微生物实验课.共59页
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中药与制药微生物学实验
二、实验内容
1.药物的微生物限度检查（二） 2.空气、皮肤细菌检查结果测定。 3.讲授基础培养基的制备方法（营养琼脂、营养肉汤）。 4.培养基的种类和用途
普通培养基、营养培养基、厌氧培养基、选择培养基 5.细菌在三种不同物理性状培养基上的接种方法(基本技能)
液体培养基
平板培养基 斜面培养基
双糖含铁半固体斜面培养基
②细菌总数的检查
2.外用药物的微生物检查: ①绿脓杆菌的检查：
②金黄色葡萄球菌的检查：
当前2页，共66页，星期日。
药品的微生物限度检查实验方法（一）
1.药品的预处理
口服药
外用药
2克药品加20毫升生理盐水， 研磨制成悬液
2.细菌培养
外服药
药品混悬液10毫升加入胆盐乳糖增菌液中 药品混悬液10毫升加入亚碲酸钠增菌液中
※方 法
1.平板划线接种法
（1）平行划线法
（2）分区划线法
2.琼脂斜面的接种方法
3.液体培养基接种法 4.半固体接种法
当前11页，共66页，星期日。
平行划线法
当前12页，共66页，星期日。
分区划线法
当前13页，共66页，星期日。
菌落
当前14页，共66页，星期日。
斜面移种技术
当前15页，共66页，星期日。
菌苔
当前16页，共66页，星期日。
液体移种技术
当前17页，共66页，星期日。
穿刺技术
当前18页，共66页，星期日。
药物的微生物限度检查方法（二）
取出前次实验培养物观察：
1.口服药物 1)细菌鉴定：
在胆盐乳糖增菌液中有无细菌生长： 增菌液变混浊―――――有
-----接种在伊红美兰琼脂平板培养基 上面。
1.药物的微生物限度检查（二） 2.空气、皮肤细菌检查结果测定。 3.讲授基础培养基的制备方法（营养琼脂、营养肉汤）。 4.培养基的种类和用途
普通培养基、营养培养基、厌氧培养基、选择培养基 5.细菌在三种不同物理性状培养基上的接种方法(基本技能)
液体培养基
平板培养基 斜面培养基
双糖含铁半固体斜面培养基
②细菌总数的检查
2.外用药物的微生物检查: ①绿脓杆菌的检查：
②金黄色葡萄球菌的检查：
当前2页，共66页，星期日。
药品的微生物限度检查实验方法（一）
1.药品的预处理
口服药
外用药
2克药品加20毫升生理盐水， 研磨制成悬液
2.细菌培养
外服药
药品混悬液10毫升加入胆盐乳糖增菌液中 药品混悬液10毫升加入亚碲酸钠增菌液中
※方 法
1.平板划线接种法
（1）平行划线法
（2）分区划线法
2.琼脂斜面的接种方法
3.液体培养基接种法 4.半固体接种法
当前11页，共66页，星期日。
平行划线法
当前12页，共66页，星期日。
分区划线法
当前13页，共66页，星期日。
菌落
当前14页，共66页，星期日。
斜面移种技术
当前15页，共66页，星期日。
菌苔
当前16页，共66页，星期日。
液体移种技术
当前17页，共66页，星期日。
穿刺技术
当前18页，共66页，星期日。
药物的微生物限度检查方法（二）
取出前次实验培养物观察：
1.口服药物 1)细菌鉴定：
在胆盐乳糖增菌液中有无细菌生长： 增菌液变混浊―――――有
-----接种在伊红美兰琼脂平板培养基 上面。
微生物学实验ppt课件
器材与试剂的选用原则
03
如无菌操作、适用性、经济性等
02
细菌形态与结构观察
细菌培养及形态特征
01
02
03
细菌培养方法
包括需氧培养、厌氧培养 和兼性厌氧培养等，不同 种类的细菌需要不同的培 养条件。
细菌菌落特征
