miR-181a-5p靶向Kras对乳腺癌细胞MDA-MB-231增殖及凋亡的调控作用
靶向沉默p65基因对人乳腺癌细胞MDA MB 231增殖及凋亡的影响
WANG Ling, SANG Mei-xiang, LIAN Yi-shui, WANG Bin, DING Chun-yan, SHAN Bao-en Department of Immunology, Tumor Research Institute, Fourth Hospital of Hebei Medical University, Shijiazhuang 050011, China
p65miRNA-3-R CCTGATCCGGTGACGCGTCTGTAGTCAGTCAGTGGCCAAAACTACAGACGATCGTCACCGGATC
1.4 真核表达质粒p65miRNA转染MDA-MB-231细胞 件：94℃预变性 5 min，94 ℃变性 50 s，60 ℃退火 50 s，
转染前将MDA-MB-231细胞以2×105个/孔的密度 72 ℃延伸40 s，35个循环。72 ℃ 5 min，4 ℃终止。最后
根据人 p65 基因序列[NM_021975]转录 RNA 的作 用位置，设计 3 对长度为 21nt 的序列（表 1），设计时已经 经 BLAST 进行同源性比较分析，所设计的靶 mRNA 与 人类细胞内任何基因没有同源性。在连接酶作用下与 线性表达质粒 pcDNATM6.2-GW/EmGFP-miR 合成环 形的重组质粒。构建了 3 个针对靶位点的质粒表达载 体，即 pcDNATM6.2-GW/EmGFP-miR-p65-1（简称为 p65miRNA-1）、pcDNATM6.2-GW/EmGFP-miR-p65-2 （简 称 为 p65miRNA-2）、pcDNATM6.2-GW/EmGFPmiR-p65-3（简 称 为 p65miRNA-3）和 阴 性 对 照 载 体 pcDNATM6.2-GW/EmGFP-miR-Negtive（简称为 NegmiRNA）。
miR-181a-5p基因在非小细胞肺癌中的应用[发明专利]
![miR-181a-5p基因在非小细胞肺癌中的应用[发明专利]](https://img.taocdn.com/s3/m/aac37381f5335a8103d220d6.png)
专利名称：miR-181a-5p基因在非小细胞肺癌中的应用专利类型：发明专利
发明人：金由辛,韦嘉励,马中良,李艳利,赵波涛
申请号：CN201410107043.X
申请日：20140321
公开号：CN104164477A
公开日：
20141126
专利内容由知识产权出版社提供
摘要：本发明涉及miR-181a-5p基因在非小细胞肺癌中的应用。
本发明发现一种抑制非小细胞肺癌生长的微小RNA，miR-181a-5p与ATG2B基因mRNA的3′-UTR互补，可能抑制靶基因mRNA的翻译或直接降解靶基因的mRNA。
在HEK293T细胞中利用荧光素酶报告基因分析，初步验证了ATG2B是miR-181a-5p的靶基因。
接着在A549细胞中过表达miR-181a-5p，发现miR-181a-5p显著下调ATG2B的mRNA水平。
所公开的为在A549细胞系中ATG2B是miR-181a-5p的靶基因的首次报道，该发明利用miRNA为非小细胞肺癌提供药物靶点方面提供了一定的应用价值。
申请人：上海大学
地址：200444 上海市宝山区上大路99号
国籍：CN
代理机构：上海上大专利事务所(普通合伙)
代理人：陆聪明
更多信息请下载全文后查看。
Mir-181a通过靶向c-fos基因抑制肺癌细胞迁移
