农杆菌介导尖孢镰刀菌西瓜专化型转化体系的建立及突变体筛选

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9311农杆菌介导转化体系(参考模板)

9311农杆菌介导转化体系(参考模板)

9311农杆菌介导转化体系(注:培养基“+”的为灭菌冷却到60℃后加)(一)诱导愈伤幼胚:取生长一致的植株,剥去主茎外层、叶鞘,将穗子剪成小段,在超净工作台上先用75%酒精浸5 min,用无菌水冲洗1次,再用次氯酸钠原液抽真空约10min至不冒气泡,再放于摇床振荡40min,无菌水冲洗4~5次,然后在灭菌滤纸上小心挤出幼胚,放于诱导培养基(NB)上。

每皿30粒,置于25~26℃下暗培养,以诱导愈伤组织。

除不能萌发的幼胚外,愈伤诱导率到达98%。

幼胚的萌发和污染受幼胚灭菌效果和接种操作的影响,所以请小心操作。

(大概一周左右能见愈伤从盾片中长出,视愈伤和芽生长情况选择掐芽、继代时间,如图1)图1 适合掐芽作继代的9311幼胚愈伤成熟种子:分别挑选健康籽粒剥去颖壳,置于37℃培养箱过夜。

种子取出后放入灭菌的三角瓶中,先用体积分数为75%的乙醇表面灭菌5min,用无菌水冲洗1次,0.1%HgCl12 min,用无菌水冲洗5次,再放入次氯酸钠原液消毒40 min,2消毒无菌水冲洗5次,于灭菌的滤纸上晾干,然后接种到诱导培养基上(9311为NB+ ABA 1mg/L),让胚的一半接触培养基。

每皿20粒,置于25~26℃下暗培养,以诱导愈伤组织。

(通过对四种基本培养基NBKNB、NB、MSTC、J0和NB+ ABA 0.5mg/L、NB+ ABA 1mg/L、NB+ NAA0.5mg/L、NB+ NAA1mg/L 的研究表明,9311在NB+ ABA 1mg/L培养基中的诱导率是85%)大概在两周左右愈伤长出、芽也比较长的时候掐去芽或者直接继代,具体时间视愈伤和芽的生长情况定,如图2、3是比较好的时期。

图2 适合掐芽的9311成熟种子图3 掐了芽的9311成熟种子,继续放于诱导培养基中,这样状态的愈伤也可以去除谷粒和愈伤中的芽头直接转到继代J3中,但注意在去除谷粒和愈伤中的芽头时不要伤到愈伤也要去除干净(二)继代培养20天后,挑选表面干爽、结构致密的愈伤组织,去除谷粒和愈伤中的芽头转到继代培养基上J3,这时候谷粒中营养已经被吸收而变软,继代培养1~2次,每次20天。

农杆菌介导的西瓜枯萎病菌遗传转化

农杆菌介导的西瓜枯萎病菌遗传转化

农杆菌介导的西瓜枯萎病菌遗传转化任俊杰;王丽霞;高洪波;吕桂云【摘要】为获得带GFP标记的西瓜枯萎病菌转化株,用于后期观察病原菌侵染过程,采用农杆菌介导的方法,对西瓜枯萎病菌1号生理小种进行了遗传转化.结果表明:共培养时间为36 h,枯萎病菌孢子和农杆菌AGL1比例为1∶1时该菌株的遗传转化效率最高,可以达到117.33个转化子/107个孢子.转化株的孢子、菌丝体及萌发的孢子均能发出稳定而强的绿色荧光.转化株的致病力检测显示其致病力与转化前的野生菌株致病力无明显差异.结果表明本研究获得的带GFP标记的西瓜枯萎病菌转化株可用于观察病菌在西瓜根系的侵染过程.【期刊名称】《植物保护》【年(卷),期】2015(041)001【总页数】5页(P93-97)【关键词】枯萎病菌;西瓜;遗传转化;绿色荧光蛋白【作者】任俊杰;王丽霞;高洪波;吕桂云【作者单位】河北农业大学,保定071001;河北农业大学,保定071001;河北农业大学,保定071001;河北农业大学,保定071001【正文语种】中文【中图分类】S436.5西瓜枯萎病是由尖孢镰刀菌西瓜专化型(Fusarium oxysporumf.sp.niveum)引起的一种毁灭性土传真菌病害,在世界范围广泛发生,该病害在我国的发生面积约占西瓜总栽培面积的42%,是危害最为严重,造成经济损失最大的西瓜病害之一[1-3]。

