微生物的接种技术
微生物检验基本操作技能—接种技术(食品微生物检验技术课件)
的环境中进行，必须严格遵守无菌操作规范。
1.接种针；2-接种环；3-接种钩；4-涂布棒；6-接种圈；7-接种锄；8-小解剖刀
高压蒸汽灭菌锅，接种环，牛肉膏蛋白胨培养基，培 养皿，试管，三角瓶，酒精灯，移液管，无菌水，灭 菌保藏菌种的试管 （三）灼烧接种环 （四）接种环接种 （五）恒温培养
1、接种环（针、铲）一定要保证其冷却后方可进行转接，以免 烫死微生物。
2、取试管棉塞时要轻缓，不宜用力过猛。棉塞一定要夹在手上 ，不能放在桌子上。
3、斜面接种时，所划直线尽可能直，不要划破培养基，也不要 使接种环触碰管壁或管口。
4、牢固树立无菌操作概念，细心体会无菌操作要领。
为什么在接种前一定要将接种环冷却？如 何灼烧过的接种环是否已经冷却？
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L、接种后斜面培养基，放在恒温箱内培养。
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斜面接种示意图
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2）、平板接种技术
A、加热融化培养基
将三角瓶瓶口包扎绳解开，轻轻旋动棉塞，然后将瓶子 放入微波炉中加热，选取高火力，加热1min后取出晃动， 重复加热直至培养基完全溶解。
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图4 接种环灭菌
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以下操作，需要使管口靠近火旁
F、用右手小指、无名指和手掌拔掉棉塞；
G、以火焰灼烧管口，灼烧时应不停转动试管口， 使试管口沾染少许菌得以烧死；
H、将烧过接种环伸入菌种试管内，先将环接触没 有长菌培养基部分，使其冷却，以免烧死被接种菌 体，然后轻轻接触菌体，取出少许，慢慢将接种环 抽出试管（图5），注意尽可能不要使环部分碰钉 子到管壁，取出后不可使环经过火焰；
原理：超净工作台洁净环境是在特定空间内，洁净空 气(进滤空气)按设定方向流动而形成。以气流方向来分， 现有超净工作台可分为垂直式，由内向外式以及侧向式。
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垂直流超净工作台
垂直流超净工作台
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水平流超净工作台
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超净台使用与维护
风速保持在0.32-0.48米/秒 使用前打开紫外灯照射40~60min 开启超净工作台工作电源，关闭紫外灯，并用75%酒精或0.5%过氧
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微生物接种方法
微生物接种方法微生物接种是生物实验中的一项基本技术，也是各种微生物检测和研究中不可缺少的步骤。
本文将介绍一些常见的微生物接种方法，包括平板划线法、斜面接种法、液体培养基接种法和穿刺接种法等。
平板划线法是一种常用的微生物接种方法，其目的是将菌种纯化，得到单一的菌落。
该方法通过在固体培养基上划线，使菌种在培养基上繁殖并形成菌落。
具体步骤如下：(1)将固体培养基灭菌后倒入培养皿中，待凝固后加入适量菌液。
(2)用接种环取适量菌液，在培养皿表面划线。
(3)将培养皿放入适宜的温度下培养，观察菌落的生长情况。
(4)根据需要重复划线操作，直至得到单一的菌落。