Mir-181a通过靶向c-fos基因抑制肺癌细胞迁移林述琨;温吉海;王耀鹏【摘要】目的：利用双荧光蛋白报告基因分析系统验证miR-181a的直接靶基因c-fos,探讨miR-181a促进肺癌细胞迁移的可能机制.方法：Transwel小室检测miR-181a对肺癌细胞迁移的影响；应用生物信息学预测软件TargetScan对miR-181a 靶基因进行预测,并通过双荧光素酶报告基因检测miR-181a对靶基因c-fos的3'UTR 区的调控作用；通过Western blot方法检测miR-181a对c-fos 蛋白表达的影响；结果：A549细胞转染miR-181a后,细胞的迁移能力降低；生物信息学预测c-fos是miR-181a的靶基因,构建融合c-fos的3'UTR区表达质粒pMIR-c-fos,在此基础上对c-fos的3'UTR“种子区”进行定点突变.双荧光素酶报告基因分析表明miR-181a 能够作用于c-fos的3'UTR. Western blot方法进一步证实c-fos是miR-181a的靶基因.结论：Mir-181a可能通过靶向c-fos基因,抑制肺癌细胞迁移.【期刊名称】《药品评价》【年(卷),期】2012(000)036【总页数】4页(P28-30,34)【关键词】肺癌;miR-181a;迁移;A549细胞【作者】林述琨;温吉海;王耀鹏【作者单位】大连普兰店市中心医院病理科;普兰店市中心医院肺外科;大连普兰店市中心医院病理科【正文语种】中文【中图分类】R735.1MicroRNA(miRNAs)是一类在生物体内普遍存在的单链非编码蛋白质小分子RNA，研究表明，它们可以特异性识别靶基因mRNA的3’UTR并与之结合，引起靶mRNAs发生降解或翻译受到抑制[1,2]。
近年来研究发现，miRNA在多种人类肿瘤的发生、发展中起癌基因或抑癌基因的作用[3,4]。
羊肚菌多糖抑制人乳腺癌细胞MDA-MB-231增殖和诱导细胞凋亡研究
214 2016, Vol.37，No.21葚品科学※营养卫生羊肚菌多糖抑制人乳腺癌细胞MDA-MB-231 增殖和诱导细胞凋亡研究李谣s陈金龙s王丽颖s张月巧s吴素蕊2，明建ia*(1.西南大学食品科学学院，重庆 400715; 2.中华全国供销合作总社昆明食用菌研宄所，云南昆明 650223;3.西南大学国家食品科学与工程实验教学中心，重庆 400715)摘要：以黑脉羊肚菌多糖为原料，研宄羊肚菌多糖对人乳腺癌细胞M D A-M B-231 (以下简称M D A)增殖和凋 亡的影响。
结果表明：在无细胞毒性范围内，羊肚菌多糖能显著抑制人乳腺癌细胞M D A的增殖，半数有效浓度 (median effective concentration，EC50)值为0.096 mg/m L，同时人乳腺癌细胞M DA表现出多种细胞凋亡的形态学变 化。
免疫印迹检测实验结果显示，羊肚菌多糖能抑制B淋巴细胞瘤-2 (B-cell lymphoma-2，Bcl-2)蛋白表达，促进 Bcl-2相关X蛋白（Bcl-2 associated X protein，Bax)表达，同时增加Bax/Bcl-2蛋白表达比值，并呈现出剂量依赖效 应。
说明羊肚菌多糖能抑制人乳腺癌细胞M DA增殖，促进细胞凋亡。
关键词：羊肚菌；多糖；人乳腺癌细胞M DA-M B-231;细胞增殖；细胞凋亡Polysaccharides from Morchella angusticeps Peck Inhibit Cell Proliferation and Induce Apoptosis inMDA-MB-231 Human Breast Cancer CellsL I Yao1,CHEN Jinlong1,WANG Liying1,ZHANG Yueqiao1,WU Surui2,MING Jian13*(1.College of Food Science,Southwest University,Chongqing400715, China;2.Kunming Edible Fungi Institute,A ll China Federation of Supply and Marketing Cooporatives,Kunming650223, China;3.National Food Science and Engineering Experimental Teaching Center,Southwest University,Chongqing400715, China)Abstract:The