超低温保存技术的相关机理综述
低温保存的依据原理
低温保存的依据原理低温保存的依据原理主要涉及生物学和化学方面的知识。
低温保存是一种用于延长生物体（包括细胞、组织、器官、种子等）的储存时间和保持其生理功能的方法。
下面将从生物学和化学两个方面分析低温保存的基本原理。
生物学原理：低温保存的生物学原理主要包括以下几个方面：1. 减缓代谢活性：低温可以减缓生物体的代谢活性，降低代谢率，减少细胞的能量需求。
细胞在低温下代谢缓慢，可以降低细胞内分子的降解速度，延缓细胞组织死亡，从而延长细胞的存活寿命。
2. 降低酶活性：低温可以降低生物体内酶的活性，减少酶介导的化学反应速率。
酶是生物体内许多生物化学反应的催化剂，温度对酶活性有显著影响。
低温下酶的活性降低，能够抑制以酶为催化剂的各种化学反应，从而避免细胞或组织的损伤。
3. 减少自由基产生：低温可以减少自由基的产生，减少对细胞分子的氧化损伤。
自由基是一种活性物质，对细胞和组织会造成氧化损伤，导致细胞膜、核酸和蛋白质的破坏。
低温可以降低自由基的产生速率，并减少自由基对细胞的损伤。
4. 蛋白质稳定性：低温可以提高细胞和组织蛋白质的稳定性，防止蛋白质变性和聚集。
温度对蛋白质结构的稳定性有重要影响，低温可以降低蛋白质的运动速率，减少不正确折叠和聚集，从而保持其结构和功能的完整性。
化学原理：低温保存的化学原理主要涉及水分子的状态变化和物质反应速率的影响。
1. 水分子的状态变化：低温可以使水分子减少热运动，降低水的活性。
水是生物体内重要的溶剂和反应介质，在细胞的生理过程中起到重要作用。
低温可以减少水分子的活性，减缓水分子的扩散速率，降低细胞内的化学反应速率，从而延缓生物体的变化和衰老。
2. 反应速率的影响：低温可以显著降低化学反应速率。
根据化学动力学理论，温度是影响化学反应速率的重要因素。
低温下，化学反应的速率大大降低，反应过程几乎可以停滞。
这可以减少细胞和组织在低温环境中的变化和破坏，保持其结构和功能的完整性。
综上所述，低温保存的依据原理主要涉及生物体的代谢活性、酶活性、自由基产生、蛋白质稳定性以及水分子状态变化和物质反应速率的影响。
食品低温保藏的原理
食品低温保藏的原理食品是人们日常生活中必不可少的物品，如何保持食品的新鲜和质量一直是人们关注的问题。
而低温保藏作为一种常见的食品保鲜方法，被广泛应用于食品储存和运输过程中。
本文将从低温保藏的原理、适用范围、方法和注意事项等方面进行详细介绍。
低温保藏的原理主要是通过控制食品的温度来降低微生物的活动和化学反应速率，从而延缓食品的腐败和变质过程。
食品在高温下容易滋生细菌和真菌，导致食品腐败、变质和产生有害物质，而低温能有效抑制这些微生物的生长，延缓食品的老化和腐败过程。
此外，低温还能减缓酶的活性和氧化反应的速率，从而保持食品的口感、色泽和营养价值。
低温保藏适用于多种食品，如肉类、水产品、蔬菜、水果、乳制品等。
其中，肉类和水产品容易滋生细菌，通过低温保藏可以延长其保鲜期，保持其营养和口感；蔬菜和水果则容易因酶的活性和氧化反应而腐败，低温可以延缓这些反应，保持其新鲜度和营养价值；而乳制品则容易受到细菌的污染，低温可以抑制细菌的生长，延长其保质期。
低温保藏的方法包括冷藏和冷冻两种。
冷藏是将食品存放在0-10摄氏度的环境中，通过降低温度来延缓食品的腐败过程。
冷藏适用于需要短期保藏的食品，如新鲜肉类、蔬菜、水果等。
而冷冻是将食品存放在-18摄氏度以下的环境中，通过降低温度将食品中的水分结冰，使微生物无法繁殖和生长，从而实现长期保藏。
冷冻适用于需要长期保藏的食品，如冷冻肉类、水产品、糕点等。
