植物组织中可溶性糖含量测定
实验报告
课程：植物生理学实验题目：植物组织中可溶性糖含量的测定一.【实验原理】
植物的代谢活动随着植物的发育过程而不断发生着变化，碳水化合物的代谢也不例外，其含量也随之发生变化，在种子萌发过程中，在光合作用受到影响时和受到外界环境的胁迫等情况下植物可溶性糖含量都会发生变化。了解植物可溶性糖含量的变化，在生理上与实践上都有重要意义。
蒽酮比色法是常用的测定可溶性五碳糖和六碳糖的方法，糖在硫酸的作用下脱水生成糠醛，糠醛再与蒽酮作用形成一种绿色的络合物，在一定的浓度范围内颜色的深浅与糖含量成正比，可以用比色法测定。该法简便，但没有专一性，绝大部分的碳水化合物都能与蒽酮反应产生颜色。
二.【实验步骤】
1、标准曲线的绘制
2、可溶性糖的提取
3、提取液的显色及比色
三.【实验结果】
实验中测得的数据如下所示：
若以1号管调零，处理后数据如下：
作出标准曲线如下：
将y=0.261，0.269，0.247分别代入上述函数公式，得到：
x=45.000，46.379，42.586；
即三样品溶液中糖浓度分别为：45.000μg／mL，46.379μg／mL，42.586μg／mL。样品中可溶性糖含量（m g·g-1）= A × c／(W × 103)
式中，
A——植物样品稀释后的体积（mL）；
C——提取液的含糖量（μg／mL）；
W——植物组织鲜重（g）。
四.【讨论】
1、误差分析
实验中的误差来源主要有：
(1)植物材料称取的误差；
(2)植物样品在转移过程中的损失；
(3)最后过滤得到的提取液中尚有未除尽的醋酸铅；
(4)移液管未润洗等等。
2、注意事项
(1)样品提取液的显色应与标准曲线的绘制同步；
(2)比色时以蒸馏水调零；
(3)醋酸铅一定要除尽；
(4)在样品转移过程中，尽量减少材料的损失；
(5)进行第二次过滤时要更换滤纸，并将漏斗洗净。
3、植物组织中糖的测定方法还有很多种，举例说明它们的原理和优缺点。
(1)苯酚-硫酸法
原理：糖在浓硫酸作用下，脱水生成的糠醛或羟甲基糠醛能与苯酚缩合成一种橙红色化合物，在10~100mg范围内其颜色深浅与糖的含量成正比，且在485nm 波长下有最大吸收峰，故可用比色法在此波长下测定。
苯酚法可用于甲基化的糖、戊糖和多聚糖的测定，方法简单，灵敏度高，实验时基本不受蛋白质存在的影响，并且产生的颜色稳定160min以上。
(2)蒽酮-硫酸法
多糖在浓硫酸水合产生的高温下迅速水解，产生单糖，单糖在强酸条件下与苯酚反应生成橙色衍生物。在波长490nm左右处和一定浓度范围内，该衍生物的吸收值与单糖浓度呈线性关系，从而可用比色法测定其含量。
要求所用的单糖对照品尽量采用与其多糖组成一致或为含量较高的单糖，这样测得的值才较准确。
(3)3，5-二硝基水杨酸比色法（DNS法）
在碱性条件下显色，较准确测定还原糖与总糖的含量从而求出多糖的含量，可消除还原性杂质的干扰。
(4)分光光度计测糖浓度
先用标准糖试剂用蒸馏水配成已知的标准溶液，分别在分光光度计上测定其在一定波长处的光密度。以光密度为横坐标，浓度为纵坐标，作标准曲线。然后
分光光度计上测未知糖溶液的光密度，在标准直线上找到该光密度相对应的浓度。
操作简便，但对糖的纯度要求较高。
(5)旋光法
取溶液，用分光计测定其旋光度，查表得到其旋光率，按公式可求糖浓度。
对糖的纯度及单一性要求较高。
(6)高效液相色谱测糖浓度
高效液相色谱法又叫做高压或高速液相色谱、高分离度液相色谱或近代柱色谱,以液体为流动相，采用高压输液系统，是色谱法的一个重要分支。
它是用高压输液泵将具有不同极性的单一溶剂或不同比例的混合溶剂、缓冲液等流动相泵入装有固定相的色谱柱，经进样阀注入待测样品，由流动相带入柱内，在柱内各成分被分离后，依次进入检测器进行检测，从而实现对试样的分析。
操作过程复杂，时间长。
(7)直接滴定法（还原糖的测定）
样品经除去蛋白质后，在加热条件下，直接滴定标定过的碱性酒石酸铜液，以次甲基蓝作指示剂，根据样品液消耗体积，计算还原糖量。
只能测定还原糖的含量，具有局限性。
4、制作标准曲线应注意哪些问题？
(1)样品提取液的显色应与标准曲线的绘制同步；
(2) 沸水浴结束后要经冷却再进行比色；
(3) 比色时以蒸馏水调零；
(4) 以糖浓度为横坐标，吸光度值为纵坐标绘制标准曲线；
(5) 添加趋势线时设置截距为零。
(完整word版)植物可溶性糖含量的测定方法
植物可溶性糖含量的测定 可溶性糖包括葡萄糖、果糖、蔗糖，是植物品质的重要构成性状之一，尤其是以果实为目的产品的果树作物，可溶性糖与酸的含量及其配比是影响果实风味品质的重要因素。对于鲜食品种，一般来讲，高糖中酸，风味浓，品质优；低糖中酸，风味淡，品质差。 科标检测拥有国际先进的检测仪器和雄厚的技术力量，可以依据多种检测标准，提供检测服务并出具资质检测报告。 一、试材及用具 1．试材新鲜或冷冻的植物材料 2．仪器及试剂高速组织捣碎机、电热恒温水浴锅、1000W调温电炉以及200mL、250mL容量瓶、250mL锥形瓶及50mL碱式滴定管等玻璃仪器；试剂主要包括费林试剂及亚甲基蓝溶液等。 二、原理 本实验的主要原理：在加热条件下，用还原糖溶液滴定一定量的费林试剂时，将费林试剂中的二价铜还原为一价铜，以亚甲基蓝为指示剂，稍过量的还原糖立即使蓝色的氧化型亚甲基蓝还原为无色的还原型亚甲基蓝。