动物粪便中球虫卵囊的检测方法
实训球虫病实验室诊断技术
浮聚法
称取2g粪便置于烧杯中 加入少量漂浮液将粪便充分搅开 再加入约10-20倍的漂浮液搅匀 将粪液倒于试管，用吸管加至凸出瓶口为止，静
置30min左右 用盖玻片轻轻接触液面顶部，提起后放于载玻片
上镜检。
未孢子化卵囊
孢子化卵囊
一、实训目标
掌握球虫病的实验室诊断技术，认识鸡的球虫卵囊。
二、实训材料
器材与药品：生物显微镜、塑料袋、天平、玻璃棒、 铁丝圈、烧杯、镊子、带凹载玻片、盖玻片、饱和 盐水
检查材料：含有球虫卵囊的粪样
三、实训步骤
1、片法
在载玻片上滴一滴生理盐水。 取少量粪便与其混合，除去粗渣，加盖玻片。 先用低倍镜观察，发现后换高倍镜检查。
2、漂浮法 原理：用比重较虫卵大的溶液作为漂浮液，使球虫
卵囊浮于液体表面，进行集中检查。
饱和盐水漂浮法：
称取5-10g粪便置于100-200ml的烧杯中 加入少量漂浮液将粪便充分搅开 再加入约20倍的漂浮液搅匀，静置30min左右 用金属圈平着接触液面，提起将液膜抖落于载玻片上，多次
螨虫检查方法-狗狗便便中寄生虫卵的检查方法
螨虫检查方法-狗狗便便中寄生虫卵的检查方法狗狗便便中寄生虫卵的检查方法定期驱虫是防止寄生虫的主要方法寄生虫过多容易导致狗狗出现营养吸收不良，狗狗偏瘦等问题。
如果长期无出寄生虫问题，那么驱虫的时间可以适当地延长一些。
1.直接涂片检查：这样的检查法，对饲主以及设备需要一定的要求。
首先在载玻片上滴上一些甘油与水的等量混合液，再用牙签或火柴棍挑取少量粪便，加入其中，混匀，嫁娶较大或过多的粪渣，使玻片上留下一层均匀粪液，以能透视书报字迹为宜。
在粪膜上覆以载玻片，放在显微镜下检查。
检查时应顺序地检查遍盖玻片下的所有部分。
有时候体内寄生虫不多，粪便中虫卵少的话就比较难查出虫卵，不过这也说明了狗狗本身寄生虫的问题并不是很严重。
2.集卵法：②漂浮：该方法适用于检查线虫卵、绦虫卵和球虫卵囊。
取粪便10g，加饱和食盐水100ml，混合，然后过滤，静止半小时，有虫卵的话，虫卵会上浮；用铁丝圈与液面平行接触蘸取表面液膜，抖在载玻片上检查。
如果不想确定是哪一种寄生虫，那么看到漂浮物有虫卵就行，因为大多数的驱虫药并不是只针对一种，所以即使不能很明确的确定是哪一种寄生虫。
但是做好驱虫工作，还是能够较好地对其进行预防的。
三种方法就能检查出现在养狗狗的人真的是越来越多了，相信很多铲屎官们都会发现狗狗经常在挠痒痒，一直在啃自己的毛发，其实这是狗狗身上的跳骚导致的，下面的三种方法就能让铲屎官们在家里给它们做检查。
一、视线检查有血色的肯定就是体外寄生虫的便便了，那您就应该尽快给狗狗驱虫了。
二、用跳蚤梳子三、用白毛巾去测试可以用白毛巾或者白纸给狗狗做跳蚤检查，可以让狗狗躺在白毛巾上，给它梳毛，梳理过程中，如果发现有污垢或黑斑掉在白毛巾或白纸上，可以用东西按压下，白毛巾或者白纸显示为红棕色的话，那狗狗身上基本是有跳蚤了。
如果狗狗配合检查的话，是可以适当的狗狗一些零食作为奖励的，如“馋不腻鸡肉干”，是吸引到狗狗的，让狗狗配合铲屎官们检查的。
跳蚤的方法1、喷驱虫药水：如果跳蚤比较多的话，是可以采用喷药的方法来去除跳蚤的。
球虫检查操作步骤
球虫粪便检查法
饱和食盐漂浮法：取3克（7,8个粪球左右）粪便在小烧杯中磨碎，加入少量
