人肝癌细胞株HepG2 和BEL 一7402 对放射敏感性的体外实验研究
实验室常用细胞株
ATCC? Number: CRL-2865? Price: $329.00 Designations: T47D-KBluc Depositors: VS Wilson Biosafety Level: 1 Shipped: frozen Medium & Serum: See Propagation Growth Properties: adherent Organism: Hom o sapi ens (human) Morpholog y: epithelial Source: Organ: mammar y gland; breas t Tissue: duct Disease: ductal carcinoma Derived from metastatic site: pleural effusion Cell T y p e: epithelialtransfected with reporter plas mid Permits/F orms: In addition to the MTA menti oned above, other ATCC and/or regulatory per mits may be required for the transfer of this ATCC material. Any one purchasing ATCC material is ultimatel y r esponsible for obtaining the permits. Please click here for information regarding the s pecific requirements for shipment to your loc ation. Reverse Transcript: N Age: 54 years adult HeLa Mar kers: N
HuH-7 人肝癌细胞
HuH-7 人肝癌细胞 Catalogue No.: C165 Product Format: a T25 flask Culture Properties：贴壁 Complete Growth Medium:89%H-DMEM+10%FBS+1%双抗 Atmosphere: air, 95%; carbon dioxide (CO2), 5% Application:Cells and cancer research NOTE: FOR RESEARCH USE ONLY. Components Operation steps for cell culture 1.吸走用于培养基，加入3-5mL PBS后轻轻晃动培养瓶润洗细胞； 2.吸干净PBS后加入1mL 0.25%胰酶-0.53mM EDTA，轻轻摇晃培养皿使胰酶 浸没细胞表面，培养瓶放37度培养箱消化； （细胞对于消化比较敏感，消化过度会严重影响细胞状态，导致细胞传代死亡漂浮或者传代后不长。细胞消化到细胞间隙变大但未脱落，可以轻轻吹下时即可终止，禁止消化到细胞完全漂浮。混匀细胞时尽量轻柔，不要吹出大量气泡。） 3.加入6-8ml完全培养基终止消化，轻轻吹下细胞混匀； 4.将混匀的细胞1000rpm（约150g）离心3min，弃上清，再用新鲜培养基 重悬37度培养箱继续培养； 传代比例: 不同细胞生长速度不一，具体传代比例视细胞生长速度而定，大部分细胞适用1:3-1:4传代，生长较慢的细胞可以1:2传代。 Cell cryopreservation 1.冻存液：92%完全培养基+8%DMSO（可以根据实验室条件自行选择） 2.降温步骤：4度10min，-20度2h，-80过夜后液氮保存。
常见细胞株中文名称及缩写
人类组织正常及永生化细胞 英文名中文名称 293E E转化人胚肾293细胞（B类） 293ET ET转化人胚肾293细胞（B类） 293KB KB转化人胚肾293细胞（B类） 293T人胚肾T细胞 A7d野生型人 C-KIT受体细胞株（B类）AMS3(SCF3)人干细胞因子单克隆抗体细胞株(B类) APP-PS1人APP-PS1双基因转染细胞株(HEK293)(B类) FC33ASP2人胚胎肾细胞转化细胞 FIP293FIP293(来源于HEK293)(B类) HEK-293人胚肾细胞 CCC-HPF-1人胚肺二倍体细胞 CCC-ESF-1人胚胎皮肤成纤维细胞HFF(ATCC? SCRC-1041?)人前皮肤成纤维细胞 HFSF人胚胎眼巩膜成纤维细胞 HFTF人胚胎眼Tenon's囊成纤维细胞 HK-2人肾小球上皮细胞 HKC人胚肾上皮细胞 HSF人皮肤成纤维细胞 MRC-5人胚肺成纤维细胞 WISH人羊膜细胞 CCC-HEL-1人胚胎肝正常细胞 CCC-HEK-1人胚胎肾正常细胞 CCC-HHM-2人胚胎心肌组织来源细胞 CCC-HPE-2人胚胎胰腺组织来源细胞 CCC-HB-2人胚胎膀胱组织来源细胞 CCC-HIE-2人胚胎肠粘膜细胞 CCC-HBE-2人胚胎气管细胞 动物组织正常及永生化细胞 3T3swiss swiss鼠胚胎成纤维细胞 3T3L1小鼠胚胎成纤维细胞(前脂肪) 3T6swiss小鼠胚胎成纤维细胞 7WCY1.0人APP-PS1双基因转染细胞株(CHO)(B类) 7WD10人APP基因转染细胞株(CHO)(B类) 7WML6.0人APP-PSI（M146L)双基因转染细胞株（CHO)(B类） 7WPS1APP-PS1双基因转染细胞株（CHO）（B类） BaF3小鼠原B细胞（B类） BHK-21金黄地鼠肾 BS-C-1非注洲绿猴肾 C2C12小鼠成肌细胞 C3H10T1/22A6小鼠成纤维细胞 CH0dhfr二氢叶酸缺陷型中国仓鼠卵巢细胞 CHO-K1中国仓鼠卵巢细胞