通过实验，学习并掌握用费林试剂滴定法测定可溶性糖的原理和方法。 三、方法步骤 （一）试剂配制 1．费林试剂甲：称取硫酸铜（CuSO4 •5H2 O，分析纯）34.6g溶于水中，稀释至500mL，过滤，贮于棕色瓶内。 2．费林试剂乙：称取氢氧化钠50g和酒石酸钾钠（KNaC4 O6 H4 •4H2 O，分析纯）138g溶于水中，稀释至500mL，用石棉垫漏斗抽滤。 3．转化糖标准溶液：称取9.5g蔗糖（分析纯）用水溶解后转入1000mL容量瓶中，加入6mol/L HCl（分析纯）10mL，加水至100mL。在20～25℃下放置三天或在25℃保温24h，然后用水定容（此为酸化的1%转化糖液，可保存3～4个月）。测定时，取1%转化糖液25.00mL放入250mL容量瓶中，加入甲基红指示剂一滴，
植物体内可溶性糖含量的测定
植物体内可溶性糖含量的测定（蒽酮法） 糖类物质是构成植物体的重要组成成分之一，也是新陈代谢的主要原料和贮存物质。不同载培条件，不同成熟度都可以影响水果、蔬菜中糖类的含量。因此对水果、蔬菜中可溶性糖的测定，可以了解和鉴定水果、 蔬菜品质的高低。 一、目的： 糖类物质是构成植物体的重要组成成分之一，也是新陈代谢的主要原料和贮存物质。不同载培条件，不同成熟度都可以影响水果、蔬菜中糖类的含量。因此对水果、蔬菜中可溶性糖的测定，可以了解和鉴定水果、蔬菜品质的高低。 二、原理 糖类遇浓硫酸脱水生成糖醛或其衍生物，反应如下： 糠醛或羟甲基糠醛进一步与蒽酮试剂缩合产生蓝绿色物质，其在可见光区620nm波长处有最大吸收，且其光吸收值在一定范围内与糖的含量成正比关系。 此法可用于单糖、寡糖和多糖的含量测定，并具有灵敏度高，简便快捷，适用于微量样品的测定等优点。 三、实验材料、仪器及试剂 1．材料：植物组织叶片 2．仪器：分光光度计恒温水箱20ml具塞刻度试管（3支）漏斗100ml 容量瓶刻度试管试管架剪刀研钵
3．试剂： （1）200μg/ml标准葡萄糖：AR级葡萄糖100mg，蒸馏水溶解，定容至500ml。 （2）蒽酮试剂：1g蒽酮，用乙酸乙酯溶解，定容至50ml，棕色瓶避光处贮藏； （3）浓硫酸 四、实验方法 1．葡萄糖标准曲线的制作 取6支20ml具寒试管，编号，按下表数据配制一系列不同浓度的标准葡萄糖溶液。 在每管中均加入0.5ml蒽酮试剂，再缓慢地加入5ml浓H2SO4，摇匀后，打开试管塞，置沸水浴中煮沸10分钟，取出冷却至室温，在620nm波长下比色，测各管溶液的光密度值（O D），以标准葡萄糖含量为横坐标，光密度值为纵坐标，作出标准曲线。 2．样品中可溶性糖的提取 称取1克叶片，剪碎，置于研钵中，加入少量蒸馏水，研磨成匀浆，然后转入20ml刻度试管中，用10ml蒸馏水分次洗涤研钵，洗液一并转入刻度试管中。置沸水浴中加盖煮沸10分钟，冷却后过滤，滤液收集于100ml容量瓶中，用蒸馏水定容至刻度，摇匀备用。3．糖含量测定 用移液管吸收1ml提取液于20ml具塞刻度试管中，加1ml水和0.5ml蒽酮试剂。再缓慢加入5ml浓H2SO4（注意：浓硫酸遇水会产生大量的热！），盖上试管塞后，轻轻摇匀，再置沸水浴中10分钟（比色空白用2ml蒸馏水与0.5ml蒽酮试剂混合，并一同于沸水浴保温10分钟）。冷却至室温后，在波长620nm下比色，记录光密度值。查标准曲线上得知对应的葡萄糖含量（μg）。
实验植物组织中可溶性糖含量的测定蒽酮比色法
实验七植物体内可溶性糖含量的测定蒽酮法 一、实验目的 了解蒽酮法测定可溶性糖含量的原理；掌握分光光度计的使用 二、实验原理 糖类物质是构成植物体的重要组成成分之一,也是新陈代谢的主要原料和贮存物质;不同载培条件,不同成熟度都可以影响水果、蔬菜中糖类的含量;因此对水果、蔬菜中可溶性糖的测定,可以了解和鉴定水果、蔬菜品质的高低; 蒽酮比色定糖法是一个快速而方便的定糖方法,在强酸性条件下,蒽酮可以与游离的或多糖中存在的己糖、戊糖及己糖醛酸还原性和非还原性作用生成蓝绿色的糖醛衍生物,其颜色的深浅与糖的含量在一定范围内成正比;蒽酮也可以和其他一些糖类发生反应,但显现的颜色不同;当存在含有较多色氨酸的蛋白质时,反应不稳定,呈现红色;上述特定的糖类物质,反应较稳定;该法特点：灵敏度高,测定量少,快速方便; 三、材料、仪器及试剂 1.材料：植物种子、白菜叶、柑桔 2.仪器：分光光度计；恒温水箱；20ml具塞刻度试管3支漏斗；100ml容量瓶；刻度试管；试管架；剪刀；研钵 3.试剂 1200μg/ml标准葡萄糖：AR级葡萄糖100mg,蒸馏水溶解,定容至500ml; 2蒽酮试剂：1g蒽酮,用乙酸乙酯溶解,定容至50ml,棕色瓶避光处贮藏； 3浓硫酸 四、实验方法 1.葡萄糖标准曲线的制作 取6支20ml具寒试管,编号,按下表数据配制一系列不同浓度的标准葡萄糖溶液;在每 管中均加入0.5ml蒽酮试剂,再缓慢地加入5ml浓H 2SO 4 ,摇匀后,打开试管塞,置沸水浴中煮 沸10分钟,取出冷却至室温,在620nm波长下比色,测各管溶液的光密度值OD,以标准葡萄 2.样品中可溶性糖的提取 称取1克白菜叶,剪碎,置于研钵中,加入少量蒸馏水,研磨成匀浆,然后转入20ml刻度试管中,用10ml蒸馏水分次洗涤研钵,洗液一并转入刻度试管中;置沸水浴中加盖煮沸10分钟,冷却后过滤,滤液收集于100ml容量瓶中,用蒸馏水定容至刻度,摇匀备用; 3.糖含量测定
