梅

(河南理工大学资源环境学院,河南焦作454003)

摘要:数量迅速增加的表达序列标签已经成为开发分子标记的重要资源。EST-SSR是基于表达序列标签开发微卫星的一种新型分子标记,与基因组SSR相比,EST-SSR具有在植物物种之间可转移性的优点。目前,EST-SSR被广泛应用于植物基因组学研究如遗传图谱构建、比较作图、遗传多样性评价、种质鉴定、系统发育与进化研究等方面。该文介绍了EST-SSR原理、引物开发、实验方法,并对其物种间通用性以及其在植物基因组研究中的应用进行了评述。

关键词:EST -SSRs ;可转移性;植物基因组学;应用

中图分类号:Q943 文献标识码:A 文章编号:1004-311X (2008)04-0090-04

Simple Sequence R epeats Derived from Expression Sequence T ags (EST -SSRs )

and Its Application to Plant G enomics

LI Wei -guo ,CH ANG T ian -jun ,G ONG H ong -mei

(Institute of Res ource and Environment ,Henan P olytechnic University ,Jiaozuo 454003,China )

Abstract :Expression sequence tags ,which are rapidly increasing in number ,have become an important res ource for development of simple se 2

quence repeats markers.C ompared with genomic SSRs ,EST -SSRs are a new kind of m olecular makers derived from expression sequence tags with remarkable advantages in high trans ferability across plant species.Currently ,EST -SSRs have been widely applied to plant genomics stud 2ies ,such as construction of genetic linkage maps ,comparative mapping ,identification of germplasm res ource ,detection of genetic diversity and s o on.In this paper ,the principles ,development ,and procedures of EST -SSRs are introduced.Furtherm ore ,trans ferability across species and its application of EST -SSRs in plant genomics studies are als o reviewed.K ey w ords :EST -SSR ;trans ferability ;application ;plant genomics

收稿日期:2008-04-08;修回日期:2008-05-27基金项目:河南理工大学博士基金项目资助(648245)

作者简介:李卫国(1970-),男,博士,讲师,研究方向:植物分子生物学,E -mail :wg -li @https://www.360docs.net/doc/e015919737.html, 。

表达序列标签微卫星(EST -SSR )是一种基于EST 的简单重复序列设计的一种新型分子标记,尽管不同植物开发的EST 序列中SSR 分布的频率差异很大,但其中2～5%序列中都含有SSR ,随着生物学技术的发展和实验成本的降低,公共数据库EST 数量的急速增加,为植物EST -SSR 的开发提供了极有价值丰富的可利用资源。由于EST 是功能基因的一部分,不同基因组间,基因编码区序列的保守性远远高于非编码区,与基因组SSR 相比EST -SSR 表现出较好的物种之间的可转移性[1,2]。此外,EST -SSR 技术还避免了基因组SSR 开发过程中需要构建基因组DNA 文库等繁琐步骤,可以为功能基因提供绝对的标记,充分反映出基因组功能区域的相似程度。目前EST -SSR 已经在植物基因组学研究如遗传图谱构建、比较作

图、亲缘关系鉴定、遗传多样性评价等方面广泛应用[3-6]

。本文介绍了EST -SSR 的原理、开发和方法,并对其物种间可转移性及在植物基因组学研究中的应用进展进行综述,为EST -SSR 在植物基因组学研究中的应用提供理论参考。

1　EST -SSR 的原理和方法

1.1　EST -SSR 技术的原理

EST 是指通过对cDNA 文库随机挑取的克隆进行大规模测序所获得的cDNA 的5′或3′端序列,它代表生物体某种组织某一时期的表达基因。而SSR 分布于整个植物基因组,除分布于基因间隔区外,在基因编码区也有广泛分布。EST -SSR 基本原理是:筛选包含SSR 的EST 并根据微卫星序列两端保守的侧翼序列设计引物,通过PCR 反应扩增基因组编码区的微卫星序列,将扩增片段进行聚丙烯酰胺凝胶电泳,再经银染后分析微卫星中核心序列重复单位数目的多态性。EST -SSR 的原理与技术与基因组SSR 相似,两者区别在于EST -SSR 来源于基因组的编码区,因此其更能反映出植物基因组功能的信息[7]。