尖孢镰刀菌西瓜专化型共有4个生理小种,分别为0号、1号、2号和3号,目前在世界生产中造成危害的主要是1号生理小种[4-6]。

绿色荧光蛋白(green fluorescent protein,GFP)最早是从水母中分离出来的,在紫外或蓝光激发下发出绿色荧光,是目前能在活细胞中表达的发光蛋白之一[7]。

GFP检测方便,荧光稳定,且可以进行活体无损伤检测。

Skadsen等用GFP转化F.graminearum详细研究了其对大麦和拟南芥的侵染模式[8]。

一株西瓜专化型尖孢镰刀菌抑制菌的分离鉴定及其抑菌活性

一株西瓜专化型尖孢镰刀菌抑制菌的分离鉴定及其抑菌活性

一株西瓜专化型尖孢镰刀菌抑制菌的分离鉴定及其抑菌活性吕智航;徐伟慧;王志刚;王春龙;刘泽平;陈文晶;史一然【摘要】以黑龙江省扎龙自然保护区的植物根际土壤为实验材料,采用对峙实验筛选抑制西瓜专化型尖孢镰刀菌(Fusarium oxysporum f.sp.niveum,FON)的菌株,并采用菌丝生长、孢子萌发和扫描电镜等方法研究其抑菌特性.结果表明,分离获得了一株能抑制FON的菌株MLY01,根据其菌落形态特征和16S rDNA碱基序列同源性结果,鉴定MLY01为地衣芽孢杆菌Bacillus licheniformis,将其命名为Bacillus licheniformis MLY01.当培养基与无菌滤液比例为1:1时,菌丝生长抑制率为71.85%,生物量抑制率为79.55%,36 h孢子萌发抑制率为76.81%.将FON孢子悬液与无菌滤液按1:1比例混合,培养12 h,孢子数目降低,表面粗糙,菌丝畸形扭曲,表面有多处凹陷.菌株MLY01对FON的生长具有明显的抑制作用,在生物菌剂的研发方面具有潜力.【期刊名称】《浙江农业学报》【年(卷),期】2018(030)012【总页数】7页(P2065-2071)【关键词】西瓜专化型尖孢镰刀菌;菌丝生长;孢子萌发;细胞形态【作者】吕智航;徐伟慧;王志刚;王春龙;刘泽平;陈文晶;史一然【作者单位】齐齐哈尔大学生命科学与农林学院,黑龙江,齐齐哈尔161006;齐齐哈尔大学生命科学与农林学院,黑龙江,齐齐哈尔161006;齐齐哈尔大学生命科学与农林学院,黑龙江,齐齐哈尔161006;齐齐哈尔大学生命科学与农林学院,黑龙江,齐齐哈尔161006;齐齐哈尔大学生命科学与农林学院,黑龙江,齐齐哈尔161006;齐齐哈尔大学生命科学与农林学院,黑龙江,齐齐哈尔161006;齐齐哈尔大学生命科学与农林学院,黑龙江,齐齐哈尔161006;齐齐哈尔市第一医院,黑龙江齐齐哈尔161005【正文语种】中文【中图分类】S436.5;S482.2+92我国是世界上西瓜产量最大的国家,年西瓜种植面积近200万 hm2,年产量7 000 余万t[1]。

