单核细胞趋化蛋白1和核因子与巨噬细胞浸润及
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微生物在单细胞蛋白中的应用
微生物在单细胞蛋白中的应用 【摘要】 微生物细胞含有丰富的蛋白质，而这正是人和动物不可缺少的营养物质，这是微生物食品倍受青睐的一个原因。人们热衷于微生物食品的开发，还有一个重要的原因，就是它可以解决因人们对蛋白质的需求增加而导致的粮食供求矛盾。 【关键词】微生物细胞蛋白质营养物质 一、引言 食品特别是蛋白质的短缺，正在对我们人类构成威胁。在这种情况下，开发新的食品资源就显得十分重要。在我们食用的各种食品中，除了动物食品和植物食品外，还包含了微生物食品。事实上，人类在很早的时候就开始食用微生物了，比如说我们所食用的味道鲜美的香茹，就是真菌形成的菌落，其他还有木耳、猴头、灵芝等，都是极具营养价值和药用价值的食用微生物。现已被人们广泛栽培和利用。 二、正文 单细胞蛋白定义 单细胞蛋白是通过培养单细胞生物而获得的菌体蛋白质。 单细胞蛋白的优点 1 SCP营养丰富 2 利用原料广可就地取材，廉价大量地解决原料问题。 3 生产速率高一般蛋白质生产速度同猪、牛、羊等体重的倍增时间成正比。 4 劳动生产率高生产不受季节气候的制约，易于人工控制，同时由于在大型发酵罐中立体式培养占地面积少。 5 可以完全工业化生产单细胞蛋白生产比农业生产需要的劳动力少，又不受地区、季节和气候条件的制约，可在占地有限的小设备上进行，不仅数量大，而且质量好，远远超过现有粮食品种的蛋白质。 6 单细胞生物易诱变，比动、植物品种容易改良可采用物理、化学、生物学方法定向诱变育种，获得蛋白质含量高、质量好、味美，并易于提取蛋白质的优良菌种。 单细胞蛋白种类与具备条件及生产过程
用于生产单细胞蛋白的微生物种类很多，包括细菌、放线菌、酵母菌、霉菌以及某些原生生物。这些微生物通常要具备下列条件：所生产的蛋白质等营养物质含量高，对人体无致病作用，味道好并且易消化吸收，对培养条件要求简单，生长繁殖迅速等。单细胞蛋白的生产过程也比较简单：在培养液配制及灭菌完成以后，将它们和菌种投放到发酵罐中，控制好发酵条件，菌种就会迅速繁殖；发酵完毕，用离心、沉淀等方法收集菌体，最后经过干燥处理，就制成了单细胞蛋白成品。 单细胞蛋白特性 （1）在理想情况下，菌种甚易使单细胞蛋白质产量倍加，而其所需时间要比使农作物蛋白质量倍增所消耗时间快500倍，比其他一般饲养家畜产量所耗的时间倍增快1000-5000倍。（2）单细胞蛋白质研究发展的实验要比研究农作物或家畜的实验易于进行，而且在极短的时间内就可得到有价值的数据与结果。 （3）单细胞蛋白质的生产不受季节，空间，阳光的种种限制。 单细胞蛋白的作用 通过微生物发酵可以生产大量的微生物蛋白，不仅可供人类直接食用，也可作为家畜、家禽的高蛋白饲料，为我们提供质优价高的肉类蛋白，它的脂肪含量只有瘦牛肉的１０％，深受广大消费者的欢迎。一方面微生物蛋白食品的开发可以缓解耕地减少、粮食紧缺的矛盾，另一方面高蛋白的微生物蛋白食品的开发，也有利于改善人们的食品结构。 1 作为畜禽饲料添加剂 据分析，酵母单细胞蛋白中蛋白质含量为45％－55％，比大豆高30％以上；细菌的单细胞蛋白中蛋白质的含量高达70％，比大豆高50％，比鱼粉高20％。因此，在各类饲料中加入单细胞蛋白添加剂，可以取得诸如使猪长得更快、牛产奶更多这样的效果。如在畜禽的饲料中，只要添加3％～10％的单细胞蛋白，便能大大提高饲料的营养价值和利用率。 2 作为食用蛋白质 单细胞蛋白所含的营养物质极为丰富。其中，蛋白质含量高达40%～80%，比大豆高10%～20%，比肉、鱼、奶酪高20%以上；氨基酸的组成较为齐全，含有人体必需的8种氨基酸，尤其是谷物中含量较少的赖氨酸。单细胞蛋白中还含有多种维生素、碳水化合物、脂类、矿物质，以及丰富的酶类和生物活性物质，如辅酶A、辅酶Q、谷胱甘肽、麦角固醇等。单细胞蛋白不仅能制成“人造肉”供人们直接食用，而且还能提高食品的某些物理性能。
天然气发酵产单细胞蛋白
天然气发酵产饲用单细胞蛋白 1.单细胞蛋白 SCP（single-cell-protein）是指利用各种基质大规模培养细菌、酵母菌、霉菌、微藻、光合细菌等而获得的微生物蛋白，是现代饲料工业和食品工业中重要的蛋白来源。 1966年，麻省理工学院首次提出SCP的概念，1967年在第一次全世界蛋白会议上正式将微生物菌体蛋白统称为单细胞蛋白。 SCP营养丰富，蛋白质含量40％-80％不等，所含氨基酸组分齐全平衡，且有多种维生素，消化利用率高(一般高于80％)，其最大特点是原料来源广，微生物繁殖快，成本低，效益高。细胞和酵母利用甲醇、乙醇、甲烷和多链烷烃生产单细胞蛋白(SCP)；利用废物中的许多物质转化为SCP，如稻秸、蔗渣、柠蒙酸废料、果核、糖浆、动物粪便和污物等；利用藻类(如小球藻、栅藻)生产SCP。生产SCP的微生物有酵母、非病原性细菌、放线菌和真菌及藻类等，其中饲用酵母和藻类蛋白发展最快。 2.嗜甲烷细菌/甲烷氧化菌 甲烷氧化菌（Methanotrophs 或 Methane-oxidizing bacteria）是甲基氧化菌的一个分支，它能够利用甲烷或甲醇等 C1 化合物作为唯一的碳源进行生长，在全球大气甲烷的平衡中有着十分重要的作用。 利用甲烷为原料生产单细胞蛋白的细菌种类，如甲烷假单胞菌，嗜甲烷单胞菌等。 甲烷不含芳香烃类，无致癌物质、无毒害，产品安全性高，原料蕴含丰富，成本低，曾被当作第二代石油蛋白进行研究。但嗜甲烷生产菌往往生长缓慢，菌体浓度低。所以其生产效率低，且尾气中的残留甲烷的利用是个问题。 3.甲烷蛋白发展史 （1）20 世纪 60 年代，单细胞蛋白开始在各国引起重视，被称为单株蛋白或合成蛋白。由于制造的原料是正构石蜡烃、粗柴油、甲烷、乙醇、甲醇等都属