1.2　EST -SSR 引物的开发

从G eneBank 、E M BL 等公共数据库中下载EST ,应用Clustal X 、T reeview 、G enedoc 等软件经过拼接和聚类去掉冗余。由于并非全部EST 都包含简单重复序列,通常需要筛选得到可利用的EST ,可以使用在线SSR 识别软件SSRIT 来完成。一般选择识别标准为:二核苷酸、三核苷酸、四核苷酸和五核苷酸重复序列的重复次数分别大于或等于10、7、5和4。应用引物设计软件Primer Premier 5.0设计引物。引物设计的原则为:EST 序列长度大于100bp ;SSR 序列的开始和结束位置分别距5′和3′端不少于20bp ,引物设计一般长度为18～24bp 。1.3　实验操作

EST -SSR 是基于PCR 技术的分子标记,其实验操作与基因组SSR 方法相同。实验流程通常包括基因组DNA 提取、PCR 扩增、聚丙烯酰胺变性凝胶电泳、银染显色、统计分析等步骤。

2　EST -SSR 的物种间的可转移性及其在植物基因

组研究中的应用

2.1　EST -SSR 的物种间可转移性

SSR 标记在不同物种之间的可转移性取决于其侧翼序列的保守程度与SSR 进化的稳定性。基因组SSR 由于大多来源于非编码序列,而且侧翼序列往往具有明显的物种特异性,因此其在不同物种间通用性极差。而EST 作为基因的一部分,由于不同物种间基因的共线性和保守性,EST -SSR 侧翼序列往往在物种之间高度保守,从一种植物中开发的EST -SSR 可通用于其它近缘物种研究,加快了物种之间的基因组信息转换,为植物基因组研究提供了新的思路和途径。EST -SSR 在不同作物中的通用性已有大量报道,而且EST -SSR 与基因组

SSR 相比具有更高的物种间的可转移性[8]。Vendramin E 等[9]

利用21对桃(Prunus per sica )的EST -SSR 引物研究了在蔷薇科李属近缘种植物杏(P .dulcis 和P .armeniaca )、李(P .domesti 2ca 和P .salicina )、甜樱桃(P .avium )可转移性,发现18个引物能有效扩增出条带,其中杏和日本李多态性条带比率均为38.1%,甜樱桃多态性条带比率为14.3%,表明EST -SSR 在李属近缘种植物之间具有高效的通用性。宿俊吉等[10]选用普通小麦534对基因组SSR 引物和351对EST -SSR 引物分别对普通小麦品种Fukuho 和同族物种四倍体冰草Z 559的基因组DNA 进行扩增,结果显示226对SSR 和258对EST -SSR 引物对冰草能有效扩增,通用性比率分别为42.3%和73.5%,表明SSR 和EST -SSR 在同族植物种小麦和冰草之间的可转移性,小麦EST -SSR 对冰草的通用性明显高于SSR 。EST -SSR 在物种间的可转移性显著增加了标记数目,提高其利用价值,表现为物种间通用性好高,为不同物种的标记开发提供了新的方法。

有研究表明物种间SSR 转移的成功率与物种之间的亲缘有关,除了在近缘植物种间有较高的转移率以外,也有许多

EST-SSR 在植物不同属间可转移的研究报道[11,12]

。忻雅等[13]

利用15对白菜的EST -SSR 引物研究了该标记在白菜、油菜、玉米、高粱、水稻和茶树等不同物种间的通用性,结果表明,所设计的引物对不同白菜品种、近缘种油菜以及玉米、高粱、水稻、茶树的扩增成功率分别为100%、93.3%、80%、93.3%、93.3%和86.7%,并且各物种基因组的扩增产物中均检测出不同程度的多态性片段。Saha M C 等[14]利用145对高羊茅(Festuca arundinacea )EST -SSR 引物研究在一些草地植物间的通用性发现,在黑麦草、草甸羊茅、小麦、水稻中成功转移率分别为86%、83%、71%、59%,表明转移成功率与这些物种与高羊茅的亲缘关系远近有关,而且扩增片段呈现出了较高的多态性。以上研究表明,EST -SSR 在近缘或远缘物种之间均有较好的通用性,并且在植物基因组研究如比较遗传作图和种质亲缘关系鉴定和利用等方面已经体现出明显优势和巨