饱和盐水，搅拌均匀，再加入适量饱和食盐水，用筛子（40或60目）将粪便过滤到另一容器内，静置3-5分钟，此时比重轻的虫卵就浮到液体的表面，用细胶头滴管吸取上层液体注入麦克马斯特计数板中，放到显微镜下（10×)，放置1-2分钟后观察，若感染，可看到球虫卵囊。
也可用直径5～10毫米的铁丝圈蘸取表面液膜，抖落于载玻片上，置于显微镜下镜检。
饱和食盐水的制备：在1000毫升水中加入380～400克食盐。
煮沸使其溶解，
待凉后使用。
（应注意变凉后的溶液中如出现食盐结晶的沉淀，则说明该食盐溶液饱和，符合要求）。
所需仪器：饱和食盐水、小烧杯、筛网、玻璃棒、细胶头滴管、麦克马斯特计数板、显微镜。
粪便内虫卵检查法
实验一蠕虫学粪便检查法（一）一、内容1.直接涂片法；2.饱和盐水漂浮法；3.各种蠕虫卵的特征。
二、参考资料蠕虫学粪便检查是蠕虫病生前诊断的重要方法。
因为大多数的寄生性蠕虫是寄生在家畜、家禽的消化道及其相连的器官（如肝脏、胰脏），有的寄生在呼吸器官和生殖器官（家禽），如后圆线虫、前殖吸虫。
寄生在这些部位的寄生虫，它们的虫卵、幼虫或节片都随着宿主的粪便排除体外，因此，通过粪便检查可以获得生前诊断。
除蠕虫以外，还有一些原生动物的寄生虫，如结肠小袋纤毛虫及球虫，它们的包囊或卵囊亦随着宿主的粪便排除体外，依靠粪便检查也可以建立生前诊断。
根据蠕虫学粪便检查的目的可分为：（一）蠕虫虫体检查法：是从粪便中检查虫体或节片，如莫尼茨绦虫，一般以肉眼直接检查；（二）蠕虫虫卵检查法：是从粪便中检查虫卵，如大多数的吸虫、绦虫和线虫；（三）蠕虫幼虫检查法：是从粪便中检查幼虫，如牛、羊的网尾线虫等，随粪便排出的不是虫卵而是幼虫。
下面主要分述虫卵和幼虫检查法。
1.蠕虫虫卵检查法（之一）：（1）直接涂片法：取一片洁净的载玻片，在玻片中央滴加1-2滴50％甘油生理盐水，然后用镊子或牙签挑取少量粪便，与甘油生理盐水混匀，并将粗粪渣推向一边，涂布均匀，作成涂片，涂片的厚薄以放到书上隐约可见下面的字迹为宜，加上盖玻片，置显微镜下检查，检查时先在低倍镜下顺序查找，如发现虫卵，再换高倍镜仔细观察。
如无甘油生理盐水时可以用常水代替，加甘油可使标本清晰，易于观察，并可防止涂膜很快变干燥。
但是检查原虫的滋养体，必须以生理盐水进行稀释，不应加甘油，否则会影响其运动而妨碍观察。
本法操作简单，能检查各种蠕虫卵，但检出率不高，特别是轻度感染时，往往得不到可靠结果，因此，本法只能为辅助的诊断方法，并且每次检查要重复观察8-10片，才能收到确实的效果。
（2）饱和盐水漂浮法：本法基本原理是采用比重比虫卵大的溶液，使虫卵浮集于液体的表面，形成一层虫卵液膜，然后蘸取此液膜，进行镜检。
浅谈动物寄生虫病粪便虫卵检查技术
此项调查可确定感染率、感染强度，感染种类和优势虫 种，为科学研究、监测预警、区域性寄生虫病防控服务。
根据驱虫前后虫卵转阴率，判断驱虫效果。 2 仪器设备材料
铁架台、漏斗、粪筛、纱布、粪勺 、烧杯、玻璃 棒、镊子、载玻片、盖玻片、粗天平、锥形瓶、吸管、铁丝圈等。
2018 年第 3 期 33
Байду номын сангаас
虫卵被漂浮在溶液的上层。操作方法： （1）取粪：取 5~10g 粪便放入 100mL 烧杯中； （2）化粪：加 10～20 倍的饱和盐水，用玻璃棒搅开； （3）过滤：用 3~4 层纱布或铜筛网过滤； （4）静置：40min 左右； （5）镜检：用直径 0.5～1cm 的金属环平着接触液面，提起后 将液面抖落在载玻片上加盖玻片用显微镜检查。