斜面接种法是一种常用的微生物接种方法，其目的是将菌种接种到斜面培养基上，以便于观察和保存。
该方法通过将菌液加入到灭菌后的斜面培养基中，使菌种在斜面上繁殖并形成菌落。
具体步骤如下：(1)将斜面培养基灭菌后放置在实验台上，用无菌操作法加入适量菌液。
(2)将接种环放入菌液中沾取少量菌种，然后在斜面培养基上划线接种。
(3)将培养皿放入适宜的温度下培养，观察菌落的生长情况。
(4)根据需要重复划线操作，直至得到单一的菌落。
液体培养基接种法是一种常用的微生物接种方法，其目的是将菌种接种到液体培养基中，以便于微生物的生长和繁殖。
该方法通过将菌液加入到灭菌后的液体培养基中，使菌种在液体培养基中繁殖并形成微生物。
具体步骤如下：(1)将液体培养基灭菌后倒入试管中，加入适量菌液。
(2)用摇床或其他设备将试管中的培养基混合均匀。
(3)将试管放入适宜的温度下培养，观察微生物的生长情况。
微生物接种技术是生物工程中一项重要的技术，广泛应用于生物制品制造、环境生物治理、医学诊断等领域。
本文将介绍微生物接种技术的基本原理、应用场景以及发展前景。
微生物接种技术是指将目的微生物通过一定的方式引入到培养基或发酵系统中，使其在特定的环境下生长繁殖，以达到特定的生物制品或环境治理的目的。
该技术的主要环节包括菌种选择、接种量确定、接种方法选择和培养条件控制等。
微生物的工作流程
微生物的工作流程一、接种将微生物接到适于它生长繁殖的人工培养基上或活的生物体内的过程叫做接种。
接种和分离工具1.接种针2.接种环3.接种钩4.5.玻璃涂棒6.接种圈7.接种锄8.小解剖刀常用的接种方法有以下几种：1、划线接种这是最常用的接种方法。
即在固体培养基表面作来回直线形的移动，就可达到接种的作用。
常用的接种工具有接种环，接种针等。
在斜面接种和平板划线中就常用此法。
2、三点接种在研究霉菌形态时常用此法。
此法即把少量的微生物接种在平板表面上，成等边三角形的三点，让它各自独立形成菌落后，来观察、研究它们的形态。
除三点外，也有一点或多点进行接种的。
3、穿刺接种在保藏厌氧菌种或研究微生物的动力时常采用此法。
做穿刺接种时，用的接种工具是接种针。
用的培养基一般是半固体培养基。
它的做法是：用接种针蘸取少量的菌种，沿半固体培养基中心向管底作直线穿刺，如某细菌具有鞭毛而能运动，则在穿刺线周围能够生长。
穿刺接种的两种方法：垂直法和水平法4、浇混接种该法是将待接的微生物先放入培养皿中，然后再倒入冷却至45℃左右的固体培养基，迅速轻轻摇匀，这样菌液就达到稀释的目的。
待平板凝固之后，置合适温度下培养，就可长出单个的微生物菌落。
5、涂布接种与浇混接种略有不同，就是先倒好平板，让其凝固，然后再将菌液倒入平板上面，迅速用涂布棒在表面作来回左右的涂布，让菌液均匀分布，就可长出单个的微生物的菌落。
6、液体接种从固体培养基中将菌洗下，倒入液体培养基中，或者从液体培养物中，用移液管将菌液接至液体培养基中，或从液体培养物中将菌液移至固体培养基中，都可称为液体接种。
7、注射接种该法是用注射的方法将待接的微生物转接至活的生物体内，如人或其它动物中，常见的疫苗预防接种，就是用注射接种，接入人体，来预防某些疾病。
8、活体接种活体接种是专门用于培养病毒或其它病原微生物的一种方法，因为病毒必须接种于活的生物体内才能生长繁殖。
所用的活体可以是整个动物；也可以是某个离体活组织，例如猴肾等；也可以是发育的鸡胚。
微生物的接种分离和纯培养
穿刺接种技术：用接种针从菌种斜面上挑取 少量菌体并竖直穿刺到半固 体培养基中；
接种无菌操作步骤
1. 将菌种斜面和待接种新鲜斜面夹在左手 的食指、中指和无名指之间，大拇指按在两 只试管中间。右手旋松棉塞，便于拔出； 2. 右手拿接种环，竖直伸入火焰中，环端 及伸入试管中部分均充分灭菌；
I
冷却至 45℃左右
每皿约倒入15ml