Rab27A和Rab27B在4种不同人肝癌细胞株中的表达
龙源期刊网 https://www.360docs.net/doc/ef9801970.html, Rab27A和Rab27B在4种不同人肝癌细胞株中的表达 作者：刘鼎刘建生 来源：《中国当代医药》2015年第16期 [摘要] 目的检测Rab27A与Rab27B在3种人肝癌细胞系及1种永生化肝细胞系中的表达情况，初步研究Rab27A与Rab27B表达对肝癌细胞生物学特性的影响。方法采用RT-PCR及Western blot技术，检测Rab27A与Rab27B mRNA在3种人肝癌癌细胞HepG2、Huh-7、Li-7及1种永生化肝细胞系HL-7702中的表达。结果 Rab27A与Rab27B在肝癌细胞系及原发性肝癌组织中存在差异性表达。Rab27A mRNA在3种人肝癌细胞系中表达明显强于1种人永生化肝细胞系；Rab27B mRNA在3种人肝癌及1种人永生化肝细胞系中均明显表达但无显著差异。结论 Rab27A与Rab27B与原发性肝癌密切相关，可以为临床采取合理诊断措施提供有效的参考依据。 [关键词] Rab27A；Rab27B；肝细胞癌；RT-PCR；Western blot [中图分类号] R735 [文献标识码] A [文章编号] 1674-4721（2015）06（a）-0004-04 Expression of Rab27A and Rab27B in the four different hepatocellular carcinoma LIU Ding LIU Jian-sheng▲ The First Clinical Medical College of Shanxi Medical University，Taiyuan 030001，China [Abstract] Objective To investigate the expression of Rab27A and Rab27B in 3 human HCC lines and the immortalized hepatic cell line and its effect on biology characteristics of the cells. Methods The mRNA expression of Rab27A and Rab27B was detected by RT-PCR，and Western-blot in 3 human HCC lines of HepG2，Huh-7，Li-7 and the immortalized hepatic cell line of HL-7702. Results Rab27A and Rab27B were differentially expressed in cell lines and primary HCC tumors.The expression of Rab27A in 3 human HCC line was significantly better than that expressed in the immortalized hepatic cell line；the mRNA of Rab27B in 3 human HCC lines and the immortalized hepatic cell line were significantly expression but there was no significantly difference. Conclusion Rab27A and Rab27B expression are closely correlated HCC，it can provide the clinical reasonable diagnostic measures as valuable effective reference basis. [Key words] Rab27A；Rab27B；Hepatocellular carcinoma；RT-PCR；Western blot 肝细胞癌（hepatocellular carcinoma，HCC）是消化系统最常见的恶性肿瘤之一，具有极高的侵袭性和转移性，出现典型症状时，往往已经为晚期。目前与HCC进展相关的因子包括癌
原发性肝癌的放射治疗
原发性肝癌的放射治疗 ——摘自南京解放军第八一医院肿瘤内科刘秀峰主任医师 放疗是恶性肿瘤治疗的三大基本手段之一，但在20世纪90年代以前，由于放疗效果较差，且对肝脏损伤较大，因此原发性肝癌患者较少接受放疗。20世纪90年代中期之后，现代的放疗技术：三维适形放疗(3-dimensional conformal radiation therapy, 3DCRT)和调强适形放疗(intensity modulated radiation therapy, IMRT)等技术逐渐成熟，为放疗在肝癌治疗中的应用提供了新的机会。国内外学者已经陆续报道了采用3DCRT和IMRT放疗技术治疗不能手术切除的原发性肝癌的研究，在经过选择的患者，3年生存率可达到25%~30%。对下述患者可考虑放疗：肿瘤局限，因肝功能不佳不能进行手术切除，或肿瘤位于重要解剖结构，在技术上无法切除，或拒绝手术。另外对已经发生远处转移的患者进行姑息治疗。 (一)肝癌的放疗指征 肝癌的放疗适用于：①一般情况好，如KPS>=70分，肝功能Child-Pugh A级，单个病灶;②手术后有残留病灶者;③需要肝脏局部肿瘤处理，否则会产生严重的并发症，如肝门的梗阻,门静脉和肝静脉的瘤栓;④远处转移灶的治疗，如淋巴结