冷冻食品在解冻后可以恢复到原来的状态，但冷藏食品则一般不能恢复到原来的状态。
在进行低温保藏时，还需要注意一些事项。
首先，食品在存放前应保持干燥和清洁，避免细菌和真菌的污染。
其次，食品应尽快冷却到所需的温度，避免细菌在高温下的繁殖。
同时，食品在低温环境下的保质期也会受到食品本身质量和包装方式的影响，因此在选择食品和包装材料时要注意质量和适用性。
此外，低温保藏的食品在解冻后要尽快食用，避免长时间放置在室温下造成二次污染。
低温保藏是一种有效的食品保鲜方法，通过控制食品的温度来延缓食品的腐败和变质过程。
超低温冷冻技术应用于鱼精子保存的研究进展
超低温冷冻技术应用于鱼精子保存的研究进展一、超低温冷冻技术的原理和特点超低温冷冻技术是一种将生物样本（如细胞、组织、精子等）在极低温条件下迅速冷冻，并存储在液氮罐中的技术。
其主要原理是通过将生物样本的温度降至极低温度（通常为零下196摄氏度），使生物样本处于一种叫做“玻璃态”的状态，从而避免了细胞内部结构和生物大分子的冻结破坏。
超低温冷冻技术在生物样本保存和维持其活力方面具有独特的优势，因此被广泛应用于细胞培养、生物医学研究等领域。
超低温冷冻技术具有以下特点：1. 低温保存稳定性好：超低温冷冻技术能够将生物样本保存在极低温度下，使其处于基本静止状态，从而实现长期稳定保存。
2. 保存有效性强：超低温冷冻技术在保存生物样本的活力和遗传信息方面具有独特的优势，保持样本的原貌和功能。
3. 保存成本低廉：相比于其他生物样本保存方法，超低温冷冻技术的保存成本较低，操作简单，易于推广应用。
二、超低温冷冻技术在鱼精子保存中的研究进展近年来，随着超低温冷冻技术的不断完善和推广，越来越多的研究者开始将其应用于鱼精子的保存。
通过对不同鱼种精子的冷冻保存实验，得出了一系列具有重要意义的研究成果，有效地推动了鱼类资源的保护和利用。
1. 鱼精子的冷冻保存条件的优化在超低温冷冻技术应用于鱼精子保存的研究中，首要的问题是确定最适宜的冷冻保存条件。
研究者在选择冷冻保存液体、添加保护剂、采用不同的冷冻速率等方面进行了大量的实验研究，最终确定了适用于不同鱼种精子的最佳冷冻保存条件。
这为鱼精子保存的实际应用提供了有力的科学依据。
2. 对冷冻保存鱼精子的质量评估研究为了评估冷冻保存鱼精子的质量，研究者们进行了大量的质量评估研究，包括鱼精子的存活率、活力、形态以及遗传物质的完整性等指标。
通过大量的实验数据和对比分析，研究人员明确了超低温冷冻技术对鱼精子保存质量的影响规律，并提出了改进措施。
3. 鱼精子保存技术的实际应用除了在实验室条件下进行研究外，超低温冷冻技术在鱼精子保存领域也已得到了一定的实际应用。
超低温保存的原理
超低温保存的原理
超低温保存时，降温冷冻和化冻过程最易引起植物材料的伤害。
在降温冷冻过程中，植物组织或细胞遭受冻害主要有两个方面的原因，即细胞内部结冰和细胞内溶质的浓缩。
由于细胞质最初是高渗透压的，故而一般先使细胞外结冰，使得细胞膜内外的渗透压梯度发生反转，即发生细胞失水并逐渐变为脱水状态，导致细胞的溶质也相应地发生浓缩。
当细胞收缩超过临界值时，会造成细胞的损伤。
一般说来，慢速降温可使细胞内的水不断流到细胞外结冰，而快速降温时，细胞内的水来不及流到细胞外而造成胞内结冰。
因此，在降温冷冻过程中必须创造一个适宜的条件，使植物材料发生保护性脱水。
冬季的植物材料，由于经过抗寒锻炼已经发生了保护性脱水及其他提高抗寒力的变化，所以采用冬季植物材料超低温保存容易获得成功。
采用一些“冷冻保护剂”或称“防冻剂”可明显地增强生物组织的抗冷和耐冷能力，目前实践中往往采用如二四基亚砜、聚乙二醇（PEG）、甘油及多种糖类等多种防冻剂配合使用以提高效果。
