驱除瘤胃真菌对绵羊瘤胃内纤维物质降解的影响
浅谈瘤胃真菌和细菌对粗饲料的降解
NEW FEEDNEW FEED 2007.1240新 进 展摘 要：瘤胃细菌和真菌均具有很强的粗饲料降解能力，但二者对粗饲料的附着和降解机制存在一定的差异，且二者之间存在着复杂的协同和竞争关系。
本文综述了瘤胃真菌和细菌对粗饲料的附着、降解及在粗饲料降解过程中的互作。
关键词：瘤胃真菌；细菌；粗饲料；附着；降解；纤维素体浅谈瘤胃真菌和细菌对粗饲料的降解集美大学厦门市饲料检测与安全评价重点实验室/孙云章植物细胞壁主要由纤维素、半纤维素和木质素组成。
其中，纤维素和半纤维素在维持植物细胞弹性、保证细胞的生长和发育过程起支撑作用，因此常被称为细胞壁结构性碳水化合物，是反刍动物瘤胃发酵的重要来源。
木质素是酚酸多聚体混合物，不能被瘤胃微生物降解，且能与半纤维素和纤维素紧密交织在一起组成多糖-木质素复合物，是影响植物细胞壁降解的主要因子。
与单胃动物相比，反刍动物对粗饲料的利用能力较高,这主要与其瘤胃中特殊的微生物区系有关。
研究显示，瘤胃细菌和真菌均具有很强的粗饲料降解能力，但二者对粗饲料的降解机制可能存在一定的差异，且二者之间存在着复杂的协同和竞争关系。
本文综述了瘤胃真菌和细菌对粗饲料的附着、降解及在粗饲料降解过程中的互作。
1 瘤胃真菌和细菌对粗饲料的附着1.1 瘤胃真菌对粗饲料的附着在瘤胃中，附着是微生物降解粗饲料的前提。
有关瘤胃真菌对粗饲料的附着方面的研究较少。
Orpin （1977）首次发现瘤胃厌氧真菌能与植物纤维紧密结合，且能利用植物纤维中同位素标记的C 14。
随后，Bauchop（1979）用扫描电镜观察绵羊和牛瘤胃内容物中的植物片段，发现厌氧真菌能大量附着于植物片段的表面，并由此推断厌氧真菌可能对粗饲料的降解具有一定的作用。
瘤胃真菌孢子囊能在动物采食后15min ～60min 内释放游动孢子。
游动孢子通过化学趋化反应到达植物片段表面后，通过阿米巴运动找到合适的位点附着、出芽，附着的主要位点是植物细胞气孔、受损表面或切缘末端。
提高反刍动物粗饲料利用率的营养措施
提高反刍动物粗饲料利用率的营养措施祁茹，赵军，孙建凤，林英庭【摘要】在反刍动物日粮中，粗饲料通常占40%～80%，甚至更高，是瘤胃微生物和宿主动物重要的营养来源。
实际生产中可通过补添适宜的营养调控瘤胃微生物区系的生长，从而提高反刍动物对粗饲料的利用效率，提高其营养价值。
本文综述了粗饲料在反刍动物中的营养作用及提高反刍动物粗饲料利用率的营养措施。
【期刊名称】中国奶牛【年(卷),期】2011(000)013【总页数】5【关键词】粗饲料；营养调控；利用率我国常规分类法中规定天然水分含量在60%以下，干物质中粗纤维含量等于或高于18%的饲料均为粗饲料，包括牧草、青干草、青贮饲料和农作物秸秆及籽实类皮壳等。
粗饲料可通过物理、化学和微生物等处理方法提高其营养价值，Cheeke 则认为包括物理和化学方法在内的粗饲料加工对其营养品质改善有限，而通过适宜的营养补添、优化瘤胃环境，从而实现反刍动物对粗饲料的最佳利用才是开发粗饲料营养潜力的根本途径[1]。
调控反刍动物利用粗饲料的营养措施有：补添氨基酸与肽、矿物元素、瘤胃氨态氮、易消化碳水化合物，供给过瘤胃蛋白、酶制剂、离子载体，应用酸碱或缓冲盐调控瘤胃的pH 值等。
1 粗饲料在反刍动物中的营养作用粗饲料最主要的营养作用是满足反刍动物对纤维素的需要。
粗饲料中的纤维素，大约有55%～95%经瘤胃微生物发酵，形成挥发性脂肪酸（VFA）、CO2和甲烷等产物。
VFA不仅为反刍动物提供能量，而且参与各种代谢，并形成产品。
此外，粗饲料还能促进反刍动物肠道消化吸收功能，维持动物健康，进而改善生产性能。
