建立大鼠全脑缺血模型制作的方法改进_张兴毅
建立大鼠全脑缺血模型制作的方法改进*
张兴毅,韩江全,宋国林,阳生光
(遵义医学院第五附属医院,广东珠海519100)
=摘要>目的改进全脑大鼠缺血再灌注模型的制作方法。方法48只成年的SD大鼠,四血管闭塞法制作全脑缺血再灌注模型,术中氨基甲酸乙酯麻醉,1ml的0.5mm无菌注射器针头阻断双侧椎动脉,无创动脉夹夹闭双侧颈总动脉,以苏木精-伊红(H.E)和T U N EL原位标记法检测海马回CA1区存活锥体细胞数。结果全脑缺血模型的成功率为80%,在缺血再灌注组从再灌注后3小时开始明显减少,随时间的延长,锥体细胞数越来越少,到48小时后降到观察时间点的最低数值,与假手术组比较,每一个时间点都有显著性差异(均P<0101)。结论改进后的四动脉阻断法,成功率高,继发性损伤脑干小,并发症少,无需特殊仪器,方法简便,可靠。
=关键词>大鼠;全脑缺血/再灌注;模型
=中图分类号>R-332=文献标识码>A=文章编号>1672-3511(2010)01-0018-03
Improvement of cerebral ischemia model
ZHANBG X ing-yi,HAN Jiang-quan,SONG Guo-lin,et al
(T he Fif th A f f iliated H osp ital of Zuny i M ed ic al Colleg e,Zhuhai519100,Gu angd ong,China)
=Abstract>Objective T o improv e the rat model o f ischemia-r eper fusio n method.Methods48adult Sprague-Daw-ley rats wer e tr eat ed wit h4arter y occlusion to establish cerebral ischemia-reperfusion model,including intrao perat ive ur e-thane anesthesia,1m l o f0.5mm ster ile needles and sy ringes bilater al vertebr al arter y o cclusion and noninvasive folder ar-ter y o cclusion of bilat eral caro tid ar teries.H ippo cam pus ar ea CA1py ramidal sur vived cells wer e detect ed wit h H E and s-i tu T U NEL detected.Results T he success r ate o f cer ebr al ischemia model w as80%.CA1pyr amidal sur vived cells w ere decreased3ho urs after tr eatment and r eached the low est48hours after operatio n.T he py ramidal surv ived cells in tr eat-ment g roup at each o bserv ation were few er than that in sham g roup(P<0101).Conclusion Cerebral ischemia model wit h fo ur impro ved arter y occlusio n is sim ple and reliable.
=Key words>Rat;Cer ebr a-l ischemia/reperfusion;M odel
Pulsinelli四血管闭塞法[1]是全脑缺血再灌注模型的首选方法之一,但由于手术难度大,并发症多,导致模型的成功率低,且试验器材相对较贵。本文就四血管闭塞法作了一些改进,现介绍如下。
1材料和方法
1.1材料
1.1动物SD大鼠48只(由遵义医学院珠海校区动物试验中心提供),均为雌性,随机分为假手术组和缺血再灌注组各24只,每组又分为3、12、24和48h4个时间点,每个时间点为6只大鼠。
1.2试剂武汉博士德T UNEL末端原位标记染色试剂盒。
1.3方法
1.3.1缺血再灌注组用25%氨基甲酸乙酯4ml/kg 腹腔麻醉,腹位固定,备皮,碘酒酒精消毒,剪开头部
基金项目:珠海市科学技术局资助项目(No.PC20081030)颈正中皮肤约2cm左右,沿正中钝性分离背阔肌和斜方肌,以第一颈椎横突为标志,分离暴露横突孔,用1ml的015mm无菌注射器穿刺入翼板小孔中,见针筒内有鲜红的血液视为椎动脉被刺穿,反复转动,进针约3~4mm完全阻断椎动脉,用持针器钳住针头(尽量往针尖端),用弯钳钳住持针器上部针,反复来回捻动至针断后移出,查翼板小孔是否出血,消毒,缝合组织,自由饮食。24h后将大鼠固定,备皮,碘酒酒精消毒,切开颈前区皮肤2cm,沿气管两侧分离双侧颈总动脉用无损伤动脉夹夹闭双侧颈总动脉20m in,此为缺血期,10s左右,大鼠出现意识丧失、角膜反射消失、瞳孔散大和翻正反射消失,20min后撤去无损伤动脉夹。在缺血期死亡或仅出现昏睡以及在整个试验过程中出现抽搐的大鼠均被废弃,断SD大鼠大脑,放入4%的多聚甲醛液中。
1.3.2假手术组同上法,不阻断双侧的椎动脉和颈动脉。
1.3.3模型成功标准1双侧颈动脉夹闭后1m in 内动物意识丧失。o眼球变白,双侧瞳孔散大,对光反射消失,角膜反射消失或迟钝,但睫毛反射可存在。?翻正反射消失。?自主呼吸加快。?毛发竖起。?小便失禁。凡不符合上述标准者或再灌注期间出现全身强直、抽搐等异常反应或死亡者全部废弃,不作为实验对象。
1.3.4染色方法1H.E染色检测海马CA1区锥体细胞。oT UNEL原位标记法检测海马CA1区锥体细胞凋亡指数。
1.4统计学方法实验数据以
x?s表示,采用SPSS 1115软件分析系统处理结果,应用方差分析方法(多样本均数的两两比较,采用ANOVA中的SNK法检验)进行数据统计分析,检验水准:A=0105。
2结果
3.1全脑缺血模型的成功率为8010%。
3.2H.E染色后,两组大鼠大脑海马CA1区存活锥体细胞数的变化见表1。从表1中可以看出,海马回CA1区存活锥体细胞数,在假手术组中,各时间点之间比较,差异没有统计学意义(F=01036,P=01991);缺血再灌注组各时点间存活锥体细胞数比较,差异有统计学意义(F=171433,P=01000)。缺血再灌注组从再灌后3小时就开始明显减少,而且随时间的延长,锥体细胞数越来越少,到48小时后降到观察时间点的最少数值,与假手术组比较,每一个时间点存活锥体细胞数差异均有显著性(均P<0101)。
表1再灌注后海马C A1区存活锥体细胞数(
x?s)
