生物：5.1《DNA的粗提取与鉴定》课件(2)(新人教版选修1)

选择适宜材料
破碎细胞
与二苯胺混合，沸水浴， 与二苯胺混合，沸水浴，呈现蓝色反应
1. 下列关于 下列关于DNA粗提取与鉴定的说法正确的是 粗提取与鉴定的说法正确的是 A．氯化钠的浓度越低，对DNA的溶解度越大 ．氯化钠的浓度越低， 的溶解度越大 B．人血也可代替鸡血进行实验 ． C．柠檬酸钠的主要作用是加速血细胞破裂 ． D．DNA不能溶于酒精 ． 不能溶于酒精 2. 在破碎鸡血细胞时，要先加入 在破碎鸡血细胞时，要先加入20ml的蒸馏水，其作用是 的蒸馏水， 的蒸馏水 A. DNA溶解于水 B． 血细胞破裂，DNA释放 溶解于水 ． 血细胞破裂， 释放 C．稀释血液，防止凝固 D． 有利于搅拌 ．稀释血液， ． 3. 若选择的实验材料为植物细胞，破碎细胞时要加入一定量的洗 若选择的实验材料为植物细胞， 涤剂和食盐， 涤剂和食盐，加入食盐的目的是 A. 利于 利于DNA的溶解 B. 分离 分离DNA和蛋白质 的溶解 和蛋白质 C. 溶解细胞膜 D. 溶解蛋白质 4. 在DNA粗提取实验中，向在溶解 粗提取实验中， 溶液中， 粗提取实验中 向在溶解DNA的NaCl溶液中，不断加 的 溶液中 入蒸馏水的目的是 A．有利于溶解 B．有利于溶解杂质 ．有利于溶解DNA ． C．减少 D．减少杂质的溶解度 ．减少DNA的溶解度 的溶解度 ．
1、鸡血细胞做实验材料，一是因为鸡血细胞核的 鸡血细胞做实验材料， DNA含量丰富 材料易得； DNA含量丰富，材料易得；二是鸡血细胞极易吸水 含量丰富， 胀破。 胀破。 2、DNA在不同浓度的NaCl溶液中溶解度不同， DNA在不同浓度的 在不同浓度的NaCl溶液中溶解度不同 溶液中溶解度不同， 3、嫩肉粉的主要成分是木瓜蛋白酶，其作用是分解 嫩肉粉的主要成分是木瓜蛋白酶， 蛋白质，使提取出的DNA纯度较高 蛋白质，使提取出的DNA纯度较高 4、预冷的乙醇溶液具有以下优点：一是抑制核酸水 预冷的乙醇溶液具有以下优点： 解酶活性，防止DNA降解 二是降低分子运动， 降解， 解酶活性，防止DNA降解，二是降低分子运动，易 于形成沉淀析出，三是低温有利于增加DNA分子柔 于形成沉淀析出，三是低温有利于增加DNA分子柔 韧性，减少断裂； 韧性，减少断裂； 5、洗涤剂等去污剂可以溶解细胞的细胞壁，破坏细 洗涤剂等去污剂可以溶解细胞的细胞壁， 胞膜，同时也能使蛋白质变性； 胞膜，同时也能使蛋白质变性； 6、在60—75度条件下加温处理，蛋白质变性，而 60—75度条件下加温处理 蛋白质变性， 度条件下加温处理， DNA结构不会受到破坏 提取纯度较高的DNA DNA结构不会受到破坏，提取纯度较高的DNA 结构不会受到破坏， 7、甲基绿能使DNA染成绿色 甲基绿能使DNA染成绿色
纱布过滤
取滤物Leabharlann 2mol/LNaCl溶液 2mol/LNaCl溶液
鸡血细胞液中DNA的粗提取实验流程图 鸡血细胞液中DNA的粗提取实验流程图
7、加冷酒精使DNA析出（纯化） 加冷酒精使DNA析出 纯化） 析出（ 冷酒精
DNA的鉴定
总结： 总结：
实验原理 DNA 的 粗 提 取 与 鉴 定 鉴定DNA 鉴定 DNA的纯化 的纯化
１.取新鲜植物组织（菜花） 取新鲜植物组织（菜花） 放置于冰箱中冷却1~2 放置于冰箱中冷却1~2 天 30克植物组织 切碎, 克植物组织, ２.取30克植物组织,切碎, 置于研体中, 置于研体中,倒入适量 洗洁精, 洗洁精,加入适量的 NaCl,充分研磨 分钟 NaCl,充分研磨10分钟 充分研磨10 过滤研磨液， ３.过滤研磨液，取上清夜 置于冰箱中冷却几分钟 倍体积的上清液， ４.取1倍体积的上清液， 加入2倍体积的95%的 加入2倍体积的95%的 冷酒精当中， 冷酒精当中，用玻棒轻 轻搅拌，沉淀3~5分钟 轻搅拌，沉淀3~5分钟 后可见白色絮状DNA缠 后可见白色絮状DNA缠 绕于玻棒末端。 绕于玻棒末端。 .DNA的提纯同鸡血细胞 ５.DNA的提纯同鸡血细胞 为实验材料的实验操作 步骤6 步骤6、7，具体数据有 一定的差异。 一定的差异。 ６.鉴定
根据以上原理可设计提取和纯化DNA的方案 根据以上原理可设计提取和纯化DNA的方案： 的方案：