趋化因子及其受体在免疫细胞中的作用
趋化因子及其受体在免疫细胞中的作用研究概述 趋化因子是目前成员最多的细胞因子家族，在人和小鼠中大概有50个内源性趋化因子。这些因子大约结合20多个跨膜受体。趋化因子的主要作用是控制免疫细胞的迁移模式，对细胞运动至关重要。趋化因子系统在初始T细胞产生，决定细胞的分化（如效应细胞和记忆细胞），影响调节性T细胞的功能，调节免疫细胞迁移和定位，已达到体内平衡。趋化因子在急性炎症和淋巴系统中对免疫反应的产生和调节具有重要作用。趋化因子在炎性疾病及癌症中的作用使其成为新的药物靶点。 趋化因子可以控制骨髓、血液及外周组织中的免疫细胞运输。CXCL12由CAR细胞产生，可以使发育中的中性粒细胞、B细胞和单核细胞保留在骨髓中。DC前体、肥大细胞前体和发育中的嗜酸性粒细胞通过未知机制保留在骨髓中。在没有CXCR4信号传导或CXCR2信号传导的情况下，嗜中性粒细胞离开骨髓并进入血液。B细胞通过CB2信号进入骨髓，并通过S1P1信号传导进入血液。B细胞可以使用CCR7、CXCR4和CXCR5信号进入淋巴结构。单核细胞响应CCR2信号进入血液以及CXCR4信号传导减少。单核细胞分化为促炎症（CCR2+）和抗炎（CX3CR1+）单核细胞。抗炎单核细胞可以通过CX3CL1进入外周组织。DC前体通过未知机制进入血液，并可以通过CCL20离开外周组织。在人类中，CXCL14也可能在抗炎单核细胞和DC前体迁移到外周组织中起作用。肥大细胞前体通过未知机制离开骨髓，并在CXCR2介导的信号后迁移至肠道。CCR3信号通过CCL11和CCL24（人和小鼠）以及CCL26（人）后，嗜酸性粒细胞进入血液并离开外周组织。
单核细胞趋化蛋白1(MCP1)检测试剂盒 SEA087Hu使用说明书
SEA087Hu96T 单核细胞趋化蛋白1(MCP1)检测试剂盒 (酶联免疫吸附试验法) 适用生物：人 使用说明书 仅供体外研究使用，不用于临床诊断! 第12版（2016年05月修订） [预期应用] 本试剂盒运用双抗体夹心ELISA法定量测定人血清、血浆、组织匀浆、细胞裂解液、细胞培养上清或其它相关生物液体中MCP1含量。 [试剂盒内容] 试剂名称数量试剂名称数量 96孔板（预包被）196孔板覆膜4 标准品2标准品稀释液1×20mL 检测溶液A1×120μL检测溶液A稀释液1×12mL 检测溶液B1×120μL检测溶液B稀释液1×12mL TMB底物1×9mL终止液1×6mL 洗涤液（30×）1×20mL使用说明书1 [需自备的设备及试剂] 1、450±10nm滤光片的酶标仪（建议仪器使用前提前预热） 2、单道或多道微量移液器及吸头 3、稀释样品的EP管 4、蒸馏水或去离子水 5、吸水纸 6、盛放洗液的容器 7、0.01mol/L（或1×）磷酸缓冲盐(PBS)，pH=7.0-7.2 [试剂盒的储存及有效期] 1、未开封的试剂盒：所有试剂均按试剂瓶标签上所示保存。请注意，收到试剂盒后请尽快将标准品、检测溶 液A、检测溶液B以及96孔板保存于-20o C，其余试剂请置于4o C保存备用。 2、使用后的试剂盒：剩余试剂仍需按照试剂瓶标签所示的温度保存，此外，请将未使用酶标条用包含干燥剂的铝 箔袋装好，并拉紧密封铝箔袋，置于-20o C保存。 注意： 试剂盒内酶标条可拆卸，按实验需求可分多次使用；使用后的剩余试剂盒建议在首次实验后1个月内使用完毕。产品过期时间以盒子上的标签为准，保质期内所有组分都确保是稳定的。
嗜酸粒细胞增多症诊断与治疗中国专家共识(2017年版)
?标准与讨论? 嗜酸粒细胞增多症诊断与治疗中国专家共识（2017年版） 中华医学会血液学分会白血病淋巴瘤学组DOI ：10.3760/cma.j.issn.0253-2727.2017.07.001 通信作者：肖志坚，中国医学科学院血液学研究所、血液病医院，Email ：zjxiao@https://www.360docs.net/doc/565391385.html, ；王建祥，中国医学科学院血液学研究所、血液病医院，Email ：wangjx@https://www.360docs.net/doc/565391385.html, Chinese expert consensus on the diagnosis and treatment of eosinophilia （2017）Leukemia and Lymphoma Group,Chinese Society of Hematology,Chinese Medical Association Corresponding author:Xiao Zhijian,Institute of Hematology and Blood Diseases Hospital,CAMS &PUMC,Tianjin 300020,China,Email:zjxiao @https://www.360docs.net/doc/565391385.html,;Wang jianxiang,Institute of Hematology and Blood Diseases Hospital,CAMS &PUMC,Tianjin 300020,China,Email:wangjx @https://www.360docs.net/doc/565391385.html, 为了进一步规范我国血液科医师对嗜酸粒细胞增多症患者的临床诊治，由中华医学会血液学分会白血病淋巴瘤学组牵头，在广泛征求国内专家意见基础上，最终达成了嗜酸粒细胞增多症的诊断程序、实验室检查、诊断标准和治疗原则等方面的共识。 