转移、肾上腺转移、骨转移，放疗可减轻患者的症状，改善生活质量。 在原发性肝癌的治疗中，放疗可以应用于下列情况：①局限于肝内肝细胞癌：放疗与介入联合治疗可显著提高有效率和生存率，循证医学证据为C级;②肝细胞癌伴癌栓：放疗可针对外科或介入治疗后出现的癌栓以及原发灶的癌栓(包括下腔静脉癌栓)，可以延长患者生存期，循证医学证据为C 级;③肝细胞癌伴淋巴结转移：放疗可显著改善淋巴结转移的肝细胞癌患者的生存期，循证医学证据为C级;④肝细胞癌肾上腺转移：放疗可缓解肾上腺转移灶出现的症状，但尚无证据说明放疗可以延长生存期;⑤肝细胞癌骨转移：放射治疗的目标为缓解症状从而提高患者生存质量，但无证据说明能够延长患者生存期;⑥肝内胆管细胞癌：放疗可延长切除术后切缘阳性和不能切除的肝内胆管细胞癌患者的生存期，循证医学证据为C级。上述原发性肝癌的放疗，大部分为姑息性的手段，疗效较差，即使能延长生存期，也仅为数月。但针对上述原发性肝癌的其它治疗方法，也未能显示有更好的疗效和更强的循证医学证据，目前放射治疗仍然是可考虑的重要治疗方法之一，特别是针对肝外的转移病灶。 (二)肝癌放疗的技术
Clausenidin及其结构类似物对於人类肝癌细胞株 Hep G2
Clausenidin及其結構類似物對於人類肝癌細胞株Hep G2/A2與Hep 3B/T2作用的研究 Study the effects of clausenidin and it's analogue on human hepatoma cell lines Hep G2/A2 and Hep 3B/T2 蘇俊圖 Su, Chun-Tu 生物藥學研究所 關鍵詞: 生物科技;藥學;肝癌細胞株;Clausenidin; Keyword: BIOTECHNOLOGY;PHARMACOLOGY; 摘要: B型肝炎是全球性的流行疾病，尤其在亞非地區最為盛行。由 流行病學上的研究顯示，B型肝 炎帶原者罹患肝癌的機率遠大於正常人，但至今仍無有效藥物可供治療之用，因此這方面的 新藥開發是一重要課題。本論文以帶有B型肝炎病毒基因且能表現B型肝炎病毒表面抗原的人 類肝癌細胞株Hep G2/A2、Hep 3B/T2作為藥物篩選模式，並對所篩得之化合物其抑制表面抗原產生 及對細胞生長之調節機制做探討。 在本論文中，發現到在一些pyranocoumarin的結構類似物中， Clausenidin對於抑制 B型肝炎病毒表面抗原的能力最強，其中Clausenidin之抑制濃度EC(50)為1.0μg/ml 。由RT-PCR分析，發現表面抗原基因之mRNA表現量會受影響。在另一株無HBV基因但有高效率轉 染HBV基因之人類肝癌細胞株HuH-7細胞，發現Clausenidin處理後，其HBV表面抗原的promoter-SPII，以 及HBV基因會受到影響。經對細胞預先處理TPA以去除蛋自激活酵素C(PKC)的實驗，得知Clausenidin 抑制細胞產生表面抗原的作用與PKC活化途徑無關。 人類肝癌細胞株HepG2/A2經Clausenidin處理其 抑制B型肝炎病毒表面抗原的能力具有可逆性，但處理Clausenidin長時期(6天)對HepG2/A2細胞會抑 制細胞生長；但在另一肝癌細胞株 Hep3B/T2，細胞生長則不被抑制。經由細胞週期及DNA複製分 析發現經Clausenidin處理，使HepG2/A2之細胞週期進行停止，DNA複製能力減弱。 在兩種不同人類 肝癌細胞 Hep G2/A2，Hep3B/T2經lausenidin長期處理後對於另一肝癌細胞指標?甲型胎兒蛋白(AFP) ，在Hep G2/A2 細胞中AFP分泌量增加，但在Hep 3B/T2細胞中分泌量卻減少 。 在藥物篩選中同時發 現另一pyranocoumarin?Clausarin，會造成細胞死亡的效果。經由細胞外型、去氧核糖核酸分析， 以及用螢光顯微鏡染色，觀察細胞核，認為細胞之死亡其應是細胞程序性死亡(apoptosis)。 一 些pyranocoumarin的結構類似物，對於抑制表面抗原之結構-活性間之關係(SAR)，以及Clausenidin如 何影響細胞生長、甲型胎兒蛋白在不同細胞的作用差異，與 Clausarin如何造成細胞死亡，都 值得做更進一步的探討。 Hepatitis B virus (HBV) infection is a world-wide public health and epidemiology probl em, especially in Asia and Africa. Epidemic studies have clearly shown that the chronic carriers of HBV can cause highe r percentage of liver diseases such as hepatocellular carcinoma (HCC) and cirrhosis than normal people. To date, no tru ly effective drugs against HBV are available, therefore it is important to develop anti-HBV drugs. In these studies we d emonstrated that