农杆菌介导尖孢镰刀菌西瓜专化型转化体系的建立及突变体筛选

农杆菌介导尖孢镰刀菌西瓜专化型转化体系的建立及突变体筛选

农杆菌介导尖孢镰刀菌西瓜专化型转化体系的建立及突变体筛选梁慎;薛保国;常高正;赵卫星;杨丽荣;孙虎;李晓慧;杨帆;全鑫;徐小利【期刊名称】《河南农业科学》【年(卷),期】2012(041)001【摘要】以尖孢镰刀菌西瓜专化型(Fusarium oxysporum f.sp.niveum)FO-11-06菌株为受体,采用农杆菌介导的遗传转化方法,实现了农杆菌AGL1(含pATMT1)介导的西瓜枯萎病菌的转化,并研究了转化介质和pH值对转化效率的影响.结果表明:在25℃下,采用乙酰丁香酮(AS)浓度为200 μmol/L、农杆菌OD600=0.15、尖孢镰刀菌分生孢子含量为1×106个/mL、pH值为5.1~5.8时可实现T-DNA的插入转化.当转化体系pH值为5.3时,转化效率最高,达到每106个分生孢子产生553个转化子.不同共转化介质对转化效率影响明显,玻璃纸和硝酸纤维素滤膜转化效率较高,每106个分生孢子获得551个和549个转化子,显著高于滤纸.通过转化,获得尖孢镰刀菌西瓜专化型转化子1 989个,对生长速度、菌落颜色和产孢量等性状进行分析,发现有46个性状特异的突变体.研究结果为进一步研究尖孢镰刀菌西瓜专化型的生长发育、致病机制和相关基因的功能奠定了基础.【总页数】5页(P82-86)【作者】梁慎;薛保国;常高正;赵卫星;杨丽荣;孙虎;李晓慧;杨帆;全鑫;徐小利【作者单位】河南省农业科学院园艺研究所,河南郑州450002;河南省农业科学院植物保护研究所,河南郑州450002;河南省农业科学院园艺研究所,河南郑州450002;河南省农业科学院园艺研究所,河南郑州450002;河南省农业科学院植物保护研究所,河南郑州450002;河南省农业科学院植物保护研究所,河南郑州450002;河南省农业科学院园艺研究所,河南郑州450002;河南省农业科学院园艺研究所,河南郑州450002;河南省农业科学院植物保护研究所,河南郑州450002;河南省农业科学院园艺研究所,河南郑州450002【正文语种】中文【中图分类】S476【相关文献】1.西瓜专化型尖孢镰刀菌FonSIX6缺失突变体的构建 [J], 唐宁安;牛晓伟;张跃建;寿伟松;范敏2.香蕉枯萎病菌4号生理小种农杆菌介导遗传转化体系的建立及T-DNA插入突变体的筛选 [J], 毛超;戴青冬;汪军;刘一贤;杨腊英;郭立佳;黄俊生3.香蕉枯萎病菌4号生理小种农杆菌介导遗传转化体系的建立及T—DNA插入突变体的筛选 [J], 毛超;戴青冬;汪军;刘一贤;杨腊英;郭立佳;黄俊生;4.尖孢镰刀菌西瓜专化型遗传转化体系的优化 [J], 郑肖兰;崔昌华;刘文波;郑服丛5.农杆菌介导球孢白僵菌转化体系的建立及突变体筛选 [J], 杨丽荣;全鑫;黄莹;梁慎;薛保国因版权原因,仅展示原文概要,查看原文内容请购买。

