紫草提取物的体外抗氧化活性研究

1 材料与方法
1. 1 材料 紫草 (Lithospermum erythrorh izon )购于西安市藻
露堂中药店。 1. 2 主要仪器
紫外 2可见分光光度计、旋转薄膜蒸发仪、数显 恒温水浴锅等。 1. 3 主要试剂
1, 12二苯基 222苦苯肼自由基 ( DPPH# )、抗坏血 酸 (V c)、B2胡 萝卜素、亚 油酸、Tween220、铁氰 化钾 ( [K3F e( CN ) 6 ] )和三氯乙酸 ( TCA )购自美国 Sigma 公司; 二丁基羟基甲苯 ( BHT)、氮蓝四唑 ( NBT )、吩 嗪硫酸甲脂 ( PMS)、还原型辅酶 ( NADH )购自德国 Applichem公司; 甲醇、三氯化铁 ( F eC l3 )、双氧水、硫 酸亚铁、乙酸, 以及无水乙醇均为国产分析纯。 1. 4 方法 1. 4. 1 LEP 的提取 将干燥紫草粉碎, 用 20倍量 95% 乙 醇 50e 回 流 提 取 2次 , 每 次 4 h, 提 取 液
醇代替待测液时的吸光度 Aj 作为阴性对照, 以 V c
作阳性对照, 清除率计算方法与 11413相同。 1. 4. 5 还原力的测定 [ 9 ] 取 1 mL 不同浓度的待
测 液 与 215 mL 磷 酸 盐 缓 冲 液 ( 012 mol/L,
N a2H PO4 /N aH 2 PO4, pH 616 ) 及 215 mL 铁 氰 化钾 ( 1% )混合, 混合物在 50e 水浴中孵育 20 m in, 然后
萘醌总色素含量为 3715% 。 2. 2 对 DPPH#的清除作用
DPPH# 是一 种很 稳 定 的 以 氮 为 中 心 的 自 由 基, 在 517 nm处有强吸收峰, DPPH#通常被用来检测抗 氧化剂的抗氧化活性。当有自 由基清除剂存在 时, DPPH# 会和清除剂提供的质子结合形成 DPPH 2H, 从而使溶液颜色由紫色变为黄色。实验结果表明, LEP是一种很好的质子供体, 可作为一种抗氧化剂。 从表 1可知 LEP 具有很强的清除 DPPH#的能力, 当 色素浓度为 300 Lg /mL 时, 其清除率可达 9111% , 半抑制率 IC50为 80 Lg /mL (V c和 BHT 的 IC50分别 为 10 Lg/mL和 60 Lg /mL)。
100 mL。将 1 mL不同浓度的待测液与 3 mL DPPH#
溶液分别加入试管中, 摇匀, 室温静置 20 m in后于
517 nm 处测定吸光度 Ai (分别以 1 mL不同浓度的 待测液与 3 mL 95% 甲 醇溶 液调 零 )。测定 1 mL
95% 乙醇与 3 mL DPPH#溶液混合后的吸光度 Aj 作 为阴性对照, 以 V c和 BHT 作阳性对照, 每个浓度平
紫草提取物, 置于 100 mL容量瓶中, 95% 乙醇定容,
在 516 nm 处测定其吸光度值, 根据中国药典记载,
按左旋紫草素的吸光系数 提取
物中羟基萘醌总色素的含量。
1. 4. 3 清除 DP PH#自由基作用的测定 [ 7] 精确称
取 4 mg的 DPPH#, 用 95% 的 甲醇 溶解 并定 容到
油酸体系测定样品的抗氧化能力。反应液的配制:
将 5 mg的 B胡萝卜素溶于 10 mL 氯仿中, 再加入
0125 mL的亚油酸和 2 mL的 Tween220, 将此混合物
移入圆 底瓶 中于 50e 旋转 蒸 发 4 m in, 之 后加 入 500 mL蒸馏水。向各试管中加入 1 mL 不同浓度的 待测 液 和 4 mL 反 应 液, 置 于 50e 水 浴 中 每 隔 25 m in测其在 470 nm 处的吸光度 (分别在 不同浓 度待测液构成的体系中, 以蒸馏水代替 B胡萝卜素 作为空白调零 ), 共测量 150 m in。抗氧化能力按下 列公式计 算: 抗氧 化力 = [ 1 - ( A0 - At ) / ( A0 . At . ) ] @100% 。
武汉植物学研究 2007, 25( 5): 490~ 493 J ou rna l of Wuhan B ota nica l R esea r ch
紫草提取物的体外抗氧化活性研究
张改平 1, 杨建雄 2* , 朱玉安 3
( 1. 陕西师范大学物理学与信息技术学院, 西安 710062; 2. 陕西师范大学生命科学学院, 西安 710062; 3. 陕西师范大学后勤管理处, 西安 710062)