effects of polysaccharides from Morchella angusticeps Peck(PMEP)on the proliferation and apoptosis of MDA-MB-231 human breast cancer cells were investigated in this study.The results showed that PMEP could significantly inhibit the proliferation of M DA-MB-231 in the non-cytotoxic concentration range with a median effective concentration (EC50)of0.096 mg/m L.M DA-M B-231 cells also showed a series of morphological changes associated with apoptosis.Western blotting assay showed that PMEP could inhibit the expression of B-cell lymphoma-2 (Bcl-2) protein,increase the expression of Bcl-2 associated X protein(Bax)and Bax/Bcl-2 ratio in a dose-dependent manner.In conclusion,PMEP could inhibit the proliferation and induce the apoptosis of MDA-MB-231 cells.Key words:Morchella esculenta;polysaccharide;MDA-MB-231 human breast cancer cell;cell proliferation;cell apoptosis DOI:10.7506/spkx1002-6630-201621036中图分类号：S567.3 文献标志码：A文章编号：1002-6630 (2016) 21-0214-05引文格式：李谣，陈金龙，王丽颖，等.羊肚菌多糖抑制人乳腺癌细胞M DA-M B-231增殖和诱导细胞凋亡研宄[J].食品科学,2016, 37(21): 214-218. D0I:10.7506/spkx1002-6630-201621036. L I Yao,CHEN Jinlong,WANG Liying,et al.Polysaccharides from Morchella angusticeps Peck inhibit cell proliferation and induce apoptosis in M DA-MB-231 human breast cancer cells[J].Food Science,2016, 37(21): 214-218. (in Chinese with English abstract)D0I:10.7506/spkx1002-6630-201621036. 羊肚菌（M orchella esculenta (L.)Pers.，M EP)是 肚而得名，常见的羊肚菌有尖顶羊肚菌、黑脉羊肚菌、一种药食两用的真菌，因其菌盖表面凹凸不平、状如羊 褐赭色羊肚菌、粗腿羊肚菌、宽圆羊肚菌。
转染miR-181a模拟物和抑制物的宫颈癌细胞迁移、增殖、凋亡情况观察
黎 玉 涵 ，孙 小 丽 ，何 少仪 ，胡桂 英 ，洪 小 山 ，布 俏雯 ，罗 喜 平 （广 州 医科 大学 附属 广 东省 妇 幼保 健 院 ，广 州 ５１００１０）