西瓜专化型尖孢镰刀菌FonSIX6缺失突变体的构建

西瓜专化型尖孢镰刀菌FonSIX6缺失突变体的构建

西瓜专化型尖孢镰刀菌FonSIX6缺失突变体的构建唐宁安;牛晓伟;张跃建;寿伟松;范敏【摘要】During the interactions between plant pathogen and host plant, the pathogen secretes effector protein to suppress host defenses. Fusarium wilt is a fungal disease caused by Fusarium oxysporum, the fungus secretes several effector proteins into the plant xylem to promote virulence. These effectors are small molecular cysteine-rich proteins and called SIX (secreted in xylem) proteins, and the SIX6 was one of them. Fusrium wilt of watermelon was a pathogenic fungus caused by Fusarium oxysporum f. sp. niveurn( Fon). To understand the function of FonSIX6 during infection , the flanking region of FonSIX6 was cloned and the deletion mutant vector of FonSIX6 with hygromycin was constructed as a selectable marker. The constructed gene deletion vector was transferred into Agrobacterium stain AGL-1 and then FonSIX6 deletion mutant was obtained by Agrobacterium-mediated transformation system.%病原菌和植物相互作用时分泌效应蛋白(effectors)抑制植物的防卫反应.枯萎病是由尖孢镰刀菌引起的真菌病害,尖孢镰刀菌和寄主相互作用时分泌几个特定的富含半胱氨酸的小分子量蛋白(15.8 ~29.9kD)进入木质部启动致病力,称为SIX(secreted in xylem)蛋白,其中,SIX6蛋白是一个效应蛋白.西瓜枯萎病是由西瓜专化型尖孢镰刀菌(Fusarium oxysporum f.sp.Niveurn,Fon)引起的真菌病害.为了明确FonSIX6在侵染西瓜时的作用,克隆了该基因的上下游序列,以潮霉素为筛选标记构建了该基因的缺失突变体载体pDH-SIX6;将构建好的基因缺失载体转入农杆菌AGL-1中,通过农杆菌介导的遗传转化和转化子的筛选获得了FonSIX6基因的缺失突变体.【期刊名称】《浙江农业学报》【年(卷),期】2013(025)002【总页数】5页(P288-292)【关键词】西瓜枯萎病;FonSIX6;效应蛋白;缺失突变体;西瓜专化型尖孢镰刀菌【作者】唐宁安;牛晓伟;张跃建;寿伟松;范敏【作者单位】浙江省农业科学院蔬菜研究所,浙江杭州310021【正文语种】中文【中图分类】S436.5西瓜枯萎病(Fusrium wilt of watermelon)是西瓜生产中最主要病害之一,严重时可以引起绝产。

毕业论文开题报告农杆菌介导的西瓜NPR1基因遗传转化

毕业论文开题报告农杆菌介导的西瓜NPR1基因遗传转化

本科生毕业论文(设计)开题报告广西师范大学2006 届本科学生毕业论文(设计)题目审批表院(系):专业:注:本表分选题填写,每题一页,由院(系)存档。

广西师范大学本科生毕业论文(设计)中期检查表广西师范大学本科生毕业论文(设计)答辩记录表院(系):专业:答辩内容摘要:一、论文题目:农村中学校本课程中“三农”资源的开发与利用研究二、陈述:研究背景、选题的意义研究方法:调查法:(问卷法和访谈法),文献法,叙事研究法,写作思路:危机——批判、反思——建构。

论文框架:条件分析,现状调查,策略,创新之处。

三、问答:1、体现叙事研究法在哪一部分?(老师)答:涉及到叙事研究法主要体现在第三部分“策略”中第四小标题“‘三农’课程资源的开发与利用的基本模式”里,大多数模式都有小案例,但由于论文篇幅有限,不能深入论述。

2、(老师):你的论文研究方法主要有问卷法、调查法、有硕士论文的风格、比较正式结构规范。

3、(老师):你的论文前期准备工作充分,后期工作游刃有余。

4、(老师):由于内容太多、结构严谨,我只发现个别错别字,如“三农”中,最后一个是“农民”,你误打成“农村”。

记录人签名:年月日广西师范大学本科生毕业论文(设计)成绩评定表(理工类,指导教师用)注:如属于论文形式,无设计图纸的,将评分项目的第11项分值加到13项中。

此页不够可加页。

广西师范大学本科生毕业论文成绩评定表(文史类,指导教师用)本科生毕业论文成绩评定表(评阅人用)本科生毕业设计成绩评定表(评阅人用)广西师范大学本科生毕业论文(设计)成绩评定总表。