一、定义和分类［1-6］1.嗜酸粒细胞增多症（Eosinophilia ）：外周血嗜酸粒细胞绝对计数＞0.5×109/L 。 2.高嗜酸粒细胞增多症（Hypereosinophilia,HE ）：外周血2次检查（间隔时间>1个月）嗜酸粒细胞绝对计数＞1.5×109/L 和（或）骨髓有核细胞计数嗜酸粒细胞比例≥20%和（或）病理证实组织嗜酸粒细胞广泛浸润和（或）发现嗜酸粒细胞颗粒蛋白显著沉积（在有或没有较明显的组织嗜酸粒细胞浸润情况下）。 3.HE 的分类：分为遗传性（家族性）HE （HE FA ）、继发性（反应性）HE （HE R ）、原发性（克隆性）HE （HE N ）和意义未定（特发性）HE （HE US ）的四大类。 （1）HE FA ：发病机制不明，呈家族聚集，无遗传性 免疫缺陷症状或体征，无HE R 和HE N 证据。 （2）HE R ：主要可能原因有：①过敏性疾病：如哮喘、异位性皮炎、花粉症等；②皮肤病（非过敏性）：Wells 综合征等；③药物：包括抗生素和抗痉挛剂；④感染性疾病：寄生虫感染和真菌感染等；⑤胃肠道疾病：嗜酸细胞性胃肠炎、肠道炎症性疾病、慢性胰腺炎、乳糜泄等；⑥脉管炎：Churg-Strauss 综合征、结节性多动脉炎等；⑦风湿病：系统性红斑狼疮、Shulman 病、类风湿性关节炎等；⑧呼吸道疾病：L ǒeffler 综合征、过敏性支气管肺曲霉菌病等；⑨肿瘤：实体瘤、淋巴瘤和急性淋巴细胞白血病（嗜酸粒细胞为非克隆性）、系统性肥大细胞增多症（嗜酸粒细胞为非克隆性）等；⑩其他：慢性移植物抗宿主病、Gleich 病等。 （3）HE N ：是指嗜酸粒细胞起源于血液肿瘤克隆。主要包括：①髓系和淋系肿瘤伴PDGFRA 、PDGFRB 、FGFR1重排或PCM1-JAK2、ETV6-JAK2或BCR-JAK2融合基因［7-9］；②慢性嗜酸粒细胞白血病-非特指型（CEL-NOS ），包括那些伴ETV6-ABL1、ETV6-FLT3或其他激酶融合基因；③不典型慢性髓性白血病伴嗜酸粒细胞增多（aCML-Eo ）；④慢性粒单核细胞白血病伴嗜酸粒细胞增多（CMML-Eo ）；⑤慢性髓性白血病加速期或急变期（偶见）；⑥其他骨髓增殖性肿瘤急变期（偶见）； ⑦急性髓系白血病伴嗜酸粒细胞增多（AML-Eo ），特别是伴t （8;21）（q22;q22）或inv （16）（p13.1q22）（仅偶见）；⑧急性淋巴细胞白血病，如果证实嗜酸粒细胞来源于恶性克隆；⑨系统性肥大细胞增多症（嗜酸粒细胞证实为克隆性）。 （4）HE US ：查不到上述引起嗜酸粒细胞增多的原发或继发原因。 4.HE 相关的器官受损［1,5］：器官功能受损，伴显著的组织嗜酸粒细胞浸润和（或）发现嗜酸粒细胞颗粒蛋白广泛沉积（在有或没有较显著的组织嗜酸粒细胞浸润情况下）且至少有以下1条：①纤维化（肺、心脏、消化道、皮肤和其他脏器组织）；② 血栓
人(Human)单核细胞趋化蛋白1(MCP-1)ELISA试剂盒说明书
上海笃玛生物科技有限公司 本试剂盒只能用于科学研究，不得用于医学诊断 人（Human）单核细胞趋化蛋白1（MCP-1） ELISA 检测试剂盒 使用说明书 检测原理 试剂盒采用双抗体一步夹心法酶联免疫吸附试验（ELISA）。往预先包被单核细胞趋化蛋白1（MCP-1）抗体的包被微孔中，依次加入标本、标准品、HRP标记的检测抗体，经过温育并彻底洗涤。用底物TMB显色，TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的单核细胞趋化蛋白1（MCP-1）呈正相关。用酶标仪在450nm 波长下测定吸光度（OD 值），计算样品浓度。 样品收集、处理及保存方法1. 血清：使用不含热原和内毒素的试管，操作过程中避免任何细 胞刺激，收集血液后，3000转离心10分钟将血清和红细胞迅速小心地分离。2. 血浆：EDTA、柠檬酸盐或肝素抗凝。3000转离心30分钟取上清。 3.细胞上清液：3000转离心10分钟去除颗粒和聚合物。 4. 组织匀浆：将组织加入适量生理盐水捣碎。3000转离心10分钟 取上清。5. 保存：如果样本收集后不及时检测，请按一次用量分装，冻存 于-20℃，避免反复冻融，在室温下解冻并确保样品均匀地充分解冻。自备物品 1.酶标仪（450nm） 2.高精度加样器及枪头：0.5-10uL、2-20uL、20-200uL、200-1000uL 3.37℃恒温箱操作注意事项1. 试剂盒保存在2-8℃，使用前室温平衡20分钟。从冰箱取出的 浓缩洗涤液会有结晶，这属于正常现象，水浴加热使结晶完全溶解后再使用。2.实验中不用的板条应立即放回自封袋中，密封（低温干燥）保 存。3. 浓度为0的S0号标准品即可视为阴性对照或者空白；按照说明书操作时样本已经稀释5倍，最终结果乘以5才是样本实际浓度。4. 严格按照说明书中标明的时间、加液量及顺序进行温育操作。
我国单细胞蛋白的开发利用现状与前景
