黄芪对AngⅡ诱导人足细胞分泌Ⅳ胶原的影响
《2024年黄芪注射液对血管紧张素Ⅱ诱导的H9c2细胞凋亡的抑制作用和机制研究》范文
《黄芪注射液对血管紧张素Ⅱ诱导的H9c2细胞凋亡的抑制作用和机制研究》篇一一、引言近年来，心血管疾病已经成为全球性的健康问题，而细胞凋亡是导致心肌细胞损伤及心力衰竭的关键因素之一。
血管紧张素Ⅱ（Angiotensin II, AngⅡ）是重要的血管收缩和血压调节因子，能够刺激H9c2细胞凋亡的发生。
随着对传统中草药研究的深入，许多研究已证明，中药及其制剂在心血管疾病的治疗中具有显著效果。
其中，黄芪注射液作为一种常用的中草药制剂，其抗细胞凋亡和保护心肌细胞的潜力备受关注。
本文旨在研究黄芪注射液对血管紧张素Ⅱ诱导的H9c2细胞凋亡的抑制作用及其机制。
二、材料与方法1. 材料（1）H9c2细胞株：用于实验的细胞模型。
（2）血管紧张素Ⅱ：用于诱导H9c2细胞凋亡。
（3）黄芪注射液：作为研究的主要药物。
（4）相关检测试剂及仪器：如PCR仪、酶标仪、Western Blot相关材料等。
2. 方法（1）细胞培养与处理：培养H9c2细胞，并分别用不同浓度的黄芪注射液和血管紧张素Ⅱ处理细胞。
（2）细胞凋亡检测：采用流式细胞术检测细胞凋亡情况。
（3）分子生物学实验：通过PCR、Western Blot等技术检测相关基因和蛋白的表达情况。
（4）数据统计与分析：使用SPSS软件进行数据分析，结果以平均值±标准差表示，P<0.05为差异有统计学意义。
三、实验结果1. 细胞凋亡检测结果经过血管紧张素Ⅱ处理的H9c2细胞，细胞凋亡率显著增加。
而加入不同浓度的黄芪注射液后，细胞凋亡率得到明显抑制，且随着黄芪注射液浓度的增加，抑制作用逐渐增强。
2. 分子生物学实验结果（1）基因表达分析：通过PCR技术检测发现，黄芪注射液能够显著上调Bcl-2基因的表达，而下调Bax基因的表达，从而改善细胞内抗氧化能力和抑制凋亡。
（2）蛋白表达分析：通过Western Blot技术检测发现，黄芪注射液能够激活PI3K/Akt信号通路，从而促进细胞的抗凋亡作用。
《2024年黄芪注射液对血管紧张素Ⅱ诱导的H9c2细胞凋亡的抑制作用和机制研究》范文
《黄芪注射液对血管紧张素Ⅱ诱导的H9c2细胞凋亡的抑制作用和机制研究》篇一一、引言近年来，心血管疾病的发病率持续上升，其机制之一为血管紧张素Ⅱ（Angiotensin II，AngⅡ）诱导的心肌细胞凋亡。
为了探究对抗这一过程的潜在药物和方法，本研究选择了中药中具有广泛药理作用的黄芪注射液，以探究其对H9c2心肌细胞凋亡的抑制作用及具体机制。
通过这一研究，旨在为临床心血管疾病的治疗提供新的药物选择和理论基础。
二、材料与方法1. 材料实验所用的黄芪注射液购买自某制药公司，H9c2细胞由某研究所提供，实验所用血管紧张素Ⅱ（AngⅡ）及其他化学试剂均为进口分析纯。
2. 方法（1）细胞培养与处理：在无菌环境下，H9c2细胞接种于培养瓶中，在添加有血管紧张素Ⅱ的溶液中诱导凋亡后，添加不同浓度的黄芪注射液进行干预。
（2）细胞凋亡检测：采用流式细胞仪检测细胞凋亡率，同时采用Western blot检测相关凋亡蛋白的表达水平。