观察细菌在固体培养基上 形成的菌落，了解其形状、 大小、颜色、透明度等特 征。
细菌细胞形态
05
微生物代谢活性测定
生长曲线测定方法
直接计数法
通过显微镜直接观察并计数微生物数量，适用于较大微生物如细 菌、酵母菌等。
比浊法
利用微生物生长引起培养液浊度变化来测定生长曲线，操作简便 但易受杂质干扰。
平板菌落计数法
将待测样品稀释后涂布于固体培养基表面，培养后计数形成的菌 落数，适用于可形成菌落的微生物。
原理
病毒必须寄生在活细胞内才能增 殖，通过提供适宜的细胞环境， 使病毒在细胞内复制并产生子代
病毒。
病毒检测技术及应用
免疫学方法
利用抗原抗体特异性结合的原理，通过酶联免疫吸附试验 （ELISA）、免疫荧光技术等检测病毒抗原或抗体。
分子生物学方法
基于病毒核酸的特异性，利用PCR、实时荧光定量PCR等技术扩增 并检测病毒核酸。
微生物学实验ppt课件
contents
目录
• 实验基础知识 • 细菌形态与结构观察 • 真菌形态与结构观察 • 病毒培养与检测技术 • 微生物代谢活性测定 • 微生物遗传与变异研究 • 微生物生态学及环境因子影响研究
01
实验基础知识
微生物学概述
类生活中的作用：如 生态平衡、发酵工业 等
生理生化鉴定
利用真菌的生理生化特性，如营养需 求、代谢产物等，进行进一步的分类 鉴定。
第二章微生物农药线虫
如果(rúguǒ)通过口器或肛门进入，线虫刺破肠壁进入 血腔；如果(rúguǒ)通过气孔进入则直接进入血腔。
线虫一旦进入寄主昆虫血腔，就开始释放共生菌，共 生菌在血淋巴中迅速繁殖，通常昆虫在被侵染24~72 h之内 患败血病死亡。
第三十九页，共59页。
8、侵染期幼虫(yòuchóng)的扩散和存活
第九页，共59页。
昆虫病原(bìngyuán)线虫隶属于动物界线虫动物 门(Nematoda)尾感器纲(Secernentea)小杆目 (Rhabditida)。
主要包括5个科：斯氏线虫科(Steinernematidae) 、 异小杆线虫科(Heterorhabditidae)、索线虫科 (Mermithidae)、新垫刃科、滑刃科。
第六页，共59页。
成虫内部(nèibù) 构造
1）消化系统 (xiāohuà xìtǒng) 2）生殖系统 3）神经系统 4）排泄系统
第七页，共59页。
（2）虫卵 寄生线虫卵在光学显微镜下所见：一般
为椭圆形，黄色、黄棕色或无色，无卵盖。
外层很薄，称卵黄膜或受精(shòu jīng)膜 卵壳 中层较厚，称壳质层
第二十二页，共59页。
食蚊罗索线虫 (xiàn chónɡ)
第二十三页，共59页。
黑蝇被线虫(xiàn chónɡ)寄生
第二十四页，共59页。
蛞蝓(kuòyú)被线虫侵染
第二十五页，共59页。
➢4、仅病一原个(属BÌ，NGY斯UÁ氏N)线线虫虫属——斯氏线虫科 ➢ 在生活史中形成特殊的“带鞘”的侵染期幼虫 ➢ 发育有两个阶段：寄生阶段和腐生阶段 ➢ 侵染期线虫体内携带(xiédài)共生细菌：使昆虫
➢ 单菌半固体(gùtǐ)培养基培养 节减成本，保
线虫一旦进入寄主昆虫血腔，就开始释放共生菌，共 生菌在血淋巴中迅速繁殖，通常昆虫在被侵染24~72 h之内 患败血病死亡。
第三十九页，共59页。
8、侵染期幼虫(yòuchóng)的扩散和存活
第九页，共59页。
昆虫病原(bìngyuán)线虫隶属于动物界线虫动物 门(Nematoda)尾感器纲(Secernentea)小杆目 (Rhabditida)。
主要包括5个科：斯氏线虫科(Steinernematidae) 、 异小杆线虫科(Heterorhabditidae)、索线虫科 (Mermithidae)、新垫刃科、滑刃科。