摘要 ：目的 观察转染微小 ＲＮＡ１８１ａ（ｍｉＲ－１８１ａ）模拟 物 、抑制物 的宫 颈癌 ＳｉＨａ和 ＨｅＬａ细胞 增殖 、凋亡 、迁移 情况 的变化 ，探讨 ｍｉＲ一１８１ａ在宫颈癌细胞 中发挥的作用 。方 法 将 体外培养 的 ＳｉＨａ、ＨｅＬａ细胞分为观 察 １组 、对 照 １组和 空白 １组 。观 察 １组转 染 ｍｉＲ．１８１ａ模 拟物 、对 照组 １组转 染无关序 列 、空 白组 只加入 转染试 剂 。将体 外 培养 的 ＳｉＨａ、ＨｅＬａ细胞分为观察 ２组 、对照 ２组和空 白 ２组。观察 ２组转染 ｍｉＲ一１８１ａ抑 制物 、对 照组 ２组 转染无 关序列 、空 白组只加入转染试剂 。①继 续培养 ２４ ｈ后 采用 实时荧 光定 量 ＰＣＲ法 检测 各组 ｍｉＲ一１８１ａ；②继 续培养 １２ ｈ后 采用 Ｔｒａｎｓｗｅｌｌ小室实验检测各组穿膜 细胞数 ；继续培养 ４８ ｈ后采用克隆形成实 验测 算各组克隆形成率 ；④ 用流 式细胞术测算各组细胞凋亡 率。结果 ① 观察 １组 、对照 １组 、空白 １组 ＳｉＨａ细胞 ｍｉＲ一１８１ａ相对表达量分别 为 ２．４±０．０８、１．０９±０．０４、０．８５±０．０２，Ｔｒａｎｓｗｅｌｌ小 室实验穿膜 细胞数分别 为 ４０．６０±２，８４、５８．４０±３．５６、６３．２Ｏ± ２．５３，克 隆形成 实验克隆形成率分别为 ２０．５４％ ±３．４０％ 、５０．９９％ ±１．７８％ 、５３．０６％ ±４．９１％ ，细胞 凋亡率 分别为 ４７．８６％ ±２．０４％ 、３６．７４％ ±３．５０％ 、３２．１５％ ４－２．３０％ 。观察 １组 ＳｉＨａ细 胞 ｍｉＲ一１８１ａ相 对表达 量 、Ｔｒａｎｓｗｅｌｌ小室 实验穿膜 细胞数 、克隆形成实验克 隆形 成率 、细胞凋亡率 与对 照 １组 、空 白 １组相 比，Ｐ均 ＜０．０５。观察 １组 ＨｅＬａ 细胞 ｍｉＲ一１８１ａ相对表达量 、Ｔｒａｎｓｗｅｌｌ小室实验穿膜 细胞 数 、克 隆形 成实 验克 隆形 成率 、细胞 凋亡率 与对 照 １组 、空 白 １组相 比，Ｐ均 ＜０．０５。②观察 ２组 、对 照 ２组 、空 白 ２组 ＳｉＨａ细 胞 ｍｉＲ一１８１ａ相 对表 达量 分别 为 ０．０９ ４－０．００、 ０．９３ ４ －０．０２、０．８９ ４ －０．Ｏ１，Ｔｒａｎｓｗｅｌｌ小室实验穿膜 细胞数分别 为 １１３．８０±４．５０、６７．２０ ４－２．１０、６５．２０ ４－２．０３，克隆形 成实验克 隆形 成率分别 为 ６９．２３％ ±４．２５％ 、５２．７１％ ４－１．８４％ 、５１．６７％ ±２．２５％ ，细胞凋 亡率 分别 为 ３０．１５％ ４－ ２．５１％ 、３２．５１％ ４ －２．１０％ 、３３．０５％ ４ －２．１４％。观察 ２组 ＳｉＨａ细胞 ｍｉＲ一１８１ａ相对表达量 、Ｔｒａｎｓｗｅｌｌ小室实验穿膜细 胞数 、克隆形成实验克隆形成率 、细胞凋亡率 与对 照 ２组 、空 白 ２组 相 比，Ｐ均 ＜０．０５。⑧观察 １组 、对照 １组 、空 白 １组 ＨｅＬａ细胞 ｍｉＲ一１８１ａ相对表达量分别 为 ２．３１±０．０８、０．９１ ４－０．０２、０．９９ ４－０．０６，Ｔｒａｎｓｗｅｌｌ小 室实验 穿膜 细胞数 分别 为 ４０．００ ４ －３．５１、５６．４０ ４ －３．５６、５８．８Ｏ ４ －２．１３，克 隆形成 实验 克隆形 成率分 别 为 ３６．６５％ ４－１．８２％ 、５４．７７％ ± ３．５２％ 、５８．２９％ ±２．５６％ ，细胞 凋亡率 分别 为 ４６．６６％ ４－２．８０％ 、２３．６４％ ４－３．０９％ 、２２．１０％ ４－４．０７％ 。④ 观察 ２ 组 、对照 ２组 、空白 ２组 ＨｅＬａ细胞 ｍｉＲ－１８１ａ相对表达量 分别为 ０．０２±０．００、０．８０ ４－０．０２、０．９３ ４－０．０５，Ｔｒａｎｓｗｅ１１小 室实验穿膜细胞数 分别 为 ７７．６０±３．５４、５７．２０ ４ －６．２０、５６．４０±２．２３，克 隆形 成实验 克 隆形成 率分 别 为 ７９．１１％ ± ２．７０％ 、５６．８２％ ４ －１．９８％ 、５７．３４％ ±２．１２％ ，细胞 凋亡 率分 别为 １７．６７％ ４－２．３０％ 、２０．７０％ ４－２．０９％ 、２１．３０％ ４－ ３．１７％。观察 ２组 ＨｅＬａ细胞 ｍｉＲ一１８１ａ相对表 达量 、Ｔｒａｎｓｗｅｌｌ小室实验穿 膜细胞 数 、克 隆形成 实验克 隆形成 率 、细 胞凋亡率 与对照 ２组 、空 白 ２组相 比 ，Ｐ均 ＜０．０５。结论 转染 ｍｉＲ一１８１ａ模 拟物 的宫颈癌 ＳｉＨａ和 ＨｅＬａ细胞迁移 和增殖 能力下降 ，细胞凋 亡率 升高 。转染 ｍｉＲ一１８１ａ抑制物可 以达 到相反的效果 。
