鸡蛋中三聚氰胺残留的检测
高效液相色谱法检测鸡蛋中三聚氰酸
高效液相色谱法检测鸡蛋中三聚氰酸王强，冼燕萍，罗海英，郭新东，杜志峰，吴玉銮（广州市质量监督检测研究院国家加工食品质量监督检验中心（广州），广东 广州 510110） 摘要：建立了鸡蛋中三聚氰酸含量的HPLC检测分析。
采用酸化甲醇超声提取样品中的待测物，提取液经浓缩吹干后用定容液（V1%氨化甲醇：V水=1：1）定容，反相高效液相色谱检测。
在2.0~8.0 mg/kg添加水平，回收率在84.8 %～91.1 %之间，变异系数在4.0 %~5.2 %之间，方法定量限为2.0 mg/kg。
结果表明，该法操作简便、灵敏、准确，适用于鸡蛋中三聚氰酸含量的测定。
关键词：鸡蛋；三聚氰酸；高效液相色谱中图分类号：TS207.3；文献标识码：A；文章篇号:1673-9078(2009)06-0711-03Determination of Cyanuric Acid in Eggs by HPLCW ANG Qiang, XIAN Y an-ping, LUO Hai-ying , GUO Xin-dong, DU Zhi-feng, WU Yu-luan （Guangzhou Quality Supervision and Testing Institute, National Centre for Quality Supervision and Testing of ProcessedFood (Guangzhou), Guangzhou 510110, China）Abstract: A method for the determination of cyanuric acid in eggs was established. Samples were extracted with 2% formic acid methanol, and then the extracts were dried by nitrogen and dissolved in 1% ammonia methanol aqueous solution (V/V) for HPLC detection. The added standards were 2.0 mg/kg～8.0 mg/kg. The recoveries, coefficients of variation, and detection limit of this method were 84.8%-91.1%, 4.0%-5.2%, and 2.0 mg/kg, respectively. The results showed that the method was simple, sensitive and accurate, which could be used for the determination of cyanuric acid in eggs.Key words: egg; cyanuric acid; HPLC2008年，三聚氰胺几乎是在一夜之间成为了家喻户晓的化学物质，而食品安全因为它也被提到了史无前例的高度。
金纳米粒子比色探针检测牛奶及鸡蛋中的三聚氰胺_孙春燕
DOI ：10．3724/SP．J．1096．2012．10857金纳米粒子比色探针检测牛奶及鸡蛋中的三聚氰胺孙春燕张民伟李宏坤李岩松平红郭佳佳张铁华*（吉林大学军需科技学院，长春130062）摘要三聚氰胺能诱导金纳米粒子（AuNPs ）团聚，溶液颜色由酒红色变为紫色或蓝灰色。
以AuNPs 作为比色探针，建立了快速检测牛奶和鸡蛋中三聚氰胺的方法。
实验优化得最佳反应条件为：AuNPs 粒径13min 、pH =7、反应时间10min 和温度为室温。
对样品中常见物质进行了干扰实验。
样品经10%三氯乙酸和氯仿提取、离心分离后可直接测定，本方法对牛奶和鸡蛋中三聚氰胺的检出限分别为0．1和2．5mg /L （S /N =3），加标回收率分别为95．0% 105．0%和98．0% 104．0%。
关键词三聚氰胺；金纳米粒子；比色；牛奶；鸡蛋2011-08-02收稿；2011-10-05接受本文系国家自然科学基金（No．20905031）、吉林大学引进优秀人才科研基金（No．430505010206H6）资助项目*E-mail ：zhangth@jlu．edu．cn1引言三聚氰胺（C 3H 3N 6）是一种重要的氮杂环有机化工原料，其含氮量高达66%，常被人为添加到牛奶、奶粉以及动物饲料中以虚增蛋白质含量。
三聚氰胺不是食品添加剂，它不能在体内代谢，过多的摄入会引起肾结石［1］。
因此，严禁在奶制品和其它食品中使用三聚氰胺。
我国政府规定，三聚氰胺在婴幼儿奶粉和其它食品中的最大允许残留量分别为1．0和2．5mg /kg 。