方案一：30mL含DNA的滤液 的滤液＋ 方案一：30mL含DNA的滤液＋2mol/L NaCl→同方向搅拌 DNA溶解 NaCl→同方向搅拌，DNA溶解→加入蒸 同方向搅拌， 溶解→ 馏水→DNA析出 过滤得到过滤物→ 析出→ 馏水→DNA析出→过滤得到过滤物→放到 2mol/LNaCl溶液中溶解 DNA-NaCl溶 2mol/LNaCl溶液中溶解→DNA-NaCl溶 溶液中溶解→ 解液 方案二：30mL滤液 嫩肉粉（ 滤液＋ 方案二：30mL滤液＋嫩肉粉（木瓜蛋白 静置10～15分钟 DNA滤液 分钟→ 酶）→静置10～15分钟→DNA滤液 方案三：30mL滤液 60～75℃ 滤液→ 方案三：30mL滤液→60～75℃恒温保温 10~15分钟 过滤获得DNA滤液 10~15分钟→过滤获得DNA滤液 分钟→
DNA的溶解和析出 的溶解和析出 DNA粗提取 粗提取 DNA在不同浓度 在不同浓度NaCl溶液中溶解度不同 在不同浓度 溶液中溶解度不同 DNA与其他细胞成分在酒精中溶解度不同 与其他细胞成分在酒精中溶解度不同 DNA和蛋白质对酶、高温和洗涤剂耐受性不同 和蛋白质对酶、 和蛋白质对酶 DNA与二苯胺呈现蓝色反应 与二苯胺呈现蓝色反应
鸡血细胞液中DNA的粗提取实验流程图 鸡血细胞液中DNA的粗提取实验流程图
鸡血细胞液中DNA的粗提取实验流程图 鸡血细胞液中DNA的粗提取实验流程图
2mol/L
鸡血细胞液中DNA的粗提取实验流程图 鸡血细胞液中DNA的粗提取实验流程图
5、过滤→取纱布上的滤物 过滤→
6、再次溶解DNA 再次溶解DNA
DNA粗提取与鉴定 DNA粗提取与鉴定
学习目标
知识目标 1、通过尝试对植物或动物组织中的DNA进 行粗提取，了解DNA的物理化学性质。 2、理解DNA粗提取与鉴定的原理。 能力目标 掌握DNA粗提取及鉴定方法，能利用DNA 的性质进行实验设计和操作。 态度观念目标 通过对DNA的粗提取的实验过程的设计及 操作，锻炼科学的思维方法，培养实事求是 的科学态度。
两种材料的DNA粗提取与鉴定过程 两种材料的DNA粗提取与鉴定过程
①释放组织细胞中的DNA， 释放组织细胞中的DNA， 粗提取DNA， ②粗提取DNA， ③将粗提取的DNA进一步纯化， 将粗提取的DNA进一步纯化， 进一步纯化 鉴定提取物是DNA ④鉴定提取物是DNA
以鸡血为材料 以花菜为材料
鸡血细胞
植物组织
１. 0.1g/ml的柠檬酸钠溶液,按1:2的比例与新鲜鸡血混 . 0.1g/ml的柠檬酸钠溶液 1:2的比例与新鲜鸡血混 的柠檬酸钠溶液, 合搅拌均匀。 合搅拌均匀。 将血液置于冰箱中24小时 小时, ２.将血液置于冰箱中24小时,弃上部澄清液 取烧杯中的血细胞液约5~10ml加入到 加入到100ml烧杯中 ３.取烧杯中的血细胞液约5~10ml加入到100ml烧杯中 向烧杯中加入20ml蒸馏水 用玻棒沿一个方向快 蒸馏水， ，向烧杯中加入20ml蒸馏水，用玻棒沿一个方向快 搅拌5分钟， 速搅拌5分钟，加速血细胞在低渗溶液中的破裂 2mol/L的氯化钠溶液 的氯化钠溶液50ml缓缓倒入烧杯中 缓缓倒入烧杯中， ４.将2mol/L的氯化钠溶液50ml缓缓倒入烧杯中，用玻 棒沿一个方向搅拌， DNA溶解于氯化钠溶液中 棒沿一个方向搅拌，使DNA溶解于氯化钠溶液中 滤除杂质，获得粘稠状的鸡血细胞DNA提取液 ，滤除杂质，获得粘稠状的鸡血细胞DNA提取液 将鸡血细胞DNA提取液置于较大的烧杯中 提取液置于较大的烧杯中， ５.将鸡血细胞DNA提取液置于较大的烧杯中，沿烧杯 内壁缓缓倒入蒸馏水，并不断搅拌， 内壁缓缓倒入蒸馏水，并不断搅拌，直到粘稠状 DNA不再析出为止 用玻棒搅拌，使析出的DNA DNA不再析出为止。用玻棒搅拌，使析出的DNA 不再析出为止。 缠绕于玻棒末端。 缠绕于玻棒末端。 将析出的DNA再溶解于 再溶解于2mol/L的氯化钠溶液中 的氯化钠溶液中。 ６.将析出的DNA再溶解于2mol/L的氯化钠溶液中。 DNA的氯化钠溶液中倒入 的氯化钠溶液中倒入95%的酒精 ml（ 的酒精50 ７.在DNA的氯化钠溶液中倒入95%的酒精50 ml（冷 却过的酒精效果较好）， DNA再次析出 ），使 再次析出， 却过的酒精效果较好），使DNA再次析出，用玻 棒搅拌， DNA再次缠绕于玻棒末端 再次缠绕于玻棒末端。 棒搅拌，使DNA再次缠绕于玻棒末端。 .DNA的鉴定 取两支试管，各加入2ml0.015氯化钠 的鉴定： ８.DNA的鉴定：取两支试管，各加入2ml0.015氯化钠 溶液， DNA溶解于其中一支试管中 溶解于其中一支试管中， 溶液，将DNA溶解于其中一支试管中，另一支做 为对照组。然后， 为对照组。然后，在两支试管内加等量的二苯胺试 水浴加热10min左右 冷却，观察实验现象。 左右， 剂，水浴加热10min左右，冷却，观察实验现象。