human hepatoma, Hep G2/A2 and Hep 3B/T2 cells, cell line containing HBV genomes and by transfection HBV genomes respectively, which continually secrete HBsAg into culture medium, can serve as a quick assay system for drug s creening for anti- HBV activity. Furthermore the regulatory mechanism of suppression of production of HBsAg and cell gr owth were also investigated. In this studies from some pyranocoumarins, Clausenidin strongly suppressed the production o f HBsAg. Clausenidin suppressed the HBsA g production by bot h Hep G2/A2 and Hep 3B/T2 cells with EC5o 1.0μg/ml. RT-PCR analysis reveals that the suppression of HBsAg gene expression by Clausenidin is mainly at the mRNA level. Clausenidin n ot only suppress the endogeneously expressed HBsAg in the Hep G2/A2 cells but also suppresses the HBsAg, HBeAg produced
人肝癌细胞株中FOXM1及NF_B的表达及意义_王琦1_柴磊2_蒋少青3_马丽4
网络出版时间：2014-02-17 09:02 网络出版地址：https://www.360docs.net/doc/ef9801970.html,/kcms/detail/64.1008.R.20140217.0902.004.html 人肝癌细胞株中FOXM1 及NF-κB的表达及意义 王琦1，柴磊2，蒋少青3，马丽4 ，金栋5 ，殷利军5，张桂香5，谢岩青5 （1.宁夏医科大学总医院肝胆外科，银川 750004；2.宁夏回族自治区第三人民外科，银川750004；3.宁夏医科大学总医院药剂科，银川 750004；4.宁夏医科大学总医院心脑血管疾病医院药剂科，银川 750004；5.宁夏医科大学总医院心脑血管疾病医院血管外/普外科，银川750004）1 [摘要] 目的探讨不同肝癌细胞株中转录因子FOXM1（Forkhead Box M1）及核转录因子NF-κB（nuclear factor kappa B）的表达强度及意义。方法采用Western blot、RT-PCR法，检测不同肝癌细胞株（QGY-7703、BEL-7402、SMMC-7721）中FOXM1及NF-κ B 在蛋白及mRNA 水平的表达情况。结果在3株肝癌细胞中FOXM1及NF-κB的表达无论是mRNA水平还是蛋白水平均存在显著差异，细胞株（QGY-7703、BEL-7402）中FOXM1及NF-κB的表达同时都明显高表达于细胞株SMMC-7721。结论肝癌细胞株中FOXM1蛋白及mRNA表达与NF-κB表达趋势一致，提示FOXM的表达可能与NF-κB的活化有关。 [关键词] FOXM1；NF-κB；肝细胞肝癌 [中图分类号]R735.7 [文献标识码]A Expression and significance of Forkhead Box M1 and nuclear factor kappa B in human liver carcinoma cells WANG Qi1，CHAI Lei2，JIANG Shao-qing 3，MA Li4，JIN Dong5，YIN Li-jun5 ,ZHANG Gui-xiang5，XIE Yan-qing5，（1. Dept.of Hepatobiliarysurgery，the Affiliated Hospital of Ningxia Med. Univ. Yinchuan 750004；2. Dept.of Surgical， the Third People′s Hospital of Ningxia. Yinchuan 750004；3. Dept.of Pharmacy，the Affiliated Hospital of Ningxia Med. Univ. Yinchuan 750004；4. Dept.of Pharmacy，the Cardio-Cerebral Vascular Disease Hospital of Ningxia Med. Univ. Yinchuan 750004；5. Dept.of Vascular/General Surgery， the Cardio-Cerebral Vascular Disease Hospital of Ningxia Med. Univ.Yinchuan 750004） ABSTRACT Objective（1）To investigate the expression and significance of Forkhead Box M1 and nuclear factor kappa