第六页，共59页。
成虫内部(nèibù) 构造
1）消化系统 (xiāohuà xìtǒng) 2）生殖系统 3）神经系统 4）排泄系统
第七页，共59页。
（2）虫卵 寄生线虫卵在光学显微镜下所见：一般
为椭圆形，黄色、黄棕色或无色，无卵盖。
外层很薄，称卵黄膜或受精(shòu jīng)膜 卵壳 中层较厚，称壳质层
第二十二页，共59页。
食蚊罗索线虫 (xiàn chónɡ)
第二十三页，共59页。
黑蝇被线虫(xiàn chónɡ)寄生
第二十四页，共59页。
蛞蝓(kuòyú)被线虫侵染
第二十五页，共59页。
➢4、仅病一原个(属BÌ，NGY斯UÁ氏N)线线虫虫属——斯氏线虫科 ➢ 在生活史中形成特殊的“带鞘”的侵染期幼虫 ➢ 发育有两个阶段：寄生阶段和腐生阶段 ➢ 侵染期线虫体内携带(xiédài)共生细菌：使昆虫
➢ 单菌半固体(gùtǐ)培养基培养 节减成本，保
微生物的形态和结构
当前27页，共70页，星期日。
革兰氏染色
当前28页，共70页，星期日。
(二)、细菌的结构
1 细 菌 的 基 本 结 构
图1-4 细菌细胞构造模式图
当前29页，共70页，星期日。
1.细菌的一般结构 (1)细胞壁
细胞壁(cell wall)是位于细胞表面，内侧紧贴细胞 膜的一层无色透明，质地坚韧，而富有弹性的构造。
双糖单位
图1-6 G+细菌肽聚糖的立体结构(片段)
肽聚糖骨架由N-乙酰葡 萄糖胺(NAG)和N-乙酰 胞壁酸(NAM)通过β1,4-苷键交替连接成的 多糖链，每条多糖链含
10～65个双糖单位
当前34页，共70页，星期日。
A、肽聚糖
1、细胞壁
L D
与由
型 交 替 方 式 连 接 而
四 个 氨 基 酸 分 子 按
成型
当前35页，共70页，星期日。
肽聚糖
溶菌酶的溶菌作用：双糖单位中的β-1,4-糖
苷键很容易被溶菌酶(lysozyme)所水解，从而 引起细菌因肽聚糖细胞壁的“散架”而死亡。
图1-7 金黄色葡萄球菌的肽聚糖结构 M：N-乙酰胞壁酸;G：N-乙酰葡萄糖 丙谷赖丙：四肽侧链;x：甘氨酸五肽
当前36页，共70页，星期日。
最 大 八 叠 球 菌 （ Sarcina maxima）
旋 动 泡 硫 菌 （ Thiophysa volutans）
大 肠 杆 菌 （ Escherichia coli）
普 通 变 形 杆 菌 （ Proteus vulgaris）
伤 寒 沙 门 氏 菌 （ Salmonella typhi）
嗜 酸 乳 细 菌 （ Lactobacterium acidophilus）
微生物实验课件
实验四 细菌的染色法和光学显微镜的使用 实验原理
油镜头的识别和重要参数
• 放大倍数
• 数值口径 • 工作距离
基础生物学实验教学中心
教师：姚璐晔
Page 35
实验四 细菌的染色法和光学显微镜的使用 实验原理
2. 革兰氏染色原理
G-菌的细胞壁中含有较多易被乙醇溶解的类脂质，而且肽 聚糖层较薄、交联度低，故用乙醇脱色时溶解了类脂质，增 加了细胞壁的通透性，使初染的结晶紫和碘的复合物易于渗 出，结果细菌就被脱色，再经复红复染后就成红色。 G+菌细胞壁中肽聚糖层厚且交联度高，类脂质含量少，经 脱色剂处理后反而使肽聚糖层的孔径缩小，通透性降低，因 此细菌仍保留初染时的颜色。
基础生物学实验教学中心
教师：姚璐晔
Page 6
实验一
培养基的配置、分装与灭菌 实验方法
培养基的制备过程：
称 量 溶 解 定容，调pH 分装，包扎 灭菌 若有不溶物 则要求过滤