1.1 提供能量瘤胃微生物消化利用纤维的基础是可以产生纤维素酶类，借助微生物产生的糖苷酶，消化宿主动物不能消化的纤维性物质，将其降解为VFA，显著增加饲料中总能（GE）的可利用程度。
日粮纤维在瘤胃内发酵产生的VFA是反刍动物的主要能源物质，约占反刍动物吸收的可消化能的70%～80%。
1.2 控制采食量粗饲料体积大，吸水性强，有强烈的填充作用，可使动物产生饱感。
畜牧学概论复习资料
畜牧学概论复习资料名词解释1、胴体重：屠宰后去头、蹄、尾及内脏，保留板油和肾脏的躯体分量为胴体重。
2、屠宰率：指胴体重占屠宰前体重的百分率。
屠宰率(%) = (胴体重÷宰前重) ×100%。
3、背膘厚(back fat thickness)：宰后胴体背中线肩部最厚处、胸腰椎结合处和腰荐椎结合处三点膘厚的平均值为平均背膘厚。
4、日增重= (结束重-起始重) /育肥天数5、饲料转化率：也称耗料增重比或者增重耗料比。
饲料转化率=育肥期饲料消耗量 /(结束重—起始重)。
6、全进—全出 (养猪生产)：在同一时间内将同一辈子长发育或者繁殖阶段的工艺猪群，全部从一种猪舍转至另一种猪舍。
7、反刍：动物采食的饲料在瘤胃内被浸润和软化，约经 0.5－1.0 小时后又被逆呕回口腔内，再子细咀嚼后咽下，这个过程称为反刍。
一、养猪生产1、哪些因素影响年产胎次？妊娠期、哺乳期、配种间隔期2、畜牧生产在国民经济中的地位和作用？(1)畜牧生产和种植业的关系 a、农业生产体系：植物农业+动物农业 b、二者是相互依赖、相互促进的两个部门。
(2) 改善国民膳食结构，提高健康水平。
(3) 为工业提供原料，促进出口创汇 a、带动食品加工业和轻工业的发展b、促进外贸事业的发展。
3、猪的生物学特性：(1) 性成熟早，繁殖率高，世代间隔短 (2)饲养周期短，生长速度快，积脂力强 (3)食性广，饲料报酬高 (4)屠宰率高，产肉性能高，肉脂品质好 (5) 猪的嗅觉和听觉灵敏，视觉不发达 (6) 小猪怕冷，大猪怕热 (7) 定居漫游，喜清洁，易调教，群居位次明显。
4、提高肉猪生产力的技术措施(1)选择优良的品种和杂交的组合(2)适宜的营养水平和饲喂方法(3)提供适宜的环境温度(4)加强肉猪的管理技术。
5、猪的行为习性：采食行为、排泄行为、群居行为、争斗行为、性行为、母性行为、活动与睡眠、探索行为、异常行为、后效行为。
6、种公猪的饲养管理：(1)单圈饲养(2)加强运动(3)定期称重(4)刷试和修蹄(5)定期检查精液品质(6)夏季防暑降温(7)保证营养需要(8)定时定量饲喂(9)控制喂料量。
瘤胃微生物的名词解释
瘤胃微生物的名词解释瘤胃微生物是指存在于反刍动物瘤胃内的一类微小生物，包括细菌、真菌和原生动物等。
瘤胃是反刍动物独特的消化器官，扮演着关键的营养转化和消化过程中的重要角色。
而瘤胃微生物群则是瘤胃生态系统的核心成分，是实现反刍动物高效利用纤维素素质的关键。
1. 瘤胃微生物的组成瘤胃微生物在种类和数量上呈现高度复杂和多样性。
它们包括纤维素分解细菌、纤维素稳定菌、乳酸菌、糖类、蛋白质分解菌等。
这些微生物之间相互协同作用，形成一种相对稳定的微生物群落，以适应反刍动物特殊的消化需求。
2. 瘤胃微生物的功能瘤胃微生物是反刍动物消化系统中最为重要的利益合作伙伴。
它们具有一系列独特的功能，其中最为重要的是纤维素的降解和利用。
纤维素是植物细胞壁的主要成分之一，但由于反刍动物自身的限制，无法直接分解和吸收。
瘤胃微生物通过合作分解纤维素，产生一系列代谢产物，如挥发性脂肪酸，提供给宿主动物能量和营养物质。
此外，瘤胃微生物还能分解和转化其他复杂的碳水化合物、合成维生素和氨基酸等。
它们还能抑制一些有害菌的生长，提高反刍动物的免疫力。
瘤胃微生物的活动对反刍动物的生长、发育和健康状态起到至关重要的作用。
3. 瘤胃微生物与饲料饲料是直接影响瘤胃微生物群落结构和功能的重要因素。