农杆菌介导的西瓜枯萎病菌遗传转化

农杆菌介导的西瓜枯萎病菌遗传转化
记的西瓜枯萎病 菌转化株 可用于观 察病菌在西瓜根 系的侵染过程 。
关键词 枯萎 病 菌 ; 西瓜 ; 遗传转化 ; 绿 色 荧光 蛋 白 文献 标 识 码 : A D OI : 1 0 . 3 9 6 9 / j . i s s n . 0 5 2 9—1 5 4 2 . 2 0 1 5 . 0 1 . 0 1 8 中图 分 类 号 : S 4 3 6 . 5
枯萎 病菌 1号生理小种进行 了遗传 转化 。结果表 明 : 共培 养时间为 3 6 h , 枯萎病 菌孢子和农杆 菌 AG L1比例 为 1 : 1
时该 菌株 的遗传转化效率最 高, 可 以达到 1 1 7 . 3 3个转化子/ l O 个孢 子。转化株 的孢 子 、 茵丝体及 萌发的孢子 均能 发 出稳 定而强的绿 色荧光 。转化株 的致病 力检 测显示其致病力与转化前 的野 生菌株致病 力无 明显差异 。结果表 明
AGL1 .Th e e x p r e s s i o n o f g r e e n f l u o r e s c e n t p r o t e i n i n t h e h y p h a e,c o n i d i a a n d g e r mi n a t i n g s p o r e s o f t h e t r a n s f o r — ma n t s we r e s t a b l e wi t h s t r o n g g r e e n f l u o r e s c e n t s i g n a 1 .Pa t h o g e n i c i t y t e s t s c o n f i r me d t h a t t h e me a n d i s e a s e s e v e r i — t y c a u s e d b y t h e i s o l a t e F ON— s GF P wa s n o t s i g n i f i c a n t l y d i f f e r e n t f r o m t h a t o f t h e wi l d — t y p e i s o l a t e F ON1 .FON1 一 s GFP mi g h t e b a se u f u l t o o l f o r v i s u a l i z i n g c o l o n i z a t i o n p r o c e s s o f wa t e r me l o n r o o t s b y F. o x y s p o r u m f . s p .n i v e 一

农杆菌(Agrobacterium tumefaciens)介导的稻瘟病菌转化及致病突变体的筛选

农杆菌(Agrobacterium tumefaciens)介导的稻瘟病菌转化及致病突变体的筛选

浙江大学硕士学位论文农杆菌(Agrobacterium tumefaciens)介导的稻瘟病菌转化及致病突变体的筛选姓名:刘朋娟申请学位级别:硕士专业:植物病理学指导教师:王政逸20050501本研究受国家自然科学基金项目30270861资助单位代码:——究生学号:——硕士学位论文农杆菌(Agrobacteriumtumefaciens)介导的稻瘟病菌转化及致病突变体的筛选论文评阅人:.郄鏖压潘废垡蒸友基答辩委员会主席:.郑康乐答辩委员会成员:奎蕉夔筮回盐国昌三遮逸论文答辩日期:摘要稻瘟病菌(Magnaporthegrisea)可以引起水稻上的重要病害一稻瘟病。

了解彪grisea的致病分子机理不仅对防治稻瘟病具有重要的意义,而且它作为一个理想的研究体系对了解其他植物病原真菌与寄主的相互作用也有重要的意义。

分离和鉴定稻瘟病菌的致病相关基因,是达到这一目标的关键所在。

BNA插入突变是标记、分离功能基因的有效途径之一,ATMT是丝状真菌遗传转化的一个的新的技术,具有转化效率离、成本低,操作方便和重复性好多重优点。

我们在构建了二个含有潮霉素B磷酸转移酶基因双元载体的基础上,成功地实现了农杆菌介导的稻瘟病菌转化,转化效率达每106个分生孢子>300个转化子,并得到了4000多个转化子。