试验研究
浅谈动物寄生虫病粪便虫卵检查技术
潘德彦
（辽宁省大连市普兰店区城子坦动物卫生监督所，辽宁 大连 116200）
DOI:10援3969/J.ISSN援1671-6027援2018援03.020
粪便虫卵检查是寄生虫病、特别是蠕虫病生前诊断的重 要方法，其原理是：大多数寄生性蠕虫寄生在消化道内，它们 的卵、节片、幼虫或成虫随宿主粪便排至外界；某些寄生于呼 吸道的蠕虫，它们的虫卵和幼虫随痰液到口腔又被动物咽下 也随粪便排出；一些寄生于血液的蠕虫，它们的虫卵也可随 血流到达肠壁，并进入肠腔而随粪排出. 1 应用范围
3 粪便的采集及保存
原则：新鲜未被污染。 方法：直肠采粪或排出的新鲜粪便，采集粪堆上面未被 污染的部分。采集的粪便要装入洁净的容器中。
采集的新鲜粪便应当天检查，不能当天检查的粪便要密 封后放在 4℃的冰箱中保存。如需转送别处检查，则可将粪样 浸入 5%～10%的福尔马林中，将虫卵固定，使其失去活力。 4 常用的粪便虫卵检查方法
兔粪便球虫卵囊的分离及计数
兔粪便球虫卵囊的分离及计数摘要：兔球虫是养兔业生产上最常见的兔寄生虫病，在各品种家兔中均易发生，以25日龄的小兔最易感染。
因此，在日常生产中对兔球虫的诊断就显得尤为重要。
本实验采取粪便球虫卵囊的分离观察来进行兔艾美尔球虫实验室诊断。
1、材料与方法1.1材料家兔粪便、光学显微镜、载玻片、盖玻片、搪瓷杯、玻璃棒、锥形瓶，量筒、离心管、过滤筛、饱和NaCl、电光显微镜1.2方法粪便球虫卵囊的分离及计数单个球虫卵囊的分离观察2、步骤2.1粪便球虫卵囊的计数取锥形瓶一只，量取56ml水，标记液面高度；将水倒掉重新量取60ml水，标记液面高度；将水吸出一部分至56ml处，加入家兔粪便至页面上升到60ml处为止，加入碎石子摇匀。
用吸管吸取1.5ml分别置于四张载玻片上，加盖玻片放在显微镜下观察。
通过一次查找出视野中所有球虫卵囊数目并计算。
2.2粪便球虫卵囊的分离在搪瓷杯中加入3~5g家兔粪便，量取45ml水拌成糊状再稀释，将稀释好的家兔粪便溶液通过60目筛过滤，弃滤渣，取其滤液再通过120目筛过滤，弃滤渣。
将过滤好的滤液倒入离心管中，保持滤液为45ml，放入离心机离心5min（2000r/min）。
完全弃掉离心管上层清液，向沉渣中加入几滴饱和NaCl，用玻璃棒倒匀，继续加NaCl至10ml，放入离心机离心2~3min（2000r/min）。
（2000r/min）3min。
将上层液取出8ml左右放入另一只离心管，加水至45ml，进行第三次离心，取出离心管，用吸管吸取一滴上层液置于载玻片上，放在电光显微镜下观察。
3、结果3.1在玻片上观察到的球虫卵囊分别为：2，3，3，4，因此，该粪便样品中球虫卵囊总数为1200个；3.2在显微镜下观察到的球虫卵囊为椭圆形，以孢子化，可观察到其近似圆形的孢子囊。
4、讨论4.1视野中虫卵数量甚少可能是由于摇匀的不够充分或者所取的粪便太少。
粪便中寄生虫卵检查技术
未受精蛔 88~94× 长椭圆 棕黄 厚，蛋白膜较薄 无 许多大小
虫卵
39~44
不等的卵
黄颗粒
钩虫卵 56~76× 椭圆