植物组织中可溶性糖含量测定
实验报告 课程：植物生理学实验题目：植物组织中可溶性糖含量的测定一.【实验原理】 植物的代谢活动随着植物的发育过程而不断发生着变化，碳水化合物的代谢也不例外，其含量也随之发生变化，在种子萌发过程中，在光合作用受到影响时和受到外界环境的胁迫等情况下植物可溶性糖含量都会发生变化。了解植物可溶性糖含量的变化，在生理上与实践上都有重要意义。 蒽酮比色法是常用的测定可溶性五碳糖和六碳糖的方法，糖在硫酸的作用下脱水生成糠醛，糠醛再与蒽酮作用形成一种绿色的络合物，在一定的浓度范围内颜色的深浅与糖含量成正比，可以用比色法测定。该法简便，但没有专一性，绝大部分的碳水化合物都能与蒽酮反应产生颜色。 二.【实验步骤】 1、标准曲线的绘制
2、可溶性糖的提取
3、提取液的显色及比色 三.【实验结果】 实验中测得的数据如下所示： 若以1号管调零，处理后数据如下： 作出标准曲线如下：
将y=0.261，0.269，0.247分别代入上述函数公式，得到： x=45.000，46.379，42.586； 即三样品溶液中糖浓度分别为：45.000μg／mL，46.379μg／mL，42.586μg／mL。样品中可溶性糖含量（m g·g-1）= A × c／(W × 103) 式中， A——植物样品稀释后的体积（mL）； C——提取液的含糖量（μg／mL）； W——植物组织鲜重（g）。 四.【讨论】 1、误差分析 实验中的误差来源主要有： (1)植物材料称取的误差； (2)植物样品在转移过程中的损失；
(3)最后过滤得到的提取液中尚有未除尽的醋酸铅； (4)移液管未润洗等等。 2、注意事项 (1)样品提取液的显色应与标准曲线的绘制同步； (2)比色时以蒸馏水调零； (3)醋酸铅一定要除尽； (4)在样品转移过程中，尽量减少材料的损失； (5)进行第二次过滤时要更换滤纸，并将漏斗洗净。 3、植物组织中糖的测定方法还有很多种，举例说明它们的原理和优缺点。 (1)苯酚-硫酸法 原理：糖在浓硫酸作用下，脱水生成的糠醛或羟甲基糠醛能与苯酚缩合成一种橙红色化合物，在10~100mg范围内其颜色深浅与糖的含量成正比，且在485nm 波长下有最大吸收峰，故可用比色法在此波长下测定。 苯酚法可用于甲基化的糖、戊糖和多聚糖的测定，方法简单，灵敏度高，实验时基本不受蛋白质存在的影响，并且产生的颜色稳定160min以上。 (2)蒽酮-硫酸法 多糖在浓硫酸水合产生的高温下迅速水解，产生单糖，单糖在强酸条件下与苯酚反应生成橙色衍生物。在波长490nm左右处和一定浓度范围内，该衍生物的吸收值与单糖浓度呈线性关系，从而可用比色法测定其含量。 要求所用的单糖对照品尽量采用与其多糖组成一致或为含量较高的单糖，这样测得的值才较准确。 (3)3，5-二硝基水杨酸比色法（DNS法） 在碱性条件下显色，较准确测定还原糖与总糖的含量从而求出多糖的含量，可消除还原性杂质的干扰。 (4)分光光度计测糖浓度 先用标准糖试剂用蒸馏水配成已知的标准溶液，分别在分光光度计上测定其在一定波长处的光密度。以光密度为横坐标，浓度为纵坐标，作标准曲线。然后
实验植物组织中可溶性糖含量的测定
实验方案 一、实验目的 通过实验，掌握测定萝卜品质的方法 （一）萝卜外部形态的测定 1、实验材料 取鲜样3个∕小区 直尺、蒸馏水、笔、记录本、吸水纸 2、实验方法 ．用自来水将各组萝卜洗净后，再用蒸馏水洗涤，擦干表面水分．每个小区取3个重复，用电子天平称量每株的鲜重，用直尺测量植株的茎长、茎粗、叶长，取平均值作为指标值 实验(二) 植物体内可溶性糖含量的测定（蒽酮法） 一、实验目的 了解蒽酮法测定可溶性糖含量的原理；掌握分光光度计的使用 二、实验原理 糖类物质是构成植物体的重要组成成分之一，也是新陈代谢的主要原料和贮存物质。不同载培条件，不同成熟度都可以影响水果、蔬菜中糖类的含量。因此对水果、蔬菜中可溶性糖的测定，可以了解和鉴定水果、蔬菜品质的高低。 蒽酮比色定糖法是一个快速而方便的定糖方法，在强酸性条件下，蒽酮可以与游离的或多糖中存在的己糖、戊糖及己糖醛酸（还原性和非还原性）作用生成蓝绿色的糖醛衍生物，其颜色的深浅与糖的含量在一定范围内成正比。蒽酮也可以和其他一些糖类发生反应，但显现的颜色不同。当存在含有较多色氨酸的蛋白质时，反应不稳定，呈现红色。上述特定的糖类物质，反应较稳定。该法特点：灵敏度高，测定量少，快速方便。 三、材料、仪器及试剂