肉汤培养基
II
III
0.2ml 0.2ml
0.2ml
微生物的计数
血球计数法 平板活菌计数法
计繁殖数法只适宜于单细胞状态的微生物 或丝状微生物产生的孢子
血球计数法
一、实验原理
血球计数器是一特制的厚载玻片，上面 刻有一定面积的方格，将盖玻片盖上后，由 于两者之间存在着距离使之形成一定容积的 小室。滴入待测样品后，使样品均匀充满小 室，在显微镜下计算小室内的菌数，换算成 单位体积的样品中所含的菌数。
度。
思考题
1. 微生物的纯种分离通常采用那些方法，并说明个 方法的特点。
2. 什么叫微生物的污染？如何防止？ 3. 从两种方法计数得出的菌液浓度是否一致？分析
误差产生的原因，由此比较一下两者的优缺点及 各自的适用范围。 4. 平板活菌计数中，为何选择生长有25～250个菌 落的平板？
碰到火焰，以免烧死菌体 6. 血球计数器要洁净干燥，滴入菌液时在盖玻片与
载玻片间不能有气泡 7. 血球计数时显微镜光线不宜太亮
实验安排（三人一组）
斜面接种：每组三支 液体接种：每组三支（大肠、四联、枯草各一支） 穿刺接种：每组二支（四联一支、变形一支） 平板划线分离：每人划一块平板（混合菌液) 稀释分离：I、II、III各一块平板（混合菌液) 血球计数：写出小格数目，并算出酵母菌液
微生物的接种技术
（二）穿刺接种
用接种针挑取菌种（针必须挺直），自培养基的 中心垂直地刺入半固体培养基中，直至接近管底， 但不要穿透，然后沿原穿刺线将针拔出，塞上试管 塞，烧灼接种针。
五、实验结果 1、待接种菌种培养长出后，看划线是否标准 2、观察穿刺接种生长状态 六、思考题 1、什么是无菌操作 2、接种时应注意的问题有哪些
实验七 微生物的接种技术
Hale Waihona Puke 一、实验目的熟悉微生物的无菌接种技术和方法
二、实验原理
微生物接种是将一种微生物移接到另一灭过菌 的新鲜培养基中，使其繁殖生长的过程。
方法有：斜面接种、液体接种、平板接种、穿 刺接种等。
无菌操作：培养基灭菌后，用灭过菌的无菌工 具将含菌材料接种于灭菌培养基上的过程。
三、实验材料 1、菌种：大肠杆菌（Ec） 2、培养基：营养琼脂斜面培养基、
4、右手拿接种环通过火焰烧灼灭菌，在火焰边用 右手的手掌边缘和小指/小指和无名指分别夹持 试管帽，将其取出，并迅速烧灼管口。
5、将灭菌的接种环伸入菌种试管内，先将环接触试 管 内壁或未长菌的培养基，达到冷却的目的，然后再 挑取少许菌苔。将接种环退出菌种试管，迅速伸入 待接种的斜面试管，用环在斜面上自试管底部向上 端轻轻地划直线，勿将培养基划破，也不要使环接 触管壁或管口。
牛肉膏蛋白胨半固体培养基 3、器材：接种环、接种针、酒精灯
四、操作步骤
（一）斜面接种
1、在斜面试管上，用记号笔写上 将接种的菌名、日期和接种者；
2、点燃煤气灯；
3、将菌种试管和待接种的斜面试 管，用大拇指和食指、中指、无 名指握在左手中，并将中指夹在 两试管之间，使斜面向上，成水 平状态，在火焰边用右手松动试 管塞，以利于接种时拔出。
微生物的无菌操作及接种技术
实验用品
实验用品如培养基、试剂 、玻璃器皿等应经过严格 灭菌处理，确保无菌状态 。
无菌操作原则与规范
操作前准备
实验人员应穿戴整洁的工作服，戴好口罩和帽子，修剪指 甲并洗净双手。同时，检查实验用品是否齐全、无菌状态 是否良好。
操作后处理
实验结束后，及时清理实验台面，将废弃物放入指定容器 内。对实验用品进行清洗和灭菌处理，确保下次实验的无 菌环境。
生长曲线测定
通过测定微生物的生长曲线， 了解其生长速度、延滞期、对 数生长期、稳定期等生长特点 。
代谢产物检测
检测微生物代谢产生的特定物 质，如酶、酸、气体等，以判
断其生长情况和代谢活性。
05
无菌操作在科研实验 中应用举例
遗传学实验：基因转化和表达分析
基因转化