（3）实验分组：对照组（无AngⅡ处理）、AngⅡ组（仅添加AngⅡ）、黄芪组（添加不同浓度的黄芪注射液）。
（4）数据统计：采用SPSS软件进行数据分析，P<0.05为差异有统计学意义。
三、结果1. 细胞凋亡率的变化实验结果显示，在AngⅡ诱导下，H9c2细胞的凋亡率显著升高，但当添加不同浓度的黄芪注射液后，细胞的凋亡率得到明显抑制。
其中，中、高浓度的黄芪注射液效果尤为明显。
与对照组相比，差异有统计学意义（P<0.05）。
2. 细胞内相关蛋白表达的变化实验结果显示，在AngⅡ处理后，细胞内促凋亡蛋白的表达明显升高，而加入黄芪注射液后，这些促凋亡蛋白的表达明显降低。
同时，抗凋亡蛋白的表达在黄芪注射液的干预下有所上升。
这一结果提示我们，黄芪注射液可能通过调节细胞内相关蛋白的表达来抑制H9c2细胞的凋亡。
四、讨论本研究发现，黄芪注射液可以显著抑制由血管紧张素Ⅱ诱导的H9c2心肌细胞的凋亡。
复方黄芪首乌合剂对MS大鼠Ang Ⅱ、FFA分泌及氧化应激反应的作用
ｏ ｆ Ｒ ａ ｄ ｉ ｘ Ａ ｓ ｔ ｒ ａ ｇ ｌ ａ ｕ ｓ ｎｄ ａ Ｐ ｏ ｌ ｙ ｇ ｏ ｎ ｕ ｍ ｍｕ ｌ ｆ ｌ ｏ ｌ ａ ｌ ｍ（ １ ｏ ｗ ｄ ｏ ｓ ｅ ｇ ｒ ｏ ｕ ｐ ， ｍｉ ｄ ｄ ｌ ｅ ｄ ｏ ｓ ｅ ｇ ｒ ｏ ｕ ｐ ｎｄ ａ ｈ ｉ ｇ ｈ ｄ ｏ ｓ ｅ ｇ ｒ ｏ ｕ ｐ ） ．Ａ ｔ ｈｅ ｔ ｅ ｎ ｄ ｏ ｆ ８ ｔ ｈ ｗ ｅ ｅ ｋ ， ｔ ｈ ｅ ｌ ｅ ｖ ｅ ｌ ｏ ｆ Ｓ ｕ ｐ ｅ ｒ Ｏ ｘ ｙ ｇ ｅ ｎ Ｄ ｅ ｈ ｙ ｄ ｒ ｏ ｇ ｅ ｎ ｉ ｓ ｅ ｓ（ Ｓ Ｏ Ｄ）ａ ｎ ｄ Ｍｅ ｔ ｈ ｎｅ ａ Ｄ ｉ ｃ ａ ｒ ｂ ｏ ｘ ｙ ｌ ｉ ｃ Ａ ｌ ｄ ｅ ｈ ｙ ｄ ｅ（ ＭＤ Ａ ）ｉ ｎ ｔ ｈ ｅ ｓ ｅ ｒ ｕ ｍ ａ ｎ ｄ ｒ ｅ ｎ ｌ ａ ｃ ｏ ｄ ｅ ｘ ｗ ｅ ｒ ｅ ｄ ｅ ｔ ｅ ｒ ・
氧化应激反应
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黄芪对足细胞损伤修复作用的研究进展
代 谢 异 常 等 均 可 引 起 足 细 胞 损 伤 ，导 致 肾 小 球 滤 过 功 能 障 碍 ，促 进 肾 小 球 硬 化 。现 代 医 学 在 足 细 胞 修 复 方 面 没 有 明 确 的
优 势 ，而 中 医 药 将 蛋 白 尿 归 为 肾 气 亏 虚 ，精 微 不 固 ，给 予 补 气 健 脾 益 肾 药 物 治 疗 ，可 以 明 显 改 善 临 床 症 状 ，有 效 延 缓 肾 脏
的 含 量 的 观 察 ，刺 血 疗 法 局 部 抗 炎 消 肿 作 用 是 否 与
其 良 性 升 高 关 节 局 部 IL-4、IL- 1 0 的含量具有时间
J 细 胞 分 子 影 响 的 研 究 [ ].实 用 骨 科 杂 志 ，2 0 0 9 ，15(12):908. M [ 9 ] 余 曙 光 ，徐 斌 .实 验 针 灸 学 [ ].北 京 ：人 民 卫 生 出 版 社 ，