大的应用潜力。

2.2　EST-SSR在植物基因组学研究中的应用

作为一种新的SSR分子标记来源,利用其在物种之间的高通用性,大量不同物种的EST-SSR标记得以开发出来,为进行遗传连锁图构建、比较遗传作图、种质资源遗传多样性评价、亲缘关系鉴定与系统分析等植物基因组研究领域提供了技术平台,目前该技术已经在许多重要作物和野生植物资源等基因组研究中成功应用。

2.2.1　遗传连锁图谱构建

遗传图谱的构建是遗传学研究中的一个重要领域,是对基因组进行系统性研究的基础,也是遗传育种的依据。传统的基因组SSR标记由于受到引物开发的限制,很难获得高密度的遗传连锁图,而EST-SSR弥补了基因组SSR的不足,为构建高密度遗传图谱提供了有力的技术手段。近年来,与其它分子标记的整合遗传图谱构建开始被关注,尤其在作物遗传图谱构建方面得到了广泛应用。Y i G等[15]利用辣椒(TF68×Habanero)F2群体,利用EST-SSR技术获得139个分子标记,远大于SSR、AF LP遗传图谱标记数,并将获得EST-SSR位点定位于14个连锁群,整合构建了总图距为2201.5cM的遗传连锁图谱。G onzalo M J等[16]应用EST-SSR、SSR、RP LP等分子标记以韩国甜瓜品种PI161375和自交系PS的杂交后代以及加倍单倍体为研究对象进行图谱整合,获得图距为1021cM 由12个连锁群组成包括16个EST-SSR标记在内的整合遗传图谱。遗传图谱的构建为进一步进行抗病基因和重要农艺性状基因的克隆、定位与鉴定提供了理论依据。

由于EST-SSR来源于基因组编码区,与基因的功能可能密切相关。随着植物基因组学研究的不断深入,构建功能基因图谱成为植物基因组学研究热点。G uo W Z等[17]以陆地棉T M-1和海岛棉Hai7124以及杂交后代与T M-1回交BC1为作图群体,通过以雷蒙德氏棉EST-SSR检测到两个亲本之间存在很高的多态性位点,并以此构建了遗传图谱,将1122个EST-SSR位点定位于26个染色体上,其中使得原有棉花遗传图谱增加至1790个位点,获得了包括26个连锁群在内图距为3425.8cM的遗传图谱,大大增加了其连锁密度。通过与数据库蛋白质序列比对,表明475个位点与生物代谢过程、细胞组分、分子催化、结合功能等基因的功能有关,并得到与棉花纤维发育的一些重要基因,对进一步研究棉花基因组功能和改良农艺性状都具有重要意义。

2.2.2　比较作图

基因组比较作图是利用共同的遗传标记对相关物种进行物理或遗传作图,比较这些标记在不同物种基因组中的分布,揭示染色体或染色体片段上的基因及其排列方式的相同或相似性,有助于在不同物种间互相利用遗传信息,从而研究不同物种的基因组结构、功能。EST-SSR由于在物种间有很好的通用性,因此,在比较作图方面展现出独特的优势。H ori K 等[18]利用栽培一粒小麦(Triticum monococcum)和野生一粒小麦(Triticum boeoticum)杂交F10群体,将大麦242个EST-SSR标记定位于小麦遗传图谱上,获得了图距为1038.1cM的遗传连锁图谱。阐明了小麦遗传图谱与原先构建的大麦遗传图谱呈明显的共线性,小麦和大麦染色体之间存在同源联系。Chen C X等[19]应用在甜橙(Citrus sinensis)和枳橙(Poncirus trifoliata)间通用性很高的甜橙EST-SSR标记,利用141个在杂交F1代分离的多态性标记分别构建了图距分别为775.8cM和425.7cM 甜橙和枳橙的遗传图谱。两个遗传图谱的比较研究表明,两个物种图谱中相应的连锁群之间存在明显的共线性,为进一步研究甜橙相关属物种之间比较遗传作图分析奠定了基础。EST-SSR通用性为研究基因组功能区域的相似程度,指导基因组功能的预测提供了有效的技术方法。Varshney R K等[20]利用大麦遗传图谱中的含有SSR的EST与黑麦、小麦、水稻的EST数据比对时发现在大麦中的这些EST在上述物种中都有同源性。把其中9个大麦的EST-SSR标记用于黑麦图谱的绘制,发现所有的这些标记的位置都在预期的功能区,与大麦图谱相比处于相似位置。由此可以看出,EST标记在物种之间遗传图谱中进行比较以揭示基因组功能及进化有着重要意义。