不同类型和比例的饲料成分能够改变瘤胃微生物的数量和组成，从而影响反刍动物的消化过程。
例如，高纤维饲料可以促进纤维素稳定菌的生长，进而提高纤维素分解效率。
而高蛋白饲料则会增加蛋白质分解菌的数量，加速蛋白质的降解和吸收。
在不同的饲料组合中，瘤胃微生物会出现适应性的变化，以最大化对各种营养物质的利用。
同时，饲料质量的变化也可能对瘤胃微生物产生不利影响。
过度加工和热处理的饲料可能破坏饲料中的营养物质和纤维素结构，降低瘤胃微生物的活性和功能。
因此，科学合理的饲料配制和饲养管理对于维持瘤胃微生物群稳定和促进反刍动物健康至关重要。
4. 瘤胃微生物与环境因素环境因素对瘤胃微生物的生态系统也有着重要影响。
饲养水平对肉用绵羊妊娠期消化代谢的影响
资源育繁|畜业技术空饲养水平对肉用绵羊妊娠期消化代谢的影响岳红艳(甘肃省定西市临洮县辛店畜牧兽医站730515)摘要：本文以饲养水平对肉用绵羊妊娠期消化代谢的影响为重点，重点分析干物质和有机物、中性洗涤纤维和酸性洗涤纤维、氮表观消化代谢及能量的消化情况，为有效实现肉用绵羊妊娠期的营养平衡提供支持和借鉴。
关键词：饲养水平；肉用绵羊；妊娠期；消化代谢肉用绵羊生长过程中需要有大量营养作支撑，但现阶段国内对其营养需要量的实际研究起步较晚。
我国拥有十分丰富的饲草资源，畜牧业发展拥有着良好的前提，科学分析饲养水平对肉用绵羊生长，尤其是妊娠期消化代谢方面的影响能为更好维持妊娠期肉用绵羊的营养平衡提供重要信息。
1测试仪器与设备在实际分析和研究肉用绵羊妊娠期消化代谢变化情况时，需要积极制定好一定的测定指标，选择相应的测定仪器。
其中在测定能量过程中，使用IKA-C200氧弹式热量测量仪测定能量；使用KDY-9380全自动凯式定氮仪测试好氮元素的含量，遵照《饲料分析及饲料质量检测技术》的相关指标要求准确测试干物质(DM)、有机物(OM)、中性洗涤纤维(NDF)及酸性洗涤纤维(ADF)叫2饲养水平对肉用绵羊妊娠期消化代谢的影响2.1干物质和有机物在实际测量肉用绵羊妊娠期消化代谢情况过程中需要积极使用采食量这一测试指标，其能准确判断岀肉用绵羊的实际健康状态和生产状况。
在相关研究中，肉用绵羊饲粮中营养物质的实际消化率和实际饲养水平之间保持负相关状态。
导致这一结果岀现的原因在于肉用绵羊实际摄入的饲粮不断增加，动物自身肠道通过食糜的速度不断加快，导致饲料和微生物之间的作用时间缩短，同时饲料和消化酶的作用时间也缩短，导致消化率降低。
在肉用绵羊饲养水平持续降低的过程中，干物质和有机物的实际消化率不断升高。
2.2中性洗涤纤维和酸性洗涤纤维具体分析肉用绵羊妊娠期消化代谢活动在饲养水平下的影响，需要注重中性洗涤纤维和酸性洗涤纤维方面的判断情况。
全棉籽对瘤胃内环境及纤维素酶活性的影响
饲料研究 FEED RESEARCH NO.6,2011 9
科学试验与研究
1.4 测定指标与方法 每期试验的第 12 天和第 13 天早上 08:00、上
午 10:00、中午 12:00、下午 15:00 和 18:00 分别采 集 40 mL 瘤胃液，4 层尼龙布过滤后立即测定 pH。 然后将瘤胃液离心（4 000 r/min 离心 15 min），上 清液制样以备测定瘤胃液 NH3-N 质量浓度、挥发 性脂肪酸质量浓度和羧甲基纤维素酶活性。
2 结果与分析
2.1 添加不同水平 WCS 对瘤胃内环境的影响 2.1.1 添加不同水平 WCS 对瘤胃内 pH 的影响
从表 1 可见 ：1 个饲喂周期内，各组 pH 平均 值差异不显著。
表 1 不同处理绵羊瘤胃内 pHLeabharlann 组 别早上 08:00
上午 10:00
中午 12:00
下午 15:00
下午 18:00