目前，检测三聚氰胺的方法主要有高效液相色谱法［2，3］、气相色谱串联质谱法［4，5］、液相色谱串联质谱法［6，7］等。
金纳米粒子（AuNPs ）以独特的光学和电学性质被广泛应用于传感器［8，9］。
AuNPs 具有良好的生物相容性和稳定性，消光系数高，易合成。
以AuNPs 为探针的比色传感器被广泛用于检测核酸［10］、蛋白质［11］、病毒［12］、金属离子［13］等。
高效毛细管电泳测定鸡蛋中三聚氰胺
第３ ７卷
２０ ０ ９年 ９月
分 析 化 学 （ Ｅ Ｘ Ｕ Ｘ Ｅ） 研 究 简 报 ＦＮ Ｉ Ａ Ｕ Ｈ
摘
要
建 立 了高 效 毛 细 管 电 泳 一 二极 管 阵列 检 测 器 检 测 鸡 蛋 中三 聚 氰 胺 的方 法 。 样 品 用 三 氯 乙酸 提 取 ， 固
相萃取小柱净化处理后进 行检测 ， ５ ｍ ｌＬ甲酸一０ｍ ｌＬ甲酸铵 （ Ｈ ２ ５ 为 缓冲溶 液 ， 以 ０ｍ ｏ ｆ ５ ｍｏ ／ ｐ ．） 在总长 度为
４
６ ｔ ｉ ／ ｎ ｍ
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图 １ 生 鸡蛋 （ ） ａ 及其添加 ０ ２ ｓｋ 三聚氰胺后 （ ） ．５ｍ ｇ ／ ｂ
的毛 细 管 电泳 图 谱
Ｆｇ １ Ｅ ｅｔ ｐ ｅｏ ｒ ｆ ｌ ｋｌｗ ｅ ｇ （ ）ａ ｄｓ ｉｅ ｉ， ｌｃ ｏ ｈ ｒｇ ｍ ｏ ｂａ ｇｓ ａ ｎ ｋ ｄ ｒ ａ ｎ ＇ ａ ｐ
司） 。电泳缓 冲溶 液 ： ０ｍｍ ｌＬ甲酸一０ ｍ ｏ／ ５ ｏ ／ ５ ｍ ＬＬ甲酸 铵 （ Ｈ ２ ５ 色谱 纯 ） 三 聚氰 胺标 准 品 （ ｐ ． ， ； 纯度 ＞ ９ ％ ，ｉ ａ 司 ） 用 Ｖ ２ ％ 甲醇 ） 水 ）＝ ： 合 液溶 解成 ５ ０ ｍ ／ ９ Ｓｍ 公 ｇ ， （０ ： （ ２ ８混 ０ ｇ Ｌ储 备液 ； 氯 乙酸 、 三 甲醇等 其
康造成 严重威 胁 ¨ 。鸡蛋 是 日常食用 最 多 的食 品之 一 ， 为保 障鸡 蛋 的食 用 安 全 ， 农业 部 最 新颁 布 的鸡
高效液相色谱法测定鸡蛋、牛奶和猪肉中环丙 氨嗪及三聚氰胺的
高效液相色谱法测定鸡蛋、牛奶和猪肉中环丙氨嗪及三聚氰胺的实验研究魏瑞成，王 冉，刘伟荣(江苏省农科院 江苏省畜禽产品安全性研究重点实验室，江苏 南京 210014)摘 要：本实验研究建立用NH 2柱和97%乙腈水溶液做流动相洗脱测定鸡蛋、猪肉和牛奶中环丙氨嗪和三聚氰胺残留量的高效液相色谱法，样品均质后经NaOH 和20%氨水乙腈溶液重复提取2次、浓缩、过C 18固相萃取小柱净化等处理后上机检测，环丙氨嗪和三聚氰胺得到了很好的分离，各自的保留时间分别是8min 和12min 。
标准曲线在0.01～1.0μg /ml 浓度范围内呈线性相关，环丙氨嗪、三聚氰胺标准曲线的相关系数(r)分别为0.9999、0.9994。
检测限为0.02mg/kg ，定量限低于0.05mg/kg 。
关键词：环丙氨嗪；三聚氰胺；残留；高效液相色谱法Study on Analytical Method of Cyromazine and Melamine Residues in Egg, Milk and Pork with HPLCWEI Rui-cheng ，WANG Ran ，LIU Wei-rong(Key Laboratory of Animal-derived Food Safety of Jiangsu Province, Jiangsu Academy ofAgricultural Science, Nanjing 210014, China)Abstract ：A high-performance liquid chromatography (HPLC) with NH 2 column and 97% acetonitrile-water as mobile phase to determine the cyromazine and melamine residues in egg, milk and pork was described in this paper. Samples were treated with NaOH, extracted with acetonitrile containing 20% NH 4OH, and cleaned up by using C 18 column solid-phase extraction (SPE).A perfect separation for cyromazine and melamine was achieved with their respective retention