在遗传学研究中，无菌操作是基因转化的关键步骤之一。通过无菌操作，可以将 外源基因导入到受体细胞中，实现基因的转移和整合。
环境微生物学研究
无菌操作在环境微生物学研究中也非常重要。通过无菌操作，可以研究环境微生物的生长、代谢和相互作用等方 面，揭示微生物在环境中的生态功能和水平，确保实验准确性
严格遵守无菌操作规范
在进行微生物实验时，必须严格遵守无菌操作规范，包括 穿戴实验服、戴口罩和手套、使用无菌器材等，以避免实 验过程中的污染。
注意事项
接种针需灼烧灭菌，避免污染；划线时力度要均匀，避免划 破培养基。
液体培养基接种法
操作步骤
在无菌条件下，用接种环沾取少量菌 液，在液体培养基中轻轻搅动，使菌 液均匀分布在培养基中。
注意事项
接种环需灼烧灭菌，避免污染；搅动 时要轻柔，避免产生气泡。
其他特殊无菌操作方法
穿刺接种法
用接种针沾取少量菌液，穿刺到半固体培养基内部，适用于厌氧菌 等需要特殊环境的微生物培养。
微生物的接种技术
引言：微生物的接种技术是一种利用活体微生物来改变或影响其宿主环境以达到某种特定目的的方法。
它在农业、医疗、环境保护等领域中有着广泛的应用。
本文将详细介绍微生物的接种技术的原理、分类以及在不同领域中的应用。
概述：微生物的接种技术是通过将特定的微生物引入特定的环境中，从而影响宿主环境中的生物群落，并达到改变环境的目的。
接种技术的成功与否取决于合适的微生物选择、适当的接种方法和适宜的环境条件。
正文：一、微生物接种技术的原理1.1接种微生物的目的和原因1.2微生物的选择原则1.3接种微生物的策略二、微生物接种技术的分类2.1入侵性接种技术2.2非入侵性接种技术2.3增强型接种技术2.4保护性接种技术2.5组合接种技术三、农业领域中的微生物接种技术应用3.1有益微生物的接种3.2有害微生物的控制3.3好氧微生物的应用3.4厌氧微生物的应用3.5接种微生物的途径与技术四、医疗领域中的微生物接种技术应用4.1微生物解毒剂的应用4.2高效微生物生产技术的应用4.3微生物酶的应用4.4微生物制剂的应用4.5微生物植入技术的应用五、环境保护领域中的微生物接种技术应用5.1污水处理中的微生物接种技术5.2土壤修复中的微生物接种技术5.3水质净化中的微生物接种技术5.4生态系统修复中的微生物接种技术5.5环境监测与评估中的微生物接种技术总结：微生物的接种技术是一种重要的生物技术手段，可以在农业、医疗、环境保护等领域中发挥重要作用。
它有助于改善宿主环境、增强微生物活性和促进生态平衡。
在应用微生物接种技术时，需注意选择适宜的微生物菌种、合适的接种方法以及适当的环境条件，以达到最佳的效果。
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1目的
1.1学习掌握微生物的几种接种技术
1.2建立无菌操作的概念，掌握无菌操作的基本环节
2实验说明
将微生物的培养物或含有微生物的样品移植到培养基上的操作技术称之为接种。
接种是微生物实验及科学研究中的一项最基本的操作技术。
无论微生物的分离、培养、纯化或鉴定以及有关微生物的形态观察及生理研究都必须进行接种。
接种的关键是要严格的进行无菌操作，如操作不慎引起污染，则实验结果就不可靠，影响下一步工作的进行。
3实验器材
3.1器械和用品
酒精灯，玻璃铅笔，火柴，试管架、接种环、接种针、接种钩、滴管、移液管、三角型接种棒等接种工具。
3.2菌种和培养基
菌种：
大肠杆菌（Escherichia coli），金黄色葡萄球菌（Staphyloccus aureus）。
培养基：
普通琼脂斜面和平板,营养肉汤,普通琼脂高层(直立柱)。
4实验流程
斜面接种法→液体接种法→固体接种法→穿刺接种法。
5操作步骤
5.1斜面接种法
斜面接种法主要用于接种纯菌，使其增殖后用以鉴定或保存菌种。