我国单细胞蛋白的开发利用现状与前景 章练红 王翠娥 李运景 韩 琴 (河南省农业科学院信息所 郑州 450002) (郑州畜牧专科学校) 提 要 以丰富的数据概述了我国近10年来以工业废液、农副产品加工下脚料,以及各类植物纤维素为原料研究与开发生产单细胞蛋白所取得的可喜进展,并详细论述了我国生产单细胞蛋白的潜力与开发前景。 关键词 单细胞蛋白 开发利用 单细胞蛋白(Single Cell Pratein,SCP)是指用各种基质大规模培养细菌、酵母菌、霉菌、藻类和担子霉获得的微生物蛋白(或菌体蛋白),是食品工业和饲料工业的重要蛋白质来源。SCP营养丰富,蛋白质含量40%～80%,比大豆高33%,且含有18～20种氨基酸,组分齐全,富含多种维生素;SCP生产原料来源广、繁殖速度快、生产效率高、占地面积小、不受气候影响等优点;目前已发展成为一项具有巨大经济效益的生物工程产业。 1 单细胞蛋白的开发利用现状 我国SCP生产始于1922年,但前期发展缓慢。80年代以来,发展迅速,主要产品为酵母、饲料酵母(包括固体发酵产品,亦称固体酵母)。1987年全国SCP(酵母)总产量1.55万t。1990年SCP超过2万t,1991年总产量6万t,其中固体酵母达4.8万t,1992年固体酵母达8万t,1993年超过10万t,到2000年预计发展到15万t[1] 。 111 利用工业废液生产SCP 1.1.1 造纸废液的利用 吉林省石砚造纸厂于60年代末期建成一套利用亚硫酸盐法将制浆废液连续发酵、生产饲料酵母的设备,生产能力1200t, 1991年生产800t[2] 。 11112 味精废液的利用 以味精废液为原料生产SCP的厂家有10个,总生产能力6500t/a,1991年生产3150t[2]。江苏如东生物化学厂、常州味精厂等相继建成年产500t的车间,周口味精厂建成年产2000t的车间。福州味精厂于1987年由西德引进4台套HDB-50型碟片离心机,首家用于分离谷氨酸菌体蛋白,制备SCP,年产量约500～600t。沈阳味精厂研制出可生产蛋白质含量66%菌体蛋白的全溶气共絮气浮法工艺,于1996年通过专家鉴定。11113 酒精废液的利用 以酒精废液为原料生产SCP的厂家有9家,主要有连云港糖厂、福建云肖糖厂、广西南宁糖厂、北京酒精厂、浙江新市酒厂等,总生产能力6900t/a,1991年生产3200t,产品粗蛋白含量45%～50%[2]。广东江门甘蔗化工厂建成年产1000t的酵母车间,国家科委在广东江门也建成一座万吨级SCP试验工厂,引进国外先进设备,用糖密酒精废液生产SCP,1991年已投入生产。北京酒精厂、安徽宿县酒精厂、河南南阳酒精厂从国外引进成套设备,用以薯干淀粉制酒精的废液生产SCP饲料。 11114 淀粉废水的利用 近年来有不少单位以此为原料开展研究,取得一些进展。辽宁省淡水水产研究所通过筛选酵母菌种,培养出蛋白质含量为65.87%的饲料酵母。广西大学化学系利用木薯淀粉废水,采用混种发酵法生产出蛋白质含量达50%以上的SCP。 11115 丙酮丁醇废液的利用 北京市营养源研究所用丝甚霉BN99对丙酮丁醇废水处理,获得蛋白质含量30%～35%的SCP。广西轻工所和南宁糖厂协作将丙酮丁醇废液的悬浮固体滤出,将剩余清液培养成饲料酵母,获得率为0145%～0171%。11116 柠檬酸废液的利用 无锡轻工业学院自1981年开展这项研究,完成了一整套工艺。最近与江苏清江食品工业总厂合作建成一座利用柠檬酸废 收稿日期:1998-03-31,修回日期:1998-04-17 ? 1 1 ? 中国农学通报 1998年 第14卷 第3期
嗜酸性粒细胞计数偏高的原因
嗜酸性粒细胞计数偏高的原因 嗜酸性粒细胞计数偏高的原因1、嗜酸性粒偏高的原因嗜酸性粒细胞计数嗜酸性粒细胞起源于骨髓内CFU-s经过单向嗜酸性祖细胞(CFU-EO)阶段在有关生成素诱导下逐步分化成熟为嗜酸性粒细胞在正常人外周血中少见仅为0.5-5%嗜酸性粒细胞有微弱的吞噬作用，但基本是无杀菌力它的主要作用是抑制嗜石破天惊生粒细胞和肥大细胞合成与释放其活性物质吞噬其释出颗粒并分泌组胺酶发破坏组胺从而起到限制过敏反应的作用。此外实验症明它还参加与对嚅虫的免疫反应嗜酸性粒细胞的趋化因子至少有六大来源:①从肥大细胞或嗜碱性粒细胞而来的组胺(histamine);②由补体而来的C3AC5A、C567其中以C5a最为重要;③从致敏淋巴细胞而来的嗜酸性细胞趋化因子;④从寄生虫而来的嗜酸性粒细胞趋化因子;⑤从某些细菌而的嗜酸性粒细胞趋化因子(如乙型溶血性链球菌等);⑥从肿瘤细胞而来的嗜酸性粒细胞趋化因子以上务因素均可引起的嗜酸性粒细胞增多由于嗜酸性粒细胞在外周血中百分率很低故经白细胞总数和嗜酸性粒细胞百分率换算而来的绝对值误差较大因此在临床上需在了解嗜酸性粒细胞的变化时应采用直接计数法[原理]用嗜酸性粒细胞稀释液将血液稀释一定倍数同时破坏红细胞和大部分其它白细胞并将嗜酸性粒细胞着色然后滴入细胞计数盘中计数一定范围内嗜酸性粒细胞数即可求得每升血液中嗜酸性粒细胞数嗜酸性粒细胞稀释液中类繁多虽想方不同但作用大同小异分为保护嗜酸性粒细胞而破坏其它细胞的物质和着染嗜酸性粒细胞的物质(如溴甲酚紫、伊红、石楠红等)可根据本实验室的条件选择配制[参考值](0.05-0.5)×109/L[临床意义] 2、生理变化在劳动、寒冷、饥锇、精神刺激等情况下交感神经兴奋
单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)与胰腺癌的关系