time 8 and 12 min. The calibration curves for cyromazine and melamine are linear in the concentration range of 0.01 to 1.0 μg/ml, with the correlation coefficients of 0.9999 and 0.9994, respectively. The detection limits of both the compounds is 0.02 mg/kg and the quantification limit is less than 0.05 mg/kg.Key words ：cyromazine ；melamine ；residues ；high-performance liquid chromatography中图分类号：O657.72 文献标识码：A 文章编号：1002-6630(2008)12-0605-05收稿日期：2007-10-10基金项目：江苏省科技厅攻关项目(BM2003306)作者简介：魏瑞成(1979-)，男，硕士，主要从事畜产品安全性评价研究。
金纳米粒子比色探针检测牛奶及鸡蛋中的三聚氰胺_孙春燕
DOI ：10．3724/SP．J．1096．2012．10857金纳米粒子比色探针检测牛奶及鸡蛋中的三聚氰胺孙春燕张民伟李宏坤李岩松平红郭佳佳张铁华*（吉林大学军需科技学院，长春130062）摘要三聚氰胺能诱导金纳米粒子（AuNPs ）团聚，溶液颜色由酒红色变为紫色或蓝灰色。
以AuNPs 作为比色探针，建立了快速检测牛奶和鸡蛋中三聚氰胺的方法。
实验优化得最佳反应条件为：AuNPs 粒径13min 、pH =7、反应时间10min 和温度为室温。
对样品中常见物质进行了干扰实验。
样品经10%三氯乙酸和氯仿提取、离心分离后可直接测定，本方法对牛奶和鸡蛋中三聚氰胺的检出限分别为0．1和2．5mg /L （S /N =3），加标回收率分别为95．0% 105．0%和98．0% 104．0%。
关键词三聚氰胺；金纳米粒子；比色；牛奶；鸡蛋2011-08-02收稿；2011-10-05接受本文系国家自然科学基金（No．20905031）、吉林大学引进优秀人才科研基金（No．430505010206H6）资助项目*E-mail ：zhangth@jlu．edu．cn1引言三聚氰胺（C 3H 3N 6）是一种重要的氮杂环有机化工原料，其含氮量高达66%，常被人为添加到牛奶、奶粉以及动物饲料中以虚增蛋白质含量。
三聚氰胺不是食品添加剂，它不能在体内代谢，过多的摄入会引起肾结石［1］。
因此，严禁在奶制品和其它食品中使用三聚氰胺。
我国政府规定，三聚氰胺在婴幼儿奶粉和其它食品中的最大允许残留量分别为1．0和2．5mg /kg 。
目前，检测三聚氰胺的方法主要有高效液相色谱法［2，3］、气相色谱串联质谱法［4，5］、液相色谱串联质谱法［6，7］等。
金纳米粒子（AuNPs ）以独特的光学和电学性质被广泛应用于传感器［8，9］。
AuNPs 具有良好的生物相容性和稳定性，消光系数高，易合成。
以AuNPs 为探针的比色传感器被广泛用于检测核酸［10］、蛋白质［11］、病毒［12］、金属离子［13］等。
应用亲水作用色谱检测鸡蛋和肉中三聚氰胺及三聚氰酸二酰胺
应用亲水作用色谱检测鸡蛋和肉中三聚氰胺及三聚氰酸二酰胺李延昭;郝卫强;王余波;陈强;李锦春;孙小丽【摘要】A hydrophilic interaction liquid chromatographic (HILIC) method for the determination of melamine and its degradation product ammeline in eggs and meat has been developed. The separation was carried out on a ZIC-HILIC column with 3 mmol/L NH4 H2 P04 (pH 6. 9) -ace-tonitrile (20:80, v/v) as mobile phase at the flow rate of 0. 