pH 用 pH-5 型 pH 计进行测定。 挥发性脂肪酸按照曹庆云，周武艺等的气相色 谱法进行瘤胃液挥发性脂肪酸的测定。 NH3-N 采用冯宗慈（1993）的比色法测定瘤胃 液 NH3-N。 羧 甲 基 纤 维 素 酶 活 性 按 照 汪 水 平， 王 文 娟 （2006）的方法测定瘤胃羧甲基纤维素酶活。 1.5 数据处理 采用 Excel 进行处理，方差分析采用 SPSS 进 行处理。
采用 4×4 拉丁方设计，分为 4 组，每组 1 头羊， 其中 1 组为对照组（CT）饲喂基础日粮，其他 3 组 为试验组（A、B 和 C）。试验组分别添加日粮干物 质 5 %（100 g）、10 %（200 g）和 15 %（300 g）的 WCS。整个试验设计分 4 期，每期 13 d，预试期 10 d， 正试期 3 d。WCS 每天分 2 次随精料添加。
瘤胃微生物对纤维素类物质降解的研究
纤维素本身的结晶结构； 木质素降解产生的挥发酸、 合物与低分子量的葡萄糖内切酶和 β－ 葡萄糖苷酶间
糠醛衍生物和酚类化合物对酶活性的影响。然而瘤胃 有明显的协同作用。
微生物却有一套降解纤维素的酶系统和降解机制。 ４ 降解纤维素的主要瘤胃微生物
１９４５ 年纤维素酶在天然纤维素中被发现之后， 瘤胃 ４．１ 瘤胃细菌
Ｒａｓｍｕｓｓｅｎ， １９８９）。溶纤维丁酸弧菌（Ｂｕｔｙｒｉｖｉｂｒｉｏ Ｆｉｂｒｉ－ 解酶（ｃｅｌｌｕｂｉｏｈｙｄｒｏｌａｓｅ）； ②内切型葡聚糖酶（ＥＣ．３．２．１．４）
ｓｏｌｖｅｎｓ） 对高温和低温、高浓度的葡萄糖和纤维二糖 （ Ｅｎｄｏｇｌｕｃａｎａｓｅ， ｅｎｄｏ－ １、４－ ｇｌｕｃａｎａｓｅ） 又称 Ｃｘ 酶、羧甲
２．４ 吸附机制的研究
的交连网络结构来说， 利用纤维素酶复合体分解纤维
微生物附着机制研究的切入点有纤维素复合体、 素无疑是一个好的方式（ Ｂａｙｅｒ 等， １９８６） 。
菌 毛、酶 的 结合 域 、细菌 糖被 层 的 碳 水 化 合 物 抗 原 决 ３．３ 瘤胃中纤维素酶间的协同作用
定族等， 但对于其吸附机理尚无定论。附着程度一般
Ｗｅｉｍｅｒ 研究发现， 降解速率常数与表面积呈强
烈正相关。增大表面积可以促进瘤胃细菌的附着； 真
菌对纤维素的降解是侵袭式的， 其附着与片段大小、
王 梦 芝 ，扬 州 大 学 动 物 科 学 与 技 术 学 院 ，２２５００９，江 苏 扬 州 。 徐爱秋、李世霞、王洪荣（通讯作 者）， 单 位 及 通 讯 地 址 同 第 一作者。 收稿日期： ２００７－ ０４－ ０９
宁酸因为结构的不同， 其对微生物附着的影响程度也 解纤维二糖、芳基－ 葡萄糖苷酸而产生葡萄糖等。芳香
瘤胃微生物来源的纤维降解酶及其应用
瘤胃微生物来源的纤维降解酶及其应用陈振明张朝晖刘建新摘要瘤胃微生物含有种类丰富的纤维降解酶系统。
通过研究纤维降解酶活性在瘤胃内的分布和各种瘤胃微生物降解酶系统等有助于这些酶的开发利用。
系统生物学研究的快速发展为大规模克隆更多的纤维降解酶基因提供了可能。
文中还综述了纤维降解酶在畜牧生产中的一些应用途径。
关键词微生物；瘤胃；纤维降解酶；基因中图分类号Ｑ５５６＋．２全球酶市场目前正以每年６．６％的速度增长，到２００９年，需要量将达到５亿美元［１］。
作为新兴的世界制造中心之一，中国将在这一进程中起更大的作用。
有关酶制剂应用的产业如食品、纺织、皮革和洗涤剂工业中，饲料工业需求的增长将是最快的。
发展更有效的酶表达系统将有效地降低酶生产成本，促进畜牧生产。
其中，酶基因库的建立并从中选择最有效的酶是一个关键［２］。
反刍动物的瘤胃是一个复杂的微生态系统，其微生物区系主要由细菌、原虫和真菌组成。
这些微生物的存在使反刍动物能够以植物纤维原料为主的低质粗饲料作为主要日粮。
粗饲料的主要成分是纤维素、半纤维素、木聚糖、果胶和木质素等纤维多糖。
与此相对应，瘤胃微生物能产生纤维素酶、半纤维素酶、木聚糖酶、葡萄糖苷酶等纤维多糖的降解酶系［３］。