浅灰 薄，卵壳与卵细胞 无 分裂的卵
36~40
间有明显间隙
细胞
蛲虫卵 50~60× 不对称椭 浅灰 厚，一边较平，一 无 折叠样幼
20~30
圆
边稍凸
虫
鞭虫卵 50~54× 长椭圆 黄褐 厚，两端有透明栓 无 1个卵细
粪便内虫卵检查法分直接涂片检查法和集卵法。 （一）直接涂片检查法
是最简便和常用的方法，但是，当畜禽体内寄生虫数量不多而粪便 中虫卵少时，有时不能查出虫卵。
本法是在载玻片上滴一些50%甘油或清洁常水的等量混合液，再用 镊子或牙签挑取少量粪便加入其中，混匀，夹去较大的或过多的粪渣， 最后使玻片上留有一层均匀的粪液，其浓度的要求是将此玻片放于报纸 上，能通过粪便液膜模糊地辨认其下的字迹为合适。在粪膜上覆以盖玻 片，置低倍显微镜下检查。检查时，应顺序地查遍盖玻片下的所有部分。 该法简便易行，适用于检查各种蠕虫的虫卵、球虫卵囊等，但检出率较 低。 （二）集卵法 1.沉淀法 该法的原理是虫卵比水重，可自然沉于水底，便于集中检查和提高检出 率。主要用于吸虫卵和棘头虫卵的检查，也可用于其他寄生虫卵和球虫
除以上诊断方法外免疫学诊断用于寄生虫病免疫诊断的方法很多， 其中，有些方法如酶联免疫吸附试验、间接血凝试验等，已在某些寄生 虫病的生前诊断及流行病学调查中得到较为广泛的应用，为某些寄生虫 病的早期诊断、流行病学调查乃至及时制订有效的防制措施提供了重要 的科学依据。
还可以进行尸体剖检，可分为全身性剖检、个别系统剖检及个别器 官剖检等。尸体剖检可以查明动物所有器官组织中的寄生蠕虫，包括生 前诊断法所不能查出的虫体如不排虫卵的雄虫、幼虫等，并可做到病原 蠕虫的计数与种类鉴别，因此，是寄生虫病确诊的重要依据，也是常用 的寄生虫病流行病学调查和药物疗效考核的主要方法。通过尸体剖检， 观察病理变化，查找病原体，判定感染的寄生虫种类和危害程度，分析 致病和死亡原因，从而达到确诊的目的。
宠物疾病诊疗-粪便检查--粪便中寄生虫卵检查
1.植物导管：梯纹、网纹、孔纹 2.螺纹和环纹 3.管胞 4.植物纤维 5.小麦的颖毛 6.真菌的孢子 7.谷壳的一些部分 8.稻米胚乳 9.植物的薄皮细胞 10.植物的薄皮细胞 11.淀粉粒 12.花粉粒 13. 植物线虫的一些虫卵 14.螨的卵（未发育） 15.螨的卵（已发育）
11
钩虫卵
蛔虫卵
主要用于检查线虫卵、绦虫卵及球虫卵囊等比重较小的卵及卵囊。
取5-10g粪便捣碎后，放于一容器内，加5-10倍量清水搅匀。经4060孔铜筛过滤后，让滤液自然沉淀约20分钟，倒掉上清液ห้องสมุดไป่ตู้反复2-3次 ，至上清液清亮为止。 最后倾倒掉大部分上清液，留约为沉淀物1／2 的溶液量，用胶帽吸管吹吸均匀后，吸取少量于载玻片上，加盖玻片镜 检。
粪便中寄生虫卵检查
取50%甘油水溶液或普通水1-2滴放于载玻片上，镊取黄 豆大小的被检粪块与之混匀，剔除粗粪渣，加上盖玻片镜 检虫卵。此法最为简便，但检出率不高。
取大约10g粪便放于一容器内，压碎， 加入适量饱和盐水搅匀，过 滤，静置0.5小时左右（或2000转/分，离心5~10分钟），用直径0.51.0cm的 金属圈蘸取表面液膜，抖落于载玻片上，加盖片后镜检；或 用盖玻片直接蘸取液面，放于载玻片上，在显微镜下检查。
绦虫卵
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动物粪便中球虫卵囊的检测方法