B in human liver carcinoma cells. Methods The expression of Forkhead Box M1 and nuclear factor kappa B protein and micro-RNA in hepatocellular carcinoma cell lines(QGY-7703、BEL-7402、SMMC-7721)were detected with the application of Western blot analysis and RT-PCR analysis，respectively. Results The expression 基金项目：宁夏自然科学基金（项目编号：NZ1236） 作者简介：王琦(1983-),硕士，主任医师，肝癌复发相关分子机制的研究。 通作者：谢岩青，Email：xie-yanqing@https://www.360docs.net/doc/ef9801970.html,
肝癌细胞培养(总结版)
BEL7402/hepG2/HCCLM等肝癌细胞培养过程 器材： 液氮冷冻灌、恒温培养箱、电冰箱、高压灭菌锅、离心机、 倒置显微镜、超净工作台、一次性吸管若干个、带塞培养瓶（不定个）、试管架、酒精灯、G6型号细菌过滤漏斗、无菌冻存管、液 氮瓶。 试剂： RPMI l640培养液，胎牛血清（生长因子）, 胰蛋白酶液，70%乙醇（消毒）,冻存培养液（培养液7ml，胎牛血清2ml，DMSO 1ml)，PBS缓冲液等。 器皿的消毒及准备： 清洗灭菌（浓硫酸、蒸馏水）： （1）浸泡（酸浸）:新使用或重复使用的玻璃器皿须经浓硫酸 溶液浸泡过夜，水洗。以去除新购进玻璃器皿所带有灰尘、铅、砷 等物质，并消除其弱碱性。操作过程需戴防护用具。 （2）刷洗:浸泡后用软毛刷和优质的洗洁精进行刷洗。刷洗后 经行烘干。 （3）冲洗、烘干备用:浸酸后的玻璃器皿先用自来水充分冲洗，吸管需冲洗10min，器皿需每瓶灌满自来水、倒掉反复10次以上，不留任何酸浸液残迹，然后用蒸馏水漂洗2～3次，将清洗好的玻璃器 皿放入烘干箱中，烘干后的玻璃器皿要求干净透明，无油烟，不能 残留任何有害物质及化学药品等。 （5）包装灭菌:器材经清洗烤干或晾干后，先应严格包装，然后再行消毒灭菌处理，以防止消毒灭菌后再次遭受污染。 实验前准备工作: 操作者的皮肤、培养瓶的盖和外壁常用酒精消毒。用紫外线消 毒实验室空气、工作台面和一些不能使用其他方法消毒的培养器皿。进无菌室前或做完实验后，均应开灯照射30min进行消毒。紫外线 照射60min可以消灭空气中大部分细菌。 细胞复苏： 冻存细胞保存管保存在液氮中（-196℃），取出保存管后必须 快速冷冻，以避免冰晶重新结晶而对细胞造成伤害，致使细胞死亡。在冻存细胞的保存管中含有对细胞有毒害的成分DMSO,故在解冻应 马上将其去除。在冷冻活化前应在无菌台上将细胞培养液配好，然 后将保存管从液氮中取出，放于37℃的温水中快速使细胞解冻。解 冻后悬液快速移入培养液中混匀，离心去掉上清液，再加入细胞培 养液。
常见肝癌细胞株
实验室用肝癌细胞株 细胞英文名称Hep G2 [HepG2]细胞中文名人肝癌细胞 形态特性上皮样生长特性贴壁生长 特征特性该细胞来源于一名15岁的白人少年的肝癌组织。该细胞表达甲胎蛋白、白蛋白、α-2-巨球蛋白、α-1-抗胰蛋白酶、转铁蛋白、α-1-抗凝乳蛋白酶、结合珠蛋白、铜蓝蛋白、纤溶酶原、补体C4、C3激活物、纤维蛋白原、α-1酸性糖蛋白、α-2-HS-糖蛋白、β-脂蛋白、视黄醇结合蛋白；表达胰岛素受体和胰岛素样生长因子IGFⅡ的受体；该细胞具有3-羟基-3-甲酰辅酶A还原酶和肝甘油三酯脂肪酶的活性。目前尚未证明该细胞中有HBV基因组。 培养基MEM-EBSS: Minimum Essential Medium (MEM Eagles with Earle＇s Balanced Salts) 血清10%FBS其它因子1%NEAA 传代方法1:4~1：6传代；每周2次。传代情况C5 冻存条件基础培养基+5%DMSO+20%FBS支原体检测阴性 细胞英文名称SMMC-7721 [SMMC7721]细胞中文名人肝癌细胞 形态特性上皮样生长特性贴壁生长 特征特性取人肝癌组织，采用静置和旋转管法培养11天细胞开始生长，首次传代23天。AFP阳性。用Northern blot方法，未能检测到细胞中1.3kb LFIRE-1/HFREP-1 mRNA的表达，免疫缺陷小鼠体内可成瘤。 培养基RPMI 1640 (w/o Hepes) 血清10%FBS其它因子无 传代方法1:3传代；3~4天1次。传代情况C5 冻存条件基础培养基+5%DMSO+20%FBS支原体检测阴性 细胞英文名称Hep3b 细胞中文名人肝癌细胞 形态特性上皮细胞样生长特性贴壁生长。 特征特性该细胞源自一位患有肝癌的7岁黑人男童，HBV阳性。 培养基MEM-EBSS: Minimum Essential Medium (MEM Eagles with Earle＇s Balanced Salts) 血清10%FBS 其它因子无 传代方法1:4～1:6传代，每周换液2次传代情况C2 冻存条件基础培养基+8%DMSO+20%FBS 支原体检测培养法（-） 国内还有，： 小鼠肝癌细胞Hepa 1-6 [Hepa1-6] 人胆管细胞型肝癌细胞HCCC-9810 小鼠肝癌瘤株H22 人肝癌细胞HHCC 人肝癌细胞PLC/PRF/5 人肝癌细胞HB611 人肝癌细胞BEL-7402 人肝癌细胞QGY-7701 （有疑问细胞待定） 人肝癌细胞QGY-7703 （有疑问细胞待定） 人肝癌细胞BEL-7404 人肝癌细胞BEL-7405