近年来，很多研究者以１６ＳｒＤＮＡ和１８ＳｒＤＮＡ序列分析、变性梯度凝胶电泳（ＤＧＧＥ）、末端限制性片段长度多态性（Ｔ－ＲＦＬＰ）及抑制性消减杂交（ＳＳＨ）等技术为基础，报道了牛和羊等反刍动物瘤胃微生物区系的多样性［４－８］，但是瘤胃来源酶的多样性研究报道不多。
本文对纤维降解酶活性在瘤胃中的分布，各类瘤胃微生物的酶活性，酶基因克隆及其应用等方面的研究进展作一综述。
１纤维降解酶在瘤胃内部的分布由于微生物种群的多样性和同种瘤胃微生物可能产生多种纤维降解酶的特性［３］，瘤胃微生物产生的酶种类极为丰富，包括各种纤维降解酶系（如纤维素酶、木聚糖酶、β－葡聚糖酶和果胶酶等）、淀粉酶、蛋白酶、植酸酶和植物毒素的降解酶（如单宁酶）等。
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畜牧兽医学报,2006,37(5),447~451Acta Veterinaria et Zootechnica S inica驱除瘤胃真菌对绵羊瘤胃内纤维物质降解的影响霍鲜鲜,侯先志,李大彪,敖力格日玛(内蒙古农业大学动物科学与医学学院,呼和浩特010018)摘 要:选取3只体况良好,带有永久性瘤胃瘘管的蒙古羊与小尾寒羊的杂交一代公羊,运用尼龙袋法研究全部驱除瘤胃真菌对绵羊瘤胃内稻草纤维物质降解的影响。
结果表明:全部驱除瘤胃厌氧真菌后,改变了瘤胃内纤维物质的降解动力学参数,显著降低了瘤胃内稻草DM 、NDF 、A DF 的降解速率(P <0.05),显著提高了三者的消化延滞时间(P <0.05),显著降低了稻草NDF 、A DF 的降解率,而DM 的降解率有所降低,但差异不显著(P >0.05)。
说明瘤胃真菌在纤维物质降解中发挥了重要的作用。
关键词:厌氧真菌;纤维物质降解率;瘤胃中图分类号:S826.5 文献标识码:A 文章编号:0366 6964(2006)05 0447 05收稿日期:2005 06 20作者简介:霍鲜鲜(1971 ),女,内蒙古呼和浩特人,博士,主要从事反刍动物营养研究。
Tel:0471 *******Effect of Elimination of All Anaerobic Fungi on FibreDegradation in Rumen for SheepH U O Xian x ian,H OU Xian zhi,LI Da biao,Aoligerima(Colleg e of A nimal S cience and A nimal M edicine,I nner M ongolia A gr icultur alUniver sity ,H uhhot 010018,China)Abstract:Three M ong olian and han cro ss bred r am s (30 1.82)kg live w eight w ith a permanent cannula in the rumen w ere used to inv estig ate the effect of elimination of anaerobic fung i on fibre digestibility of straw w ith ny lon bag methods in sacco.The r esults show ed that the degradation dynamic parameters of different fibre w ere changed and the degradation rates of DM,NDF,ADF w ere significantly decreased (P <0.05).Digestibility of NDF,A