在化冻时要防止细胞内次生结冰，因此，多数情况下采用快速化冻方法，即在3440摄氏度温水中化冻。
超低温技术在冷冻保存中的应用
超低温技术在冷冻保存中的应用随着人类社会的不断发展，食品、生物医学、电子等领域对低温技术的需求也越来越高。
而超低温技术在各个领域的应用也越来越广泛。
特别是在冷冻保存领域，超低温技术不仅可以有效地延长食品、生物医学制品以及电子元器件的保存期限，还可以更好地保护它们的质量和性能。
一、超低温技术的概念和分类超低温技术是指将物质的温度降低到极低的程度，以达到所需的处理效果的技术。
它可以将物质的温度从普通的低温状态降低到接近绝对零度（-273.15℃）的极低温状态。
根据温度的不同，超低温技术可以分为常规低温、超低温、极低温等多个等级。
常规低温指的是0℃以下但未达到-40℃的温度范围。
常规低温技术在食品、医药等领域的冷链运输和储存中得到广泛的应用。
超低温指的是-40℃～-80℃之间的温度范围。
在这一范围内，物质的温度降低到可以抑制其变质和失活的程度。
极低温指物质的温度降低到已经接近绝对零度（-273.15℃）的状态，其中液氮温度甚至可以低于-196℃。
在这个温度范围内，物质几乎可以永久保持其原有的生理、化学和物理性质。
二、超低温技术在食品冷冻中的应用食品是我们生活中必不可少的物质之一，保鲜和储存食品是人们日常生活中必须要解决的实际问题之一，而超低温技术在这个领域的应用也十分广泛。
它可以将食品中的水分以及细胞内的水分逐渐减少到无法支持细菌或微生物生存的程度，从而从根本上抑制了食品的腐败。
超低温技术在冷冻保存食品中的应用十分广泛。
在超低温冷冻的过程中，食品中的细胞水分和细胞外的水分都会被冻结。
当冷冻过程中水分形成晶体时，会对细胞结构和化学组分进行一定的破坏。
为此，超低温技术的关键在于冷冻速度。
在快速冷冻的情况下，水分在形成冰晶的过程中无法形成大型结晶，使细胞更容易恢复到其原有状态。
三、超低温技术在生物医学中的应用生物医学材料是人类医疗保健过程中必不可少的物质。
生物医学中的信号传输和诊断都与微电子技术有着密切的关系，而微型元件的工作和参数取决于其制造和使用的环境温度。
超低温冰箱 原理
超低温冰箱原理
超低温冰箱是一种能够将物体冷却至极低温的设备。
它采用了一系列复杂的原理和技术，以实现这一目标。
首先，超低温冰箱使用了压缩机循环制冷技术。
该技术的基本原理是利用压缩机将制冷剂压缩成高压气体，然后通过传热器将热量传递给外部环境。
在压缩机内部，高温高压气体会被冷却成低温高压气体。
接下来，制冷剂通过膨胀阀进入蒸发器，此时压力骤降，制冷剂会吸收热量并蒸发，从而冷却蒸发器内部的空气。
其次，超低温冰箱还采用了多级制冷技术。
这种技术通过将制冷系统分成多个级别，每个级别都有自己的蒸发器、压缩机和冷凝器。
通过串联多个级别，可以将冷却温度逐级降低，从而实现超低温冷藏。
另外，超低温冰箱还使用了真空绝热技术。
在冰箱内部的隔热层中，会形成真空环境，阻止空气传导热量。
这样可以减少热量的传递，提供更好的保温效果，维持低温环境。
最后，超低温冰箱的控制系统也非常重要。
通过精密的温控装置和传感器，可以实时监测和调节冰箱的温度，确保维持恒定的超低温度。
总的来说，超低温冰箱通过压缩机循环制冷、多级制冷、真空绝热和精密的控制系统等原理和技术，实现了将物体冷却至极
低温的功能。
它在科学研究、医药领域和食品工业等方面具有重要的应用价值。
低温冷冻保存生命技术 伦理
低温冷冻保存生命技术伦理随着现代科技的不断发展，人类已经开始探索如何利用低温冷冻技术，将人体、动物和植物等生命形式在极低温环境下保存，以期将来迎来技术进步，重新唤醒他们的生命。