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黄芪多糖对糖尿病足溃疡成纤维细胞胶原合成的影响_周倩
·论著·糖尿病足溃疡（DFUs）是糖尿病较严重并发症之一。
成纤维细胞（Fb）是创面愈合过程中的主体细胞，其生物学效应在创面修复中起着至关重要的作用。
黄芪多糖（APS）应用于糖尿病足部慢性溃疡的治疗，能在一定程度上提高溃疡的治愈率，降低截肢率和死亡率，但其详细机制不详［1］。
本研究观察APS对体外培养的糖尿病足溃疡Fb 增殖和胶原合成的影响，并探讨其可能作用机制。
1材料与方法1．1研究对象与分组经知情同意的糖尿病足病截肢患者10例，男6例，女4例，年龄（57±8．2）岁，均符合1999年WHO糖尿病诊断标准，糖尿病病程为（5．9±1．5）年，糖尿病足溃疡病程（5．8±0．8）周，FPG（9．4±1．6）mmol／L，2hPG（14．2±2．4）mmol／L，HbA1c（9．1±1．0）％，踝肱比（ABI）0．8±0．2。
对照组10例，取自年龄、性别等相匹配的非糖尿病外伤及骨科手术患者，无系统性硬化、肾病等疾病。
取皮肤Fb培养后分为6组：①对照组；②DFUs组；③DFUs加10μg／mL APS （哈尔滨生物制品一厂，批号0809054，每10mL含APS0．1g）；④DFUs加40μg／mL APS；⑤DFUs加160μg／mL APS；⑥DFUs加640μg／mL APS。
1．2研究方法1．2．1Fb的培养及鉴定将手术中切下的标本在无菌条件下去除表皮后用含有青霉素（100U／mL）和链霉素（100U／mL）的PBS反复漂洗，去除皮下脂肪组织，将组织块剪成0．5～1．0mm3大小碎块，采用组织块贴壁法置37℃、5％CO2条件下原代培养。
培养基为DMEM高糖培养基，含10％胎牛血清、青霉素（100U／mL）和链霉素（100U／黄芪多糖对糖尿病足溃疡成纤维细胞胶原合成的影响周倩，王燕，肖正华，陈定宇（广州市第一人民医院内分泌科，广东广州510180）【摘要】目的研究黄芪多糖（Astragalus Polysaccharides，APS）对糖尿病足溃疡（diabetic foot ulcers，DFUs）成纤维细胞（fibroblasts，Fb）增殖和胶原合成的影响，并探讨其与溃疡愈合的关系。
《2024年黄芪注射液对血管紧张素Ⅱ诱导的H9c2细胞凋亡的抑制作用和机制研究》范文
《黄芪注射液对血管紧张素Ⅱ诱导的H9c2细胞凋亡的抑制作用和机制研究》篇一一、引言心血管疾病是全球范围内最常见的健康问题之一，其中细胞凋亡在其中发挥着重要的作用。
黄芪作为一种常用的中草药，已被广泛研究其在心血管保护、抗氧化及细胞保护等作用。
本研究关注于黄芪注射液对血管紧张素Ⅱ（Angiotensin II, AngⅡ）诱导的H9c2细胞凋亡的抑制作用及其机制，旨在为心血管疾病的预防和治疗提供新的思路和实验依据。
二、材料与方法1. 材料本实验使用的H9c2细胞购自ATCC公司，黄芪注射液购自XX药厂。
实验中使用的血管紧张素Ⅱ、MTT、DAPI等试剂均为市售高品质产品。
2. 方法（1）细胞培养与处理：H9c2细胞在DMEM培养基中培养，采用不同浓度的黄芪注射液进行预处理，然后加入血管紧张素Ⅱ刺激细胞。