8 mL/min, and detected at 220 nm. Compared with the reversed-phase liquid chromatography, this method can avoid the use of ion pair reagents and thus simplify the composition of mobile phase. Under the above chromatographic conditions, melamine and ammeline had good peak shapes and moderate retention times. Good separation between these compounds and the substances that were naturally contained in the samples can be achieved. For the sample preparation, the analytes were first extracted with 0. 1% phosphoric acid due to the basicity of melamine and ammeline. Then, metaphosphoric acid and acetonitrile were used to remove proteins and saccharides by precipitation. After the filtration and removal of acetonitrile by rotary evaporation under vacuum, the filtrate was cleaned-up by solid-phase extraction (SPE) technique in which a cation exchange column was used. The SPE column was activated by using methanol and 0. 1% phosphoric acid. A solution of 5% ammonia methanol was chosen as eluent. The residues obtained from the eluant by evaporating the solvent were resolved in the mobile phase. It was found that there was a goodlinear relationship between concentration and detector response within the range of 0.4-40 mg/L. The limits of detection were 2 mg/kg for both melamine and ammeline. The average recoveries were between 80% and 105% in the spiked range of 2 - 10 mg/kg. The relative standard deviations were not more than 10%. The solutions of melamine and ammelinewere stable in a month. The established method can be used in practice to determine melamine and ammeline simultaneously in egg and meat samples.%应用亲水作用色谱(HILIC)对从市场上购买的鸡蛋和肉中的三聚氰胺及三聚氰胺降解产物三聚氰酸二酰胺进行了检测.采用的色谱柱为ZIC-HILIC柱,流动相为3 mmol/L磷酸二氢铵溶液(pH 6.9)-乙腈(20∶80,v/v),流速为0.8 mL/min,检测波长为220 nm.在该体系下,三聚氰胺和三聚氰酸二酰胺的保留时间适中,与样品中的内源性物质有良好的分离.样品经0.1％磷酸提取,偏磷酸及乙腈沉淀蛋白质和糖类物质,以及P-SCX固相萃取柱净化.三聚氰胺和三聚氰酸二酰胺在0.4～ 40 mg/L范围内与峰面积呈良好的线性关系,样品定量限(按信噪比(S/N)不小于10计)为2 mg/kg,在2～10 mg/kg添加水平下的平均回收率为80％～ 105％,相对标准偏差小于10％.该方法具有良好的分离选择性,可用于鸡蛋和肉中三聚氰胺和三聚氰酸二酰胺的同时检测.