miR-181a在人类恶性肿瘤中作用机制的研究进展
miR-181a在人类恶性肿瘤中作用机制的研究进展雷振伟;张瑜;张旭【摘要】microRNA(miRNA)是一组长度为20～ 25个核苷酸的非编码小RNA,通过与靶基因mRNA结合在转录后水平调控靶基因的表达.microRNAs在细胞发生发展、增殖、凋亡和分化等众多生物学过程中发挥着重要作用.研究表明,异常表达的miR-181a通过调控功能蛋白的表达水平及信号通路而与众多肿瘤的发生发展密切相关,涉及的生物学过程包括肿瘤细胞的增殖、侵袭、转移、凋亡和生存.本文就miR-181a分子的基因结构、基因表达与调控、生物学功能以及与人类恶性肿瘤发生的关系的研究进展作一综述.【期刊名称】《解放军医学院学报》【年(卷),期】2016(037)011【总页数】4页(P1204-1207)【关键词】微RNA;miR-181a;基因表达调控;恶性肿瘤【作者】雷振伟;张瑜;张旭【作者单位】解放军总医院泌尿外科,北京100853;解放军总医院泌尿外科,北京100853;解放军总医院泌尿外科,北京100853【正文语种】中文【中图分类】R733microRNA是一类长度为20～25个核苷酸、内生的非编码小RNA，通过与靶基因mRNA的3'UTR区域结合而在转录后水平负向调控靶基因的表达[1]。
研究表明，异常表达的miRNA通过调控功能蛋白的表达水平和信号通路网而与众多肿瘤的发生发展密切相关，涉及的生物学过程包括肿瘤细胞的增殖、侵袭、转移、凋亡和生存[2]。
其中，miR-181家族成员miR-181a在细胞发展和分化过程中发挥着重要作用，其异常表达与肿瘤、自身免疫性疾病等密切相关。
本文就miR-181a 在人类恶性肿瘤中作用机制的研究进展作一综述。
miR-181家族共有4个成员，miR-181a、miR-181b、miR-181c、miR-181d，分别位于3条独立的染色体上，其种子区域与数以百计的mRNA互补，通过抑制结合或者激活RNA诱导的沉默复合体或促进降解的方式调控靶基因，进而参与各种生理或病理过程。
microRNA干扰抑制MTDH的表达对乳腺癌细胞MDA-MB-231增殖和侵袭能力的影响
microRNA干扰抑制MTDH的表达对乳腺癌细胞MDA-MB-231增殖和侵袭能力的影响苏洁之;梁庆模【期刊名称】《医学研究杂志》【年(卷),期】2017(046)005【摘要】目的探讨microRNA干扰技术沉默异黏蛋白(MTDH,metadherin蛋白)基因表达及对人乳腺癌细胞MDA-MB-231细胞增殖、转移、侵袭能力的影响.方法将人工合成的针对MTDH基因的miRNA片段瞬时转染人乳腺癌细胞MDA-MB-231,通过Western blot法、RT-PCR法检测MTDH蛋白表达和MTDHmRNA;应用MTT检测法、划痕实验、Transwell实验检测抑制MTDH基因后对乳腺癌细胞增殖、转移、侵袭能力的影响.结果 MTDHmiRNA能有效抑制MTDH蛋白和MTDHmRNA表达,最佳抑制率分别为79.41％、80.56％ (P ＜0.05);经miRNA干扰的细胞,生长速度明显受到抑制(P＜0.05),侵袭迁移能力显著下降(P＜0.05).结论 MTDH miRNA瞬时转染人乳腺癌MDA-MB-231细胞可明显抑制癌细胞中MTDH表达,沉默MTDH基因表达后可明显抑制人乳腺癌MDA-MB-231细胞生长增殖、侵袭迁移能力.