T able1The nu mb er of pyramidal cells in hippocampus CA1region after reperfusion(HE)组别只数3h12h24h48h
假手术组2483.67?4.8482.67?7.5083.00?7.5982.33?8.96缺血再灌注组2440.83?7.17127.50?8.26118.67?13.171 4.83?4.711注:与假手术组比较,1P<0101
3.3TU NEL标记染色法检测全脑缺血再灌注后海马CA1区神经凋亡百分比见表2。从表2可见,假手术组各时点间凋亡率比较,差异无显著性(F=01021, P=01996);缺血再灌注组各时点间锥体细胞凋亡率比较,差异有显著性(F=751487,P=01000)。缺血再灌注组与假手术组比较,差异有显著性(均P<0101)。假手术组中神经元凋亡率很低,而缺血再灌注组各时点间凋亡率与时间成正相关递增。
表2再灌注后海马CA1区锥体细胞凋亡率(@10-2, x?s)
Table2Apoptotic pyramidal cells in hippocampus after reperfus ion
组别只数3h12h24h48h
假手术组24 1.28?1.63 1.38?1.86 1.38?2.01 1.17?1.32缺血再灌注组2422.58?4.68142.68?3.04155.51?6.81171.69?7.711注:与假手术组比较,1P<0101
4讨论
Pulsinelli四血管闭塞法[1]全脑缺血模型已广泛应用于脑缺血再灌注神经损害的研究。在作全脑缺血再灌注模型中,首先要进行椎动脉阻断。阻断方法通常有电凝法、热凝固法等,但是都有其缺点。电凝法需要手术显微镜和单极电凝,而且使用电凝时电流不易控制,过低不能烧灼椎动脉,造成出血,过高则会可损伤脑干,对动物损伤大,还可能电伤操作者[2]。热凝固法如果烧灼动作太慢,热能散失,反而烧针会粘破椎动脉,引起动物大量出血导致死亡,亦会有烧灼作者。本文通过直接用针穿刺并保留针于第一横突小孔,导致椎动脉的阻断,我们称为针刺阻断法。从文中的H.E染色和TU NEL标记染色法检测海马CA1区的锥体细胞得出:缺血再灌注组与假手术组比较差异有显著性,且在缺血再灌注组中各时间点之间,凋亡率与时间成正相关递增,差异有显著性,说明本法改进是可行的。
在进行四血管闭塞法动物模型的制备的过程中,模型的成功与否与以下方面相关联:1大鼠的体重在200~300g的健康大鼠,制作模型的成功率较高;> 300g或<200g的健康大鼠麻醉效果较差,手术中出血较多,椎动脉阻断困难。o动物固定非常重要,用立体定位仪固定大鼠,常规头与脊柱呈30b夹角,但是我们发现45b夹角可能会更适合,有时需要60b夹角。?手术过程应实行无菌操作,手术中尽量使用钝性分离肌肉和结缔组织,这样手术损伤小,出血量小。手术出血量大,大鼠的状况就比较差,模型的成功率就会下降。?对大鼠的护理也是影响模型成功率的因素之一。大鼠在手术过后,对其身体是一个打击,加
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应)来证实了血管紧张素ò-NADPH氧化酶-活性氧信号传导通路与平滑肌细胞增殖的关系。结合以往国内外的研究结果,我们可以推测血管紧张素ò诱导的人肠系膜平滑肌细胞的增殖反应可能与血管紧张素ò诱导NADPH氧化酶的激活,进而导致活性氧物质生成量的增加有关,即血管紧张素ò诱导的人肠系膜平滑肌细胞的增殖反应至少部分是通过与膜结合的NADPH氧化酶来源的活性氧介导的。
4结论
血管紧张素ò的促人肠系膜动脉平滑肌增殖作用的部分机制是通过血管紧张素ò-NADPH氧化酶-活性氧通路来实现,这可能是人血管重构的途径之一,针对该途径的相应干预措施也许能够部分逆转或延缓血管重构。
=参考文献>
[1]罗廷福,李家富.血管紧张素II-NADPH氧化酶-活性氧通路与高
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(收稿日期:2009-09-09;修回日期:2009-09-27;编辑:张文秀)
(上接第19页)
上缺血再灌注对脑的损伤,大鼠的状况就比较差,大鼠对自身的护理差,这样就要对大鼠进行护理,定时给其清洗眼睛,畅通呼吸道,避免伤口感染。
经过上述改进,我们的模型成功率为8010%,与傅震等[2]建立模型的成功率(7718%)相差不大。本法操作简便,成功率高,继发性损伤脑干小,并发症少,方法简便,可靠,无需特殊仪器,便于观察。
4结论
改进后的四动脉阻断法用于全脑大鼠缺血再灌注模型制作,成功率高,继发性损伤脑干小,并发症少,方法简便,可靠,无需特殊仪器,值得推广。
=参考文献>
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(收稿日期:2009-04-07;修回日期:2009-05-13;编辑:母存培)HT<
医学数字
10临近年底,美国5时代6周刊又评出了2009年10大医学突破,艾滋病疫苗、甲型H1N1流感疫苗、美国解除千细胞研究限制等新发现和重大医学事件均榜上有名。
7日前,我国科学家采用国际最新的全基因组关联分析方法,通过对11400名麻凤病患者及健康对照者的研究,发现了7个麻风病的易感基因。
线栓法大鼠脑缺血再灌注模型(MCAO)制备方法.pdf
线栓法大鼠脑缺血再灌注模型制备 前言 相信不少神经内科的研究生都作过或将要作大鼠线栓模型，都有一个从查文献了解方法到跟师兄、师姐学习再到自己体会摸索直至熟练的过程，在模型制作的过程中可能的经历了从模型不成功的郁闷到熟练后成功的喜悦（我们是有这样的感觉）。为了缩短各位将要作或刚开始作MCAO模型的战友的摸索过程，提高模型制作的成功率，我们愿意将自己的经验与大家分享，相信各位战友看过后将对制作大鼠线栓模型有更深的认识，并以其为乐趣，同时欢迎各位熟练的战友与我们交流经验。 第一部分线栓模型制备理论及经验 ⒈ 插线法局灶性脑缺血模型简介 八十年代 Koizumi 和 Longa 创用了不开颅的大鼠 MCA 可逆性脑梗塞模型，此后，应用插线法制备大鼠局灶性脑缺血再灌注模型的方法不断改进和完善，已渐趋成熟，目前该法已逐渐取代开颅法而成为最流行的方法。该模型先阻断颈外动脉（ECA）及其分支，且阻断翼腭动脉（PPA），以切断颅外来源的侧副循环血流。从 ECA 插入尼龙线，经颈内动脉（ICA）到 大脑前动脉（ACA），机械性阻断大脑中动脉（MCA）发出处的血供来建立大脑中动脉缺血模型。此模型可在无麻醉状态下拔出尼龙线，恢复血流，实现再灌注。 1994 年 Huang 等[55]首次将线栓技术应用于小鼠局部永久性脑缺血模型。1997 年 Hara 等[56]将线栓技术改进后应用于小鼠局部暂时性脑缺血模型。此后不断有学者借助于显微技术和多功能生理监测手段建立小鼠局部线栓脑缺血模型[57,58]。国内蒋晓帆等[59]，王芙蓉等[60] 也对该方法进行了研究。线栓法具有不开颅、效果肯定、可准确控制缺血及再灌注时间的优点，用于研究神经元 对缺血的敏感性、耐受性，药物疗效观察以及再灌注损害和治疗时间窗较为理想，同时也具有对全身影响小、动物存活时间长的特点，适于慢性脑损伤的研究。控制好易变因素，可避免实验结果的不稳定性。但线栓造模也并非完美无缺，存在着下列不足：①线栓造模过程是非直视下的手术，血流是否完全阻断不能即刻得知。②动物品系、体重、批次会影响结果。动物饲养条件好的单位所繁育的动物，可以使影响程度降低。③操作者的科研训练影响结果。严格的训练和足够例数的实践可以复制出稳定的结果。④血管破裂出血。操作不小心极易刺破血管或拔线栓时引起出血。轻柔、精细的操作可以减少血管破裂的发生。