（2）细胞凋亡检测：采用MTT法检测细胞活力，利用DAPI染色观察细胞凋亡情况。
（3）机制研究：利用qPCR和Western Blot检测相关基因和蛋白的表达水平，以探究其作用机制。
三、实验结果1. 抑制H9c2细胞凋亡的作用实验结果显示，黄芪注射液能显著抑制由血管紧张素Ⅱ诱导的H9c2细胞凋亡，提高细胞的存活率。
这一作用随着黄芪注射液浓度的增加而更加明显。
2. 抑制细胞凋亡的机制研究（1）基因表达水平：通过qPCR检测发现，黄芪注射液能显著上调Bcl-2基因表达，同时下调Bax基因表达。
这些基因在细胞凋亡过程中具有重要调控作用。
（2）蛋白表达水平：Western Blot结果显示，黄芪注射液能显著提高Bcl-2蛋白水平，降低Caspase-3活性。
Caspase-3是细胞凋亡的关键执行酶，其活性降低表明细胞凋亡得到抑制。
（3）抗氧化作用：此外，我们还发现黄芪注射液具有显著的抗氧化作用，能显著提高细胞内超氧化物歧化酶（SOD）活性，降低丙二醛（MDA）含量。
这表明黄芪注射液可能通过抗氧化作用来抑制细胞凋亡。
黄芪含药血清对血管紧张素Ⅱ诱导内皮细胞分泌PAI—1的影响
黄芪含药血清对血管紧张素Ⅱ诱导内皮细胞分泌PAI—1的影响目的探讨血管紧张素Ⅱ（AngⅡ）对内皮细胞（HUVECs）分泌1型纤溶酶原激活物抑制剂（PAI-1）的影响及黄芪含药血清对AngⅡ此效应的干预作用。
方法培养脐静脉内皮细胞株，对照组与AngⅡ干预组：内皮细胞与不同浓度Ang Ⅱ共孵育18 h；黄芪含药血清组：内皮细胞在不同浓度黄芪药血清培养基中培育24 h后，加入AngⅡ（×10-4 mol/L）培养18 h，酶联免疫吸附法（ELISA）测定PAI-1浓度。
结果与对照组比较，不同浓度的AngⅡ均能刺激HUVECs分泌PAI-1；黄芪含药血清可抑制AngⅡ促HUVECs分泌PAI-1的效应。
结论黄芪含药血清可能通过抑制AngⅡ诱导的HUVECs分泌PAI-1效应，产生抗动脉粥样硬化的作用。
标签：黄芪；血管紧张素Ⅱ；内皮细胞；1型纤溶酶原激活物抑制剂血管紧张素Ⅱ（AngⅡ）是由血管紧张素Ⅰ在血管紧张素转化酶的作用下，水解产生的多肽物质，能产生多种生理效应，促进动脉粥样硬化（AS）的发生、发展，其中包括影响凝血和纤溶系统的活性平衡，促进血栓形成[1-3]。
黄芪的药用历史悠久，临床上黄芪注射液已用于治疗冠心病、糖尿病肾病等疾病[4-5]。
本实验研究AngⅡ对内皮细胞分泌1型纤溶酶原激活物抑制剂（PAI-1）的诱导作用及黄芪含药血清的干预效应，探讨黄芪含药血清的血管保护机制。
1 材料与方法1.1 仪器与材料胎牛血清（美国Gibco公司）；RPMI-1640培养基（美国Gibco公司）；胰蛋白酶（美国Gibco公司）；黄芪（江西省中医院中药房）；AngⅡ（美国Sigma公司）；脐静脉内皮细胞株ECV-304（中国科学院上海细胞生物研究所）；Wistar大鼠（南昌大学实验动物科学部）；PAI-1ELISA试剂盒（上海太阳生物技术公司）；酶标仪（芬兰Thermo bioanalysis公司）；超净工作台（苏州安泰空气技术有限公司）。