%Objective To investigate the effects of RNA interference technique silencing MTDH on proliferation,metastasis and invasion of human breast cancer cell MDA-MB-231.Methods The MTDH miRNA was transfected into Human breast cancer cell MDA-MB-231 by means of lipofectamine 2000.The silencing efficiency of MTDH was examined by RT-PCR and western blot.The influence of MDA-MB-231 cell proliferation,metastasis and invasion ability from inhibition MTDH genewas conducted by using MTT assay,scratch experiments,and Transwell assay.Results MTDH miRNA effectively inhibited MTDH mRNA and protein levels.The best inhibition rate were 79.41％ and 80.56％ (P ＜ 0.05).With miRNA interferring cells,the ability of cells proliferation was decreased (P ＜ 0.05),and cells invasive and metastasis were depressed (P ＜0.05).Conclusion MTDH expression is obviously suppressed after transfected by MTDH miRNA in MDA-MB-231 cells.The inhibition of MTDH expression from microRNA leads to significant suppression of proliferation,invasion and metastasis of breast cancer cell MDA-MB-231.【总页数】7页(P84-90)【作者】苏洁之;梁庆模【作者单位】570102海口,海南医学院附属医院乳腺胸部肿瘤外科;421001 衡阳,南华大学附属南华医院胸外科【正文语种】中文【中图分类】R73【相关文献】1.利用RNA干扰抑制CXCR4基因表达对乳腺癌细胞转移和侵袭能力的影响 [J], 张树成;乔雷;高红2.RNA干扰对MDA-MB-231乳腺癌细胞株骨保护素基因表达的抑制作用 [J], 张帆;姜军;唐振宁;杨新华;徐琰;范林军;张毅;陈莉;周艳;陈庆秋3.RNA干扰技术抑制Galectin-3表达对三阴性乳腺癌细胞 MDA-MB-231增殖和凋亡的影响 [J], 魏杨辉;张宗明;杨莉涛;黄耀;刘娟;张卫星;吴爱国4.抑制NBS1表达对三阴性乳腺癌细胞MDA-MB-231增殖和凋亡的影响 [J], 华晶;王雅杰5.构建RNA干扰真核表达载体靶向抑制乳腺癌细胞株MDA-MB-231内的VEGF-C表达之研究 [J], 钟强;朱晨芳;戚晓亮;孙波;顾岩因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
非甾体类抗炎药对乳腺癌细胞MDA-MB-231增殖影响的实验室研究
非甾体类抗炎药对乳腺癌细胞MDA-MB-231增殖影响的实验室研究闫晓枫;王杨;张岩【期刊名称】《中国实验诊断学》【年(卷),期】2008(012)009【摘要】目的通过研究阿司匹林、塞来昔布及两者分别联合阿那曲唑对乳腺癌细胞MDA-MB-231的抑制作用,探讨并比较阿司匹林和塞来昔布的抗肿瘤作用.方法采用MTT法检测不同浓度的阿司匹林、塞来昔布及两者分别联合阿那曲唑对乳腺癌细胞MDA-MB-231增殖的影响.结果阿司匹林、塞来昔布单药对MDA-MB-231细胞生长均有抑制作用,表现为浓度、时间依赖性,统计学差异具有统计学意义(P<0.05);不同浓度的阿司匹林、塞来昔布分别联合阿那曲唑后对MDA-MB-231细胞的抑制作用较单用阿那曲唑增强,亦表现为浓度依赖性,差别具有统计学意义(P<0.05).