通常先从平板培养基上挑取分离的单个菌落，或挑取斜面，肉汤中的纯培养物接种到斜面培养基上。
操作应在无菌室、接种柜或超净工作台上进行，先点燃酒精灯。
将菌种斜面培养基(简称菌种管)与待接种的新鲜斜面培养基(简称接种管)持在左手拇指、食指、中指及无名指之间，菌种管在前，接种管在后，斜面向上管口对齐，应斜持试管呈45～0度角，并能清楚地看到两个试管的斜面，注意不要持成水平，以免管底凝集水浸湿培养基表面。
以右手在火焰旁转动两管棉塞，使其松动，以便接种时易于取出。
右手持接种环柄，将接种环垂直放在火焰上灼烧。
镍铬丝部分（环和丝）必须烧红，以达到灭菌目的，然后将除手柄部分的金属杆全用火焰灼烧一遍，尤其是接镍铬丝的螺口部分，要彻底灼烧以免灭菌不彻底。
用右手的小指和手掌之间及无名指和小指之间拨出试管棉塞，将试管口在火焰上通过，以杀灭可能沾污的微生物。
棉塞应始终夹在手中如掉落应更换无菌棉塞。
将灼烧灭菌的接种环插入菌种管内，先接触无菌苔生长的培养基上，待冷却后再从斜面上刮取少许菌苔取出，接种环不能通过火焰，应在火焰旁迅速插入接种管。
在试管中由下往上做S形划线。
接种完毕，接种环应通过火焰抽出管口，并迅速塞上棉塞。
再重新仔细灼烧接种环后，放回原处，并塞紧棉塞。
将接种管贴好标签或用玻璃铅笔划好标记后再放入试管架，即可进行培养。
5．2液体接种法
多用于增菌液进行增菌培养，也可用纯培养菌接种液体培养基进行生化试验，其操作方法与注意事项与斜面接种法基本相同，仅将不同点介绍如下：
由斜面培养物接种至液体培养基：
用接种环从斜面上沾取少许菌苔，接至液体培养基时应在管内靠近液面试管壁上将菌苔轻轻研磨并轻轻振荡，或将接种环在液体内振摇几次即可。
如接种霉菌菌种时，若用接种环不易挑起培养物时，可用接种钩或接种铲进行。
由液体培养物接种液体培养基时，可用接种环或接种针沾取少许液体移至新液体培养基即可。
也可根据需要用吸管、滴管或注射器吸取培养液移至新液体培养基即可（图4-5）。
接种液体培养物时应特别注意勿使菌液溅在工作台上或其他器皿上，以免造成污染。
如有溅污，可用酒精棉球灼烧灭菌后，再用消毒液擦净。
凡吸过菌液的吸管或滴管，应立即放入盛有消毒液的容器内。
5.3固体接种法
普通斜面和平板接种均属于固体接种，斜面接种法已讲了，不再赘述。
固体接种的另一种形式是接种固体曲料，进行固体发酵。
按所用菌种或种子菌来源不同可分为：
用菌液接种固体料，包括用菌苔刮洗制成的菌悬液和直接培养的种子发酵液。
接种时按无菌操作将菌液直接倒入固体料中，搅拌均匀。
但要注意接种所用水容量要计算在固体料总加水量之内，否则会使接种后含水量加大，影响培养效果。
用固体种子接种固体料。
包括用孢子粉、菌丝孢子混合种子菌或其他固体培养的种子菌。
将种子菌于无菌条件下直接倒入无菌的固体料中即可，但必须充分搅拌使之混合均匀。
一般是先把种子菌和少部分固体料混匀后再拌大堆料。
5.4穿刺接种法
此法多用于半固体、醋酸铅、三糖铁琼脂与明胶培养基的接种，操作方法与注意事项与斜面接种法基本相同。
但必须使用笔直的接种针，而不能使用接种环。
接种柱状高层或半高层斜面培养管时，应向培养基中心穿刺，一直插到接近管底，再沿原路抽出接种针。
注意勿使接种针在培养基内左右移动，以使穿刺线整齐，便于观察生长结果。
6结果
分别记录并描绘平板划线、斜面和半固体接种的微生物生长情况和培养特征。
7思考
7.1如何确定平板上某单个菌落是否为纯培养？请写出实验的主要步骤。
7.2为什么高氏I号培养基和马丁氏培养基中要分别加入酚和链霉素？如果用牛肉膏蛋白胨培养基分离一种对青霉素具有抗性的细菌，你认为应如何做？
7.3试述如何在接种中，贯彻无菌操作的原则?
7.4以斜面上的菌种接种到新的斜面培养基为例说明操作方法和注意事项。
7.5试设计一个实验，从土壤中分离酵母菌并进行计数。