单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1）与 胰腺癌的关系 关键词:趋化因子；单核细胞趋化蛋白-1；肿瘤；胰腺癌 The relationship of Monocyte Chemoattractant Protein-1(MCP-1) and Pancreatic Cancer TANG Zuxiong Department of General Surgery ,The First Affiliated Hospital of Soochow University, Suzhou 215000 ,China 摘要：细胞因子可以分为白细胞介素、干扰素、肿瘤坏死因子、集落刺激因子、趋化性细胞因子和生长因子六类。趋化因子是一类具有相似分子结构的超家族趋化性细胞因子，依其一级结构中N端高度保守序列的4个半胱氨酸残基中前2个的排列分布状况的不同被分为4类：C，CC，CXC和CX3C[1]。这些趋化因子与靶细胞膜上相应受体——7次跨膜G蛋白偶联趋化因子受体(7TM—GPCR)蛋白的胞外N端结合，介导受体蛋白胞内C端丝氨酸／苏氨酸磷酸化，通过不同的跨膜信号转导通路，激活与细胞运动、侵袭、胞外基质相互作用和细胞存活相关基因的转录[2]；通过趋化作用，选择性地调控多种白细胞亚群募集和运输。还参与调控B细胞和T细胞发育、树突状细胞成熟，调控THl和TH2免疫反应，广泛参与炎症反应与免疫调节[3]。单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1，CCL2)是最早发现并被广泛研究的CC类趋化因子家族的成员之一，它对单核细胞、天然杀伤细胞、T淋巴细胞、嗜碱性细胞和树突状细胞有趋化作用。本文着重以MCP-1为代表，对其做一定的论述并简单介绍其在胰腺癌的表达及其生物学意义。 1 MCP-1的分子生物学特性 1．1 MCP-1的蛋白质结构人类MCP-1以包含23个氨基酸组成的信号肽分子的前体蛋白形式分泌，在翻译后加工过程中与信号肽解离后，完整的MCP-1由76个氨基酸残基构成。MCP-1一级结构中的N端氨基酸残基对于受体识别与信号转导是十分重要的。MCP-1单体的二级结构与其他CC类趋化因子例如MIP-1B、RANTES十分类似，均含有3个反向平行的口折叠及其上方的1个C端a螺旋，然而不同的是其N端2-6的氨基酸残基组成的短310螺旋。在三级与四级结构水平，高效液相色谱分析及沉积平衡超速离心与化学交联分析证实，MCP-1与IL-8在生理浓度下几乎均以单体形式存在，而当浓度超过100μm时，则以二聚体为主要的存在形式[4]。 1．2 MCP-1的基因结构人类MCP-1基因基因坐落于17q11．2-12，包含了3个外显子与2个内含子，第1个外显子编码5’端非翻译区及23个氨基酸的信号肽遗传信息及MCP-1蛋白的前2个氨基酸，3～40个氨基酸由第2个外显子编码，第3个外显子编码C端其余36个氨基酸序列及3’端非翻译区。MCP-1基因5’端上游的增强子中，存在于-128位的TRE元件和-64位的GC box，及-2612位的NF-kB元件，对于IL-1b，TNF-a，LPS和TPA调控MCP-1基础水平的持续表
单细胞蛋白生产.doc
目录 1 前言. ................................... 错误 ! 未定义书签。单细胞蛋白饲料的优点 . .............................. 错误 ! 未定义书签。蛋白质含量丰富 . .................................... 错误 ! 未定义书签。原材料来源广泛 . .................................... 错误 ! 未定义书签。生长速度快 . ........................................ 错误 ! 未定义书签。不受季节和气候等条件的影响 . ........................ 错误 ! 未定义书签。细胞蛋白生产的菌种类型 . ............................ 错误 ! 未定义书签。单细胞蛋白的生产工艺的类型 . ........................ 错误 ! 未定义书签。液体深层发酵法[4] ................................... 错误 ! 未定义书签。固体发酵法 . ........................................ 错误 ! 未定义书签。单细胞蛋白饲料的应用 . .............................. 错误 ! 未定义书签。 2 菌种的选育. .............................. 错误 ! 未定义书签。菌种的选取及筛选 . .................................. 错误 ! 未定义书签。菌种的选取 . ........................................ 错误 ! 未定义书签。菌种的采集 . ........................................ 错误 ! 未定义书签。培养菌 . ............................................. 错误 ! 未定义书签。菌种的初筛 . ......................................... 错误 ! 未定义书签。菌种的复筛[11] . ....................................... 错误 ! 未定义书签。诱变育种 . .......................................... 