基础生物学实验教学中心
教师：姚璐晔
Page 7
实验一
培养基的配置、分装与灭菌 实验方法
基础生物学实验教学中心
教师：姚璐晔
Page 8
教师：姚璐晔
Page 15
实验二
环境中微生物的监测与菌落识别 实验方法
斜面接种
基础生物学实验教学中心
教师：姚璐晔
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实验二
环境中微生物的监测与菌落识别 实验方法
液体接种
接种环
斜面
液体培养基
将接种环送入液体培养基中时使环在液体与管壁接 触的地方轻轻磨擦，使菌体分散，然后塞上棉塞，再 轻轻摇动均匀，即可培养。如果菌种是培养在液体培 养基中时，一般用移液管或滴管接种。
植物病原真菌的分离培养及纯化技术详解演示文稿
切取组织的大小要适宜，一般可将较大的组织，在 消毒液中消毒后切取中央部分，经灭菌水洗过以后培 养。
25
第25页，共59页。
植物病原真菌的组织分离的技术与步骤：
1）选取典型的病组织，在病健交界处将其剪成 5mm×5mm的小方块若干，装于火焰灭菌的小碟中 。
注: 选择新患病的组织作为分离的材料，可以减少腐生菌混 入的机会。腐生菌一般在发病很久而已经枯死或腐败的部分 滋生，因此，一般斑点病害应在临近健全组织的部分分离。
般3～5分钟。消毒后用无菌水冲洗3～4次。
22
第22页，共59页。
（3）次氯酸钠NaClO3 由于漂白粉的成分不固定而影响其消毒效果，目
前多改用次氯酸钠. 消毒所用的浓度一般是3%-5%的水溶液，消毒时
间5-15分钟。 幼嫩的病组织，表面用药剂消毒时可能会同时杀死
其中的病原真菌，消毒时间应尽量缩短。 比较安全的方法是不用药剂消毒，而以灭菌水洗8
注意：操作者事先必须洗净手，并用70%酒精消毒。
11
第11页，共59页。
二、真菌分离
植物病原菌的分 离培养，是植物病理 实验室工作中的基本 技能。
12
第12页，共59页。
真菌的分离---就是将所需要的真菌与其它杂菌分开 ，供给适当的条件，使它们繁殖而得到纯培养。
一般是根据该微生物对营养、酸碱度、氧气等条 件要求不同，而供给它们适宜的生活条件，即让 病原菌生活在适宜的培养基上，或加入某种抑制 剂造成只利于此菌生长，而抑制其他菌生长的环 境，从而得到纯菌株。
分离烟草的根腐病菌(Thielaviopsis)，用这种方法效果也很好，将烟 草种子播在培养皿中的吸水纸上，然后用田间采得的烟草病根切 成小块，撒在种间，幼苗染病后移到胡萝卜琼脂培养基平板上， 病菌即生长而得到纯培养。
25
第25页，共59页。
植物病原真菌的组织分离的技术与步骤：
1）选取典型的病组织，在病健交界处将其剪成 5mm×5mm的小方块若干，装于火焰灭菌的小碟中 。
注: 选择新患病的组织作为分离的材料，可以减少腐生菌混 入的机会。腐生菌一般在发病很久而已经枯死或腐败的部分 滋生，因此，一般斑点病害应在临近健全组织的部分分离。
般3～5分钟。消毒后用无菌水冲洗3～4次。
22
第22页，共59页。
（3）次氯酸钠NaClO3 由于漂白粉的成分不固定而影响其消毒效果，目
前多改用次氯酸钠. 消毒所用的浓度一般是3%-5%的水溶液，消毒时
间5-15分钟。 幼嫩的病组织，表面用药剂消毒时可能会同时杀死
其中的病原真菌，消毒时间应尽量缩短。 比较安全的方法是不用药剂消毒，而以灭菌水洗8
注意：操作者事先必须洗净手，并用70%酒精消毒。
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第11页，共59页。
二、真菌分离