Abstr act: Lithospermum erythrorh izon pigment ( LEP ) was isolated from L. erythrorhizon bymeans of reg2 u lar reflux2extrac.t Moreover, the antioxidant activity of LEP was eva luated by superoxide anion ( OH2 ), 1, 12diphenyl222p icrylhydrazyl ( DPPH# ) radical scavenging activity and B2carotene linoleate mode l sys2 tem assays. The results showed that LEP had strong rad ica l scavenging activity towards DPPH# and OH2, and it owned obvious inhibition aga inst B2carotene linoleate model system. There fore, the results proved that the pharm acological funct ion ofL. erythrorhizon was probably re lated with the strong antioxidant act iv2 ity of LEP. K ey w ord s: Lithospermum erythrorhizon; DPPH rad ica;l Antioxidan t act ivity; N aphthoqu inone
第 5期
张改平等: 紫草提取物的体外抗氧化活性研究
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3500 r /m in离心 10 m in, 上清液用旋转薄膜蒸发仪
于 50e 浓缩, 再置烘箱中干 燥, 最后用分析天平称
重。做抗氧化活性研究时以 95% 的乙醇为溶剂配
制所需浓度的待测液。
1. 4. 2 羟 基萘醌总 色素含量 测定 根据 中国药 典 [ 6] 测定羟基萘醌总色素的含量。精确称 取 8 mg
加入 215 mL的 TCA ( 10% , W /V), 3000 r/m in离心
10 m in, 取上清液 215 mL, 分别加入 215 mL无水乙
醇和 015 mL F eCl3 ( 011% ), 于 700 nm 处测定吸光 度 (分别在不同浓度待测液构 成的反映体系中, 以
蒸馏水代 替 F eC l3 溶液 作为 空 白调 零 ), 以 Vc 和 BHT 作阳性对照, 每个浓度平行做 3次。 1. 4. 6 抗氧化能力的测定 [ 8 ] 采用 B胡萝卜素 2亚
关键词: 紫草; DPPH 自由基; 抗氧化活性; 萘醌
中图分类号: R 284. 2
文献标识码: A
文章编号: 10002470X( 2007) 052 0490204
Study on An tiox idan t A ctivity of L ithosperm um erythrorh izon in vitro
收稿日期: 20072032 23, 修回日期: 2007205221。 基金项目: 国家自然科学基金资助项目 ( 20175012)。 作者简介: 张改平 ( 1983- ), 女, 硕士, 主要从事天然产物的分离鉴定与功能评价研究。 * 通讯作者 ( E2m ai:l jxyang@ snnu. edu. cn)。
向试管中加入 1 mL NBT、1 mL NADH 和 1 mL不同
浓度的待测液, 最后加入 014 mL 的 PMS, 混匀后室
温静置 5 m in, 于 560 nm 处测定吸光度 Ai (分别以 1 mL不同浓度的待测液加入 1 mL NBT、1 mL NADH
和 014 mL双蒸水调零 ), 同时测定用 1 mL 95% 乙
摘 要: 为研究紫草色素 ( LEP )的体外抗氧化活性, 采用常规回 流方法提取 LEP, 测定了 LEP 对 超氧自由 基 ( OH2 ) 和 1, 12二苯基 222苦苯肼自由基 ( DPPH# )的清除能力 , 及其对 B2胡萝卜素 /亚油 酸自氧化体 系的抑制 作用。结果表 明, LEP 对 DPPH# 和 OH2 均有较强的清除能力, 并且对 B2胡萝卜素 /亚油酸自氧化体系有明 显的抑制作用, 说明紫草 的药理作用可能与 LEP 较强的抗氧化能力有关。
紫草是多年生紫草科草本植物, 其主要成分紫 草色素 ( Lithospermum erythrorhizon pigmen,t LEP )是 一类脂溶性很强的萘醌类色素, 具有止血 [ 1 ] 、抗炎、 抗菌 [ 2, 3] 、抗肿瘤 [ 4] 及抗癌 [ 5 ] 等作 用。 LEP 还具有 电子传递作用, 促进或抑制某些生化反应过程, 表现 出多种生物活性。由于 pH 值的不同, LEP 会呈现 不同的颜色, 因此 LEP 被广泛应用于食品和医药等 领域。目前关于紫草的研究多集中于其药效及 LEP 的分离和纯化, 而对其抗氧化性能的研究报道很少。 我们采用 4种化学模拟体系研究了 LEP 的抗氧化 能力, 为更好地研究其在医药及食品方面的作用, 开 发具有保健功能的新型抗氧化剂提供实验依据。
ZHANG Ga i2P ing1, YANG Jian2X iong2* , ZHU Yu2An3