结论阿司匹林和塞来昔布均有抑制乳腺癌MDA-MB-231细胞的作用,两者分别联合阿那曲唑后有协同抗肿瘤的作用.【总页数】4页(P1089-1092)【作者】闫晓枫;王杨;张岩【作者单位】吉林大学第三临床医院,血液肿瘤内科,吉林,长春,130021;吉林大学第三临床医院,血液肿瘤内科,吉林,长春,130021;吉林大学第三临床医院,血液肿瘤内科,吉林,长春,130021【正文语种】中文【中图分类】R737.9【相关文献】1.盐霉素通过靶向调控ALDH影响三阴性乳腺癌细胞MDA-MB-231增殖和凋亡[J], 何朵; 吴博; 赵菊梅2.七叶皂苷对乳腺癌细胞MDA-MB-231和T-47D增殖的影响 [J], 刘红梅;文钦琳;唐琳;李峰3.山苍子油对乳腺癌细胞MDA-MB-231增殖和凋亡的影响及其可能机制的研究[J], 周恩正;郭贵明;苏旭;吴春凯;左丽4.沉默UBA2对三阴性乳腺癌细胞系MDA-MB-231增殖和迁移的影响 [J], 吴明;赵玉洁;彭楠茜;陈波5.下调HOX转录反义RNA对三阴性乳腺癌细胞MDA-MB-231增殖、周期及侵袭能力的影响 [J], 叶惠荣;张玉娟;曹茵;王西跃;吴丽华;陈桂林;陈丽娟;袁惠玲因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。
ｍｉＲ．１８ｌａ—Ｓｐ傲／ｊ￣ＲＮＡｓ；Ｋｒａｓ；乳 腺肿瘤 ；细胞增 殖 ；细胞 凋＿Ｌ
［中图分 类号］ Ｒ７３７．９
［文献标 志码 ］ Ａ
［文章编号 ］ ０５７７—７４０２（２０１８）０９—０７３５—０Ｓ
［ＤＯＩ］ １０．１ １８５５／ｊ．ｉｓｓｎ．０５７７．７４０２．２０１８．０９．０３
减 少（Ｐ＜０．０Ｓ）。与转染 阴性Ｘ￣ ｍｉｍｉｃｓ和（或）Ｋｒａｓ—Ｍｕｔ相 比 ，共转 染ｍｉＲ一１８ｌａ．５ｐ ｍｉｍｉｃ及 Ｋｒａｓ．ｗｔ后ＭＤＡ．ＭＢ．２３ｌ细胞 中
的荧光素酶 活性 明显 降低（Ｐ＜０．０５）。结 论 在乳腺 癌细胞ＭＤＡ—ＭＢ一２３１中ｍｉＲ一１８ｌａ．５ｐ呈低表 达 ，Ｋｒａｓ呈高表 达 ；过表 达
比 ，转染 ｍｉＲ—ｌ８１ａ．５ｐ ｍｉｍｉｃ可使ＭＤＡ．ＭＢ．２３１细胞 中ｍｉＲ一１８１ａ．５ｐ的表 达 明显上调 （Ｐ＜０．０５），Ｋｒａｓ蛋 白的表 达 明显 下 渊 （Ｐ＜０．０Ｓ），并可 使ＭＤＡ—ＭＢ．２３ｌ细 胞增殖 活性 降低 （Ｐ＜０．０５），凋亡细 胞 比例增加 （Ｐ＜０．０Ｓ），Ｇ，／Ｍ期细胞 增 多 ，ｓ期 细胞
Ｔｈｅ Ｍ ＤＡ—Ｍ Ｂ－２３１ ｃｅｌｌｓ ｗｅｒｅ ｔｒａｎｓｆｅｃｔｅｄ ｗ ｉｔｈ ｍ ｉＲ一１８１ａ—Ｓｐ ｍ ｉｍｉｃｓ．Ｃｅｌｌｓ ｔｈａｔ ｗｅｒｅ ｔｒａｎｓｆｅｃｔｅｄ ｗ ｉｔｈ ｔｈｅ ｎｅｇａｔｉｖｅ ｃｏｎｔｒｏｌ ｍ ｉｍ ｉｃｓ ｗ ｅｒｅ ｓｅｒｖｅｄ ａｓ ｃｏｎｔｒｏ１．Ｔｏ ｖｅｒｉｆｙ ｔｈｅ ｕｐｒｅｇｕｌａｔｉｏｎ ｏｆ ｍ ｉＲ·１ ８ ｌ ａ一５ｐ ｕｓｉｎ ｇ ｉｔｓ ｍ ｉｍ ｉｃｓＪ ｔｈｅ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ ｍ ｉＲ一１ ８ ｌ ａ—Ｓｐ ｗａｓ ｄｅｔｅｃｔｅｄ ｕｓｉｎｇ ＲＴ－ＰＣＲ ａｎｄ ｔｈｅ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ ｉｔｓ ｔａｒｇｅｔ，Ｋｒａｓ，ｗａｓ ｄｅｔｅｃｔｅｄ ｕｓｉｎｇ Ｗ ｅｓｔｅｒｎ ｂｌｏｔｔｉｎｇ．Ｃｅｌｌ ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ ｗ ａｓ ｍ ｅａｓｕｒｅｄ ｂｙ Ｍ ＴＴ ａｓｓａ￣ Ｃｅｌｌ ａｐｏｐｔｏｓｉｓ ａｎｄ ｃｅｌｌ ｃｙｃｌｅ ｗｅｒｅ ｄｅｔｅｃｔｅｄ ｗ ｉｔｈ ｆ ｌｏｗ ｃｙｔｏｍ ｅｔｅ ｒ．Ｔｏ ｃｏｎｆｉｒｍ ｔｈａｔ Ｋｒａｓ ｉｓ ａ ｒｅａｌ ｔａｒｇｅｔ ｏｆ ｍ ｉＲ一１ ８ １ ａ．５ｐ ｉｎ