这种技术被称为低温冷冻保存生命技术，也叫做“冷冻逝者”技术。
尽管低温冷冻保存生命技术如今仍然处于实验阶段，并有许多争议和风险，但它有着多种应用前景和可能性。
例如，该技术可帮助人类延长红利期、重获新生、治疗疾病、保留遗传信息、保护生物物种等等。
因此，这项技术仍然备受关注。
但是，低温冷冻保存生命技术所引起的许多伦理问题和道德困境也不容忽视。
首先，该技术破坏了伦理界限，涉及对生命的改造和重组。
这是否会威胁到人类的生命价值和人类尊严？其次，该技术涉及到人类对死亡的态度和看法。
是否应该认为死亡是自然过程中的一部分，无法干预？再次，该技术涉及到与家庭、社会和个人身份相关的问题。
例如，人们是否应该被允许在死亡前决定自己的身体被保存？是否应该允许某些人群获得更加优先的冷冻器官？为探讨这些伦理问题，需要建立相应的伦理框架和标准。
首先，需要确保个人能够自由选择自己的身体被按照自己意愿进行保存。
其次，需要建立一个权威的中央机构，承担对低温冷冻保存生命技术实施、管理和监督的任务。
其中，该机构需要确保技术的公正、安全和透明，以及防范技术被用于非法或不道德的目的。
此外，需要建立一个专门的道德委员会，评估该技术对人类和社会的潜在影响、责任和道德风险，并提出相应的政策建议和监督机制。
该委员会需要由专业人士、科学家、伦理学家、公民团体等构成，确保多元性、深入性和科学性。
总之，虽然低温冷冻保存生命技术为我们提供了各种可能性和应用前景，但它也带来了许多伦理问题和社会挑战。
在推动该技术的同时，我们需要建立一个伦理框架和标准，确保该技术得到透明、安全和负责的管理和监督，维护人类的生命价值和尊严。
细胞超低温冻存基本方法与原理
细胞超低温冻存基本方法与原理细胞超低温冻存是一种常见的细胞保存方法，被广泛应用于生物医学研究、生物技术和生物医药领域。
本文将介绍细胞超低温冻存的基本方法与原理。
细胞超低温冻存的基本方法主要包括样品准备、冷冻过程和储存条件三个步骤。
样品准备是细胞超低温冻存的关键步骤之一。
在冷冻之前，细胞需要进行培养和增殖，以保证细胞的数量足够。
同时，细胞也需要经过预处理，例如添加保护剂、调整细胞密度等，以增加其冻存的生存率和稳定性。
冷冻过程是细胞超低温冻存的核心步骤。
细胞在冷冻之前需要选择适当的冷冻介质，常用的有甘油、二甘醇、DMSO等。
这些冷冻介质可以通过渗透作用防止细胞冻结时产生的冰晶对细胞膜结构的破坏。
在加入冷冻介质后，细胞需要缓慢冷却到超低温，通常使用液氮或液氮混合物进行冷冻。
冷冻过程中，细胞内的水分会逐渐转化为冰晶，细胞体积会收缩，并伴随着细胞内外的渗透压差。
为了减少细胞膜的破裂和细胞器的损伤，需要在冷冻过程中采用缓慢降温的方式，以使细胞适应渗透压的变化。
储存条件是细胞超低温冻存的关键因素之一。
一般情况下，细胞冻存后需要存放在液氮罐或液氮制备的冰箱中，保持在超低温（通常为-196℃）下。
在储存过程中，细胞需要避免受到溶液中的氧气和湿气的影响，因此通常将细胞样品放置在密封的容器中，以防止细胞的氧化和水分蒸发。
细胞超低温冻存的原理主要涉及到冷冻介质的渗透保护作用和低温对细胞活性的影响。
冷冻介质的渗透保护作用是细胞超低温冻存的重要原理之一。
冷冻介质中的溶质浓度较高，在细胞冻结时可以通过渗透作用防止冰晶对细胞膜的破坏。
渗透保护剂以及适当的冷冻速率可以减少细胞内外的渗透压差，从而减少细胞膜的破裂和细胞器的损伤。
低温对细胞活性的影响也是细胞超低温冻存的原理之一。
低温可以减缓细胞内的化学反应速率，从而减少细胞代谢和损伤。