DF w as also significantly de creased (P <0.05),but the degr adation r ate of DM w as no o bv io us difference.It sug gested that the anaero bic fungi chiefly influence the fibre digestion.Key words:anaerobic fungi;fibre degr adation;rumen 厌氧真菌是反刍动物瘤胃中的正常寄居种群,自从1975年Orpin 首次成功地培养了这些生物体以来[1],厌氧真菌以其高效的降解纤维物质的能力引起了研究者们的兴趣,而我国的国情又使开发粗饲料资源显得更加需要和迫切,因此研究厌氧真菌在反刍动物中的营养作用具有重要意义。
厌氧真菌的研究大多集中在国外,国内在此领域研究报道甚少。
即使在国外目前对瘤胃厌氧真菌的研究只是基于单一菌株,纯合底物的培养,它在反刍动物瘤胃内对纤维物质降解到底发挥多大作用,相关报道甚少。
为此,本研究采用驱除瘤胃厌氧真菌的方法研究其对瘤胃内纤维物质降解的影响,从而反证瘤胃厌氧真菌在纤维物质降解中的作用。
1 材料与方法1.1 试验动物选择体况良好、体重(30 1.82)kg 的蒙古羊与小尾寒羊的杂交一代公羊3只,统一驱虫,安装永久性瘤胃瘘管进行试验。
手术器械、消毒液的准备及消化道瘘管的安装,详见 现代反刍动物营养研究方法与技术![2]。
1.2 试验日粮与饲养管理试验羊采食的青干草由内蒙古农业大学牧场购进,经打草机一次性打碎备用。
试验日粮全部由青畜 牧 兽 医 学 报37卷干草或处理草组成,分别于07:00,12:00,19:003次饲喂,自由采食,自由饮水,单笼饲养。
青干草与处理草的营养成分见表1。
表1 青干草和处理草的营养成分Table1 Nutritional composition of green hay and treated green hay%样品名称Sample水分DM GE/(M J/kg)CP EE CF N DF AD F A SH Ca P 青干草G reen hay8.7291.2815.75 6.35 3.0331.7168.5255.16 4.580.370.45处理草T reated g reen hay8.8491.1614.80 3.92 1.4438.6675.1468.53 3.600.430.351.3 试验设计与方案采用单因子重复试验设计。
试验分2期进行,第1期为对照期,研究在青干草日粮条件下绵羊瘤胃内纤维物质降解的变化规律;第2期为试验期,在一期的基础上,研究青干草日粮条件下,将瘤胃内真菌全部驱除后,对纤维物质降解的影响。
一期试验预试期12d,正试期10d;一期试验结束后,将试验羊禁食24h,然后以化学处理后的青干草(后称处理草)饲喂,自由采食,分别于饲喂后8 d开始采集瘤胃内容物进行真菌计数,直至发现瘤胃真菌全部消失;此后以未处理青干草饲喂试验羊,待试验羊采食量稳定后5d进行真菌计数,发现瘤胃内无真菌,10d后再次计数,发现仍无真菌,12d 后开始正式试验,试验期10d,正式期结束后再对瘤胃真菌进行计数,然后在计数后第3天为试验羊引入外源真菌,3d后对厌氧真菌再进行计数。
在整个试验期依据试验目的采用瘤胃尼龙袋法测定纤维物质的消化率。
1.4 试验方法1.4.1 用于驱除真菌的青干草处理方法 在容积为200L的水池内加入160L水,然后按比例加入次氯酸钠(2kg/160L)及冰乙酸(400mL/160L)搅拌均匀后,将已洗净的青干草10kg放入池内,用塑料布密封。
48h后将草取出,用流动的自来水冲洗30min,洗净草上残余物,晒干,打包储存备用。