2.2.3　种群遗传多样性评价

遗传多样性是种群遗传结构特性的重要组成部分,是生态系统多样性和物种多样性的核心与基础,也是物种的适应性的体现,对于种质资源遗传多样性的研究有助了解物种对环境的适应性、生存力以及进化潜力,对制定有效管理措施有着极其重要的意义。然而对于许多自然生态环境的野生物种,其遗传背景不是十分清楚,共显性标记基因组SSR因引物设计困难应用受到很大限制,对于其种群遗传多样性研究多限于RAPD、ISSR、AF LP等显性分子标记的使用,对杂合体不能有效加以区分,影响了对种群遗传多样性准确评价。EST-SSR由于其很高的物种间的通用性,数量剧增的公共数据库公布的EST序列为开发SSR提供了大量可利用资源。近年来利用遗传信息丰富的植物EST开发近缘种EST-SSR的策略开始受到关注,并已在植物种群遗传结构研究中开始应用。Pa2 shley C H等[21]应用22个向日葵栽培种(H elianthus annuus)EST -SSR引物比较分析了两个栽培种和近缘稀有野生向日葵(H elianthus verticillatus)3个种群的遗传多样性和遗传结构,发现22个栽培种EST-SSR引物在野生种种群内和种群间产生更为丰富的多态性位点,表明该稀有植物种种群具有极高的遗传多样性和一定程度的种群遗传分化,初步揭示了遗传分化可能源于适应性位点的遗传变异,为进一步制定保育管理措施提供了理论依据。

2.2.4　种质资源的鉴定

种质资源鉴定是进行品种改良、资源利用的前提和基础,植物种质资源的鉴定在提供多样化亲本、扩大品种遗传基础及合理利用种质资源等方面都具有十分重要意义。近年来, EST-SSR技术的发展和应用,为种质资源鉴定深入开展提供了一个全新的途径。金基强等[22]采用16对EST-SSR引物对42个茶树品种资源进行了分析,结果显示10对引物具有多态性,占76.9%,共检测到84种等位基因型和74个等位变异,每对引物可检测到基因型和等位基因数分别为4～12和3～10种,并将42茶树品种划分为3个亚类,表明EST-SSR标记是鉴定茶树资源有效的方法。Carus o M等[23]用EST-SSR对36个竹笋品种进行了鉴定,研究材料包括35个栽培种和1个新的变种,应用8对EST-SSR引物对36个品种进行了区分,聚类分析表明品种间遗传联系与其地理起源有明显的相关性。张鹏等[24]对192份国内外芝麻的进行了EST-SSR分析, 25对SSR引物扩增的136个等位基因中56128%呈多态性,平均每对检测引物产生3.04个。经聚类分析发现,192份芝麻材料可被分为3个类群6个组,中国南部地区芝麻遗传多样性高于中部和北部地区,为保护利用芝麻种质资源及育种工作打好了基础。

2.2.5　分子系统发育与进化

分子系统发育与进化的基本关系就是在DNA水平上探索生物进化的原因和机制,以生物大分子信息推断生物进化的历史,重建系统谱系关系。EST-SSR由于物种间通用性高,打破了传统基因组SSR的局限,在分子系统发育与进化研究中被广泛应用。Wang M L等[25]采用苜蓿、大豆的28个EST-SSR标记研究野百合属4个种26个品种的系统亲缘关系,把26个划分为4个类群,C.juncea与C.retusa和C.spectabilis有较近的亲缘关系,而与C.pallida的亲缘关系较远,并对26个品种的系统分类进行了重新确定。Mian M A等[26]用145对高羊茅EST-SSR标记对来自禾本科2个亚科8个属的12个代表性草本种进行系统分类分析,发现均可以扩增出条带并呈