1.材料：植物种子、白菜叶、柑桔 2.仪器：分光光度计；恒温水箱； 20ml具塞刻度试管（3支）漏斗；100ml容量瓶；刻度试管；试管架；剪刀；研钵 3.试剂 （1）200μg/ml标准葡萄糖：AR级葡萄糖100mg，蒸馏水溶解，定容至500ml。 （2）蒽酮试剂：1g蒽酮，用乙酸乙酯溶解，定容至50ml，棕色瓶避光处贮藏； （3）浓硫酸 四、实验方法 1.葡萄糖标准曲线的制作 取6支20ml具寒试管，编号，按下表数据配制一系列不同浓度的标准葡萄糖溶液。在每管中均加入0.5ml蒽酮试剂，再缓慢地加入5ml浓H2SO4，摇匀后，打开试管塞，置沸水浴中煮沸10分钟，取出冷却至室温，在620nm波长下比色，测各管溶液的光密度值（OD），以标准葡 2. 称取1克白菜叶，剪碎，置于研钵中，加入少量蒸馏水，研磨成匀浆，然后转入20ml刻度试管中，用10ml蒸馏水分次洗涤研钵，洗液一并转入刻度试管中。置沸水浴中加盖煮沸10分钟，冷却后过滤，滤液收集于100ml容量瓶中，用蒸馏水定容至刻度，摇匀备用。 3.糖含量测定 用移液管吸收1ml提取液于20ml具塞刻度试管中，加1ml水和0.5ml 蒽酮试剂。再缓慢加入5ml浓H2SO4（注意：浓硫酸遇水会产生大量的热！），盖上试管塞后，轻轻摇匀，再置沸水浴中10分钟（比色空白用2ml蒸馏水与0.5ml蒽酮试剂混合，并一同于沸水浴保温10分钟）。冷却至室温后，在波长620nm下比色，记录光密度值。查标准曲线上得知对应的葡萄糖含量（μg）。 五、结果计算 样品含糖量（g/100g鲜重）=查表所得糖含量（μg）×稀释倍数×100/样品重（g）×106 六、注意事项
植物组织中可溶性糖含量的测定
九植物组织中可溶性糖含量的测定 一．实验目的 学习可溶性糖测定的蒽酮比色法 二．实验原理 植物在个体发育的各个时期，代谢活动也发生相应的变化，碳水化合物的代谢也不例外其含量也随之发生变化。了解可溶性糖含量的变化，在生理上和实践上都有重要的意义。本实验采用蒽酮比色法测定可溶性糖的含量。糖在硫酸的作用下生成糠醛，糠醛再与蒽酮作用，形成一种绿色的络合物.在低浓度时，625nm 的OD值与糖含量成正相关。该实验方法简便，但没有专一性，对于绝大部分的碳水化合物都能与蒽酮反应，产生颜色。 三．实验用品 721型分光光度计分析天平研钵恒温水浴锅烧杯刻度试管大试管活性炭移液管漏斗酒精（80%） 葡萄糖标准溶液：称取已在80℃烘箱中烘至恒重葡萄糖100mg,配制成 500mL溶液，即得每mL含糖为200μg的标准溶液。 蒽酮试剂：称取1g经过纯化的蒽酮，溶解于1000mL稀硫酸中即得。稀硫酸溶液由760mL浓硫酸（比重1.84）稀释成1000mL而成。四．实验步骤 1.可溶性糖的提取 称取0.5g的新鲜植物（青菜）叶片，于研钵中加80%酒精4ml，仔细研磨成匀浆，倒入离心管内，置于80℃水浴中不断搅拌30min，离心10分钟(5000转/min)，收集上清液于10ml的刻度试管中，其残渣加2ml80%酒精重复提1次，合并上清液。在上清液中加0.5g活性炭，80℃水浴脱色30min,定容至10ml，过滤后取滤液(稀释10倍或20倍后)测定。 2.显色及比色 吸取上述糖提取液1mL，放入一干洁的试管中，加蒽酮试剂5mL混合之，于沸水浴中煮沸10分钟，取出冷却，然后于分光光度计上进行测定，波长为625nm，测得吸光度。从标准曲线上查得滤液中得糖含量（或经直线回归公式计算），然后再行计算样品中含糖百分数。
植物组织中可溶性糖含量的测定实验报告
植物组织中可溶性糖含量的测定实验报告 10科四谭晓东20102501024 一、实验目的 掌握蒽酮比色法测定可溶性糖含量的提取和方法原理；掌握分光光度计中标准曲线制作 的使用程序。 二、实验原理 植物组织中的糖（包括还原糖和非还原糖）可以与浓硫酸反应生成糠醛，糠醛和蒽酮反应可以生成蓝绿色络合物，在625nm处有最大光吸收值。 三、实验材料 大白菜叶片与叶柄 四、实验步骤 1. 可溶性糖的提取 大白菜叶柄和叶片各0.5g鲜重，研磨+10ml 80%乙醇 80 度 水 浴 30mi n 过滤后定容至25ml 葡萄糖浓度 020*********（ug/ml） 标准匍萄糖液吸 00.10.20.30.40.5取量（ml） 蒸馏水（ml）10.90.80.70.60.5 蒽酮（ml）5 混匀，沸水浴10min，冷却后在625nm下比色 0.1ml提取液+0.9ml蒸馏水 冷却后对照标准曲线比色
五、实验结果 1.葡萄糖标准曲线 标准方程：y=184.6x-1.973 R=0.9940 2. 根据标准曲线测到，叶片的吸光度是0.249，葡萄糖浓度为4 3.96ug/ml，含糖量为 13.82% ;叶柄的吸光度为0.276，葡萄糖浓度为49.01ug/ml，含糖量为15.41% 六、分析与讨论 植物体内的可溶性糖和淀粉均是光合作用产物。可溶性糖以蔗糖为主，是植物糖类运输 的主要形式，其次是葡萄糖、果糖、麦芽糖、戊糖和糖苷等。 可溶性糖在硫酸作用下生成糖醛或羟甲基糠醛化合物，糖醛或羟甲基糠醛可与蒽酮作用形成蓝绿色络合物（糖醛衍生物），在一定波长范围内，其颜色的深浅与糖含量有定量关系，在625 nm波长下的吸光值与可溶性糖含量成正比。由于蒽酮与可溶性糖反应的呈色强度随时间变化，故必须在反应后立即在同一时间内比色。该实验方法简便，灵敏度高，可溶性糖 含量在30卩g左右就能进行测定，所以可作为测定微量可溶性糖之用。 该法的特点是几乎可以测定所有的碳水化合物，不但可以测定戊糖与己糖含量，而且可 以测所有寡糖类和多糖类，其中包括淀粉、纤维素等（因为反应液中的浓硫酸可以把多糖水解成单糖而发生反应），所以用蒽酮法测出的碳水化合物含量，实际上是溶液中全部可溶性碳 水化合物总量.在没有必要细致划分各种碳水化合物的情况下，用蒽酮法可以一次测出总量，省去许多麻烦，因此，有特殊的应用价值?但在测定水溶性碳水化合物时，则应注意切勿将样 品的未溶解残渣加入反应液中，不然会因为细胞壁中的纤维素、半纤维素等与蒽酮试剂发生反应而增加了测定误差.此外，不同的糖类与蒽酮试剂的显色深度不同，果糖显色最深，葡萄糖次之，半乳糖、甘露糖较浅，五碳糖显色更浅，故测定糖的混合物时，常因不同糖类的比例不同造成误差，但测定单一糖类时，则可避免此种误差。