肿瘤相关抗原GCF2高水平表达的肝癌细胞株的筛选
*国家自然科学基金资助项目（编号：8106016），广西科学基金资助项目（编号：2010GXNSFD013048） △通信作者。E －mail ：gwongluo@yahoo．com 肿瘤相关抗原GCF2高水平表达的肝癌 细胞株的筛选 * 蒋日婷，晁耐霞，马平，李金平，罗国容△ 广西医科大学组织胚胎学教研室（南宁530021） 【摘要】目的 筛选出肿瘤相关抗原GCF2高表达的人肝癌细胞株，为进一步探讨GCF2对肝癌发生发展的 可能作用奠定基础。方法 选择4种人肝癌细胞株（BEL －7404、 HepG2、SMMC －7721和QGY －7703）及1种成人正常肝细胞株（HL －7702），培养后分别制作细胞爬片及提取蛋白后，采用免疫细胞染色技术和Western blot 的方法筛选出GCF2表达量高的细胞株。结果 免疫细胞染色显示， GCF2在5种细胞中的胞核及胞质中均有表达。GCF2蛋白在肝癌细胞BEL －7404、HepG2、SMMC －7721和QGY －7703的表达要强于正常肝细胞HL －7702，其中以BEL －7404的表达量最高。通过Western blot 检测，BEL －7404的GCF2相对表达量为0.875?0.134，较其他细胞株高，差异有统计学意义（P ＜0.05）。结论 BEL －7404细胞中GCF2蛋白水平的相对表达量最高，可以作为下 一步探讨GCF2在肝癌发生发展的可能作用的实验材料。 【关键词】肿瘤相关抗原；GCF2；肝癌；蛋白表达 GCF2（GC binding factor 2）是一个转录抑制因子，能 够抑制多个下游基因，比如EGFR 、TNF －α、PDGF －A 链和Igf2等的转录，参与细胞增殖、周期和凋亡等进 程 ［1－6］ 。本课题组前期用SEREX 技术筛选人肝癌组织构建的cDNA 文库，发现2个克隆与GCF2的片段同 源，提示GCF2可能是肝癌相关抗原［7］ 。目前，尚未见文献报道GCF2基因在肝癌中的作用的研究，因此，2010年11月至2011年3月，本实验将采用免疫细胞化学技术检测4种人肝癌细胞和1种成人正常肝细胞中GCF2的表达情况，并且通过Western blot 筛选出GCF2高水平表达的人肝癌细胞株，为进一步探讨GCF2在肝癌发生发展的可能作用奠定基础。1材料与方法 1．1 材料人肝癌细胞株BEL －7404、 HepG2、SMMC －7721、QGY －7703和成人肝细胞株HL －7702，均购于上海细胞生物学研究所。实验仪器均由广西医科大学基础实验中心提供：CO 2恒温培养箱（Thermo ）、倒置显微镜（OLYMPUS ）、台式高速冷冻离心机（SIGMA ）、紫外分光光度计（UV2000I Tanon ）、电泳仪（北京六一仪器厂）、半干式转膜仪（BIO －RAD ）。细胞培养基高糖DMEM 及RPMI 1640均购于HyClnoe 公司。磷酸缓冲液（PBS ）、 DAB 显色试剂购于福州迈新生物技术开发有限公司。蛋白提取试剂盒购于南京凯基生物技术有限公司。GCF2抗体购自美国Santa 公司。辣根过氧化物酶（HRP ）标记的山羊抗鼠IgG 购自上海长岛生物试 剂有限公司。GAPDH 抗体、ECL 发光试剂购于碧云天生物技术研究所。 1．2 细胞培养 将4种肝癌细胞分别培养在含10% 胎牛血清的高糖DMEM 培养液中，将成人正常肝细胞 株HL －7702培养在含10%胎牛血清的RPMI 1640培 养液中，并置于37?、 5%CO 2及饱和湿度的恒温培养箱中培养， 隔天更换培养液。1．3细胞爬片的制作及免疫组织化学检测 将生长 状态良好的人肝癌细胞株BEL －7404、 HepG2、SMMC －7721、QGY －7703和成人正常肝细胞株HL －7702接 种于置有圆形盖玻片的12孔培养板内，接种密度为1?104个细胞/孔，用含10%胎牛血清的高糖DMEM 及RPMI 1640培养液在37?、5%CO 2条件下培养。待细胞长到60% 70%融合时，用0.01mol /L PBS 洗涤1次，加入4%多聚甲醛室温固定15min 。将盖玻片取出，粘贴在载玻片上，按照常规免疫组织化学方法，加 入1?100稀释的GCF2抗体， 4?湿盒内温育过夜。PBS 洗片后滴加辣根过氧化物酶标记的山羊抗鼠IgG ，室温 下孵育30min ， PBS 洗片后进行DAB 显色2 3min 。常规50% 100%梯度酒精脱水，二甲苯透明，香柏油 封片，显微镜下观察并拍照记录结果。以PBS 替代一抗作为阴性对照。采用Image －Pro Plus version 6.0软件分析阳性着色光密度。1．4 总蛋白的提取及Western blot 的检测常规细胞培养，当细胞贴壁生长达90%时，按蛋白提取试剂盒 操作方法提取细胞总蛋白， 分装后置于－80?保存。取4个细胞株的蛋白20μg 与1/4体积的5?SDS 上样缓冲液混合，100?沸水浴5min ，冷却后点样进行 SDS －PAGE 电泳分离。电泳完毕，按照半干转移仪公司提供的说明进行印迹操作，将电泳分离蛋白转移到PVDF 膜上。转移膜用含50g /L 脱脂牛奶的PBST （0.01mol /L PBS +0.5%Tween －20）室温封闭5h 。GCF2抗体1?200稀释液4?孵育过夜；按1?5000稀 · 1551·广东医学2012年6月第33卷第11期Guangdong Medical Journal June．2012，Vol．33，No．11