取小鼠脑组织
丁香园上面总结的方法，排版有点乱。 其实过程与大鼠近似，我的经验是： 1. 材料准备；大剪刀、眼科剪、眼科镊、大镊子、滤纸、竹签等； 2. 步骤：处死小鼠，取头颅； 剪开皮肤，漏出颅骨； 用大尖镊子夹住两侧眼眶，用眼科剪稍剪除颅骨中线； 再用眼科镊夹住颅骨从内向外夹，从下向上逐步去除颅骨； 当全脑露出时，再用眼科镊去除脑膜和血管； 然后用竹签从嗅球处向下取出全脑，即可。 3. 注意事项：用力轻柔，否则容易弄破脑部； 用剪刀剪颅骨时，一定要贴壁向上剪，否则容易剪破脑部； 去除脑膜时，不能硬拉，否则容易弄破大脑； 取出全脑时应把头顶朝下，用竹签轻轻取出，离桌面也不要太远、高； 若留病理，建议一定要取完整无损的大脑。 做免疫组化的话，稍微麻烦一点儿，因为脑组织含水量多，要固定的好，就需要先灌注。先麻醉小鼠 剪开胸腔，找到心脏，从心尖入针，剪开右心耳 先用生理盐水灌注直到从心耳流出来的水清亮了 再改用固定液（一般是4%多聚甲醛）灌注至小鼠四肢僵硬 小鼠只需要用注射器就行了，我做的25～35g的小鼠一般用50mLNS+30mL多聚甲醛。具体步骤：常规麻醉小鼠，将其固定，用剪刀剪开胸部皮肤，暴露出皮下组织，剪开时注意钝性分离，以免误伤。然后用镊子提起剑突，用剪刀剪开胸腔，剪断两侧肋骨，暴露整个胸腔，小心误伤肺及心脏、大血管。用镊子撕开心包膜，暴露心脏，用眼科剪剪开右心耳，然后提起心尖将准备好的生理盐水注射器插入左心室，注射，注射时小心针头滑脱。生理盐水灌流至肺和肝的颜色都变成灰白色即可。然后用多聚甲醛灌流，针孔最好是同一个，多聚灌流时小鼠四肢会抽搐，待抽搐结束，小鼠僵硬即可。取下小鼠，用剪刀在颈部离断头颅，用剪刀在小鼠头颅中间皮肤剪一刀，将两边皮肤向下翻用手捏住，暴露整个颅骨，用眼科剪从脊髓端插入椎孔，沿着颅正中线剪开颅骨，注意剪刀向上翘一些，以免误伤脑组织，剪开后用弯眼科镊分离颅骨，小心分离，直至暴露整个大脑，然后用弯镊伸入颅底离断颅底神经，就可以取出整个脑子了。放多聚里固定24h后包埋切片即可。 具体操作如下： 实验操作步骤： 1) 小鼠称重，以每克小鼠0.0025ml 4%戊巴比妥钠剂量的实施腹腔麻醉。也可以用10%的水合氯醛，3-5ul/g腹腔注射麻醉。 2) 将麻醉的小鼠仰放在操作台上，去毛。 3) 解剖小鼠，暴露心脏。 4) 找到心尖部，左手用镊子提起心尖部，右手或左手将灌流针刺破心尖部进针约0.5cm（最好是用小点的针头，用止血钳固定针尖，剪开右心耳。 5) 将灌流器的导管部开口放到生理盐水中里，打开灌流器灌流，直到从右心耳流出的液体为无色，同时小鼠肝脏色淡，肠管肿胀为止，停止灌流。没有灌流器的用注射器或者吊瓶都可以。
缺血性脑血管病药物治疗
缺血性脑血管病药物治疗 崔学艳 第一部分缺血性脑血管病概述 缺血性脑血管病(Ischemic cerebrovascular disease,ICVD)，是指在供应脑的血管血管壁病变或血流动力学障碍的基础上发生脑部血液供应障碍，导致相应供血区脑组织由于缺血、缺氧而出现脑组织坏死或软化，并引起短暂或持久的局部或弥漫脑损害，造成一系列神经功能缺损症候群。缺血性脑血管病占脑血管病的80%，是导致人类死亡的三大主要疾病之一，仅次于心脏病及癌症，具有高发病率，高致残率，高死亡率的特点。ICVD包括短暂性脑缺血发作（Transient ischemic attack,TIA）、缺血性卒中（Ischemic stroke）。主要危险因素有：高血压、心脏病、糖尿病、吸烟、酗酒、血脂异常、颈动脉狭窄、种族、遗传等。 一、短暂性脑缺血发作（TIA） 短暂性脑缺血发作（Transient ischemic attack,TIA）是由于局部脑或视网膜缺血引起的短暂性神经功能缺损，临床症状一般不超过1小时，最长不超过24小时，且无责任病灶的证据。神经影像学检查有神经功能缺损对应的明确病灶者不宜称为TIA。 （一）病理类型与发病机制 TIA的发病与动脉粥样硬化、动脉狭窄、心脏病、血流动力学变化及血液成分改变等多种病因有关。其发病机制主要有颈内动脉系统或椎-基地动脉系统狭窄、微栓塞等。 （二）临床表现
1.一般特点：TIA好发于中老年人，患者多伴有高血压、糖尿病、动脉粥样硬化或高脂血症等脑血管病危险因素。起病突然，有局灶性脑或视网膜功能障碍的症状，持续时间最长不超过24小时，不遗留后遗症。TIA常反复发作，每次发作表现相似。 2.临床表现取决于受累血管的分布，症状多样。①颈内动脉TIA：多表现为大脑半球或单眼症状。大脑半球症状多为一侧面部或肢体的无力或麻木、失语、认知的改变；视觉症状表现为一过性黑曚、视野中有黑点等。②椎-基底动脉TIA：多表现为眩晕、跌倒和共济失调、构音障碍等。 3.辅助检查：CT或MRI检查大多正常。TCD检查可探及颅内动脉狭窄，并可进行血流状况评估。CTA、MRA及DSA检查有时可见血管狭窄、动脉粥样硬化改变。 （三）治疗药物 1.抗血小板药物：非心源性栓塞性TIA推荐抗血小板治疗，发病24h内，可启动阿司匹林(aspirin)和氯吡格雷(clopidogrel)双联抗血小板治疗，持续用药60天。其后，单独应用阿司匹林抗血小板治疗，阿司匹林过敏患者，可服用氯吡格雷用于二级预防。 2.抗凝药物：心源性栓塞性TIA可采用抗凝治疗。主要包括肝素（Heparin）、低分子肝素（Low-Molecular-Weight Heparin）和华法林（Warfarin）。一般短期使用肝素或低分子肝素后改为华法林口服抗凝治疗，华法林治疗目标为国际标准化比值（international normalized ratio,INR）达到2～3，用量根据结果调整。
2020年《缺血性脑血管病的抗血小板药物治疗》答案
缺血性脑血管病的抗血小板药物治疗 试题正确答案如下： 缺血性脑血管病的抗血小板药物治疗 选择题（共10 题，每题10 分） 1 . （单选题）缺血性脑卒中及短暂性脑缺血发作二级预防风险评估量表常用的有哪些（） A .ABCD评分系统 B .Essen量表 C .SPI-II量表 D .以上都是 2 . （单选题）随着Essen量表评分增高，卒中复发风险增加，Essen 量表评分大于几分的患者，年卒中复发风险>4％（） A .≥3分 B .≥4分 C .≥5分 D .≥6分