植物组织中可溶性糖与淀粉的测定
植物组织中可溶性糖与淀粉的测定 一、蒽酮法测定可溶性糖 仪器与用具 分光光度计；电炉；铝锅；20ml刻度试管；刻度吸管5ml 1支,1ml 2支；记号笔；吸水纸适量; 试剂 1．蒽酮乙酸乙酯试剂：取分析纯蒽酮1g,溶于50ml乙酸乙酯中,贮于棕色瓶中,在黑暗中可保存数星期,如有结晶析出,可微热溶解; 2．浓硫酸比重; 方法 1．标准曲线的制作 取20ml刻度试管11支,从0～10分别编号,按表24-1加入溶液和水; 表1 各试管加溶液和水的量 然后按顺序向试管内加入1ml 9%苯酚溶液,摇匀,再从管液正面快速加入5ml浓硫酸,摇匀;比色液总体积为8ml,在恒温下放置30min,显色;然后以空白为参比,在485nm波长下比色测定,以糖含量为横坐标,光密为纵坐标,绘制标准曲线,求出标准直线方程; 按表1加入标准的蔗糖溶液,然后按顺序向试管中加入蒽酮乙酸乙酯试剂和5ml浓硫酸,
充分振荡,立即将试管放入沸水浴中,逐管均准确保温1min,取出后自然冷却至室温,以空白作参比,在630nm 波长下测其光密度,以光密度为纵坐标,以糖含量为横坐标,绘制标准曲线,并求出标准线性方程; 2．可溶性糖的提取 取新鲜植物叶片,擦净表面污物,剪碎混匀,称取～0.30g,共3份,或干材料;分别放入3支刻度试管中,加入5～10ml 蒸馏水,塑料薄膜封口,于沸水中提取30min 提取2次,提取液过滤入25ml 容量瓶中,反复冲洗试管及残渣,定容至刻度; 3．显色测定 吸取样品提取液于20ml 刻度试管中重复2次,加蒸馏水,以下步骤与标准曲线测定相同,测定样品的光密度; 4．计算可溶性糖的含量 可溶性糖含量mg/g=310⨯⨯⨯ W n a V C 式中 C －标准方程求得糖量μg ； a －吸取样品液体积ml ； V －提取液量ml ； n －稀释倍数； W －组织重量g; 四、淀粉含量的测定 仪器与用具 电子天平；容量瓶：100ml×4,50ml×2；漏斗；小试管若干支；电炉；刻度吸管×1,×3,5ml×4；分光光度计；记号笔;
实验24 植物组织中可溶性糖与淀粉的测定
实验24 植物组织中可溶性糖与淀粉的测定 植物体内的碳素营养状况以及农产品的品质性状，常以可溶性糖和淀粉的含量作为重要指标，本实验学习几种定量测定可溶性糖和淀粉的方法。 一、苯酚法测定可溶性糖 【原理】 植物体内的可溶性糖主要指能溶于水及乙醇的单糖和寡聚糖。苯酚法测定可溶性糖的原理是：糖在浓硫酸作用下，脱水生成的糠醛或羟甲基糠醛能与苯酚缩合成一种橙红色化合物，在10～100μg范围内其颜色深浅与糖的含量成正比，且在485nm波长下有最大吸收峰，故可用比色法在此波长下测定。苯酚法可用于甲基化的糖、戊糖和多聚糖的测定，方法简单，灵敏度高，基本不受蛋白质存在的影响，并且产生的颜色稳定160min以上。 【仪器与用具】 分光光度计；电炉；铝锅；20ml刻度试管；刻度吸管5ml 1支，1ml 2支；记号笔；吸水纸适量。 【试剂】 1．90%苯酚溶液称取90g苯酚（AR），加蒸馏水10ml溶解，在室温下可保存数月； 2．9%苯酚溶液取3ml 90%苯酚溶液，加蒸馏水至30ml，现配现用； 3．浓硫酸（比重1.84）； 4．1%蔗糖标准液将分析纯蔗糖在80℃下烘至恒重，精确称取1.000g。加少量水溶解，移入100ml容量瓶中，加入0.5ml浓硫酸，用蒸馏水定容至刻度； 5．100μg/ml蔗糖标准液精确吸取1%蔗糖标准液1ml加入100ml容量瓶中，加水定容。 【方法】 1．标准曲线的制作 取20ml刻度试管11支，从0～10分别编号，按表24-1加入溶液和水。 表24-1 各试管加溶液和水的量 然后按顺序向试管内加入1ml 9%苯酚溶液，摇匀，再从管液正面快速加入5ml浓硫酸，摇匀。比色液总体积为8ml，在恒温下放置30min，显色。然后以空白为参比，在485nm波长下比色测定，以糖含量为横坐标，光密为纵坐标，绘制标准曲线，求出标准直线方程。 2．可溶性糖的提取 取新鲜植物叶片，擦净表面污物，剪碎混匀，称取0.10～0.30g，共3份，或干材料。分别放入3支刻度试管中，加入5～10ml蒸馏水，塑料薄膜封口，于沸水中提取30min（提取2次），提取液过滤入25ml容量瓶中，反复冲洗试管及残渣，定容至刻度。 3．测定吸取0.5ml样品液于试管中（重复2次），加蒸馏水1.5ml，同制作标准曲线
植物中可溶性糖含量的测定