植物病原菌的分 离培养，是植物病理 实验室工作中的基本 技能。
12
第12页，共59页。
真菌的分离---就是将所需要的真菌与其它杂菌分开 ，供给适当的条件，使它们繁殖而得到纯培养。
一般是根据该微生物对营养、酸碱度、氧气等条 件要求不同，而供给它们适宜的生活条件，即让 病原菌生活在适宜的培养基上，或加入某种抑制 剂造成只利于此菌生长，而抑制其他菌生长的环 境，从而得到纯菌株。
分离烟草的根腐病菌(Thielaviopsis)，用这种方法效果也很好，将烟 草种子播在培养皿中的吸水纸上，然后用田间采得的烟草病根切 成小块，撒在种间，幼苗染病后移到胡萝卜琼脂培养基平板上， 病菌即生长而得到纯培养。
第三章烃的含氧衍生物第二节醛演示文稿
第5页，共59页。
茴香醛
对甲氧基苯甲醛； 主要用作山楂、葵花、紫 丁香等香精的香基。
视黄醛
• 【生活常识】由“酒后不要立即饮茶 ”
• （本草纲目记载：酒后饮茶伤肾，腰腿坠 重，膀胱冷痛，兼患痰水肿）。
• 【原因】酒精在肝脏中→乙醛→乙酸 →CO2和H2O。但是，浓茶中含有较多
茶碱会使尚未分解的乙醛过早进入肾 脏，损害很大。
全使用，关注醛对环境和健康的影响。
• 【过程与方法目标】
•
1．通过对醛的化学性质的演示实验，进一步掌握醛的性质。
•
2.学会运用观察、实验、查阅资料等多种手段获取信息及加工信息的能力。
•
3.通过讲解醛基的结构性质，渗透“结构决定性质”的方法预测有机化物
的主要性质。
• 【情感态度与价值观目标】
•
通过对醛的性质及应用的学习，使学生认识到有机化学在科学生产、人
视黄醛也称维生素A醛，
分子式：C20H28O；
视黄醛是眼球发育中重要的信
号转导分子，其在脊椎动物的眼 球发育中具有多种不同的重要作 用。
第6页，共59页。
吸收甲醛的植物——猎醛香草
• 猎醛香草;（又名：净清香草）本植物是一 种挥发性芳香植物，它释放的芳香精油是由 香茅醇、柠檬烯等多种香精成分组成。据资 料表明：香茅醛、香茅醇具有提神醒脑、扩 张血管、舒解紧张情绪的作用；还有缓解头 痛、神经痛的作用。
• 结构式:
• 结构简式: CH3CHO • 官能团: -CHO
第10页，共59页。
2、乙醛的物理性质：
名称 分子式 分子量 沸点 溶解性
丙烷 C3H8
44 -42.07 不溶于水
乙醇 C2H6O
46
真菌的分类与致病性 59页PPT文档
• 血、BALF、CSF
– Sensitivity： 67% to 100% – Specificity：84% to 100%
05.09.2019
41
G试验：出现假阳性的原因分析
– 输注白蛋白或球蛋白 – 血液透析 – 输注抗肿瘤的多糖类药物 – 外科手术后早期 – 标本接触纱布
05.09.2019
长出形态相同或略有不同的配子囊接合而成。 • D.子囊孢子(ascospore)：子囊菌的有性配子或生于子囊
内的有性配子叫之。 • E.担孢子(basidiospore)：担子菌的有性孢子为担孢子，
是一种外生孢子。
05.09.2019
14
我国常见机会性真菌
• 常见菌种有：白念珠菌，曲霉菌属，隐球 菌，马尔尼菲青霉，毛霉菌属，糠秕马拉 色菌，根霉菌属，镰刀菌属，链隔孢属， 红酵母菌，弯孢菌属，双极霉属，白吉利 丝孢酵母，波氏假阿利氏菌，扁平赛多孢 菌，多育赛多孢菌等
Aspergillus ter3re7 us
有菌部位的细菌学结果评价
• 人体与外界相通的器官：呼吸道、消化道 和泌尿生殖道
• 特点：正常菌群寄生 • 正常菌群一方面可能污染标本，造成假阳
性；另一方面可能为真正感染菌 • 结果评价很重要