3 . （单选题）建议急性缺血性脑血管病患者在发病后多长时间内服用阿司匹林（） A .24～48 h B .48～72 h C .72～96 h D .96～120 h 4 . （单选题）轻型卒中（NIHSS评分≤3分）患者起病24h内，应尽早给予何种抗血小板药物治疗21d（） A .阿司匹林 B .氯吡格雷 C .氯吡格雷联合阿司匹林 D .以上都不是 5 . （单选题）2014中国缺血性脑卒中和短暂性脑缺血发作二级预防指南指出哪种抗血小板药物可作为长期二级预防一线用药（） A .阿司匹林
B .氯吡格雷 C .阿司匹林或氯吡格雷 D .以上都不是 6 . （单选题）对于未接受静脉溶栓治疗的轻型卒中及高危TIA患者，在发病多长时间内启动双重抗血小板治疗（） A .12h B .24h C .36h D .48h 7 . （单选题）消化道出血患者对症处理选择哪些药物（） A .PPI B .H2受体拮抗剂 C .黏膜保护剂 D .以上都是
8 . （单选题）在使用抗血小板药物前先评估消化道出血的风险，以下哪项是常见的危险因素（） A .消化道溃疡及并发症病史 B .消化道出血史 C .双联抗血小板治疗或联合抗凝治疗 D .以上都是 9 . （单选题）《2019 阿司匹林在心血管疾病一级预防中的应用中国专家共识》指出哪个年龄段可以考虑服用小剂量阿司匹林(75~100 mg/d) 进行一级预防（） A .40-50岁 B .40-60岁 C .40-70岁 D .40-80 10 . （单选题）不建议下列哪些人群服用阿司匹林进行ASCVD 的一级预防（） A .年龄>70 岁或<40 岁的人群
缺血性脑血管病的治疗原则_刘秀琴
·讲座· 缺血性脑血管病的治疗原则 刘秀琴 中图分类号:R493文献标识码:E文章编号:1006-9771(2001)01-040-02 1短暂性脑缺血发作(transient ischemic attack,TIA)的治疗 TIA是造成急性脑梗死的重要危险因素,如能及时地进行积极的治疗,可降低脑梗死的发生率。 1.1颈动脉内膜剥脱术:对于颈动脉TIA发作且颈动脉分叉处的狭窄>70%者,该手术是最佳的治疗选择。 1.2气囊血管成形及扩张术:是颅内、外闭塞性血管疾病的新疗法。对于有血管狭窄或闭塞而又不能选择外科治疗的患者,血管成形术可为其提供治疗机会。1.3颅外颅内血管搭桥术或颞浅动脉与大脑中动脉吻合术:对有血液动力学改变的TIA患者可能是有益的。 1.4药物治疗 1.4.1抗血小板聚集药物:①Aspirin可使脑卒中的发生率降低25%。其最有效剂量有两种,即3075mg/ d的极低剂量和1300mg/d的大剂量。目前对此尚存争论,需要做前瞻性研究来解决这个问题。国内目前以采用小剂量治疗为主。②Ticlopidine:比Aspirin更有效,特别对老年人、妇女、椎-基底动脉的TIA、大脑的小血管疾病和Aspirin无效者效果更好。对颈动脉高度狭窄(>75%狭窄)的患者无效。因为Ticlopidine 可引起严重的血中性粒细胞减少(大约1%的患者),所以在应用的最初3个月需要每2周查1次血常规。 ③Clopidog rel:与Ticlopidine类似,有效性与Ticlopi-dine相同,但副作用相对较小。 1.4.2抗凝治疗:①华法令:推荐用国际标准化比率(NIR) 2.0 3.0;②皮下注射肝素:根据国际脑卒中试验(世界范围近2万人)的结果,其预防脑卒中的效果不如Aspirin。 2急性脑梗死的治疗 2.1溶栓治疗 2.1.1时间窗:根据缺血后的组织病理改变和溶栓治疗的临床试验,目前国内外将溶栓治疗的时间窗定为症状发生后3h或36h以内。 2.1.2溶栓药物:与链激酶和尿激酶相比,基因重组 作者单位:100730北京市,中国协和医科大学北京协和医院。作者简介:刘秀琴(1939-),女,主任医师,长期从事癫痫与脑电图的研究及神经康复。纤溶酶原激活剂(rt-PA)具有高度血栓纤维蛋白亲和力和选择性,具有局部溶栓作用,但价格昂贵。国内多采用尿激酶。链激酶的国际静脉溶栓试验(MAST-I, MAST-E和AS T)均因明显增加死亡的危险性而停止。 2.1.3溶栓方法:包括静脉内溶栓与动脉内溶栓。①静脉内溶栓:静脉内输注溶栓药物。②动脉内溶栓:经股动脉插管,进入颈动脉或椎动脉。通过造影选择性地插管至闭塞血管的起始部或闭塞点的近端,局部应用溶栓药。一旦血流再通,应立即停止。与静脉内给药相比,动脉内溶栓用药剂量小,溶栓起效快。然而动脉内溶栓需要一定时间和放射医生的参与,还需要建立一个绿色通道的专业队伍。 2.1.4禁忌症:①发病时间不清楚,如睡眠中发病;②PLT计数<10万/cm3;③有凝血障碍或已用华法令; ④有可能为CNS出血;⑤近期外伤或外科手术的患者;⑥胃肠道、泌尿系统和肺部疾病近期有出血者;⑦血压持续升高>200/120mmHg;⑧近期发生心肌梗死或心包炎者。 先进的影像学(diffusion/perfusion M RI)将可能提供早期溶栓治疗的影像标准,并对溶栓预后做出评价。 2.2神经保护治疗:神经保护治疗是通过阻止局灶缺血所造成的细胞损伤以救助缺血脑组织的措施。基于对局灶缺血脑损伤向着不可逆方面发展所涉及到的一些机制认识的增加,产生了各种不同的干预措施,如尝试应用Ca2+拮抗剂、兴奋性氨基酸受体拮抗剂、谷氨酸释放抑制剂、白细胞粘附抑制剂、自由基清除剂等作为保护脑的药物。但到目前为止,在动物实验中显示有希望的药物在临床实验中尚未显示出明确的有效性。目前尚缺乏有效的用于急性缺血性脑卒中治疗的神经保护剂,但针对缺血后复杂的神经元病理过程所进行的神经保护治疗有广阔的发展前景。一种M axi-K+通道促效剂BMS-204352可能是有希望的药物,不久将公布它的Ⅲ期临床试验结果。在神经保护剂临床试验设计中,治疗时间窗、药物血浆水平、治疗目标人群和评定指标等,都可能是重要因素。弥散—灌注M RI(diffusion/perfusion M RI)可为更好地确定目标人群提供依据,也是评价治疗有效性的重要指标。 2.3抗血栓治疗:对动脉粥样硬化性梗死患者,推荐
大鼠灌注固定的方法
大、小鼠灌注固定的方法 准备物品： 1、灌注针（灌注用的针可以是临床上的静脉套管针，便于穿刺） 2、医用输液器 3、500ml输液用玻璃瓶 4、血管钳 5、剪刀 6、生理盐水 7、4%多聚甲醛（4℃）,0.1M的PB配制 大鼠深度麻醉，迅速打开胸腔，暴露心脏，此时注意用血管钳钝性分离心包及周围软组织以便充分暴露心脏。左手持镊子捏住心脏，右手持套管针从心尖部位插入，向上进针到升主动脉。取出套管针内芯，连接生理盐水，打开输液开关，快速灌注，同时用剪刀在右心耳处剪一小口，待流出的液体无色后（约60ml即可）更换为多聚甲醛。多聚甲醛灌注速度为先快后慢，快速灌注50ml后放慢速度，缓慢滴注维持即可，每只大鼠约需100ml。如果多聚甲醛灌注充分，则动物四肢和全身肌肉会不停抽动。如此灌注约需1小时时间。 充分暴露升主动脉