在作物的碳素营养中，作为营养物质主要是指可溶性糖和淀粉。它们在营养中的作用主要有：合成纤维素组成细胞壁；转化并组成其他有机物如核苷酸、核酸等；分解产物是其他许多有机物合成的原料，如糖在呼吸过程中形成的有机酸，可作为 NH 3 的受体而转化为氨基酸；糖类作为呼吸基质，为作物的各种合成过程和各种生命活动提供了所需的能量。由于碳水化合物具有这些重要的作用，所以是营养中最基本的物质，也是需要量最多的一类。 Ⅰ 蒽酮法测定可溶性糖 一、原理 糖在浓硫酸作用下，可经脱水反应生成糠醛或羟甲基糠醛，生成的糠醛或羟甲基糠醛可与蒽酮反应生成蓝绿色糠醛衍生物，在一定范围内，颜色的深浅与糖的含量成正比，故可用于糖的定量测定。 该法的特点是几乎可以测定所有的碳水化合物，不但可以测定戊糖与己糖含量，而且可以测所有寡糖类和多糖类，其中包括淀粉、纤维素等（因为反应液中的浓硫酸可以把多糖水解成单糖而发生反应），所以用蒽酮法测出的碳水化合物含量，实际上是溶液中全部可溶性碳水化合物总量。在没有必要细致划分各种碳水化合物的情况下，用蒽酮法可以一次测出总量，省去许多麻烦，因此，有特殊的应用价值。但在测定水溶性碳水化合物时，则应注意切勿将样品的未溶解残渣加入反应液中，不然会因为细胞壁中的纤维素、半纤维素等与蒽酮试剂发生反应而增加了测定误差。此外，不同的糖类与蒽酮试剂的显色深度不同，果糖显色最深，葡萄糖次之，半乳糖、甘露糖较浅，五碳糖显色更浅，故测定糖的混合物时，常因不同糖类的比例不同造成误差，但测定单一糖类时，则可避免此种误差。 糖类与蒽酮反应生成的有色物质在可见光区的吸收峰为 620 nm ，故在此波长下进行比色。 二、实验材料、试剂与仪器设备 （一）实验材料 任何植物鲜样或干样。 （二）试剂 1. 80 ％乙醇。 2. 葡萄糖标准溶液（ 100 μg/mL ）：准确称取 100 mg 分析纯无水葡萄糖，溶于蒸馏水并定容至 100 mL ，使用时再稀释 10 倍（100 μg/mL ）。 3 ．蒽酮试剂：称取 g 蒽酮，溶于 80% 浓硫酸（将 98% 浓硫酸稀释，把浓硫酸缓缓加入到蒸馏水中） 1000 mL 中，冷却至室温，贮于具塞棕色瓶内，冰箱保存，可使用 2 ～ 3 周。 （三）仪器设备 分光光度计，分析天平，离心管，离心机，恒温水浴，试管，三角瓶，移液管（ 5 、 1 、mL ），剪刀，瓷盘，玻棒，水浴锅，电炉，漏斗，滤纸。 三、实验步骤 1. 样品中可溶性糖的提取称取剪碎混匀的新鲜样品～ g （或干样粉末 5 ～ 100 mg ），放入大试管中，加入 15 mL 蒸馏水，在沸水浴中煮沸 20 min ，取出冷却，过滤入100 mL 容量瓶中，用蒸馏水冲洗残渣数次，定容至刻度。 2. 标准曲线制作取 6 支大试管，从 0 ～ 5 分别编号，按表 24-1 加入各试剂。 表 24-1 蒽酮法测可溶性糖制作标准曲线的试剂量
植物组织中可溶性糖含量测定方案
植物组织中可溶性糖含量的测定—蒽酮比色法 一、原理 糖类在浓硫酸作用下经脱水反应生成糠醛或羟甲基糖醛，生成的糠醛或羟甲基糖醛与蒽酮(C14H10O)脱水缩合，形成糠醛的衍生物，呈蓝绿色。该物质在630 nm处有最大吸收，在150 µg/mL范围内，其颜色的深浅与可溶性糖含量成正比。 该方法的特点是几乎可以测定所有的糖类（包括单糖：戊糖、已糖；多糖：蔗糖、淀粉、纤维素），所以用该方法测出的糖类含量是溶液中全部可溶性糖类含量。 二、仪器、试剂和材料 1.仪器：电子天平，电热恒温水浴锅，分光光度计，容量瓶，刻度吸管等 2.试剂： (1) 蒽酮浓硫酸试剂：1.0 g蒽酮溶于100 mL浓H2SO4中，贮藏于棕色瓶中（当 日配置） (2) 浓硫酸 3.材料：草莓新鲜果实 三、实验步骤 1、标准曲线的制作 1、1 1 %蔗糖标准液：将分析纯蔗糖在80℃下烘干至恒重，精确称取1.000g。加蒸馏水溶解，转入100mL容量瓶中，用蒸馏水定容至刻度。 1、2 100ug/mL蔗糖标准液：精确吸取1%蔗糖标准液1mL至100mL容量瓶中，加水至刻度。取10mL刻度试管11支，从0~10分别编号，按下表一次加入蔗糖标准液和蒸馏水。 1、3 按顺序依次向试管中加入5mL蒽酮浓硫酸试剂，充分振荡，立即将试管放入96℃沸水浴中，每管均保温3min，取出后流水冷却后取出至室温下放置15min，以空白作参比，在630 nm处测其吸光度，以吸光度为横坐标，以糖浓度为纵坐标，绘制标准曲线，并求出标准线性方程。 2、可溶性糖提取称取具有代表性样品的可食部分100 g，放人组织捣碎机中，迅速捣成匀浆（或研磨），称取0.50 g浆状样品，共三份。分别放入3支试管中，加入10 mL蒸馏水，塑料薄膜封口，于沸水中提取30min(提取2次)，提取液过滤到50 mL容量
植物组织中可溶性糖和
实验十三、植物组织中可溶性糖和 淀粉含量的测定 ——硫酸蒽酮法 一、实验目的和意义 可溶性糖和淀粉是粮食作物、蔬菜和水果中C素营养的主要营养物质。糖类作为呼吸基质，为植物的各种合成过程和各种生命活动提供所需的能量，因此通过测定植物组织中可溶性糖和淀粉的含量可以在一定程度上了解植物各组织器官中的营养状况。 测定植物组织中可溶性糖的方法有苯酚法、蒽酮法；测定植物组织中淀粉含量方法有酮法、双波长法、农业部法和国标法。 二、实验方法原理（硫酸蒽酮法） 淀粉是由葡萄糖残基组成，在酸性条件下加热使其水解成葡萄糖，然后在浓硫酸的作用下，使单糖脱水生成糠醛类化合物，利用蒽酮试剂与糠醛化合物的显色反应，即可进行比色测定。 1 实验方案 高氯酸（2次提取）蒽酮试剂 样品中淀粉葡萄糖 80%乙醇蒽酮试剂 样品可溶性糖浸提液 2 显色原理 可溶性糖类遇浓硫酸，就会脱水形成羟甲基糠醛，羟甲基糠醛与蒽酮再脱水，形成蓝绿色的糠醛衍生物，其颜色深浅与含糖量高低成正相关。该蓝绿色在620nm波长处有最大吸收值，故可进行比色测定。 己糖羟甲基糠醛糠醛衍生物（蓝绿色） 蒽酮 （本法适于测定己糖、蔗糖和可溶性淀粉） 3 仪器药品 （1）仪器： 分光光度计；天平（万分之一）；离心管（4000转/分）；恒温水浴；容量瓶；试管（25*200mm）；移液管（5、1、0.5ml）；量筒；水浴锅；电炉；漏斗；滤纸。