1.4.2 尼龙袋试验方法 选择孔径为300目的尼龙布,制成8cm∀12cm的尼龙袋,标号,自来水浸泡冲洗,烘干恒重备用。
称取2.0g左右的稻草放入一个尼龙袋中,每两个袋拴在一根长约15cm的半软性塑料管上,用橡皮筋紧紧缠住。
在早晨饲喂后2h投入瘤胃腹囊处,管的另一端用尼龙线挂在瘘管塞上。
每只羊瘤胃内放8根管,共16个袋,每时间点取出2个平行袋,尼龙袋在瘤胃内停留时间为0、2、6、12、24、48、60、72h,每个时间点取出的尼龙袋和对照袋(0h)连同塑料管一起放入塑料盆内洗涤7min,再在中等流速的自来水下漂洗1min,松开尼龙袋,在65#烘箱烘48h,用来测DM、NDF 和ADF,每期试验重复一次。
1.5 样品分析方法1.5.1 真菌计数用培养基成分及制作 真菌计数所用培养基为液体培养基,由基础培养基、缓冲液A 和B、无细胞瘤胃液、指示剂及发酵底物组成。
具体配方见文献[3]。
1.5.2 真菌的计数方法 从绵羊瘤胃内采集约200m L瘤胃内容物,经电子旋涡仪振荡15s后,从中移取10mL接种到预先注入抗生素的装有液体培养基的血清瓶中,经系列稀释至10-8,用大注射器于每稀释度移取10mL缓冲液接种到亨氏管中,每稀释度3个重复,亨氏管提前装有0.8g/管稻草,高压灭菌,并于39#恒温厌氧培养,整个过程均在厌氧条件下进行。
当亨氏管中的稻草片段呈疏松浮起后,计为∃+%号,接种10d后仍无此现象发生则计为∃-%号,采用MPN法(最大可能计数法)进行计数,并将结果转换为T FU/mL内容物(T FU为thallus form ing units,即丝菌体形成单元数)。
1.5.3 营养成分分析 常规成分分析DM、OM、CP、EE、ASH、Ca、P依饲料化学成分分析手册![4]的方法测定。
纤维成分NDF、A DF、H C分析依据饲料分析和饲料质量检测技术![5]的方法进行。
1.6 计算方法1.6.1 DM和NDF、ADF在不同时间点的降解率(P)计算公式P=放入袋中饲料DM(或纤维)重-某时间点残留袋内的DM(或纤维)重放入袋中饲料DM(或纤维)重∀100%4485期霍鲜鲜等:驱除瘤胃真菌对绵羊瘤胃内纤维物质降解的影响1.6.2 a、b和c的求算 根据P=a+b(1-e ct)和不同时间点尼龙袋法测定的瘤胃降解率数据,用最小二乘法即可求得a、b和c三个参数。
其中a为快速降解部分,b为慢速降解部分,c为降解速率,P为不同时间点的降解率,t为时间点。
1.6.3 其它营养指标计算PED=a+b*c/(c+K);L=1/c*Ln(b/(a+b-a&))其中:PED为动态降解率,K为流通速率,a&为零时间水洗降解值,L为消化延滞时间。
1.7 统计分析用SA S软件中的方差分析进行数据处理。
2 结果与分析2.1 驱除真菌前后瘤胃内真菌总数的测定驱除真菌前瘤胃内真菌总数为(1.20 0.57)∀105TFU/mL,驱除后为0。
饲喂处理草10~14d后,瘤胃内真菌数量由原来的1.2∀105T FU/m L下降到检测不出,说明用次氯酸钠和冰乙酸处理的草,动物采食后可杀灭真菌,此方法最早为Ford发现,而且他还发现驱除真菌后的试验动物再饲喂未处理草时,瘤胃内仍然没有真菌,同时不影响瘤胃液中的pH值和纤毛虫的数量[6]。
另外,研究报道表明,放线菌酮、莫能菌素、Salino mycin(一种离子载体)、多氧菌素(一种几丁质合成抑制剂)和Tetronasin(一种离子载体)都能驱除真菌。
但是,放线菌酮全部驱除真菌的剂量较高,约150m g/d[1],对试验羊机体有毒害作用[7];而莫能菌素用于全部驱除真菌的有效性还值得怀疑[8~11],另外3种制剂alinomycin、Tetronasin和多氧菌素,尽管在体外培养时真菌对这些抑制剂比较敏感,但在体内使用仍然可以检测到厌氧真菌[7,12]。