套管针从心尖部位插入，向上进针到升主动脉 1、暴露心脏时要小心，速度要快，但不可损伤心脏及大血管，如果出现血液凝固或大血管损伤，灌流将失败。 2、最好是剖开右心室，但是因为暴露的问题，有误剪到左心室的可能。相对来说，剪开右心耳更为方便。我们就是这样做的。 3、灌流的效果：PBS或NS灌流时，血流丰富的脏器如肝脾肾等的颜色会迅速转为灰白，此为灌流正常。另外，大鼠耳尖，口唇，四肢掌部也会变苍白。 4、PBS或NS灌流需缓慢而持续，防止血液血管内凝固。有条件的话可加点肝素。 5、先主动脉插管，再右心耳放血，这样插管容易些。先剪右心耳的话，心脏会瘪下去的。小鼠灌注固定方法： 采用水合氯醛麻醉后剪开胸腔，动作要快，经左心室插入头皮针连接的20 mL注射器（头皮针磨钝，从与身体纵轴成45°角的方向进针，针尖插入升主动脉内，可以看见，动作要轻柔），同时剪开右心耳，推入20 mL 生理盐水。推完以后迅速换4 ℃多聚甲醛20 mL，灌完以后取材基本就可以了。
稳定大鼠原位肝移植模型的建立
万方数据
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２００９年５月第６卷第１３期 图１腹主动脉灌注图２修肝及套管 圈３肝脏血管系统吻合完成 当延长供肝的冷缺血时间并不明显增加术后死亡率及并发症的发生。而术中过多地牵动供肝则会明显影响供肝的质量嗍。手术分离时尽可能去除血管壁周围的筋膜、结缔组织等。防止再通后造成套管腔狭窄及血栓形成。 ３．２供肝灌注 先松开门静脉夹，再松开肝下下腔静脉夹，均缓慢松开。灌洗压力过大容易引起供肝的细胞器肿胀、细胞坏死和淋巴细胞浸润，导致细胞内钙超载和能量代谢障碍．从而影响移植肝的质量。本研究采用的是经腹主动脉的灌注法。以１￣２ＩｌｉＯｎ的速度灌注腹主动脉，灌注液体经过肝动脉和门静脉系统回流入肝脏，从而保证肝脏得到充分、缓慢而均匀的灌注，提高供肝的质量。 ３．３袖套管放置 套管必须保证硬度适中、内壁光滑。由于不重建肝动脉，而胆道血供多由肝动脉供应．故供肝胆总管不应保留过长．有利于减少胆道并发症。在脾静脉水平安放门静脉袖套较为方便。在左肾静脉水平剪断ⅣＣ。有利于袖套的翻转。 ３．４受体手术 笔者在进腹时习惯取中上腹横切口，而此过程中笔者建议结扎左右腹壁下静脉，首先该血管相对较粗大，出血会影响术野，其次该血管的出血量相对于只有１２一１３“血容量的大鼠来讲会是术后出血性休克死亡的重要原因。受体术前１５ｒｎｉｎ常规给予阿托品对于预防术后肺炎、肺不张有较好的效果ｆＩｑ。供肝恢复血供后对于肝门部的处理，使用血供较好的大网膜覆盖，既有加压防止出血、使胆漏和胆道感染局限化的作用，同时可以适当供给胆道血供，可以预防胆道并发症的发生【ｌｌｌ。受体阻断门静脉后，经门静脉注入羟乙基淀粉 ?论著? 注射液可将肝内残存的血液及时推人体循环。起到“自身输血”的作用。在ＳＶＣ的吻合过程中，缝线不宜过紧。防止血管狭窄。供肝门静脉及ＩＶＣ“套管法”吻合前，必须排出阻断夹后方的一段积血。以防止血栓栓塞。Ｐａｅｈｅｃｏ等旧研究表明，随门静脉淤血时间的延长。再灌注后闲肠道内菌群移位而使内毒素骤升。如此可激活肝脏Ｋｕｐｆｆｅｒ细胞，产生大量的ＴＮＦ—Ｏｔ及一系列的级联反应。从而对供肝及受者的肺脏产生损伤１７．Ｌａ－ｌ川。同时．ＩＶＣ阻断时间的延长会导致血钾浓度显著升高。在供肝恢复血供的过程中．应缓慢放开无创血管夹，而且应按顺序先放开门静脉。后放开肝上上腔静脉，尽量使心脏逐渐适应血容量的增加。 ４结论 重复是技巧之母．所以大量的练习是提高手术技巧的关键。认真、耐心、仔细的手术是成功的关键。对于供肝的提早冷缺血处理及对供肝植入后的细心操作。使得手术成功的机会大大增加。 【参考文献】 【１】ＫａｍａｄａＮ，ＣａＭｅＢＹ．ＡｓｕｒｇｉｃａｌｅｘｐｅｒｉｅｎｃｅｗｉｔｈｆｉｖｅｈｕｎｄｒｅｄｔｈｉｒＩｙｌｉｖｅｒｔｒａｎｓｐｌａｎｔｓｉｎｔｈｅｒａｔ【Ｊ】．Ｓｕｒｇｅｒｙ，１９８３，９３（Ｐｔｌ）：６４－６９． 【２】宇汝胜，汪泳，钱海鑫．大鼠原位肝移植模型的手术操作技巧探讨阴．肝胆胰外科杂志．２００８．２０（１）：７－９． 【３】权毅，付华。徐亮．大鼠原位肝移植模型的建立和术式改进阴．中国现代医学杂志．２００６．１６（２）：２２６－２２９． 【４】ＷａｎＣＤ，ＣｈｅｎｇＲ，ＷａｎｇＨＢ。ｅｌａ１．１ｒａｍｕｎｏｍｏｄｕｌａｔｏｒｙｅｆｆｅｅｔａｏｆｍｅｓｅｎｃｈｙｍａｌｓｔｅｍｃｅｌｌｓｄｅｒｉｖｅｄｆｒｏｍａｄｉｐｏｓｅｔｉｓｓｕｅｓｉｎａｒａｔｏｒｔｈｏｔｏｐｉｃｌｉｖｅｒｔｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎｍｏｄｅｌ陬ＨｅｐａｔｏｂｉｌｉａｒｙＰａｎｃｒｅａｔＤｉｓＩｎｔ，２００８，７（１）：２９—３３． 【５】汪根树。陈规划，朱晓峰．大鼠小体积原位肝移植模型的建立田．中国实验诊断学，２００６，（１０）：儿１９－１１２２． 【６】贾凯，徐钧．二袖套法大鼠原位肝移植术的改进们．山西医科大学学报，２００６，３７（４）：３５６－３５８． 【７】ＴｉａｎＹ，ＪｏｅｈｕｍＷ，Ｇ∞晒ｅｖＰ，ｅｔａ１．Ｋｕｐｆｆｅｒｃｅｌｌ－ｄｅｐｅｎｄｅｎｔＴＮＦ－Ｍｐｈａｓｉｇｎａｌｉｎｇｍｅｄｉａｔｅｓｉｎｊｕｒｙｉｎｔｈｅａｒｔｅｒｉａｌｉｚｅｄｓｍａｌｌ—ｆ打一ｓｉ∞ｌｉｖｅｒｔｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎｉｎｔｈｅＩｎｏｕｏｅ叽ＰｌｏｃＮａｉｌＡｃａｄＳｃｉ．２００６，１０３（１２）：４５９８－舢奶． 【８】ＵｍｔａＫＮａｎｙｅｎＢ，Ｂｍｕｈ＆ｅｔａ１．Ｄｅｃｒｅａｓｅｄｓｕｒｖｉｖａｌｉｎｒａｔｌｉｖｅｒｔｒａｒｍｐｌａｎｔａｔｉｏｎｗｉｔｌｌｅｘｔｅｎｄｅｄｃｏｌｄｐｒｅｓｅｒｖａｔｉｏｎ：ｒｏｌｅ０ｆｐｏｒｔａｌｖｅｉｎｃｌａｍｐｉｎｇｔｉｍｅＩＪ］．Ｈｅｐａｔｏｌｏｇｙ，１９９８，２８（２）：３６６－３７３． 【９】邵堂雷，蔡伟耀，张明钧，等．影响肝移植鼠近期存活的术中因素分析叨．上海第－－ｇｇ科大学学报，２００１，２１（３）：２２３—２２５． 【１０】彭勇，龚建平，刘长安，等．大鼠原位肝移植模型制作过程中麻醉方法的选择【Ｊ】．中华普通外科杂志，２００３，１２０）：６７３－－６７６． 【１ｌ】常顺伍，郑树森，梁廷波，等．大鼠原位肝移植术中胆道重建方法的改进【Ｊ】．中华器官移植杂志２００７，（１）：１３—１６． 【１２】ＰａｅｈｅｅｏＥＧ，ＧｏｒａｅａＭＣ，ＲｏｄｒｉｇｕｅｓＧ凡ｅｔａ１．Ｅｆｆｅｃｔｏｆｌｉｖｅｒｉａｅｈａｅｍｉｅｐｒｅｃｏｎｄｉｔｉｏｎｉｎｇｉｎｃｉｒｒｈｏｔｉｃｒａｔｓｓｕｂｍｉｔｔｅｄｔｏｈｅｐａｔｉｃｉｓｅｈａｅｍｉａ／ｒｅｐｅｒｆｕｓｉｏｎｉｎｊｕｒｙ【Ｊ】．ＡｅｔａＣｉｒＢｒａｓ，２００６，２１：２４－２８． 【１３】ＯｌｌｕｏｇｌｕＥ，ＫｅｒｅｍＭ，ＰａｓａｏｇｌｕＨ，ｅｔａ１．Ｄｅｌａｙｅｄｅｎｅｒｇｙｐｒｏｔｅｃｔｉｏｎ０ｆｉｓｃｈｅｍｉｃｐｒｅｃｏｎｄｉｔｉｏｎｉｎｇｏｎｈｅｐａｔｉｃｉｓｃｈｅｍｉａ／ｒｅｐｅｒｆｕｓｉｏｎｉｎｊｕｒｙｉｎｒａｔｓ仞．ＥｕｒＳｕｒｇＢｅｓ，２００６，３８：１１４－１２１． 【１４］Ｋａｓｈｔｉ气Ｍｅｈｒａｂｉ气ＰａｈｌａｖａｎＩＳ，ｅｔａ１．Ａｒｅｖｉｅｗｏｆｖａｒｉｏｕｓｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓｏｆｏｒｔｈｏｔｏｐｉｃｌｉｖｅｒｔｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎｉｎｔｈｅ呲忉．ＴｒａｎｓｐｌａｎｔＰｒｏｅｔ２００５，３７：１８５－１８８． （收稿日期：２００９－０２—１７） ＣＨＩＮＡＭＥＤＩＣＡＬ ＨＥＲＡＬＤ中目医琦导囊３５ 万方数据