（2）药品： 80%乙醇；标准葡萄糖（100ug.l-1）；准确称取100mg分析纯无水葡萄糖，溶于蒸馏水并定容至100ml，使用时再稀释10倍；蒽酮试剂：称取200mg蒽酮，溶于100ml浓硫酸（比重1.84）中，冷却至室温，贮存在棕色瓶内，当天配制当天使用；9.2mol.l-1和4.6mol.l-1高氯酸。 4 测定方法 （1）样品中可溶性糖提取 对于淀粉含量高的样品，要用80%的乙醇提取。称取0.1g粉碎过100目筛的烘干样品，置于10ml离心管中，加入6-7ml 80%乙醇，在80℃水浴中提取30分钟，取出离心（3000转/分）5分钟，收集上清夜。重复提取以上两次（各10分钟）同样离心，收集三次上清液合并于25ml容量瓶，以80%乙醇定容，供可溶性糖的测定。 （2）样品中淀粉提取 向沉淀中加水2ml，搅拌均匀，置于80℃水浴中使残留的乙醇蒸发，再放入沸水浴中糊化15分钟。冷却后，将离心管放在冰水浴中，加入2ml冷的9.2mol.L-1高氯酸，不时搅拌，提取15分钟后加水4ml，混匀离心10分钟，上清夜倾入50ml容量瓶。再向沉淀中加入2ml 4.6mol.L-1 高氯酸，搅拌提取15分钟后加入水6ml，混匀离心10分钟，收集上清夜于容量瓶。然后用水洗沉淀1-2次，离心，合并离心液于50ml容量瓶用蒸馏水定容供测淀粉用。（3）绘制标准曲线 取6支大试管，分别按下表加入各试剂： 给各试管加蒽酮试剂时要求在10秒钟内加完，快速摇动2-3秒钟，混匀后置于试管架上室温（18-30℃）下显色10-15分钟冷却后，在620nm波长下测定光密度，以光密度为纵坐标以含糖量为横坐标绘制标准曲线。
植物组织中可溶性糖含量的测定
植物组织中可溶性糖含量的测定 素营养中，作为营养物质主要是指可溶性糖和淀粉。它们在营养中的作用主要有：合成纤维素组成细胞壁；转化并组成其他有机物如核苷酸、核酸等；分解产物是其他许多有机物合成的原料，如糖在呼吸过程中形成的有机酸，可作为NH3 的受体而转化为氨基酸；糖类作为呼吸基质，为作物的各种合成过程和各种生命活动提供了所需的能量。由于碳水化合物具有这些重要的作用，所以是营养中最基本的物质，也是需要量最多的一类。 莅I蒽酮法测定可溶性糖 袅一、原理 莂糖在浓硫酸作用下，可经脱水反应生成糠醛或羟甲基糠醛，生成的糠醛或羟甲基糠醛可与蒽酮反应生成蓝绿色糠醛衍生物，在一 定范围内，颜色的深浅与糖的含量成正比，故可用于糖的定量测定。 芈该法的特点是几乎可以测定所有的碳水化合物，不但可以测定戊糖与己糖含量，而且可以测所有寡糖类和多糖类，其中包括淀 粉、纤维素等（因为反应液中的浓硫酸可以把多糖水解成单糖而发生反应）， 所以用蒽酮法测出的碳水化合物含量，实际上是溶液中全部可溶性碳水化合物总量。在没有必要细致划分各种碳水化合物的情况 下，用蒽酮法可以一次测出总量，省去许多麻烦，因此，有特殊的应用价值。但在测定水溶性碳水化合物时，则应注意切勿将样品 的未溶解残渣加入反应液中，不然会因为细胞壁中的纤维素、半纤维素等与蒽酮试剂发生反应而增加了测定误差。此外，不同的糖 类与蒽酮试剂的显色深度不同，果糖显色最深，葡萄糖次之，半乳糖、甘露糖较浅，五碳糖显色更浅，故测定糖的混合物时，常 因不同糖类的比例不同造成误差，但测定单一糖类时，则可避免此种误差。 莅糖类与蒽酮反应生成的有色物质在可见光区的吸收峰为620nm,故在此波长下进行比色。 肂二、实验材料、试剂与仪器设备 蝿（一）实验材料 肇任何植物鲜样或干样。 蒅（二）试剂 蒃1.80 ％乙醇。 蒁2.葡萄糖标准溶液（100卩g/mL）:准确称取100mg分析纯无水葡萄糖，溶于蒸馏水并定容至100mL, 使用时再稀释10倍 （100卩g/mL ）。
可溶性糖含量的测定
可溶性糖含量的测定 实验九植物组织中可溶性糖含量的测定 2005级生物科学(1)班赵银锁(40508010) 一(实验目的 学习可溶性糖测定的蒽酮比色法 二(实验原理 植物在个体发育的各个时期，代谢活动也发生相应的变化，碳水化合物的代谢也不例外其含量也随之发生变化。了解可溶性糖含量的变化，在生理上和实践上都有重要的意义。本实验采用蒽酮比色法测定可溶性糖的含量。糖在硫酸的作用下生成糠醛，糠醛再与蒽酮作用，形成一种绿色的络合物.在低浓度时，625nm的OD值与糖含量成正相关。该实验方法简便，但没有专一性，对于绝大部分的碳水化合物都能与蒽酮反应，产生颜色。三(实验用品 721型分光光度计分析天平研钵恒温水浴锅烧杯刻度试管大试管活性炭移液管漏斗酒精(80%) 葡萄糖标准溶液:称取已在80?烘箱中烘至恒重葡萄糖100mg,配制成500mL溶液，即得每 mL含糖为200μg的标准溶液。 蒽酮试剂:称取1g经过纯化的蒽酮，溶解于1000mL稀硫酸中即得。稀硫酸溶液由760mL 浓硫酸(比重1.84)稀释成1000mL而成。 四(实验步骤 1.可溶性糖的提取 称取0.5g的新鲜植物叶片，于研钵中加80%酒精4ml，仔细研磨成匀浆，倒入离心管内，置于80?水浴中不断搅拌30min，离心10分钟(5000转/min)，收集上