【期刊名称】《色谱》【年(卷),期】2012(030)007【总页数】5页(P716-720)【关键词】亲水作用色谱;液相色谱;三聚氰胺;三聚氰酸二酰胺;鸡蛋;肉【作者】李延昭;郝卫强;王余波;陈强;李锦春;孙小丽【作者单位】常州大学材料科学与工程学院,江苏常州213164;南京大学常州高新技术研究院,江苏常州213164;常州大学材料科学与工程学院,江苏常州213164;南京大学常州高新技术研究院,江苏常州213164;常州大学材料科学与工程学院,江苏常州213164;常州大学材料科学与工程学院,江苏常州213164【正文语种】中文【中图分类】O658Abstract:A hydrophilic interaction liquid chromatographic(HILIC)method for the determination of melamine and its degradation productammeline in eggs and meathas been developed.The separation was carried out on a ZIC-HILIC column with 3 mmol/L NH4H2PO4(pH 6.9)-acetonitrile(20∶80，v/v)as mobile phase atthe flow rate of0.8 mL/min，and detected at220 pared with the reversed-phase liquid chromatography，this method can avoid the use of ion pair reagents and thus simplify the composition of mobile phase.Under the above chromatographic conditions，melamine and ammeline had good peak shapes and moderate retention times.Good separation between these compounds and the substances that were naturally contained in the samples can be achieved.For the sample preparation，the analytes were first extracted with 0.1%phosphoric acid due to the basicity of melamine and ammeline.Then，metaphosphoric acid and acetonitrile were used to remove proteins and saccharides by precipitation.After the filtration and removal of acetonitrile by rotary evaporation under vacuum，the filtrate was cleaned-up by solid-phase extraction(SPE)technique in which a cationexchange column was used.The SPE column was activated by using methanol and 0.1%phosphoric acid.A solution of 5%ammonia methanol was chosen as eluent.The residues obtained from the eluant by evaporating the solvent were resolved in the mobile phase.It was found that there was a good linear relationship between concentration and detector response within the range of0.4－40 mg/L.The limits of detection were 2 mg/kg for both melamine and ammeline.The average recoveries were between 80%and 105%in the spiked range of 2－10 mg/kg.The relative standard deviations were not more than 10%.The solutions of melamine and ammeline were stable in a month.The established method can be used in practice to determine melamine and ammeline simultaneously in egg and meat samples.Key words:hydrophilic interaction liquid chromatography(HILIC);liquid chromatography(LC);melamine;ammeline;eggs;meat三聚氰胺(melamine)是一种含氮有机杂环化合物。