此外，低温还可以降低细胞内的水分活性，减少冰晶的形成和对细胞的损害。
细胞超低温冻存的基本方法与原理为细胞保存提供了重要的技术支持。
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二甲基亚砜
二甲基亚砜（DMSO）是一种含硫有机化合物，分子式为（CH3）2SO，常温下为无色无臭的透明液体，是一种吸湿性的可燃液体。
具有高极性、高沸点、热稳定性好、非质子、与水混溶的特性，能溶于乙醇、丙醇、苯和氯仿等大多数有机物，被誉为“万能溶剂”。
同时，氯化铬，氯化锰等过渡金属卤化物与氯化钾，氯化钠等卤化物在DMSO中有一定溶解度，故可以应用在有机电化学中。
二甲基亚砜广泛用作溶剂和反应试剂，特别是丙烯腈聚合反应中作加工溶剂和抽丝溶剂，作聚氨酯合成及抽丝溶剂，作聚酰胺，聚酰亚胺和聚砜树脂的合成溶剂，以及芳烃，丁二烯抽提溶剂和合成氯氟苯胺的溶剂等。
除此之外，在医药工业中二甲基亚砜还有直接用作某些药物的原料及载体。
二甲基亚砜本身有消炎止痛，利尿，镇静等作用，亦誉为“万灵药”，常作为止痛药物的活性组分添加于药物之中。
DMSO是二甲基亚砜，用途广泛。
用作乙炔、芳烃、二氧化硫及其他气体的溶剂以及腈纶纤维纺丝溶剂。
是一种即溶于水又溶于有机溶剂的极为重要的非质子极性溶剂。
对皮肤有极强的渗透性，有助于药物向人体渗透。
也可作为农药的添加剂。
也是一种十分重要的化学试剂。
DMSO也是一种渗透性保护剂，能够降低细胞冰点，减少冰晶的形成，减轻自由基对细胞损害，改变生物膜对电解质、药物、毒物和代谢产物的通透性。
但研究表明，DMSO存在一定的毒性作用，与蛋白质疏水集团发生作用，导致蛋白质变性，具有血管毒性和肝肾毒性。
DMSO存在一定的毒性作用，用的时候要避免其挥发，要准备1%-5%的氨水备用，皮肤沾上之后要用大量的水洗以及稀氨水洗涤.
在防冻剂中的应用
纯DMSO 的冰点是18.45℃，含水40%的DMSO在-60℃不冻，而且DMSO与水、雪混合时放热。
这种性质使DMSO可作为汽车防冻液、刹车油、液压液组分。
乙二醇防冻液在超过-40℃低温时已不适用。
而且比DMSO沸点低，有毒，易生产气阻。
DMSO 防冻液在北部严寒地区用于除冰剂，涂料、各种乳胶的防冻剂，汽油、航煤的防冰剂，骨髓、血液、低温保存的防冻剂等。
在细胞冻存中的应用
二甲基亚砜是一种重要的渗透型细胞保护剂。
在深低温（零下200度）保存细胞时冻存过程中，为防止细胞内液冰晶形成、渗透压改变、细胞结构紊乱等导致的损伤，有必要使用含有DMSO冷冻保护剂。
DMSO能够快速穿透细胞膜进入细胞中，降低冰点、延缓冻存过程，同时提高细胞内离子浓度，减少细胞内冰晶的形成，从而减少细胞损伤。
深低温时二甲基亚砜的细胞毒性受到抑制。
复苏时动作要快，尽快洗掉二甲基亚砜，否则会造成对细胞严重的毒性。
二甲基亚砜（DMSO）是目前最好的细胞冻存保护剂，但也是一种以细胞毒性很大的化学试验剂。
研究结果表明，培养液中DMSO 浓度为10%时，细胞生长抑制率近100%；1‰浓度时抑制率为35%，即使是0.04‰的浓度，DMSO对细胞的生长也有不利的影响。
渗透性冷冻保护剂
渗透性冷冻保护剂多是一些小分子物质，可以透过细胞膜渗透到细胞内。
渗透性冷冻保护剂主要包括二甲基亚砜、甘油、乙二醇、丙二醇、乙酰胺、甲醇等。
其保护机制是在细胞冷冻悬液完全凝固之前，渗透到细胞内，在细胞内外产生一定的摩尔浓度，降低细胞内外未结冰溶液中电解质的浓度，从而保护细胞免受高浓度电解质的损伤同时。
细胞内水分也不会过分外渗，避免了细胞过分脱水皱缩。