错误 ! 未定义书签。菌种的保藏 . ......................................... 错误 ! 未定义书签。 3 培养基的配制............................. 错误 ! 未定义书签。配置培养基的原则 . .................................. 错误 ! 未定义书签。培养基类型 . ......................................... 错误 ! 未定义书签。孢子培养基 . ........................................ 错误 ! 未定义书签。种子培养基 . ........................................ 错误 ! 未定义书签。发酵培养基 . ......................................... 错误 ! 未定义书签。热带假丝酵母菌的培养基及培养条件 . .................. 错误 ! 未定义书签。培养基的设计 . ....................................... 错误 ! 未定义书签。
研究凋亡素参与正常细胞核蛋白表达差异
致力于打造高品质文档研究凋亡素参与正常细胞核蛋白表达差异1．引言凋亡素能够特异引起肿瘤细胞与转化细胞的凋亡，这种细胞凋亡是非 P53 依赖的，而不能够导致正常细胞的凋亡，这与凋亡素的核定位有关。凋亡素 是一种在细胞质与细胞核之间穿梭的蛋白。无论是在肿瘤细胞还是正常细胞内，凋亡素都能够通过核定位信号进入细胞核。然而在肿瘤细胞中，凋亡素被修饰，导致出核信号的失活，定位在细胞核内，引起肿瘤细胞的凋亡；而在正常细胞中，凋亡素又通过出核信号出核，定位在细胞浆内，不引起正常细胞的凋亡。 综上所述，肿瘤细胞与正常细胞之间的蛋白表达一定存在着某种差异，使得凋亡素在肿瘤细胞中被特异地修饰。本实验通过蛋白质组学的方法来寻找肿瘤细胞与正常细胞核内的蛋白表达差异，以期望能够进一步探讨凋亡素诱导肿瘤细胞特异凋亡的机制。 2．材料和方法 2.2 pEGFP-C1-apoptin 载体的提取按照Promega 公司PureyieldTM Plasmid Midiprep System 提取试剂盒进行质粒的提取。 2.7 细胞核蛋白的双向电泳将提好的细胞核蛋白样品分装，送公司进行双向电泳。 3．实验及结果分析 3.2 双向电泳结果我们通过双向电泳进行初步分析，发现HepG2 与L02 细胞核蛋白表达存在差异。 4．讨论凋亡素能够特异引起肿瘤细胞与转化细胞的凋亡，这种细胞凋亡是非P53 依赖的，而不能够导致正常细胞的凋亡。同时我们观察到，凋亡素在细胞内的定位与其凋亡功能密切相关。将凋亡素的基因转染进细胞，24 小时后，我们发现凋亡素无论在肿瘤细胞还是正常细胞，都定位在细胞核内，都不引起细胞的凋亡。48 小时后，凋亡素在肿瘤细胞核内聚集，行使凋亡功能，而凋亡素却从正常细胞的核内出来，在胞质内聚集，不能引起正常细胞的凋亡。于是我们推测，凋亡素行使凋亡功能与其在肿瘤细胞核内受到某种修饰，而停留在细胞核内有关。而这种修饰在正常细胞的核内是没有的，因此肿瘤细胞与正常细胞之间一定存在着某种蛋白表达的差异。 因此，我们可以推测在肿瘤细胞内存在着特异的磷酸激酶，或者其他某种能使凋亡素特异修饰的蛋白。 目前高通量的蛋白质组学研究方法已经成为了有力的手段，蛋白质质谱鉴定技术和生物信息学迅猛发展。高分辨率、高敏感性和高流通性的分离和分离后鉴定技术，结合准确、全面的数据库技术，使蛋白质组技术用于生物研究卓有成效。我们通过蛋白质组学的方法找到了肿瘤细胞HepG2 细胞和正常细胞L02 细胞核蛋白表达的差异，但是由于时间关系，没有对差异点进行质谱分析，鉴定，这是我们下一步的工作，以期望能够找到这个特异的蛋白，来完善凋亡素的机制研究。
流体剪切力介导血管内皮细胞表达单核细胞趋化蛋白1及其信号通路的研究
天津医科大学博士学位论文 Abstract Objective: The outcome of patients with end stage renal disease depends on functional vascular access. Arteriovenous fistula is the foremost vascular access for patients. But the patency rate of arteriovenous fistula is low. The fluid dynamics and biological environment have changed after vascular anastomosis that may lead to intimal hyperplasia, venous stenosis and influence maturation and patency rate of arteriovenous fistula. The study investigated the mechanism of fluid shear stress on intimal hyperplasia, and provided the evidence for improving maturation and patency rate of arteriovenous fistula. Methods:(1) We