三聚氰胺的检测技术一
● 以目标物测定浓度为横坐标，目标物与对应同位素内标峰面积比为纵坐标，绘制三聚氰胺标准曲 线，在2.5～100.0 ng/mL线性关系良好，回归方程为y=0.998 266x+0.041 23，相关系数r为 0.999 3，符合检验对标准曲线的要求。
回收率实验
● 分别向空白样本中添加标准工作液、同位素内标工作液，按照1.3.1步骤处理并检测。添加水平为 0.01 mg/kg、0.03 mg/kg、0.10 mg/kg 3个水平，每个浓度6份平行样本，检测结果见表2。方 法回收率为82.8%～102.3%，相对标准偏差为3.2%～5.6%，回收率和精密度良好，符合检测方 法要求，适合液体乳中三聚氰胺的检测
● 检出限测定以空白牛奶样品为基质，一个阳性添加浓度C(10.0µg/g)，按照上述优化过的方法来 前处理和上机，所得信噪比S/N=19.49，可计算检出限为0.001 5µg/g。计算公式如下
● 检出限(method detection limit,MDL)(μg/g)=3C/(S/N)
● 回收率和精密度的确定以空白牛奶作为基质，进行相应的加标回收试验，加标浓度为 10µg/kg、 5 0 µg / k g 、 2 0 0 µg / k g 。 每 个 加 标 浓 度 分 别 做 6 个 相 同 浓 度 的 平 行 试 样
结论
● 本研究探索优化了一种基于高效液相色谱-串联质谱法的内标法测定液态奶 中三聚氰胺的分析方法。该方法通过用含10%二乙胺的乙腈水溶液充分提 取，取上清液进行氮吹浓缩后，定容上机测定，最后，该方法的检出限达 到了0.001 5μg/g，能灵敏的检测低含量基质，同时，液态奶试样在按 10μg/kg、50μg/kg、200μg/kg 3个浓度添加情况下根据该试验方法进行 前处理和仪器检测，结果回收率为87.79%～104.54%，相对标准偏差为 2.39%～5.07%。该方法具有前处理简单便捷、检出结果精密度高定量结 果准确且重复测试较为稳定等特点，大大提高了液态奶中三聚氰胺的检测 效率，方便对此类药物的监督管控对有效的倒逼生产养殖端按规定使用该 类药物起到积极推动作用
酶联免疫吸附法检测鸡蛋中三聚氰胺的残留
三聚氰胺(Melamine ,MA )是建筑业中常用的一种防火化工材料,常用于制造三聚氰胺-甲醛树脂。
由于MA 是一种含氮量高的化合物(图1a ),所以被非法添加至动物饲料原料或饲料中以增加表观蛋白含量。
2007年,中国出口到美国的用于生产宠物食品的小麦谷蛋白中添加了较高浓度的MA ,引发数起宠物死亡事件。
2008年,国内发生了震惊全国的“毒奶粉”和“毒牛奶”事件,随后,出口香港的鸡蛋中也被检测出含有MA 。
长期食入高浓度MA 可导致小鼠肾结石和膀胱肿瘤[1]。
因此,中国农业部严令禁止在动物饲料或饲料原料中人为加入MA ,并规定了动物饲料中MA 的最高限量为2.5mg/kg 。
除了非法添加外,MA 还可由一种动物用灭蝇药物———环丙氨嗪(图1b )代谢而来。
环丙氨嗪是中国农业部于2003年批准的兽药,可以添加到动物饲料中使用。
但有2%~14%的环丙氨嗪在动物体内代谢为MA 。
因此,必须对动物性产品中的MA 残留进行严格监控。
目前,关于检测饲料原料、饲料、牛奶、鸡蛋和肉产品中MA 的方法国内外有很多报道,包括HPLC [2-10]、LC-MS/MS[10-14]、GC/MS[15-16]。
这些方法虽可定性定量,但需要昂贵的仪器设备,操作复杂,耗费大量时间和人力物力。
而酶联免疫吸附检测法(ELISA )快速、简单、灵敏,一次可同时检测几十份样品,对于国内需要检测样品量巨大的实际情况来说,不失为一种最佳的选择。
到目前为止,只有Kim [10]和Garber[17]分别以美国Beacon 公司和美国Abraxis 公司的商品化试剂盒对宠物饲料中的MA 进行了检测,检测限分别为0.02mg/kg 和0.009mg/kg 。
而至今国内外均未见有建立ELISA 方法对MA 进行检测的研究报道。
因此,该研究旨在合成MA 的人工抗原,制备特异性抗体,建立一种简单、快速、灵敏地检测MA 的间接竞争ELISA 方法,以对鸡蛋中可能残留的MA 进行检测。
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应用予济多动植物昀生化检测，是一种常用的检测 方法。我们对比国标、ＦＤＡ和农业部测定三聚氰胺 方法，优化三聚氰胺的提取方法、改变流动棚和色谱 分析柱，用硪）Ｌｃ检测鸡蛋中三聚氰胺的残留量。