很高的多态性。根据EST-SSR的多态性和含有这些SSR的DNA序列比对分别构建了系统树,两种分析发现冷季型禾本科牧草模式种Lolium temulentum和他们研究的羊茅属(Lolium)和黑麦草属(Festuca)的大部分种有比较近的亲缘关系,两种分析方法的结果表现出一致性并且与传统系统分类相吻合,表明EST-SSR在该属物种具有很好的通用性,利用基因组信息丰富的模式植物或作物EST-SSR标记为分子系统发育与进化分析提供了便捷。

3　存在问题及采取措施

EST-SSR作为一种新型的分子标记,尽管在遗传连锁图谱构建、比较遗传作图、种质资源遗传多样性评价与保护、亲缘关系鉴定与系统分析等基因组研究中具有很大优势,但同时也存在一定的缺陷,主要表现在以下几个方面:

(1)由于EST-SSR来源于序列相对保守的基因组编码区,与传统SSR标记相比较,EST-SSR标记的多态性较低。

(2)EST-SSR多态性是主要基于微卫星重复序列数目的变化而产生的长度多态性,对于长度相同而由不同碱基重复序列组成的SSR不能有效加以区分。

(3)由于EST仅仅是一个基因的部分序列,所以它所揭示的基因组信息不够全面,如有些调控序列等在基因表达调控中起重要作用的信息不能体现出来。

针对以上EST-SSR存在的不足,利用数量迅速增加的EST开发新的EST-SSR,增加EST-SSR标记数量,并结合其它分子标记如RF LP、AF LP、SSR、C APS、S NP等进行比较研究,以提高实验的可靠性和准确性。

4　前景与展望

高通用性EST-SSR已经在遗传图谱构建、遗传多样性评价、比较遗传作图、种质资源鉴定、系统发生与进化等植物基因组研究中被广泛应用。随着功能基因组学研究的不断深入,大量表达序列标签成为开发SSR可利用的资源,特别是水稻、拟南芥等模式植物全基因组序列的测定,源于植物基因组编码区高通用性的EST-SSR开始在分析基因组功能如基因定位与克隆、转录图谱的构建、发掘和利用功能基因、揭示基因对于环境的适应性进化等方面发挥重要作用。随着分子生物学技术和生物信息学的飞速发展,高通用性分子标记EST-SSR必将有着更为广阔的应用前景。

参考文献:

[1]Hanai L R,de Cam pos T,Camarg o L E,et al.Development,characteriza2 tion,and com parative analysis of polym orphism at comm on bean SSR loci is olat2 ed from genic and genomic s ources[J].G enome,2007,50(3):266-277.

[2]E llis J R,Pashley C H,Burke J M,et al.H igh genetic diversity in a rare and endangered sun flower as com pared to a comm on congener[J].Mol E col, 2006,15(9):2345-2355.

[3]Zhang K P,T ian J C,Zhao L,et al.M apping QT Ls with epistatic effects and QT L×environment interactions for plant height using a doubled haploid population in cultivated wheat[J].J G enet G enomics,2008,35:119-127.

[4]Han Z,W ang C,S ong X,et al.Characteristics,development and mapping of G ossypium hirsutum derived EST-SSRs in allotetraploid cotton[J].Theor Appl G enet,2006,112(3):430-439.

[5]Chen C X,Ly on M T,O’M alley D,et al.Origin and frequency of2n ga2 metes in Citrus sinensis×Poncirus trifoliata and their reciprocal crosses[J].P lant Sci,2008,174:1-8.

[6]T angphats ornruang S,Sraphet S,S ingh R,et al.Development of polym or2 phic markers from expressed sequence tags of Manihot esculenta Crantz[J]. Mol E col R esouce,2008,(8):682-685.

[7]Li Y C.K orol A B,Fahima T,et al.M icrosatellites within genes:struc2 ture,function,and ev olution[J].Mol Biol Evol,2004,(21):991-1007.

[8]Scott K D,Eggler P,Seaton G,et al.Analysis of SSRs derived from grape ESTs[J].Theor Appl G enet,2000,100:723-726.