清液于10ml的刻度试管中，其残渣加2ml80%酒精重复提1次，合并上清液。在上清液中加0.5g活性炭，80?水浴脱色30min,定容至10ml，过滤后取滤液(稀释10倍或20倍后)测定。 2.显色及比色 吸取上述糖提取液1mL，放入一干洁的试管中，加蒽酮试剂5mL混合之，于沸水浴中煮沸10分钟，取出冷却，然后于分光光度计上进行测定，波长为625nm，测得吸光度。从标准曲线上查得滤液中得糖含量(或经直线回归公式计算)，然后再行计算样品中含糖百分数。 3.绘制标准曲线 1 取标准葡萄糖溶液将其稀释成一系列不同浓度的溶液，浓度分别为每mL含糖0、5、 10、20、40、60、80μg。按上述方法分别测得其吸光度，然后绘制A625,糖浓度曲线，或 进行直线回归求得直线方程。 试剂(ml) 管号 1 2 3 4 5 6 葡萄糖标准液 0 0.05 0.1 0.2 0.3 0.4 80%酒精 1.0 0.95 0.9 0.8 0.7 0.6 蒽酮-硫酸试剂 5 5 5 5 5 5 葡萄糖浓度(ul/ml) 0 10 20 40 60 80 4.计算样品中含糖量, 设V为植物样品稀释后的体积(m L);C为提取液的含糖量(μg/ m L);W为植物组织鲜重 (g)。 则得计算式如:可溶性糖含量,,( C×V)/(W×106) ×100%
植物组织中可溶性糖与淀粉的测定
植物组织中可溶性糖与淀粉(de)测定 一、蒽酮法测定可溶性糖 仪器与用具 分光光度计；电炉；铝锅；20ml 刻度试管；刻度吸管5ml1支,1ml2支；记号笔；吸水纸适量. 试剂 1．蒽酮乙酸乙酯试剂：取分析纯蒽酮1g,溶于50ml 乙酸乙酯中,贮于棕色瓶中,在黑暗中可保存数星期,如有结晶析出,可微热溶解. 2．浓硫酸（比重1.84）. 方法 1．标准曲线(de)制作 取20ml 刻度试管11支,从0～10分别编号,按表24-1加入溶液和水. 表1各试管加溶液和水(de)量 然后按顺序向试管内加入1ml9%苯酚溶液,摇匀,再从管液正面快速加入5ml 浓硫酸,摇匀.比色液总体积为8ml,在恒温下放置30min,显色.然后以空白为参比,在485nm 波长下比色测定,以糖含量为横坐标,光密为纵坐标,绘制标准曲线,求出标准直线方程. 按表1加入标准(de)蔗糖溶液,然后按顺序向试管中加入0.5ml 蒽酮乙酸乙酯试剂和5ml 浓硫酸,充分振荡,立即将试管放入沸水浴中,逐管均准确保温1min,取出后自然冷却至室温,以空白作参比,在630nm 波长下测其光密度,以光密度为纵坐标,以糖含量为横坐标,绘制标准曲线,并求出标准线性方程. 2．可溶性糖(de)提取 取新鲜植物叶片,擦净表面污物,剪碎混匀,称取0.10～0.30g,共3份,或干材料.分别放入3支刻度试管中,加入5～10ml 蒸馏水,塑料薄膜封口,于沸水中提取30min （提取2次）,提取液过滤入25ml 容量瓶中,反复冲洗试管及残渣,定容至刻度. 3．显色测定吸取样品提取液0.5ml 于20ml 刻度试管中（重复2次）,加蒸馏水1.5ml,以下步骤与标准曲线测定相同,测定样品(de)光密度. 4．计算可溶性糖(de)含量 可溶性糖含量(mg/g)= 310⨯⨯⨯ W n a V C 式中C －标准方程求得糖量(μg)； a －吸取样品液体积(ml)； V －提取液量(ml)； n －稀释倍数； W －组织重量（g ）.
植物组织中可溶性糖与淀粉的测定
精心整理 植物组织中可溶性糖与淀粉的测定 一、蒽酮法测定可溶性糖 【仪器与用具】 分光光度计；电炉；铝锅；20ml 刻度试管；刻度吸管5ml1支，1ml2支；记号笔；吸水纸适量。 【试剂】 1．蒽酮乙酸乙酯试剂：取分析纯蒽酮1g ，溶于50ml 乙酸乙酯中，贮于棕色瓶中，在黑暗中可保存数星期，如有结晶析出，可微热溶解。 2．浓硫酸（比重1.84）。 浓硫酸，次），提，以下步骤与标准曲线测定相同，测定样品的光密度。 4．计算可溶性糖的含量 可溶性糖含量(mg/g)=3 10⨯⨯⨯ W n a V C 式中C －标准方程求得糖量(μg)； a －吸取样品液体积(ml)； V －提取液量(ml)； n －稀释倍数； W －组织重量（g ）。
精心整理 四、淀粉含量的测定 【仪器与用具】 电子天平；容量瓶：100ml×4，50ml×2；漏斗；小试管若干支；电炉；刻度吸管0.5ml×1，2.0ml×3，5ml×4；分光光度计；记号笔。 【试剂】 （1）浓硫酸（比重1.84）； （2）9.2mol/LHClO ； 4 （3）2%蒽酮试剂：同蒽酮法（或9%苯酚，同方法一）； （4）淀粉标准液：准确称取100mg纯淀粉，放入100ml容量瓶中，加60～70ml热蒸馏水，放入沸水浴中煮沸0.5h，冷却后加蒸馏水稀释至刻度，则每ml含淀粉1mg，吸取此液5.0ml，加蒸 1 2 15min，再加入 3 以0.9 式中 V－提取液总量（ml）； a－显色时取液量（ml）； W－样品重（g）。 注：淀粉水解完全度试验样品测定中可同时作1份用于淀粉水解完全度检验的样品，在酸解过 -KI溶液，显微镜下观察，滤后，将其残渣加上2ml水，搅拌均匀，吸2滴于白瓷盘上，加2滴I 2 若出现紫蓝色颗粒，证明水解不完全，其正式测试样品需再加高氯酸水解，直至不出现蓝紫色为止。