established the parallel plate flow chamber, in which human umbilical vein endothelial cells (HUVECs) were exposed to laminar shear stress or oscillating shear https://www.360docs.net/doc/565391385.html,ing computational fluid dynamics (CFD) models computed fluid shear stress and mapped its spatial distribution in the parallel plate flow chamber. (2) We established the parallel plate flow chamber, in which HUVECs were exposed to laminar shear stress or oscillatory shear stress. The laminar shear stress included low shear stress (4dyn/cm2), physiological shear stress (12dyn/cm2), and high shear stress (20dyn/cm2), and oscillatory shear stress (0±5dyn/cm2)，and the action time were 0 h, 6 h, 12 h and 24 h. Immunofluorescence was applicated to detect the receptor of MCP-1 (CCR2) and caveolin-1 (Cav-1). Western blotting was used to analysis the expression of MCP-1, CCR2, Cav-1, ERK1/2 and NF-κB. In order to definite the possible signaling pathways in intimal hyperplasia induced by fluid shear stress, d isruption of caveolae by cholesterol depletion with MβCD and the inhibitor of ERK were used separately. (3) To simulate uremic environment, some uremic serum was added to culture medium. We established the parallel plate flow chamber, in which HUVEC were exposed to laminar shear stress or oscillating shear stress. Western blotting was used to analysis the expression of MCP-1, CCR2, Cav-1, ERK1/2 and NF-κB. Results：(1) The flow in the parallel plate flow chamber was drivied by pressure. There was no significant difference between the pressure distribution of flow field in X and Z direction, and the pressure gradually decreased along flow direction.In the III 万方数据
单细胞蛋白的生产现状及发展前景
单细胞蛋白的生产现状及发展前景 摘要：随着世界人口的不断增长,粮食和饲料不足的情况日益严重.面对这一严峻的现实，单细胞蛋白的开发与生产为解决人类食品和饲料问题开辟了新的途径。因此，本文就单细胞蛋白的生产现状与发展前景作一阐述。 关键词：单细胞蛋白生产前景 单细胞蛋白（简称SCP）主要是从酵母菌、细菌、放线菌、霉菌、微型藻等单细胞生物和具有简单结构的多细胞生物中所提取的蛋白质,称为单细胞蛋白质，目前工业化生产的单细胞蛋白几乎都是来自酵母菌。单细胞蛋白其粗蛋白含量可达45％～70％（而作物中蛋白质含量最高的大豆仅达35％～45％），且各种氨基酸搭配合理，维生素含量高。成本低、产量高、原料广等特点，特别对于缓解世界面临食物短缺、环境污染和能源缺乏等问题尤其显得重要。 1、单细胞蛋白的特性 1.1单细胞蛋白的生物特性 单细胞蛋白是通过培养单细胞生物而获得的菌体蛋白质。用于生产SCP的单细胞生物包括微型藻类、非病原细菌、酵母菌类和真菌。 1.1.1SCP营养丰富蛋白质含量高达40%～80%，比大豆高10%～20%，比肉、鱼、奶酪高20%以上；氨基酸的组成较为齐全，含有人体必需的8种氨基酸，尤其是谷物中含量较少的赖氨酸。单细胞蛋白中还含有多种维生素、碳水化合物、脂类、矿物质，以及丰富的酶类和生物活性物质，如辅酶A、辅酶Q、谷胱甘肽、麦角固醇等。［2］ 1.1.2 生产单细胞蛋白的原料来源极为广泛，成本较低。