1 目的（适用范围）
本方法适用于猪、禽、兔、犬、猫球虫病感染的检测。
2 依据（参考）标准
《动物球虫病诊断技术》（GB/T 18647-2002）
3 原理
卵囊通常存在于宿主粪便中，从粪便中分离球虫卵囊最常用的方法为饱和食盐溶液漂浮法。
饱和食盐溶液密度高于卵囊密度，而低于粪便中大多数杂质，经离心或静置沉淀后，大部分杂质沉淀在容器底部，卵囊漂浮在悬浮溶液的表面，然后收集表层漂浮物；由于卵囊比重大于水的比重，所以表层漂浮物用自来水稀释离心后，卵囊沉淀富集于离心管底部即可得到大量球虫卵囊。
4 材料
4.1 被检样品
被检动物的新鲜粪便不少于30 g。
4.2 试剂耗材
饱和食盐水、60目筛网、50 mL和100 mL烧杯、玻璃棒、15 mL离心管、自制铁丝吊环（或细菌接种环）、载玻片、盖玻片、香柏油、麦克马氏计数板。
4.3 仪器设备
电子天平、托盘天平、低速离心机、1 mL移液器、显微镜、手动计数器。
5 检测方法
5.1 定性检查
5.1.1 取被检动物的新鲜粪便5 g，放入50 mL烧杯中，加入3倍体积的水，用玻璃棒搅拌均匀，经60目筛网过滤。
5.1.2 将滤液移入离心管中，在天平上平衡，于离心机上以3000 r/min离心3 min，弃上清液，在沉淀中再加入适量水，将沉淀吹起，平衡离心同上，弃上清液，如此重复2~3次至上清液清亮，弃上清液。
5.1.3 在沉淀中加入5倍体积的饱和食盐水，用玻璃棒将沉淀搅拌均匀，在天平上平衡，于离心机上以3000 r/min离心5 min，小心快速用铁丝吊环蘸取液膜，抖于载玻片上，盖上盖玻片，于100~400倍镜下检查。
5.1.4 结果判定：
（1）若发现球虫卵囊，判为阳性，说明该动物已感染球虫，并可根据附录卵囊形态特征，初步确定为哪一属的球虫。
（2）若未发现球虫卵囊，需重复检查5次，仍未见球虫卵囊，本粪样可判为阴性。
5.2 定量检查
5.2.1 对定性检查中呈现阳性的粪样进行定量检查。
5.2.2 取粪样2 g，放入100 mL烧杯中，先加入8mL饱和食盐水，用玻璃棒搅匀，再加入50 mL饱和食盐水，混匀后立即用60目筛网过滤。
5.2.3 立即吸取滤液注满麦克马氏计数板2个计数室，以刚好不溢出为宜，在显微镜载物台上静置3～5min。
5.2.4 用10×10或10×40倍观察计数，数出每个计数室（容积为1cm×1cm×0.15cm=0.15mL）内的所有卵囊数，计算出平均值A。
对压线的卵囊按计上不计下、计左不计右处理。
5.2.5 每克粪便中卵囊数（oocysts per gram, OPG）按公式计算：OPG=(A÷0.15)×60÷2=A×200 5.2.6 对于卵囊数较多的粪样（每个方格内10~50个为宜），可在60 mL基础上用饱和食盐水稀释B倍后计数，则OPG按式计算：OPG=A×200×B
5.2.7 判定标准：
（1）OPG＞10×104，为严重感染；
（2）10×104≥OPG≥1×104，为中度感染；
（3）OPG＜1×104，为轻度感染。
附录
1 球虫卵囊的形态学观察
球虫未孢子化卵囊：不同种属未孢子化卵囊共同特征是卵囊内呈现一团原生质，包含核质、各种细胞器等结构。
其他结构如卵囊形状、大小以及卵囊壁结构与孢子化后相同（如图1所示）。