１材料与方法
１．１试验材料 １．１．１ 药品与试荆 三聚氰胺标准品：含量９９％ （Ｓｉｇｍａ—ａｌｄｒｉｃｈ）。甲醇：ＴＥＤｌＡ，色谱纯（美国天 地）。乙腈：ＲｏＥ，色谱纯（美国ＲＯＥ ｓｃｉｅｎｔｉ纛ｃ Ｉｎｃ．）。氨水：分析纯（广州试剂厂生产）。正己烷： 分析纯（上海久意化学试剂有限公司）。三氯乙睃： 分析纯（广东油头市西陇化工厂）。蒸馏水为双 蒸水。
在空白鸡蛋样品中添加三聚氰胺标准液，使样 品中三聚氰胺浓度秀０。２ ｍ∥堍、ｏ。５掇∥穗、２。０ ｍｇ／ｋｇ和５．０ ｍｇ／ｋｇ。混匀后静邋２０ ｍｉｎ，按照１．２ 的方法和条件进行样品处理和色谱测定，网收率见 表２。以具有合理的西收率（７０％一１１０％）穰耩礁
度（１５％麟Ｄ）的最低浓度为定量限（￡ＤＱ）ｐ】，确定
Ａｂｓｔｒａｃｔ： Ａ ｈｉｇｈ—ｐｅｒｆｏ丌ｎａｎｃｅ ｌｉｑｕｉｄ ｃｈｍｍａｔｏｇｍｐｈｙ（ＨＰＬＣ）ｗｉｔｈ ＮＨ２ ｃｏｌｕｍｎ ａｎｄ ９０％ａｃｅｔｏｎｉｔｒｉｌｅ ｅｌｕａｔｅ ｔｏ ｄｅ—
ｔｅ珊ｉｎｅ ｔｈｅ ｍｅｌａｍｉｎｅ ｉｎ ｅｇｇｓ ｗａｓ ｄｅｖｅｌｏｐｅｄ． Ｓａｍｐｌｅｓ ｗｅｒｅ ｅｘｔｒａｃｔｅｄ ｗｉｔｈ ｌ％ｔｒｉｃｈｌｏｍａｃｅｔｉｃ ａｃｉｄ—ａｃｅｔｏｎｉｔｒｉｌｅ．Ｔａｒｇｅｔ ａｎａ－
回收率为７８．９６％～９２．１９％，相对标准偏差（船Ｄ）为１．９６％～６．６０％。样品榆测定量限为Ｏ．２ ｍｇ／ｋｇ。
关键词：鸡蛋；三聚氰胺；残留；高效液相色谱法
中图分类号：Ｓ６３４．３
文献标识码：Ａ
文章编号： ｌ０００４４４０（２００８）０６ＪＤ９３６讲
Ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ ０ｆ Ｍｅｌａｍｉｎｅ Ｒｅｓｉｄｕｅｓ ｉｎ Ｅｇｇ
Ｑ眦研，胁懈“Ａ咖矿月咖础“ｍｚ＆如眦；研ｋ６０ｒ咖可ｏ，，．ｏＤｄ ＷＥＩ Ｒｕｉ—ｃｈｅｎｇ， ＨＵＡＮＧ Ｓｉ—ｙｕ， ＨＯＵ Ｘｉａｎｇ， ＢＡＯ Ｈｏｎｇ—ｄｕｏ， ＣＨＥＮ Ｍｉｎｇ， ＷＡＮＧ Ｒａｎ
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ｓｑ研枷凡ｉ幻一，ｌｇ ｏ甜讹，孵眦埘，删凡蠡竹旷
Ａ咖以￡叭；肋呼ｎ胁ｉ聊Ｚ研ｋ６０ｍ幻可矿Ａｎｉ啪ｆ一肋讥ｄ而ｏｄ黝砂，胞咖ｗ ２１００１４，饥ｉ船）
ａ ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ瑚ｇｅ ｏｆ ０．１—５．０ ｇ／ｆＩｌｌ，ｗｉｔｈ ｃｏ盯ｅｌａｔｉｏｎ ｃｏｅｍｃｉｅｎｔ“Ｏ．９９９ ９．Ｒｅｃｏｖｅｒｉｅｓ ｏｆ ｍｅｌ帅ｉｎｅ ａｔ ｆｏｎｉ６ｅｄ ｌｅｖｅｌｓ
ｏｆＯ．２ ｍｇ／ｋｇ，０．５ ｍｇ／ｋｇ，２．０ ｍｇ／ｋｇ ａｎｄ ５．０ ｍｇ／ｋｇ ｒａｎｇｅｄ ｆｍｍ ７８．９６％一９２．１９％，ｗｉｔｈ ｒｅｌａｔｉｖｅ ｓｔａｎｄａｒｄ ｄｅｖｉａｔｉｏｎ ｏｆ
鸡蛋样品不同于牛奶样品，在超声过程会有起 泡现象，且色素、脂类和蛋［Ｊ质含量较高，十扰较多。 本试验在检测牛奶中三聚氰胺方法的基础上进行改 进，在提取液中加入乙腈沉淀蛋白，取得了较好的净 化效果；同时，由于鸡蛋尤其蛋黄中含有较高的脂类 物质和色素等干扰物质，需加入正己烷去脂步骤，以 减少萃取小柱的堵塞和脂肪对三聚氰胺的吸附、包 裹。为防止提取过程中鸡蛋样品产生乳化现象，不 能剧烈振荡，液一液分配后的提取液高速低温离心后 分成３层，正己烷层、脂肪层和三氯乙酸层。弁去卜 面两层，去除大部分脂肪，下层溶液变得澄清，有利 于下一步的净化和样品回收率的提升。 ３．３ 色谱分析柱和流动相的选择
表ｌ三聚氰胺峰面积与浓度的回归方程 Ｔａｂｌｅ ｌ Ｌｉｎｅａｒ聃ｇｎｅｓｓｉｏｎ ｂ雠懈∞ｎ ｐ翰ｋ ａｌ嘲ａｎｄ ｄｒｌ堰００ｎＯｅｎｈ鼍－
ｌ耋ｏｎ｜ｂｒ ｍｅｌａｍｉｌｌｅ
２。２色谱圈鞠保鳖时阂 在试验选定的色谱条件下，测得三聚氰胺的保
留时间为６．５ ｍｉｎ。色谱峰形较好，杂质峰和分析物 蜂分离凄较好（醒１）。 ２．３回收率和精密度
止在食品或饲料中使用的添加物，但因其含氮量高 达６６％，被一些造假者利用，添加在饲料或食品中， 造成蛋白质含量较高的假象，以获得更高利润，却造 成了诸如２００７年美国宠物食品污染事件和２００８年 中国毒奶粉及鸡蛋中检出三聚氰胺等严重食物安全 事故，造成严重的社会影响。。
研究表明三聚氰胺能导致小鼠膀胱肿瘤，是一 种潜在的致癌物质［１］，在水中分解成氰尿酸，动物 身体无法转化这种物质，在肾脏通过其分子结构上 的氢氧基与氨基之间形成不溶于水的大分子氰尿酸 三聚氰胺，大量氰尿酸三聚氰胺聚集于肾脏形成结
２结果
２．１标准曲线和线性关系 准确吸取一定体积的三聚氰胺标准储备液，用