肝癌细胞
实验室用肝癌细胞株 细胞英文名称 Hep G2 [HepG2] 细胞中文名人肝癌细胞形态特性上皮样生长特性贴壁生长 特征特性该细胞来源于一名15岁的白人少年的肝癌组织。该细胞表达甲胎蛋白、白蛋白、α-2-巨球蛋白、α-1-抗胰蛋白酶、转铁蛋白、α-1-抗凝乳蛋白酶、结合珠蛋白、铜蓝蛋白、纤溶酶原、补体C4、C3激活物、纤维蛋白原、α-1酸性糖蛋白、α-2-HS-糖蛋白、β-脂蛋白、视黄醇结合蛋白；表达胰岛素受体和胰岛素样生长因子IGFⅡ的受体；该细胞具有3-羟基-3-甲酰辅酶A还原酶和肝甘油三酯脂肪酶的活性。目前尚未证明该细胞中有HBV基因组。培养基 MEM-EBSS: Minimum Essential Medium (MEM Eagles with Earle＇s Balanced Salts) 血清 10%FBS 其它因子 1%NEAA 传代方法 1:4~1：6传代；每周2次。传代情况 C5 冻存条件基础培养基+5%DMSO+20%FBS 支原体检测阴性 细胞英文名称 SMMC-7721 [SMMC7721] 细胞中文名人肝癌细胞形态特性上皮样生长特性贴壁生长 特征特性取人肝癌组织，采用静置和旋转管法培养11天细胞开始生长，首次传代23天。AFP阳性。用Northern blot方法，未能检测到细胞中1.3kb LFIRE-1/HFREP-1 mRNA的表达，免疫缺陷小鼠体内可成瘤。培养基 RPMI 1640 (w/o Hepes) 血清 10%FBS 其它因子无 传代方法 1:3传代；3~4天1次。传代情况 C5 冻存条件基础培养基+5%DMSO+20%FBS 支原体检测阴性细胞英文名称 Hep3b 细胞中文名人肝癌细胞形态特性上皮细胞样生长特性贴壁生长。 特征特性该细胞源自一位患有肝癌的7岁黑人男童，HBV阳性。 培养基 MEM-EBSS: Minimum Essential Medium (MEM Eagles with Earle＇s Balanced Salts) 血清 10%FBS 其它因子无 传代方法 1:4～1:6传代，每周换液2次传代情况 C2 冻存条件基础培养基+8%DMSO+20%FBS 支原体检测培养法（-）国内还有，： 小鼠肝癌细胞 Hepa 1-6 [Hepa1-6] 人胆管细胞型肝癌细胞 HCCC-9810 小鼠肝癌瘤株 H22 人肝癌细胞 HHCC 人肝癌细胞 PLC/PRF/5 人肝癌细胞 HB611 人肝癌细胞 BEL-7402 人肝癌细胞 QGY-7701 （有疑问细胞待定）人肝癌细胞 QGY-7703 （有疑问细胞待定）人肝癌细胞 BEL-7404 人肝癌细胞 BEL-7405 人高转移肝癌细胞 HCCLM3 人肝癌细胞 Hep 3B2.1-7 人肝癌亚力山大细胞 PLC/PRF/5 人肝癌细胞 SMMC-7721 人肝癌细胞 Homo Spaniens cell line Hep B1.2 抗人肝癌单抗HAb18杂交瘤细胞 HAb18 抗人肝癌单抗F11杂交瘤细胞 F11 细工-CRO
原发性肝癌放射治疗的临床效果分析
原发性肝癌放射治疗的临床效果分析 发表时间：2018-05-16T09:34:08.440Z 来源：《中国医学人文》(学术版)2018年1月第1期作者：潘克生 [导读] 讨放射治疗原发性肝癌的临床效果。方法：选取我院2016年8月-2017年12月收治的原发性肝癌患者50例 潘克生 黑龙江省鹤岗市鹤康肿瘤医院黑龙江鹤岗市 154101 【摘要】目的：探讨放射治疗原发性肝癌的临床效果。方法：选取我院2016年8月-2017年12月收治的原发性肝癌患者50例，均实 施放射治疗，回顾性分析临床资料。结果：在50例患者中，根据2个月的随访显示，临床的总有效率为80.0%。患者术后多有I级消化道反 应，表现为食欲不振、腹部不适等，完成治疗后可以自行恢复；少数有II级消化道反应，完成治疗后症状消失。随访1年显示，肿瘤小于 5cm，患者的生存率显著高于肿瘤大于5cm的患者，差异有统计学意义。结论：原发性肝癌采用放射治疗，可显著提高临床的总有效率， 延长患者生存期，改善生活质量，具有较高的安全性和有效性，值得在临床上广泛推广应用。 【关键词】原发性肝癌；放射治疗；临床效果 Abstract：Objective：To investigate the clinical effect of radiotherapy on primary liver cancer. Methods： Fifty patients with primary hepatocellular carcinoma admitted in our hospital from August 2016 to December 2017 were enrolled in this study. All patients und In 50 patients，according to 2-month follow- up showed that the clinical total effective rate was 80.0%. Patients with grade I gastrointestinal reactions， manifested as loss of appetite，abdominal discomfort，complete treatment can be self-healing； a few have grade II gastrointestinal reactions，the symptoms disappeared