艾美耳属孢子化卵囊：均有4个孢子囊，每个孢子囊内包含2个子孢子。
不同虫种的卵囊形态、大小、有无卵膜孔、极粒、卵囊残体和孢子囊残体等特征存在差异（如图2所示）。
等孢属孢子化卵囊：均有2个孢子囊，每个孢子囊内包含4个子孢子。
其他结构特征随虫种而存在差异（如图3所示）。
温扬属孢子化卵囊：均有4个孢子囊，每个孢子囊内包含4个子孢子。
其他结构特征随虫种而存在差异（如图4所示）。
泰泽属孢子化卵囊：卵囊内存在8个子孢子和卵囊残体，无孢子囊结构（如图5所示）。
2 鸡、猪、兔、犬和猫球虫常见种类
世界公认，鸡球虫共有7个种，其中柔嫩艾美耳球虫（Eimeria tenella ）和毒害艾美耳球虫(E. necratrix )致病性最强；感染猪的有等孢属(Isospora )和艾美耳属球虫多个种，其中猪等孢球虫(I. suis )致病性最强；目前国外认定家兔艾美耳属球虫有11个有效种，其中肠艾美耳球虫(E. intestinalis )、黄艾美耳球虫(E. falvescens )和斯氏艾美耳球虫(E. stiedai )强致病种；犬等孢球虫（I. canis ）和猫等孢球虫（I. felis ），形态结构与猪等孢球虫相似，但致病性中度或轻微。
图 1 球虫未孢子化卵囊结构示意图2 艾美耳属球虫孢子化卵囊结构示意图
1，极帽；2，卵膜孔；3，极粒；4，孢子囊；
5，孢子囊残体；6，卵囊残体；7，子孢子
图3 等孢属球虫孢子化卵囊结构示意图
1，孢子囊；2，子孢子；3：孢子囊残体
图6 鸡7种艾美耳球虫孢子化卵囊
a为巨型艾美耳球虫，b为布氏艾美耳球虫，c为柔嫩艾美耳球虫，
d为毒害艾美耳球虫，e为早熟艾美耳球虫，f为堆形艾美耳球虫，
g为和缓艾美耳球虫
图7 家兔11种艾美耳球虫孢子化卵囊
1为小型艾美耳球虫，2为斯氏艾美耳球虫，3为无残艾美耳球虫，4为大型艾美耳球虫，
5为穿孔艾美耳球虫，6为中型艾美耳球虫，7为维氏艾美耳球虫，8为盲肠艾美耳球虫，
9为肠艾美耳球虫，10为黄艾美耳球虫，11为犁形艾美耳球虫
图8 犬等孢球虫(A)、猫等孢球虫(B)和猪等孢球虫(C)
3 临床症状和病理变化
3.1 猪球虫
猪等孢球虫病的潜伏期为5d，病猪主要临床症状为腹泻，排黄色至灰色粪便，初期粪便松软呈糊状，1~2d后排水样稀便，腹泻可持续4~8d，导致仔猪脱水、失重，偶尔由于肠道黏膜出血使粪便呈棕色。
仔猪常全身沾满液状粪便，并发出腐败乳汁样的酸臭味。
病变主要见于空肠和回肠，肠黏膜上常有黄色纤维性、坏死性假膜覆盖在充血的黏膜上，肠上皮细胞坏死并脱落。
肠道内乳糜消化不良，恶臭。
3.2 鸡球虫
急性病例症状为下痢，拉血便，精神沉郁、扎堆，被毛松乱，闭目缩头，呆立吊翅，食欲减退但饮水增加，可视黏膜、冠、髯苍白，严重的出现死亡。
慢性病例主要出现于成年鸡，表现为逐渐消瘦，贫血，产蛋量及生长受阻。
致病性最强的柔嫩艾美耳球虫寄生于鸡盲肠，病变表现为一侧或两侧盲肠严重出血、高度肿大，外观呈酱油色或暗红色质地坚实，肠腔内充满由血凝块、坏死物质及炎性渗出物凝固形成的栓子，称为肠芯，盲肠壁增厚，有坏死溃疡病灶。
实验室检查
肠黏膜涂片检查从病死鸡的小肠中段病变部位刮取肠黏膜涂片，用生理盐水稀释，加盖玻片镜检，可看到成簇的大型裂殖体。
图10 犬等孢球虫(A)、猫等孢球虫(B)和猪等孢球虫(C)。