流动摆稀释配制成浓度秀ｏ。ｌ转∥ｍｌ、０。５牡∥瘟、 １．０ ｐｇ／越、２．Ｏ ｐ∥ｍｌ和５．Ｏ ｐ∥ｍｌ的三聚氰胺标 准工作液，此溶液现配现用。按照１．２所选定的色 谱分析条件，每个浓度溅定３次。以峰匿积与三聚 氰胺的浓度关系作线性回归分析，结果见表ｌ，三聚 氰胺质量浓度（Ｃ）在０．１～５．０灿ｇ／“时与峰面积 （Ａ）呈嶷好魄线性关系。
溶液为流动相，鸡蛋样品经混合均匀后，用三氯乙酸一乙腈溶液提取，经阳离子交换固相萃取柱净化、富集后，在紫
外检测器２３０ ｎｍ处用高效液相色谱仪测定，保留时间在６—７ ｍｉｎ。标准曲线在０．１～５．０¨ｇ／ｍｌ浓度内呈线性相
关，相关系数（ｒ）为０．９９９ ９。在空白鸡蛋样品中添加Ｏ．２ ｍ吕／ｋｇ、０．５ ｍｇ／ｋｇ、２．ｏ ｍｇ／ｋｇ和５．０ ｍｇ／ｋｇ的三聚氰胺，
本试验方法的￡ＤＱ为０．２ ｍｇ／蚝。
３讨论
３。ｌ检测波长的确定 用紫外分光光度诗对三聚氰胺标准晶溶液进行
万方数据
江苏农业学报 ２００８年第２４卷第６期
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Ａ：标准工作液（Ｏ．５¨ｇ／“）；Ｂｌ：空亡Ｊ鸡蛋样品；Ｂ２：添加Ｏ．５ ｍｇ／ｋｇ三聚氰胺鸡蛋样品。 Ａ：Ｓｔａｎｄａｒｄ ｓｏｌｕｔｉｏｎ（Ｏ．５ ｕ∥ｍＩ）；Ｂｌ：Ｂｌａｎｋ ｅ路ｓａｍｐＩｅ；Ｂ２：Ｅ踞 ｓａｍｐｌｅ ｇｐｉｋｅｄ ａｔ Ｏ．５ ｍｇ／ｋｇ ｗｉｔｈ ｍｅｌａｍｉｎｅ． 图ｌ三聚氰胺标准品和样品的色谱图 Ｆｉｇ．１ Ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｍｓ ｏｆ ｓｔａｎｄａｒｄ ｍｅＩａｍｉＩＩｅ ａｎｄ昭ｇ ｓａｍｐｌｅ
万方数据
魏瑞成等：璃鬣中ｉ聚氰胺残留的检测
石，造戚肾小管的阻塞，导致尿液无法顾煮排除，使 肾脏积水，最终导致肾脏衰竭，严重将导致死亡。
目前，关于三聚氰胺残盟的检测方法，美国食龆
耨药品管理局（秘Ａ）和中隔农蝗行救标准等发帮 的主要是气相色谱法幢“ｊ、液相色谱法＂“Ｊ、质谱 法Ｈ柚’８ｆ９ Ｊ。其中，蕊效液相色谱（ＨＰ燃）已被广泛
移高，然詹耀三氯乙酸饱秘的正己烧滁脂，１２嘲
ｒ／ｍ派４℃离心２０臻ｉｎ，弃去正己烷层。 取８ ｍ１待检溶液注入预先用３ ｌＩｌｌ甲醇、３ ｍｌ水
活化的圊棚擎取柱中，依次用３ ｍ１水和３ ｍｌ甲醇淋 洗，用４ ｍｌ ５％氨水甲簿溶液洗脱，样品装载稳流脱
过程流速为０．５彬ｍｉｎ。洗脱液于５０℃水浴氮气
吹于，用ｌ越甲醇溶鳃残留物，涡旋混合ｌ越ｎ，过 Ｏ。２２降ｍ滤膜后供ＨＰ院测定。
表２三聚氰胺添加回收率（ｎ＝３） ＴａｂＩｅ ２ Ｒｅｃｏｖｅｒｉｅｓ ｏｆ ｍｄａｍｉｎｅ ｆｍｍ ｓｐｉｋｅｄ ｅｇｇ（以＝３）
万方数据
魏瑞成等：鸡蛋中二聚氰胺残留的检测
流动相中有机试剂的比例与目标物保留时间呈 正相关。当乙腈浓度在８５％、９０％、９５％和１００％间 变化时，三聚氰胺的保留时问变长；当乙腈浓度为 １００％时，三聚氰胺峰形拖尾变宽；乙腈浓度太低，三 聚氰胺出峰时间变短，样品中干扰物质影响三聚氰 胺的分离。试验发现，乙腈与水溶液的比例以９０： １０为宜。
三聚氰胺在传统的ｃ博和ｃ。上保留很差，需要 用离子对试剂，否则Ｃ，。柱没有良好的保留与分离。 而流动相添加离子对试剂，限制了液质联用方法的 使用，且用离子对试剂，要求分析柱承受低ｐＨ压 力，经常使用离子对试剂容易堵塞系统。为此，本研 究采用了ＮＨ：柱作为色谱分离柱，流动相采用了 ９０％的乙腈水溶液，取得了较好的分离效果，保留时 间为６—７ ｍｉｎ，峰形好，无干扰杂质，方法简单，且试 剂易得。
江苏农业学报（胁，咿Ⅱ上矿，４盯蹦．），２００８，２４（６）：９３６～９３９
鸡蛋中三聚氰胺残留的检测
魏瑞成， 黄思瑜， 侯翔， 包红朵， 陈 明， 王 冉
（江苏省农业科学院食品质量安全与检测研究所，农业部食品安全监控重点开放实验室，江苏省畜禽产品安全性研究重点实 验室，江苏南京２１００１４）
摘要： 为建立鸡蛋中ｉ聚氰胺残留的简便高效液相色谱法，本试验采用ＮＨ：柱作为色谱分析柱，９０％乙腈水
“ｍ，２５０。Ｏ ｍｍ×４．６ ｍｍ（ｉ．ｄ．）。流动相：乙腈＋水 （９０：ｌ§）；漉速：１．０ ｍｙｍ法。检测器：二极管阵列检 测器；检测波长：２３０ ｎｍ；柱温：２５℃；进样量：２０砧。 １。２。２样品处理与测定准确称取２．０ ｇ混合均 匀的试群于５０礅ｌ聚丙烯其塞离心管巾，麴入１５疯 ｌ％三氯乙酸溶液和５ ｌＩｌｌ乙腈，超声提取ｌｏ ｍｉｎ，再 振荡提取ｌＯ ｍｉｎ，８ ０００∥ｍｉｎ离心７ ｍｉｎ，上清液转
全波长扫描（１９０～４００ ｎｍ），结果表明，三聚氰胺在 ２０５ ｎｍ处有最大吸收峰。由于许多物质在近紫外