黄芪甲苷干预高糖诱导的足细胞转分化的体外研究
黄芪甲苷干预高糖诱导的足细胞转分化的体外研究陈廷芳;郭永平;桂定坤;张海英;汪年松【期刊名称】《中国中西医结合肾病杂志》【年(卷),期】2017(018)006【摘要】目的:观察黄芪甲苷对高糖诱导的足细胞转分化的影响.方法:将条件性永生的小鼠足细胞随机分为高糖组(HG)、正常对照组(NG)、甘露醇高渗对照组(MA)、及HG+不同剂量(5、15、30μg/ml)黄芪甲苷(AS-Ⅳ)干预组,采用免疫双标法、real time RT-PCR检测nephrin和desmin表达的变化.结果:高糖诱导足细胞转分化,desmin的表达增加,nephrin的表达减少.不同剂量黄芪甲苷可不同程度抑制高糖引起的上述改变.结论:高糖能诱导足细胞发生上皮-间充质转分化(EMT),黄芪甲苷能抑制高糖诱导的EMT.%Objective:To observe the change of high glucose induced podocyte epithelial-mesenchymal transition (EMT),and AS-Ⅳ inhibit podocyte EMT.Methods:Conditionally immortalized mouse podocytes were randomly divided into 6 group:normal glucose group,high glucose group,mannitol group,HG +30 μg/ml AS-Ⅳ group,HG + 15 μg/ml AS-Ⅳ group and HG +5 μg,/ml AS-Ⅳ group.The expressions ofdesmin,nephrin were detected by a two-color immunohistochemistry staining technique and real time RT-PCR.Results:The expressions of desmin were enhanced and nephrin was decreased by high glucose,AS-Ⅳ markedly inhibited all of those changes induced by highglucose.Conclusion:The high glucose can induced podocyte EMT,and AS-Ⅳ might inhibit podocyte EMT.【总页数】5页(P482-485,后插1)【作者】陈廷芳;郭永平;桂定坤;张海英;汪年松【作者单位】上海健康医学院附属第六人民医院东院上海 200200;上海健康医学院附属第六人民医院东院上海 200200;上海健康医学院附属第六人民医院东院上海 200200;上海健康医学院附属第六人民医院东院上海 200200;上海交通大学附属第六人民医院上海 200233【正文语种】中文【相关文献】1.骨形态发生蛋白-7通过TGFβ／smad 信号通路抑制高糖诱导下足细胞的转分化[J], 徐建伟;刘丽秋;赵小丽2.