缺血性脑中风的动物模型研究进展
缺血性脑中风的动物模型研究进展 发表时间：2012-09-13T16:06:44.077Z 来源：《医药前沿》2012年第6期供稿作者：冯斌[导读] 大脑组织对局部缺血非常敏感，即使神经元的短时间缺血也会引发一系列的事件，最终导致细胞的死亡 冯斌（中南民族大学生命科学学院湖北武汉 430074）【摘要】脑中风是世界引起死亡的第二大病因，目前常用动物模型来研究脑中风。本文详细阐述了缺血性脑中风的三类动物模型，并指出缺血性脑中风动物模型的有关问题和发展前景。【关键词】急性缺血性脑中风动物模型【中图分类号】R322.8-3 【文献标识码】A 【文章编号】2095-1752（2012）06-0017-02 1.前言 脑中风是世界引起死亡的第二大疾病，在存活的病人中，它又有高致残率。脑中风一般可分为缺血性脑中风（占所有脑中风的85%）和出血性脑中风（占所有脑中风的15%）。其中缺血性脑中风的定义是血流减少导致正常细胞的功能改变。大脑组织对局部缺血非常敏感，即使神经元的短时间缺血也会引发一系列的事件，最终导致细胞的死亡。许多的实验模型用来研究中风损伤，对细胞损伤机制的研究是在特定模型中测试各种不同处理对细胞应激和死亡的影响。三个主要的缺血性中风动物模型是：（1）全脑缺血模型，（2）局灶性缺血模型，（3）体外研究模型。 2.全脑缺血中风模型 局灶性中风模型被认为是与人脑中风模型最接近的模型。然而，全脑缺血模型能模拟人的心搏停止和昏厥等临床症状[1]。从一个可逆的全脑缺血模型恢复的过程中，测量生理、生化和功能等方面的因素对于识别分子和细胞机制以及潜在的神经保护剂的药理作用等方面有着重要作用。因此全脑缺血模型可能与局灶性缺血模型一样有用。三种最常用的全脑缺血模型是：1、大鼠四血管阻塞（4-VO）或者低血压两血管阻塞（2-VO）；2、沙鼠-2-VO；3、小鼠-2-VO。小鼠-2-VO模型是为了研究转基因老鼠而发明的，是一个常用的模型 [1]。另一种全脑缺血模型是通过颈部缚带，心搏停止，或者通过结扎或压紧所有的心脏动脉制造全脑缺血。在这种模型中血流量小于1%或者为0。由于该模型的高死亡率，并没有得到广泛的应用。 2.1大鼠全脑缺血模型 四血管阻塞（4-VO）：该模型有许多优点，包括制造模型十分容易，可预测的缺血神经损伤的发病率高，惊厥的发病率低和不需要麻醉药。这个模型曾经并且仍然被广泛的用于寻找潜在的脑中风治疗药物。大鼠4-VO模型包括椎动脉永久结扎，以及两个颈动脉的临时结扎。 双血管阻塞（2-VO）：这个模型在一般的麻醉条件下进行并且需要注射肌肉松弛剂。大量证据表明双侧劲总动脉的栓塞不能使大脑充分缺血，或者扰乱脑组织能量状态产生可检测到的细胞死亡[2]。因此为了产生缺血性脑损伤，在双侧颈动脉阻塞的同时还必须通过降低血压的方法来减少脑内血流量。降低血压通常用以下三种方法的一种来达到：（1）放血控制法，（2）注射外周血管扩张剂，（3）联合运用以上两种方法。结扎双侧颈总动脉并且使血压减少到50mmHg导致的损伤结果比4-VO更严重。海马、新皮质和纹状体中的血流量降到3～5%。然而，在一些情况下血流量只下降到对照组的15%左右[1]。 2.2 沙鼠的全脑缺血模型 这个模型通常只临时结扎颈总动脉而不降低其血压。因为沙鼠中没有脑后部的动脉连接，所以一般会产生严重的前脑缺血。局部的中枢神经系统血流的改变与大鼠模型中相似，皮层中的血流量约为控制组的1%，海马中的血流量约为控制组的4%。 2.3 小鼠的全脑缺血模型 小鼠的全脑缺血模型与大鼠2-VO模型相似。一些研究表明用2-VO或者低血压2-VO技术制作的小鼠全脑缺血模型对海马CA1区神经元的损伤数量比较一致[3]。然而，由于通过后交通动脉的侧支循环的多样性，要在CA1区得到一致的损伤并且同时保持较高的存活率和实验成功率是困难的。一个模型结合了基底动脉和双侧颈总动脉栓塞——三血管栓塞。但在这个模型当中动物的存活率低，并且CA1区的损伤不一致。 3. 局部脑缺血模型 局部脑缺血模型与全脑缺血模型有两点不同。首先，即使是在损伤的中心区域，血流量总是比全脑缺血模型要高些。其次，从损伤中心区域到损伤的外周有一个明显的梯度，因此在这个区域的代谢条件是不同的。由于局部脑缺血模型的持续时间和异质性，它的损伤比全脑缺血模型更加复杂。同时，它也是类似人脑中风的情况，所以被广泛的研究。 局部脑缺血模型有两类：短暂局部脑缺血模型和永久局部脑缺血模型。在短暂局部脑缺血模型中，血管在堵塞三小时后被再灌注；然而，在永久局部脑缺血模型中，血管被堵塞的时间通常是一天或者几天。 3.1短暂中动脉栓塞 该模型中有两个主要的栓塞位点。在近体端，栓塞位点在靠近颈内动脉的分支处。目前广泛运用的栓塞方法是在颈动脉中插入一段尼龙线，经过中动脉的分支处，从而造成中动脉栓塞。 具体的流程如下：将大鼠的颈部正中切开后，分离左侧的颈外动脉和翼腭动脉并用丝线结扎。在颈内动脉分叉的周围栓塞颈总动脉，同时用小夹子夹住翼腭动脉，用丝线结扎颈总动脉。用一根尼龙线(0.20-0.22 mm，尖端磨钝) 插入颈外动脉。用丝线扎紧颈外动脉和尼龙线。在中动脉栓塞中，用激光多普勒测速仪检测血流量，栓塞时血流量应为栓塞前基线的20%。在一段栓塞时间之后抽出尼龙线，血液从颈内动脉流出再灌注。 3.2永久性中动脉栓塞 常用的永久性局部脑缺血模型是栓塞中动脉的一个或者多个分支。简要步骤如下：把颞肌剥离开后，在靠近颧骨和鳞状骨结合2-3mm 处钻一个2-3mm深的孔。然后打开和剥离硬脑膜，使中动脉曝露。用一个钢钩通过显微操作仪把中动脉挑起并用电凝法使其栓塞。另外一个常用的永久性局部脑缺血模型是用线结扎中动脉24小时以上。 3.3光化学诱导局部脑缺血模型
小鼠灌注取脑
成年小鼠心脏灌流及取脑组织步骤 实验步骤： 1、小鼠麻醉后立即将其用针头固定在泡沫板上（用针头插住四肢）。用镊子扯起胸部皮肤，另一只手用剪刀剪开胸腔的皮肤和肋骨，暴露出心脏和肝脏。 2、将注射针头插入小鼠左心室，同时将小鼠肝脏减掉，以使血液流出。灌注生理盐水，时间维持在1min（10~20ml）灌注液左右，血液排除后四肢、肝脏和舌头会变白。 3、待小鼠四肢、肝脏和舌头变白之后，用4%PFA#流固定，当PFA 流至大脑处可能会使小鼠尾巴略有反射现象（有时可能没有），此时可将灌流速度下调，以使固定更加充分。整个PFA灌流时间约为5min。 （固定原理：多聚甲醛可以使蛋白质交联）4、将导管始端从PFA中拿出，待管中液体流尽后，将心脏上的针头拔下，如果固定的较好，可发现小鼠眼球呈现白色。将托盘中的血液倒至废液桶内，并准备下一步的取脑操作。 取脑及脱水:
1、剪开头部皮肤，露出白色头盖骨。将延髓上包被的软骨剪开，除去多余的结缔组织。需要注意的时，眼睛要由剪刀剪下，不能够直接扯下来，因为眼睛后部连着视神经，如果扯的话有可能会损坏视交叉上核等其他脑部组织。 2、将头盖骨小心剥开，露出白色的脑部，在剥嗅球部位时要格外小心，必要的话可以先将嗅球前部的碎骨留着待进一步固定之后再去除。 3、将头盖骨剥开后，将脑下部连接的神经逐条剪短（可看到视神经交叉），待全部剪断后将脑整个剥离出来。 4、将剥离出来的脑浸泡在4%PF/中，过夜固定。 5、将PFA液换为30%蔗糖进行脱水（防止冷冻切片时形成冰晶和孔洞），初始脱水时脑会浮在蔗糖上面，待完全脱水后脑会沉底。此时可将脑取出进行冷冻切片。
缺血性脑血管病的抗血小板药物治疗
缺血性脑血管病的抗血小板药物治疗 选择题（共10 题，每题10 分） 1 . （单选题）缺血性脑卒中及短暂性脑缺血发作二级预防风险评估量表常用的有哪些（） A .ABCD评分系统 B .Essen量表 C .SPI-II量表 D .以上都是 2 . （单选题）随着Essen量表评分增高，卒中复发风险增加，Essen量表评分大于几分的患者，年卒中复发风险>4％（） A .≥3分 B .≥4分 C .≥5分 D .≥6分 3 . （单选题）建议急性缺血性脑血管病患者在发病后多长时间内服用阿司匹林（） A .24～48 h B .48～72 h C .72～96 h D .96～120 h 4 . （单选题）轻型卒中（NIHSS评分≤3分）患者起病24h内，应尽早给予何种抗血小板药物治疗21d（） A .阿司匹林 B .氯吡格雷 C .氯吡格雷联合阿司匹林 D .以上都不是 5 . （单选题）2014中国缺血性脑卒中和短暂性脑缺血发作二级预防指南指出哪种抗血小板药物可作为长期二级预防一线用药（） A .阿司匹林 B .氯吡格雷 C .阿司匹林或氯吡格雷 D .以上都不是 6 . （单选题）对于未接受静脉溶栓治疗的轻型卒中及高危TIA患者，在发病多长时间内启动双重抗血小板治疗（） A .12h B .24h C .36h D .48h 7 . （单选题）消化道出血患者对症处理选择哪些药物（） A .PPI B .H2受体拮抗剂 C .黏膜保护剂 D .以上都是 8 . （单选题）在使用抗血小板药物前先评估消化道出血的风险，以下哪项是常见的危险因素（）
A .消化道溃疡及并发症病史 B .消化道出血史 C .双联抗血小板治疗或联合抗凝治疗 D .以上都是 9 . （单选题）《2019 阿司匹林在心血管疾病一级预防中的应用中国专家共识》指出哪个年龄段可以考虑服用小剂量阿司匹林(75~100 mg/d) 进行一级预防（） A .40-50岁 B .40-60岁 C .40-70岁 D .40-80 10 . （单选题）不建议下列哪些人群服用阿司匹林进行ASCVD 的一级预防（） A .年龄>70 岁或<40 岁的人群 B .高出血风险人群 C .经评估出血风险大于血栓风险的患者 D .以上都是
灌流取脑
大鼠灌注固定取脑 准备物品： 37℃的温生理盐水500ml、10%的中性甲醛或4%的多聚甲醛固定液500 ml、500 ml的输液瓶2个、输液管2副、三通1个,镊子、剪刀、止血钳各2把、灌注针(将12号注射用针头的针尖掐断磨钝圆、光滑即可)1个、麻醉剂、步骤 1)将两个输液瓶中分别装满生理盐水和固定液并将输液管安装在生理盐水瓶上并调整好,使管内没有气泡。 2)将动物麻醉,数分钟后,待动物前后肢放松,即可准备灌注。 3)将已麻醉的动物仰卧在解剖台上,固定四肢,用左手持镊子夹起腹部皮肤,右手持剪刀自腹部剪一小口,由此沿腹中线和胸骨剑突中线向上将皮肤剪至下颌,分离皮下组织,将皮肤翻向两侧,再沿腹中线和胸骨中线向上剪开胸骨,沿膈肌向两侧剪开,并用止血钳将胸骨和胸部的皮肤钳紧,将止血钳翻向外侧以充分暴露心脏。小心用镊子将心包打开,滴一些生理盐水保持湿润。 4)分离出主动脉,穿一根丝线,准备结扎灌针。 5)将左心室尖用眼科剪刀剪开一小口,将灌注针插入心室并送至主动脉内,用丝线结扎牢固,使之不能退出,打调节阀,灌注生理盐水,灌注时的灌流量约20 ml/分钟。时,剪开右心耳,使血液排出。观察肝脏逐渐变为白色为止 6)旋转三通使之对准灌注液,开始灌注固定液。固定液进大鼠血管后,逐渐出现四肢抽动,表明灌注液进入大鼠大脑,待抽动完全停止,全身组织器官变硬后即可取材。 7)取脑：枕骨大孔处用剪刀横断，小心地于枕骨大孔斜插入剪刀剪开顶骨，用止血钳掰断两边地顶骨，注意嗅球上地顶骨也要仔细去掉，用剪刀于一侧剪断视神经并探到颅底，就可以将整块的脑组织翘起。取出的脑在同样固定液中4℃再固定4-6小时。 8)保存或切片注意事项： 1、将灌注针插入主动脉内是灌注固定的关键,也是难点。首先准确找到主动脉,这是此步骤的要点。可用温生理盐水将胸腔内的血液冲洗干净,用眼科镊子轻轻夹住心外膜(夹的越少越好,以免影响取材)将心脏向左上方提起,即可看清主动脉,又可使灌注针很容易地插入主动脉内。插入时动作要慢,针尖方向不要偏向右侧,以免刺入右心房,如果感到有阻力,则将针退后、调整方向重新进针,直到进入主动脉,灌注针进入主动脉后可在心脏的上方看到其位置,灌注针进入主动脉的长度最好为3~5毫米,然后用丝线扎紧。切勿将灌注针放在左心室内,这样由于主动脉瓣的关闭,灌注液很难进入主动脉,而是沿着心室的切口流出,致使灌注失败。另外,灌注针插入成功后,一定要用剪刀剪开右心耳而不是右心室,这是灌流液的出口。剪开心尖的位置一定要掌握好,不能偏右使灌注针插入右心室。 2、配4％多聚甲醛PBS缓冲液：称取40g PFA溶于装有500ml DEPC水的玻璃容器（烧杯或烧瓶）中，持续加热磁力搅拌至60～65℃，使成乳白色悬液。用1.0mol/L的NaOH直至7.0，使呈清亮状（滴加），再加入约500ml PBS，充分混匀（在冰浴或冷水浴中），可再检测一下pH，过滤后定容至1000ml，室温或4℃保存备用。 加热至60～65℃固然融解的快，只需要15分钟左右，不过容易挥发，气味难闻，需配置的量比较大的时候是较合适的方法。如果有通风厨的可在通风厨内配置，就基本没有气味散发的问题。在通风较好的地方配置也可以，但配置的时候配溶液的人一定要注意自我防护，味道确实很刺激！。如果不着急，可先配好pbs，称好相应的多聚甲醛，37℃水浴或温箱密
大鼠肝脏移植模型制作