[9]Vendramin E,Dettori M T,G iovinazzi J,et al.A set of EST-SSRs is olat2 ed from peach fruit transcriptome and their transportability across Prunus species [J].Mol E col N ote,2007,7(2):307-310.

[10]宿俊吉,柴守诚,刘伟华,等.普通小麦SSR和EST-SSR引物对冰草通用性的比较分析[J].西北植物学报,2007,27(7):1311-1316.

[11]陈树林,王沛政,胡保民.陆地棉EST-SSRs在向日葵中的通用性研究[J].西北植物学报,2006,26(3):502-506.

[12]刘振,石玉真,王静毅,等.棉花EST-SSRs在香蕉中通用性[J].中国农学通报,2008,24(1):33-37.

[13]忻雅,崔海瑞,张明龙,等.白菜EST-SSR标记的通用性[J].细胞生物学杂志,2006,28(2):248-252.

[14]Saha M C,M ian M A R,Eujayl I,et al.T all fescue EST-SSR markers with trans ferability across several grass species[J].Theor Appl G enet,2004, 109:783-791.

[15]Y i G,Lee J M,Choi D,et al.Exploitation of pepper EST-SSRs and an SSR-based linkage map[J].Theor Appl G enet,2006,114(1):113-30.

[16]G onzalo M J,Oliver M,G arcia-M as J,et al.S im ple-sequence repeat markers used in merging linkage maps of melon(Cucumis melo L.)[J].Theor Appl G enet,2005,110:802-811.

[17]G uo W Z,Cai C P,W ang C B,et al.A M icrosatellite-Based,G ene-Rich Linkage M ap Reveals G enome S tructure,Function and Ev olution in G os2 sypium[J].G enetics,2007,176:527-541.

[18]H ori K,T akehara S,Nankaku N,et al.Barley EST M arkers Enhance M ap Saturation and QT L M apping in Diploid Wheat[J].B reed Sci,2007,57: 39-45.

[19]Chen C X,Bowman K D,Choi Y A,et al.EST-SSR genetic maps for Citrus sinensis and Poncirus trifoliate[J].T ree G enet G enome,2008,4(1):1 -10.

[20]Varshney R K,S igmund R,Borner A,et al.Interspecific trans ferability and com parative mapping of barley EST-SSR markers in wheat,rye and rice [J].P lant Sci,2005,168:195-202.

[21]Pashley C H,E llis J R,M cCauley D E,et al.EST databases as a s ource for m olecular markers:less ons from H elianthus[J].J H ered,2006,97:381 -388.

[22]金基强,崔海瑞,龚晓春,等.用EST-SSR标记对茶树种质资源的研究[J].遗传,2007,29(1):103-108.

[23]Carus o M,Federici C T,R oose M L.EST-SSR markers for asparagus genetic diversity evaluation and cultivar identification[J].Mol B reed,2008, 21(2):195-204.

[24]张鹏,张海洋,郭旺珍,等.以SRAP和EST-SSR标记分析芝麻种质资源的遗传多样性[J].作物学报,2007,33(10):1696-1702. [25]W ang ML,M osjidis J A,M orris J B,et al.G enetic diversity of Crotalar2 ia germ plasm assessed through phylogenetic analysis of EST-SSR markers[J].

G enome,2006,49(6):707-715.

[26]M ian M A,Saha M C,H opkins A A,et https://www.360docs.net/doc/e015919737.html,e of tall fescue EST-SSR markers in phylogenetic analysis of cool-seas on forage grasses[J].G enome, 2005,48(4):637-47.

发酵法生产壳聚糖的研究现状

吴建国,刘清斌,甘广东

(四川理工学院生物工程系,四川自贡643000)

摘要:综述了多种生产壳聚糖的发酵方法,甲壳素脱乙酰以及壳聚糖的提取方法,分析了壳聚糖的开发利用现状。关键词:壳聚糖;甲壳素;发酵法;提取

中图分类号:T Q92 文献标识码:A 文章编号:1004-311X(2008)04-0093-03

Development Situation of the Production of Chitosan by Fermentation

W U Jian-guo,LI U Qing-bin,G AN G uang-dong