在使用渗透性冷冻保护剂时，需要一定时间进行预冷，在细胞内外达到平衡以起到充分的保护作用。
目前使用较多的是二甲基亚砜、甘油、乙二醇和丙二醇等。
它们的主要作用机制是,与水结合后使溶液的冰点下降,使之不易形成冰晶;此类保护剂可稀释溶液中的溶质浓度,减少细胞摄取盐量,由保护剂替代;冷冻保护剂进入细胞,改变了细胞内过冷状态,使细胞内外压接近,降低了细胞脱水引起的皱缩程度和速度;此类保护剂进入细胞,缓解了复温时渗透性膨胀引起的损伤[3],起到冷冻保护作用。
本试验采用不同浓度的二甲基亚砜、甘油、乙二醇对黑熊耳部成纤维细胞进行冻存研究,以期寻找最佳冷冻保护剂和最佳浓度。
PVS2溶液的组成：300g/L 甘油150g/L 乙二醇150g/L DMOS 0.4mol/L 蔗糖
PVS2由30%甘油(v/v),15%乙二醇(v/v),15%二甲基亚砜(DMSO,v/v)和0.4mol·L的蔗糖配成。
2PVS2溶液的组成：0.15mol/L 蔗糖液体培养基与PVS2溶液以体积比40:60 配制
装载(loading) 的过程, 即用一个较高浓度的冷冻保护剂混合液于室温下预处理一定时间, 以进一步降低组织含水量, 避免由于渗透压变化剧烈对材料所造成的伤害。
北海道大学指出：PVS2在处理中对细胞有毒害作用，稀释的装载液能够降低毒害作用，但是也导致了再生率的降低。
用KF7G稀释PVS2溶液75%-50%可以降低装载过程中的毒害作用，还能保证再生率。
超低温保存(cryopreservation)被认为是一种有希望长期保存植物种质资源的技术,在液氮(-196℃)保存状态下活细胞的所有代谢几乎完全停止,可防止老化及变异(Nikishina 等,2001a)。
超低温保存的冷冻方法分为快速冷冻法(rapid cooling)和玻璃化法(vitrification)等。
快速冷冻法是指将材料直接投入液氮,此方法适合于含水量低、细胞小的材料。
玻璃化法是利用高浓度的复合保护剂在25℃或者0℃下对材料进行预处理,投入液氮(Takagi,2000)。
玻璃化液作用在于增大膜的通透性,促进脱水,降低水分冰点温度,保护蛋白质和酶类。
目前广泛使用的玻璃化液为PVS2(plant vitrification solution 2)。
生物细胞在降温过程中，随着温度的降低，细胞外介质结冰，而细胞内尚未结冰，造成细胞内外蒸汽压力差。
只要降温速率不超过脱水的连续性，细胞内的水不断向细胞外扩散，细胞原生质浓缩，从而降低细胞内含物的冰点，这种逐渐除去细胞内水份的
过程称为“保护性脱水”(Protectivedehydration)[31]o这种保护性脱水能有效阻止细胞质和液泡中结冰。
但过度脱水会使细胞内有害物质积累，蛋白质分子之间形成二硫键，破坏蛋白质、酶，膜的完整性而受到伤害。
“。
此时，若降温速率加快(10℃／min以上)，细胞内就产生大量冰晶，导致细胞死亡。
“。
但是，如果降温速率非常快，细胞质溶液“固化”，但仍保持非结晶状态，这种现象称为“玻璃化”，对细胞不构成直接伤害。
从理论上说，细胞内含物一旦发生玻璃化，就能避免细胞内结冰。
预培养的主要目的是使材料内的自由水含量减少以提高材料对低温的抗性，主要措施是将材料在添加高渗物质或低温保护剂的培养基上预培养，并在零度以上的低温下对材料进行低温锻炼，但预培养处理不是不可少的。
缓慢冷却过程则主要是诱导保护性脱水，以降低细胞的结冰点，一般采用两步法，材料在添加冰冻保护剂后，可用程控降温仪(约0．5-2℃／min)将样品降温至转移温度(一般为-40～-70‘C)，处理一定时间后再浸入液氮进行保存…’“1，降温速率、预冻温度及其停留时间等因素影响冻存效果。