一般分为四类：一是糖质原料，如淀粉或纤维素的水解液、亚硫酸纸浆废液、制糖的废蜜等；二是石油原料，如柴油、正烷烃、天然气等；三是石油化工产品，如醋酸、甲醇、乙醇等；四是氢气和碳酸气。最有前途的原料是可再生的植物资源，如农林加工产品的下脚料、食品工厂的废水下脚料等。这些资源数量多，而且用后可以再生，还可实现环境保护。 1.1.3 生产速率高一般蛋白质生产速度同猪、牛、羊等体重的倍增时间成正比。微生物的倍增时间比牛、猪、鸡等快千万倍，如细菌、酵母菌的倍增时间为20～120h，霉菌和绿藻类为2～6h，植物1～2周，牛1～2个月，猪4～6周。据估计，一头500kg公牛每天生产蛋白质0.4kg，而500kg酵母至少生产蛋白质500kg。［3］ 1.1.4劳动生产率高生产不受季节气候的制约，易于人工控制，同时由于在大型发酵罐中立体式培养占地面积少。如年产10万t SCP工厂，以酵母计，按含蛋白质45%计算，一年所产蛋白质为45000t。一亩大豆按亩产200kg计，含蛋白质40%，则一年为80kg蛋白质，所以，一个SCP工厂所产蛋白质相当于562500亩土地所产的大豆。［1］
蛋白-细胞核蛋白提取方法
提取细胞核蛋白的步骤： 1.向培养细胞的平皿中加入少量（保证在1.5ml TUBE内能放下）冷PBS(或1*D-Hanks) 2.，用细胞刮刀尽可能多的刮下细胞，收集到1.5ml的离心管中。 在预冷的离心机中，４度，1000rcf，1－3分钟，沉降细胞。 为尽可能多的获得细胞，可将一次离心后的上清再重复刮细胞一次； 2. 将细胞重悬于cell lysis buffer中（加入体积106细胞/200uL，体积估计方法还是没确 定,should be sufficient; 一般就是一个10cm平皿加1ml cell lysis buffer）,添加蛋白酶抑 制剂；先破细胞膜，得到细胞核（没有用B DOUNCE）； 冰上放置（不震荡，可偶尔用枪轻吹）30分钟至1小时（此时核膜没有破，有核染色为证），充分裂解； cell lysis buffer： 5mM PIPES pH 8.0 85mM KCL, 0.5% NP40, 1% protein inhibitor; 3. ４度，1000rcf，20分钟，上清为胞质蛋白（蛋白浓度比较低，如需要检测，建议先 浓缩一下），沉淀为细胞核； 此时可以将沉淀冻存于－70℃； 4. 将沉淀重悬于100-200 ul nucleai lysis buffer（体积视目的蛋白表达丰度而定，一般 50-100ul）中，添加蛋白酶抑制剂，冰上放置30分钟至1小时（每5分钟震荡一次），充分裂解；可以观察到沉淀慢慢消失，溶液变澄清； nucleai lysis buffer：成分同SDS lysis buffer； 50mM Tris-Cl pH 8.1, 10mM EDTA, 1% SDS, 1% protein inhibitor; 5. 四度，最大转速离心，10分钟以上（尽可能沉淀完全），上清即为细胞核蛋白； （此文档部分内容来源于网络，如有侵权请告知删除，文档可自行编辑修改内容， 供参考，感谢您的配合和支持） 编辑版word
CC趋化因子
CC趋化因子 趋化因子CC亚家族英文名称：chemokine CC subfamily其他名称：β亚家族定义：分子N端含2个相邻的Cys残基，有20余个成员，主要趋化和激活单核细胞和某些T细胞亚群，也可趋化活化B细胞、嗜酸性粒细胞、DC和NK细胞，对中性粒细胞无作用。 DC树突状细胞（Dendritic Cells,DC）是近年来倍受人们关注的专职抗原呈递细胞（Antigen presenting DC作用机制 Cells,APC），能摄取、加工及呈递抗原，启动T细胞介导的免疫反应。DC于1973年首次由Steinman和Cohn发现。其后的好长时间里，由于受当时生物学技术的限制，人们没办法在体外培育更多的树突状细胞，且价格昂贵，结果造成对它研究没能进一步深入下去。进入九十年代，人类在生物学技术方面取了长足进步，能够在体外培养树突状细胞了，对DC的研究也就有了突破性的进展。二十世纪末美国率先开始在人体上进行树突状细胞免疫治疗肿瘤的试验。其结果令人倍受鼓舞。接着而来的是：树突状细胞成了肿瘤生物治疗的明星，也成了全世界与癌症奋斗的科学家们研究的热点。进入21世纪，国内外科
学家发现DC在治疗哮喘等疾病中起到了很重要的作用。树突状细胞就是人体免疫系统的哨兵，它能敏锐的捕捉肿瘤细胞与正常细胞那微小的差异，并把这种差异传递给人体免疫系统中的武警——T淋巴细胞，让T淋巴细胞接受到识别叛乱分子的办法和作战命令，迅速由静息状态转化为战斗状态，将人体内残存的、转移的癌细胞全部、彻底地消灭干净。并且T细胞免疫还有记忆能力，也就是说人的一生中再有同样的癌细胞产生，人体的免疫系统就会马上把癌细胞给干掉。所以树突状细胞免疫治疗又被称为治疗性疫苗（和我们日常用的预防性疫苗相对而言）。 一、NK细胞的来源 NK细胞确切的来源还不十分清楚，一般认为直接从骨髓中衍生，其发育成熟依赖于骨髓的微环境。小鼠和人的体外实验表明，胸腺细胞在体外IL-2等细胞因子存在条件下培养也可诱导出NK细胞。小鼠脾脏在体内IL-3诱导下可促进NK细胞的分化。NK细胞主要分布于外周血中，占PBMC5～10%，淋巴结和骨髓中也有NK活性，但水平较外周血低。由于NK细胞具有部分T细胞分化抗原，如80～90%NK细胞CD2+，20～30%NK细胞CD3+(表达CD3ζ链)，30%NK细胞CD8+(α/α)和75～90%NK细胞CD38+,而且NK细胞具有IL-2中亲