糖肾平通过TGF-β1-Smad2/3-ILK信号通路干预高糖+LPS诱导足细胞上皮间质转分化的分子机制研究 [J], 赵敬;王颖超;赵宗江;张新雪;杨美娟3.雷公藤内酯醇干预高糖诱导足细胞转分化作用机制的研究 [J], 叶迅;侯鹏超;朱伶俐;洪郁芝4.Wnt/β-catenin信号通路在高糖诱导足细胞转分化中的作用机制研究 [J], 刘淑歌;赖德源5.芪卫颗粒调控miRNA-155减轻高糖诱导小鼠足细胞转分化的研究 [J], 王晓磊;高彦彬;张涛静因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
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肾小 球基 底 膜 （ Ｂ 是 在 Ⅳ 胶 原 网状 结 构 的 基 础 上 ， Ｇ Ｍ）
１３ 实验 分组 ．
ＤＨ ５ ｂ ５ ２ ５ ｐ 一 ＴＡ Ａ ＡＣＡ ＧＡ ． Ｃｒ Ｇ Ａ １× Ｉ ＧＡＡ 一 ３ ． 一 Ｔ Ａ Ｇ Ｇ ５ Ｇ Ｃ Ｇ－
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酶 ０５ ． ，
ＤＰ Ｅ Ｃ—Ｈ Ｏ ８ ２ １ 。放 人 Ｐ Ｒ仪 扩增 ： １ ９ ℃５分 钟。（ ） Ｃ （）５ ２
９ ℃３ ５ Ｏ秒 ，０ ｏ ，２ ｏ秒 ，５个 循 环 。 （）２１退 火 １ ６ ℃３ 秒 ７ ℃６ ３ ３７ ＇ ２ ０
５ ￣ 。扩增 产物在 １７ Ｐ －￣ ．％的琼脂 糖凝胶 中电泳 ， 紫外凝胶成 像并分析。重 复 ３次 ／ —Ｐ Ｒ过程 。 Ｉ Ｔ Ｅ １５ 统计分析 ．
ｈ ｉｒ． ， ｅｅｓ１ｏａＤ Ｐ ．２ １０ ３ ￣ 温育 ６ 分钟 ， ｉｔ １０ Ｒｖｒ ．ｔ Ｅ Ｃ一Ｈ Ｏ ． ，７Ｃ ｂｏ ｅ ０ ９ ℃温育 ５ ５ 分钟 。
１４ ３ Ｐ Ｒ 取 １ ．． Ｃ ． 加入 １ ０× Ｂｆ ｒ． ｕｅ ５ ２ ， １５ ， ．
・
４ ・ ２
中国中医药科技 ２ １ ００年 １ 月第 ｌ 卷第 １ Ｊｎ ２Ｏ ｏ．７ Ｎ ． ７ 期 ａ． Ｏ９ Ｖ１１ ｏ Ｉ
黄 芪 对 Ａ ｇＩ 导 人 足 细 胞 分 泌 Ｉ ｎＩ诱 Ｖ胶 原 的 影 响 ＊
覃 志成 齐 悦 李荣山
（ 西 医科 大 学 第二 医院 ・ 原 ０００ ） 山 太 ３０ １
Ｐ Ｒ反应体系试剂 ： Ｃ 上海生物工程有限公司 ； 黄芪注射 液 ： 购
自大 理 药 业 有 限公 司 。
ｄ Ｔ ０５ 上下游引物各 １ｏａＩ Ｎ Ｐ ． ， ．ｖ（Ｖ胶原 ２６ ＃ １ Ｇｒ． ６ ｂ 一Ｃ ０Ｇ Ｇ
Ｇ ＧＧＡ ＴＩ Ｌ 一３ ， 一 Ｇ Ｗ １Ａ Ｇ Ｃ ＧＡ Ｇ Ｇ 一 ３ ； Ａ － Ｃ Ｇ ＇＇ ＩＴ ５ ＡＩ Ｖ ２ Ｗ， Ｇ Ｔ Ａ Ｇ Ｐ
摘
要 目的 ： 观察 Ａ 对足细胞分泌 Ⅳ 胶原 的影响及 中药黄芪的保护作 用。方法 ： ｎＩ 用不同浓度 的 Ａ ． ｎ