after treatment. One year follow- up showed that the tumor was less than 5cm， the survival rate of patients was significantly higher than the tumor larger than 5cm patients， the difference was statistically significant. Conclusion： Radiotherapy can significantly improve the total effective rate of primary hepatocellular carcinoma， prolong survival and improve quality of life of patients with hepatocellular carcinoma. It is safe and effective and should be widely applied clinically. Key words：Primary liver cancer；Radiotherapy；Clinical effect 原发性肝癌在临床恶性肿瘤中发病率一直处于较高的水平，对患者的生命安全构成了严重威胁。临床治疗通常以手术为主，但大部 分患者由于发现并治疗较晚，丧失了最佳的手术治疗时机。放射治疗以其疗效确切、不良反应少的优势，在临床上广泛应用。研究选取我 院2016年8月-2017年12月收治的原发性肝癌患者50例，现将结果具体报告如下。 1资料与方法 1.1一般资料 研究选取2016年8月-2017年12月我院收治的原发性肝癌患者50例作为研究对象，将其随机分为实验组与对照组，各25例。其中， 实验组男13例，女12例，年龄25-48岁，平均年龄（33.5±5.26）岁。对照组男14例，女11例，年龄25-49岁，平均年龄（32.35±5.23） 岁。两组患者一般资料对比，差异无统计学意义（P＞0.05）。 1.2方法 对照组患者采用远离体外照射的方法，利用B超进行准确定位；实验组患者在对照组的基础上采用放射治疗，具体操作如下，准备 放射治疗设备，协助患者卧于负压袋，对负压袋实施抽真空成行操作，将患者固定后，利用所有CT层面自动勾画体表外形，建立立体三维 体表轮廓。然后逐层勾画靶区周围剂量限制性器官的轮廓。靶区轮廓勾画是能否实现精确放疗的关键。因此不但要求有高质量的图像显 示，还要求有高水平的肿瘤诊疗医生配合，根据肿瘤大小和形状在相应的各CT层面上勾画靶区轮廓。放射治疗的绝对禁忌证很少，尤其是 低姑息性治疗，例如对局部转移灶的止痛大部分有效。 1.3疗效评定 患者体内肿瘤得到缩小，并达到45%以上，能够维持1个月，代表缓解；患者体内肿瘤缩小效果比明显，但是存在好转现象，能够 维持1个月，代表稳定；患者体内肿瘤不断增大，甚至出现新的疾病，代表恶化。 1.4统计学方法 采用SPSS 19.0统计学软件对数据进行处理，计量资料以“x±s”表示，采用t检验；计数资料以百分数（%）表示，采用x2检验，以P ＜0.05为差异有统计学意义。 2结果 在50例患者中，根据2个月的随访显示，临床的总有效率为80.0%。患者术后多有I级消化道反应，表现为食欲不振、腹部不适等， 完成治疗后可以自行恢复；少数有II级消化道反应，完成治疗后症状消失。随访1年显示，肿瘤小于5cm，患者的生存率显著高于肿瘤大于 5cm的患者，差异有统计学意义。 3讨论 原发性肝癌是我国的常见肿瘤，在临床上的死亡率极高。原发性肝癌的病情过于隐蔽，一般患者不易察觉，基本的表现特征是肝区 疼痛、产生乏力和消瘦，体征表现为肝肿大，产生腹水现象，肝区具有摩擦音已经肝区血管产生杂音等。一般而言，肝癌患者的生活质量 比较差，现如今，手术切除是公认可以根治肝癌的手段，然而，仅一部分早期患者能得到根治性治疗，80%的患者就诊时即失去手术切除 机会，或接受姑息性治疗，或接受支持护理，其生存期短。随着对原发性肝癌治疗的认识，肝癌的放射治疗效果已经得到业界的认可，并 作为中晚期患者的治疗手段。放射治疗可以精确确定定位肿瘤，靶区剂量集中，使肿瘤得到高剂量的准确照射，周围组织受照射剂量较 低，而对周围正常组织造成的损伤较少。为了提高放射治疗的效果，多主张采用未诱发正常组织在放射治疗过程中出现不良反应的前提 下，使治疗的总时间尽量缩短。文章研究结果显示，在50例患者中，根据2个月的随访显示，临床的总有效率为80.0%。患者术后多有I级 消化道反应，表现为食欲不振、腹部不适等，完成治疗后可以自行恢复；少数有II级消化道反应，完成治疗后症状消失。随访1年显示，肿 瘤小于5cm，患者的生存率显著高于肿瘤大于5cm的患者，差异有统计学意义。根据研究的结果更加清晰的证明了放射治疗对于原发性肝 癌的重要性，帮助更多的原发性肝癌患者走向健康的生活，营造良好的生活氛围，温馨的家庭生活。综上所述，原发性肝癌采用放射治 疗，可显著提高临床的总有效率，延长患者生存期，改善其生活质量，放射治疗具有较高的安全性和有效性，值得在临床上广泛推广应 用。 参考文献： [1]韩猛，田亮.适形放射治疗结合介入治疗应用于不宜手术的原发性肝癌的效果[J].临床医学研究与实践，2016，25：123-124. [2]徐海杰，刘天壤.原发性肝癌三维适形放射治疗和介入治疗加放疗的疗效比较[J].系统医学， 2017，12：85-87. [3]王鲁通.原发性肝癌采用三维适形放疗的研究进展[J].临床医学研究与实践，2017，31：225-226.