转 染至ＭＤＡ．ＭＢ一２３ｌ细胞 ，采用 双荧 光素 酶报 告基 因检 测细 胞荧 光 素酶 的活性 。结果 与ＨＢＬ．１００细胞相 比 ，ＭＤＡ—
ＭＢ．２３ｌ细胞 中ｍｉＲ—ｌ８ｌａ．５ｐ的表 达 明显降低 （Ｐ＜０．０Ｓ），而Ｋｒａｓ蛋 白的表达 明显 升高 （Ｐ＜０．０５）。与转染 阴性 对照ｍｉｍｉｃｓ￣（Ｈ
ＬＤｅｐａｒｔｍｅｎｔ ｏｆＧｅｎｅｒａｌ Ｓｕｒｇｅｒｙ，３０９ Ｈｏｓｐｉｔａｌ ｏｆＰＬＡ，Ｂｅｉｊｉｎｇ １０００９１ｉ Ｃｈｉｎａ ２Ｍｅｄｉｃａｌ Ａｄｍｉｎｉｓｔｒａｔｉｏｎ Ｄｉｖｉｓｉｏｎｊ Ｂｅｑｉｎｇ Ｃｈａｏｙａｎｇ Ｈｏｓｐｉｔａｌ，Ｂｅｑｉｎｇ Ｊ ０００２０，Ｃｈｉｎａ ［Ａｂｓｔｒａｃｔ］ Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ Ｔｏ ｅｘｐｌｏｒｅ ｔｈｅ ｐｏｔｅｎｔｉａｌ ｆｕｎｃｔｉｏｎ ｏｆｍｉＲ－１８１ａ·５ｐ ｉｎ ｒｅｇｕｌａｔｉｎｇ ｃｅｌｌ ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ ａｎｄ ａｐｏｐｔｏｓｉｓ ｉｎ ｔｈｅ
ＭｅｄＪ Ｃｈｉｎ ＰＬＡ，Ｖｏ１．４３，Ｎｏ．９，Ｓｅｐｔｅｍｂｅｒ ｌ，２０１８ ７３ ５
论 著
ｍｉＲ一１８１ａ一５ｐ靶 ［￣Ｋｒａｓ对 乳 腺癌 细胞ＭＤＡ—ＭＢ一２３１增殖 及 凋亡 的调控作 用
何 建苗 ，赵 华洲 ，王婷 ，邱啸 臣，翁剑峰 ，张心慧 ， 曹志 宇
［摘 要］ 目的 探讨 ｍｉＲ．１８ｌａ一５ｐ靶 向ＫｒａｓＸ￣￣Ｌ腺 癌细 胞ＭＤＡ．ＭＢ一２３１增 殖及 凋亡 的调 控作 用 。方 法 选 取乳 腺
ｂｒｅａｓｔ ｃａｎｃｅｒ ｃｅｌｌ ｌｉｎｅ Ｍ ＤＡ—Ｍ Ｂ一２３１ ｂｙ ｔａｒｇｅｔｉｎｇ Ｋｒａｓ．Ｍ ｅｔｈｏｄｓ Ｔｈｅ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｓ ｏｆ ｍｉＲ一１８ｌａ．５ｐ ａｎｄ Ｋｒａｓ ｉｎ Ｍ ＤＡ．Ｍ Ｂ一２３ｌ ｆａ
ｈｕｍａｎ ｂｒｅａｓｔ ｃａｎｃｅｒ ｃｅｌｌ ｌｉｎｅ）ａｎｄ ＨＢＬ一１ ００（ａ ｈｕｍａｎ ｂｒｅａｓｔ ｃｅｌｌ ｌｉｎｅ）ｗｅｒｅ ｄｅｔｅｃｔｅｄ ｂｙ ＲＴ—ＰＣＲ ａｎｄ Ｗ ｅｓｔｅｒｎ ｂｌｏｔｔｉｎｇ，ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ．
表 达 ，Ｗｅｓｔｅｒｎ ｂｌｏｔｔｉｎｇ检 ￣Ｊ］Ｋｒａｓ蛋 白 的表 达 ，Ｍ ＴＴ法 检 测 细 胞 增 殖 情 况 ， 流式 细 胞 仪 检 测 细 胞 周 期 及 细 胞 凋 亡 情 况 。
分别将 野生 型Ｋｒａｓ ３＇－ＵＴＲ质 粒（Ｋｒａｓ．ｗｔ）￣Ｎ突变 型Ｋｒａｓ ３＇－ＵＴＲ质粒 （Ｋｒａｓ．Ｍｕｔ）与ｍｉＲ．１８１ａ一５ｐ ｍｉｍｉｃ，或阴性对 照ｍｉｍｉｃｓ共
ｍ ｉＲ－－１８１ａ －５ｐ ｒｅｇｕｌａｔｅｓ ｃｅｌｌ ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ ａｎｄ ａｐｏｐｔｏｓｉ：ｓ ｂｙ ｔａｒｇｅｔｉｎｇ Ｋｒａｓ ｉｎ ｔｈｅ ｂｒｅａｓｔ ｃａｎｃｅｒ ｃｅｌｌ ｌｉｎｅ Ｍ Ｄ Ａ —Ｍ Ｂ．２３１ ＨＥ Ｊｉａｎ—ｍｉａｏ ，ＺＨＡＯ Ｈｕａ—ｚｈｏｕ ，Ｗ ＡＮＧ Ｔｉｎｇ ，ｑ＿ＩＵ Ｘｉａｏ—ｃｈｅｎ ，Ｗ ＥＮＧ Ｊｉａｎ—ｆｅｎｇ ，ＺＨＡＮＧ Ｘｉｎ—ｈｕｉ ，ＣＡＯ Ｚｈｉ—ｙｕ
癌 细 胞 系Ｍ ＤＡ．ＭＢ一２３１和 人 乳 腺 细 胞 系ＨＢＬ．１００，分 别 采 用 ＲＴ．ＰＣＲ、Ｗｅｓｔｅｒｎ ｂｌｏｔｔｉｎｇ检 ￣，１ ］ｍｉＲ．１８ｌａ ５ｐ及 Ｋｒａｓ蛋 白 的 表
达 。选取ＭＤＡ—ＭＢ．２３ｌ细胞 ，分 别转染 ｍｉＲ一１８ｌａ．５ｐ ｍｉｍｉｃｓ及 阴性对 照ｍｉｍｉｃｓ，采用 ＲＴ．ＰＣＲ检 测细胞 中ｍｉＲ．１８１ａ一５ｐ的