通过继代培养和PCR检测,证明插入到稻瘟病菌基因组中的潮霉素抗性基因可稳定遗传。

Southern杂交分析表明,大约有2/3转化子的T-DNA插入是单拷贝的。

用大麦叶片离体接种的方法快速测定部分稻瘟病菌转化子的致病性,发现一个致病缺陷突变体:A1-412。

该突变体不能侵入水稻叶片及擦伤的大麦或水稻叶片,说明A1.412突变体在寄主组织中扩展进程被阻断。

进一步的表型分析,发现A1,412突变体的产孢量显著下降,仅为野生菌株的7%,在疏水表面不能形成附着胞,部分分生孢子萌发的速度也略有延迟。

Southcm杂交显示A1-412基因组中T-DNA插入是单拷贝的。

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河 南 农 业 科 学 , 0 2, 1 1 : 2 8 2 1 4 ( ) 8 ~6
J u n l fH e a rc lu a ce c s o r a n n Ag iut rlS in e o
农 杆 菌介 导 尖 孢镰 刀 菌 西瓜 专化 型 转 化体 系的 建 立 及 突 变 体 筛 选
Ab ta t I t s s ud Fus i m .ys r m f p.n v um i s r c : n hi t y, ar u 02 po u g .s ie s FO一 一 6 1l 0 w a s c s f ly t a — s uc e s u l r ns
19 9个 , 8 对生长速度 、 落颜 色和产孢 量等性状 进行 分析 , 菌 发现有 4 6个性 状特 异 的 突变体 。研 究结
果 为进 一 步研 究 尖 孢 镰 刀 菌 西瓜 专 化 型 的 生 长发 育 、 病 机 制 和 相 关基 因的 功 能 奠 定 了基 础 。 致
关键词 :尖孢镰 刀菌西瓜 专化 型 ;农杆 菌 ; T—D NA 插入 转化 ;转化效 率 中 图分类 号 : 4 6 ¥ 7 文献 标志码 :A 文章编 号 :1 0 0 4—3 6 ( 0 2 0 —0 8 —0 28 21 )1 0 2 5
M ut nt t e ilTr is a swih Sp ca at
LI N G A She , n CH A N G a — he g ZH A O e— n , A N G — o , U N u G o z n , W ixi g Y Lir ng S H ,
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2 I s i t fP a tPr tc i n, e a a e fAg iu t r lS i n e , h n z o 5 0 2, i a . n tt e o l n o e t u o H n n Ac d my o rc l a ce c s Z e g h u 4 0 0 Ch n ) u
摘 要 :以尖孢镰 刀菌西瓜 专化型 ( uaim o yp rm .pnvu F F sru sou fs. iem) O一1 —0 x 1 6菌株 为受体 , 采用农
杆 菌介 导 的 遗 传 转化 方 法 , 实现 了农 杆 菌 A I ( p T G 含 A MT1 介 导 的 西瓜 枯 萎 病 菌 的 转 化 , 研 究 了 1 ) 并
梁 慎 常 高 正 , 卫 星 杨 丽 荣 , , 赵 , 孙 虎 。 李 晓 慧 杨 帆 , , , 全 鑫 徐 小 利 , , 薛保 国。 ( 河南省农业科学院 园 1 . 艺研究所, 郑州 400; . 河南 502 2河南省农业科学院 植物保护研壳所, 郑州 400) 河南 502
转化介质和 p 值对 转化效 率的影响 。结果表 明 : 2 H 在 5℃下 , 用 乙酰丁香 酮( ) 采 AS 浓度 为 20/ l 0 l / mo
L、 杆 菌 O 6 一0 1 、 农 D。 。 .5 尖孢 镰 刀 菌 分 生 孢 子 含 量 为 1 1。个/ I、H 值 为 5 1 5 8时 可 实现 T — × 0 m p .~ .
Ag o a tru t me a in Idae1T a s maln o r b ce im u f ce s1e1 td,rn 士 r t i T ’ 、 1 1 r O ‘ O r
1 S z 1 ・ m o s r po um t P. z m z nd r e ‘ g Ot , .S - e 0 a 1 c e nm r s n
D NA的插入 转化 。当转化体 系 p H值 为 5 3时 , . 转化效率 最高, 达到每 1 。 0 个分生孢 子产 生 5 3个转 5
化子 。不 同共转化介 质对转化 效率影响明显 , 璃纸和硝酸 纤维素滤膜转化效率较 高 , 1 个分生 玻 每 O
孢 子 获 得 5 1个 和 5 9个 转 化 子 , 著 高 于 滤 纸 。 通 过 转 化 , 得 尖 孢 镰 刀 茵 西 瓜 专 化 型 转 化 子 5 4 显 获
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