大鼠肝脏移植模型制作 大鼠原位肝移植是研究器官保存、肝脏缺血再灌注损伤、免疫抑制剂、移植排斥反应以及免疫耐受机理等方面常用的动物模型。最初由Lee在1973年报道，经过许多学者的改进，其手术基本稳定，根据肝上下腔静脉吻合方式，大鼠原位肝移植可分为“二袖套法”和“三袖套法”，下面简单的将大鼠肝脏移植的模型制作介绍一下。 一、手术器械 显微外科手术器械包，手术显微镜1台，自制S拉钩（用橡皮筋一端带弯成S形大头针）4个，眼科剪1把，其它外科器械若干及纱布、棉球、棉片和橡皮条等。 二、供、受者大鼠的选择 根据不同的研究目的选择不同的动物品系，在同种移植模型中，一般采用两种纯系健康大鼠，如Lewis大鼠，Brown Norway 大鼠（BN），DA大鼠等，国内应用Wistar，SD大鼠也比较多。如果是异种移植可以选用豚鼠－大鼠，仓鼠－大鼠等不同品系的动物。 三、术前准备 供、受者术前禁食14h，自由饮水，采用乙醚吸入麻醉麻醉的方法，提高手术的安全性，受者术前肌肉注射阿托品0.03mg，防治分泌物阻塞呼吸道。 四、供者手术 麻醉成功后，经阴茎背静脉注射50U/ml肝素稀释液3.0ml，使供者全身肝素化。十字切口入腹，经腹主动脉穿刺灌洗供肝；灌洗前，剪开膈肌，阻断腹主动脉，离断胸腔段肝上下腔静脉，灌洗至流出液澄清为止，约需灌洗液20～30ml。游离肝下下腔静脉，分离结扎离断右肾静脉和右肾上腺静脉，自肠系膜上静脉置管，缓慢注入20ml含肝素的林格氏液，于右肾静脉下方离断肝下下腔静脉，剪开胆总管前壁，近肝端插入外径1.0mm，长4.0mm 的聚乙烯管约2.0mm（可用硬膜外导管制成），结扎固定后远肝端离断之，分离结扎离断肝固有动脉；游离门静脉，结扎离断其分支幽门静脉、脾静脉，于脾静脉下方离断门静脉，锐性分离肝周韧带，结扎左膈下静脉，绕肝上下腔静脉环切膈肌及其腱膜，保留2.0mm
缺血性脑卒中的动物模型完整版
缺血性脑卒中的动物模 型 HEN system office room 【HEN16H-HENS2AHENS8Q8-HENH1688】
缺血性脑卒中研究中的动物模型 想要进行一项基础研究，动物模型必不可少。缺血性脑卒中研究如火如荼，动物模型也多种多样，有哪些常用的动物模型，以及它们各自的特点就成了研究人员在选择模型时十分关注的问题。 在缺血性卒中过程中，最终的梗死体积和神经功能预后受到多种因素的影响，例如缺血的持续时间、缺血的严重程度、侧枝循环、系统的血压以及梗死产生的原因和位置。此外，年龄、性别和相对复杂的药物遗传背景也会对其产生影响。因为卒中是如此复杂的一个疾病，因而动物模型也往往只能覆盖其中个别方面的特点。 虽然中风是一种复杂的疾病，但其存在一些共同的特点，这使得我们有机会用实验来模拟卒中的发生。缺血性脑卒中的一个重要特点是进展，这也解释了缺血半暗带的存在。当血流量降至基线值的15-20%以下时，只要几分钟就会产生不可逆的脑损伤核心，并且迅速相周围发展。其周围的脑组织血流减少得相对较轻，所以此时神经功能缺失而组织结构却是完整的。但如果脑血流不能恢复，那么这些所谓的半暗带组织就会被纳入梗死核心区。 最常用的一种模型是啮齿动物的线拴法大脑中动脉闭塞模型（MCA），方法是将普通的血管内缝线或特制的线拴放入大脑中动脉开口处，从而达到阻塞血管造成血流量减少的目的。这种方法的优点是：不需要开颅的手术，并且通过拔出线拴的方法还可以达到在特定时间再通血管的目的，虽然瞬间的血管开通与人体一般的病理生理过程相去甚远，但与近来应用越来越广泛的机械取栓治疗的病理过程不谋而合。因此，虽然在模型的制作上存在一些问题，但仍是目前最广受认可的一种脑卒中动物模型。 另一种常用的方法是用各种方式直接地闭塞血管，分为永久地闭塞血管（如凝断）和暂时闭塞血管（如结扎），但大多都需要开颅的手术操作。 使用内皮素－1（一种强血管收缩剂）可以诱导短暂的局灶性脑缺血，其产生的病灶可以分布于脑组织任何位置，常常被用于制作腔隙性梗死的模型制作。 光化学法是在系统给予荧光物质后，用可穿透颅骨的光线，激活特定脑区的荧光剂，从而达到局部梗死的目的。这种方法可以做到高度的可重复性，并且病灶可以相当局限。但缺点是这种方法制作的模型缺乏缺血半暗带，因而不能很好地模拟某些病理生理变化。 另外还有血栓栓子模型和栓塞微球模型，这两种方式与实际临床病理生理过程更为相近，但同时也有梗死位置变异性大，并且有不可预知的血管再通等问题。 尽管有如此众多的动物模型，但由于模式动物本身和人有诸多差异，在许多结构和功能上都不能完全模拟。随着对脑功能研究的进一步深入，这些简单的动物模型将不适用于许多高级神经功能的研究。诸如卒中后认知功能损伤、神经精神症状、抑郁、睡眠呼吸暂停等常见的卒中后并发症的研究均在不同程度上因为缺少有效的动物模型而受到阻碍。而这也将是卒中动物模型进一步发展所要解决的问题。 1. Sommer, . Ischemic stroke: experimental models and reality. Acta Neuropathol133, 245-261 (2017).
大鼠线栓(MCAO)模型+灌注取脑+TTC染色
第一部分 线栓模型制作 1、实验器材（从左到右）： 第一行：干棉球、酒精棉球、10％水合氯醛＋注射器、碘伏＋棉签 第二行：三种不同粗细的鱼线（鱼线最好在2.0、2.5mm处各用记号笔作好标记，便于观察进入距离）、弯盘内为手术器材 第三行：记号笔、自制拉钩（皮筋+曲别针＋大头针） 2、麻醉： 可用饮料瓶自制捕鼠器（适用于不敢手抓大鼠的），用于打麻药，根据大鼠的重量选择不同粗细的饮料瓶（太粗了大鼠可在瓶中回头）。 效果图
3、麻倒后绑在手术台上。 4、剪去颈前的鼠毛，碘伏消毒。 5、沿经部正中切开皮肤。 说明：切开皮肤前最好将结扎动脉的线事先剪好（后面会用到）。
6、钝性分离皮下组织。 如图：大鼠腹侧可见事先剪好的结扎线。 7、分离到气管前肌后，沿右侧胸锁乳突肌腱向下分离，见到颈动脉鞘后可上拉钩。
8、分离动脉鞘。 如图：分离好后见光滑的颈总动脉。 9、分离出颈总、颈外、颈内动脉，结扎颈总、颈外动脉，注意中间那根线不要系紧，用来插鱼线时防止出血的。
10、夹闭颈内动脉，用眼科剪将颈总动脉剪一小口。 11、插入鱼线，鱼线进入颈内动脉后按图中注释方法插（成功率在90%以上）。 说明： （1）这一步鱼线选择是关键，根据大鼠重量（作的多了后根据动脉粗细就可选择了）选鱼线。我们的经验是：250g以
下的选0.26mm的线，250-300g的选0.26mm蘸腊的或0.28的都可以。 （2）如果遇到鱼线怎么也查不进去的情况，可让大鼠休息一会，换细点的鱼线再试，这种情况不一定都是进到翼腭动脉了，我曾解剖过4例这种情况的大鼠，有三例都是在如颅的地方卡住了，可惜我们手里没有0.24mm的鱼线。 （3）通过实践，我们认为结扎或夹闭翼腭动脉没有必要，按我们的方法，熟练的话，从切开到缝合完毕也就是15分钟，算上准备工作（如麻醉、消毒等）半小时也可以搞定了，这样一上午两人作10只大鼠不成问题。 （4）我们体会最好用蘸腊的鱼线作模型，好处是进线深度控制的好，不容易出现蛛网膜下腔出血。我们曾试过0.26mm 的鱼线（不带腊）在250g以下的大鼠进入深度足有2.5cm 12、成功后结扎中间那根线，可见第一个标记距动脉分叉约2mm。 13、缝合。