05.09.2019
38
痰液培养的临床应用价值？
• 评价：可靠性差，价值有限 • 建议：
• 1、无性繁殖方式 • A.菌丝细胞直接断裂而形成新个体； • B.细胞的直接分裂产生子细胞； • C.营养细胞或孢子的芽殖； • D.产生孢子，每个孢子再萌发产生新个体。
05.09.2019
11
真菌的无性繁殖
• 2、真菌的无性繁殖孢子类型 • A.游动孢子（zoosporangiospore）：鞭毛菌产生的无
– Sensitivity： 67% to 100% – Specificity：84% to 100%
05.09.2019
41
G试验：出现假阳性的原因分析
– 输注白蛋白或球蛋白 – 血液透析 – 输注抗肿瘤的多糖类药物 – 外科手术后早期 – 标本接触纱布
05.09.2019
长出形态相同或略有不同的配子囊接合而成。 • D.子囊孢子(ascospore)：子囊菌的有性配子或生于子囊
内的有性配子叫之。 • E.担孢子(basidiospore)：担子菌的有性孢子为担孢子，
是一种外生孢子。
05.09.2019
14
我国常见机会性真菌
• 常见菌种有：白念珠菌，曲霉菌属，隐球 菌，马尔尼菲青霉，毛霉菌属，糠秕马拉 色菌，根霉菌属，镰刀菌属，链隔孢属， 红酵母菌，弯孢菌属，双极霉属，白吉利 丝孢酵母，波氏假阿利氏菌，扁平赛多孢 菌，多育赛多孢菌等
Aspergillus ter3re7 us
有菌部位的细菌学结果评价
• 人体与外界相通的器官：呼吸道、消化道 和泌尿生殖道
• 特点：正常菌群寄生 • 正常菌群一方面可能污染标本，造成假阳
性；另一方面可能为真正感染菌 • 结果评价很重要
05.09.2019
38
痰液培养的临床应用价值？
• 评价：可靠性差，价值有限 • 建议：
• 1、无性繁殖方式 • A.菌丝细胞直接断裂而形成新个体； • B.细胞的直接分裂产生子细胞； • C.营养细胞或孢子的芽殖； • D.产生孢子，每个孢子再萌发产生新个体。
05.09.2019
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真菌的无性繁殖
• 2、真菌的无性繁殖孢子类型 • A.游动孢子（zoosporangiospore）：鞭毛菌产生的无
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为 了城墙 而战斗 一样。 ——赫 拉克利 特 17、人类对于不公正的行为加以指责 ，并非 因为他 们愿意 做出这 种行为 ，而是 惟恐自 己会成 为这种 行为的 牺牲者 。—— 柏拉图 18、制定法律法令，就是为了不让强 者做什 么事都 横行霸 道。— —奥维 德 19、法律是社会的习惯和思想的结晶 。—— 托·伍·威尔逊 20、人们嘴上挂着的法律，其真实含 义是财 富。— —爱献 生
微生物实验课.
16、业余生活要有意义，不要越轨。——华盛顿 17、一个人即使已登上顶峰，也仍要自强不息。——罗素·贝克 18、最大的挑战和突破在于用人，而用人最大的突破在于信任人。——马云 19、自己活着，就是为了使别人过得更美好。——雷锋 20、要掌握书，莫被书掌握；要为生而读，莫为读而生。——布尔沃
微生物实验课.
16、业余生活要有意义，不要越轨。——华盛顿 17、一个人即使已登上顶峰，也仍要自强不息。——罗素·贝克 18、最大的挑战和突破在于用人，而用人最大的突破在于信任人。——马云 19、自己活着，就是为了使别人过得更美好。——雷锋 20、要掌握书，莫被书掌握；要为生而读，莫为读而生。——布尔沃