ｇ Ⅱ刺激足细胞 ， 观察其对足 细胞 Ⅳ 胶原 的影响 ； 并用不同剂量 的黄 芪注射液干预 ， 用 Ｒ 运 Ｔ—Ｐ Ｒ方法检 Ｃ 测足细胞 Ⅳ 胶原 ｍＲ Ａ表达的变化。结果 ：ｎ 可 以剂 量依 赖性地刺 激足 细胞 Ⅳ 胶 原 ｍ Ｎ Ｎ Ａ Ｒ Ａ表 达增 高 ， 芪注射液可 以剂量依赖性地降低 ・ 诱导的足细胞 Ⅳ 胶 原 ｍ Ｎ 黄 Ｒ Ａ表达的增 高（ Ｐ＜００ ） ．５ 。结论 ：
析。
２ 结 果
１３ １ ．．
— 浓 度 梯 度 对 人 足 细 胞 Ⅳ 胶 原 基 因表 达 的影 响
秒 ， 入 ２ｏ 加 ｏｔ ａ氯仿 ， 烈振 荡混 匀 ３ 剧 ｏ秒 ， 冰上放 置 ５分钟
结合非胶原糖 蛋白和糖胺 聚糖 、 白多糖而形成 的 ， 中 Ⅳ 蛋 其
胶原 占肾小球基底 膜 干重 的 ５ ％ ， 穿透 整个 Ｇ Ｍ 。足 ０ 它 Ｂ…
细 胞 分 泌 Ⅳ 胶 原 的 异 常 将 直 接 导 致 Ｇ Ｍ 的 构 成 异 常 而 引 Ｂ
１ 加 入 Ｔ ５× ．ｖ，ＮＩ２ｏ ． ｇ（＇ １１ｏａ Ｒ ａ ｎ ０ Ｐ ４ ｏａ ｄ ＇ ．ｔ 伽 ｏｄ ）８ ．ｖ， Ｎ ｓ Ｉ－ ＇ Ｐ ａ ｒ ｅ
ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ
１１ 材 料 足细胞 ： ． 由英 国 Ｂｉｏ 大学 Ｓｌ ｍ教 授 赠送 ； ｒｔ ｓｌ ａｅ ｅ
１％ 的胎 牛 血 清 、 州 四季 青 生 物 有 限公 司 ；Ｐ Ｉ６０培 养 ０ 杭 Ｒ Ｍ １４ 液及 ｌ ｒ （ 岛 素 １ｔ ｍ 、 铁 蛋 白 ５５ ／ｍ 、 硒 酸 钠 ％ｒＳ 胰 ０ ｃ／ｌ转 ．ｔ ｌ亚 ｅ ５ｇｍ ）美 国 Ｓ ｍ 公 司 ； 管 紧 张 素 Ⅱ： 国 Ａ ａｐｃ公 司 ； ｎ／ １： ｉａ ｇ 血 美 ｎｓｅ
１２ 足细胞培 养 ．
培养基为 Ｒ ＭＩ ４ Ｐ １ ０培养液 ， １％的胎 ６ 含 ０
牛血清 ，％ＩＳ 在 ３ ￣ ５ （ 培养箱 中传代增殖 ， １ Ｔ ； ３Ｃ、％ｃ） ２ 细胞 成 鹅卵石状 ， 之后转 入 ３ ￣ ５ 培养箱 中两周 ， ７Ｃ、 ％ｃ 使其分 化 成熟 为树枝 状 时接种 于 ２ ｃ１ ５Ｉ Ｉ ２的培养 瓶 中， 细胞生 长 至 待 ８ ％融合 ， ０ 无血清同步 １ ２小时后进行实验。
起肾小球疾病 ， 本研究 主要 观察血管紧张素 ｌ Ａ ｇ ） Ｉ ｎｌ 是否可 （ Ｉ 以引起足细胞异常分泌 Ⅳ 胶原及黄芪对其 的干预作用。
１ 材 料 和方 法
弃去 上清 ， 留下白色 Ｒ Ａ沉 淀 ， ０ 乙醇 ｌ ｌ Ｎ ７％ ｍ 洗涤 ２ ， 次 放
在室 温下将酒精空干 ， 沉淀 用 ５ｖ Ｄ Ｐ Ｏ溶解。 ｏａ Ｅ Ｃ一 １４ ２ Ｔ 用紫外分光光度计检测总 Ｒ Ａ浓度 ， ．． Ｒ Ｎ 将总 Ｒ Ａ Ｎ 浓度用 Ｄ Ｐ Ｅ Ｃ—Ｈ Ｏ稀 释 到 Ｏ２ ｐ／ｄ ６ ℃温 育 ５分 钟 ， ２ ．１ｇ ｔ ，５ ． 取
后 ，２０ ｒｍｎ ４Ｅ离心 ２ １００／ ｉ， ＇ ５分 钟 ， 上 清液 小 心 转 移 到无 将
Ｒ ａｅ １５ ｌ Ｎ ｓ 的 ．ｍ 离心管 中， 加入 与上清等 体积的异丙醇 ， 振荡 混匀 ， 冰上放置 １ 钟 ，１ ０ｒｍ ｎ４Ｃ ５分 ２ ０／ ｉ，￣ 离心 ｌ ０ ０分钟 ， 小心