植物组织培养常用培养基的成分
植物组织培养MS培养基配方
植物组织培养MS培养基配方（一）母液配制与保存配制培养基时，如果每次配制都要按着杨成分表依次称量，既费时，又增加了多次称量误差。
为了提高配制培养基的工作效率，一般将常用的基本培养基配制成10～200倍，甚至1000倍的浓缩贮备液，即母液。
母液贮存于冰箱中，使用时，将它们按一定的比例进行稀释混合，可多次使用，并在配制较多数量的培养基时，降低工作强度，也提高试验的精度。
基本培养基的母液有四种：大量元素（浓缩20倍），微量元素（浓缩100倍），铁盐（浓缩200倍），除蔗糖之外的有机物质（浓缩100倍）1大量元素配制大量元素母液时要分别称量，分别溶解，在定容时按表1中的序号依次加入容量瓶中，以防出现沉淀。
倒入磨口试剂瓶中，贴好标签和做好记录后，可常温保存或放入冰箱内保存。
2微量元素母液在配制微量元素母液时，也应分别称量和分别溶解，定溶时不分先后次序，可随意加入溶量瓶中定容（表2），一般不会出现沉淀现象。
倒入磨口试剂瓶中，贴好标签和做好记录后，可常温保存或放入冰箱内保有存。
3铁盐母液由于铁盐无机化合物不易被植物吸收利用，只有基螯合物才能被植物吸收利用，因此需要单独配成螯合物母液表3）。
配制方法：称取5.56g硫酸亚铁和7.46g乙二胺乙酸二钠，分别用450ml的去离子水溶解，分别适当加热不停搅拌，分别溶解后将硫酸亚铁溶液缓缓加入到乙二胺四乙酸二钠溶液中，将两种溶液混合在一起，最后用去离子水定溶于1000mL，倒入棕色贮液瓶中，贴好标签和做好记录后放入冰箱内保存。
先取一种置容量瓶（烧杯）中，然后将另一种成分逐加逐剧烈震荡，至产生深黄色溶液，最后定容，保存在棕色试剂瓶中。
4有机物母液按表4中的量分别称取各种有机物，分别溶解后，用蒸馏水或去离子水定容于1000mL，放入细口瓶配成1 mg/ml 。
各100 ml。
6-苄基腺嘌呤（6-BA）用0.5 N的HCl加热溶解。
萘乙酸（NAA）用少量无水乙醇溶解，再加蒸馏水。
植物组织培养的培养基
植物组织培养的培养基中，需要添加糖类作为碳源物质，因此糖类是影响植物组织培养成功与否的关键之一。
高中生物教材中明确指出，植物组织培养的培养基中添加的糖类是蔗糖。
那么为什么不添加葡萄糖呢？很多资料上解释为蔗糖较葡萄糖便宜，易被植物细胞吸收。
其实并非如此。
之所以以蔗糖作为碳源，主要有三个方面的原因：（1）同样作为碳源为植物细胞提供能量来源，蔗糖较葡萄糖能更好地调节培养基内的渗透压。
配制相同质量分数的培养基，蔗糖形成的渗透压要明显低于葡萄糖，因此若采用葡萄糖作为碳源，易使植物细胞脱水而生长不良。
同时，植物细胞吸收蔗糖的速率要明显慢于吸收葡萄糖的速率，所以蔗糖形成的渗透压可相对长期的保持稳定。
（2）植物组织培养过程中，要时刻注意防止培养基受到微生物的污染。
微生物生长所需的碳源最常用的是葡萄糖，一般很少利用蔗糖。
因此，采用蔗糖作为培养基的碳源，可一定程度上减少微生物的污染。
（3）诱导作用。
在培养基成分中，增加生长素的浓度，导致木质部形成，增加蔗糖浓度则导致韧皮部形成。
当生长素水平恒定时，2％蔗糖使分化出的全部是木质部，4％蔗糖使分化出的几乎全部是韧皮部，3％蔗糖则可以分化出两者。
所以，生长素和蔗糖浓度决定愈伤组织中维管束的类型与数量。
因此，在植物组培中要选用蔗糖而不选用葡萄糖。
通过细胞膜内外的液体的浓度差来调节当细胞膜内的浓度小于细胞膜外的时候蔗糖救能进入细胞中了植物细胞培养中最常用的培养基的碳源是蔗糖，已知葡萄糖和果糖也能使某些植物生长得很好。
植物细胞可以分解蔗糖，蔗糖是由一分子果糖和一分子葡萄糖组成的，蔗糖是可以直接进入细胞的，蔗糖跨质膜从质外体进入细胞是由载体介导并需要消耗能量的质子-蔗糖共运输机制进行的，另外，植物能够利用的某些其他形式的碳源有麦芽糖、半乳糖、甘露糖和乳糖等。
葡萄糖更不稳定，培养基需添加葡萄糖一般都在灭菌后再兑换。
实在要添加葡萄糖那么灭菌温度一般控制在108~110左右，120度灭出来的就有一定程度的碳化了。
ms培养基主要成分及作用
ms培养基主要成分及作用
MS培养基是常用的植物组织培养基之一，其主要成分包括微量元素、无机盐和有机物等。
下面我们来具体介绍一下MS培养基的成分和
作用。
微量元素是MS培养基中的重要成分之一，微量元素指的是植物在
生长过程中只需以微量的形式摄取的元素，包括铁、锰、锌、铜、钼、氯等。
这些元素虽然只需要很少的量，但对植物生长和发育起到了至
关重要的作用。
无机盐是MS培养基中另一重要成分，无机盐的主要作用是提供植
物所需的重要离子，如钾离子、钠离子、钙离子等，同时也起到了调
节植物生理代谢的作用。
无机盐中的每一个元素都有其特定的作用，
合理配比能够提高植物的生长效果。
有机物是MS培养基中的第三个重要成分，有机物的主要作用是为
植物提供能量和营养，促进其正常生长和发育。
有机物中的糖类、蛋
白质和维生素等物质可被植物吸收并转化成能量。
有机物的含量对MS
培养基的品质和成果也有很大的影响。
除了以上三个主要成分外，MS培养基中还含有一些添加剂，如椰
子汁、植物生长素、生长素拮抗剂等。
这些添加剂能够增强植物的生
长性能、促进其分化和再生。
总之，MS培养基中的微量元素、无机盐和有机物等成分各具特定的作用，它们的合理配比能够提高植物的生长效果，促进组织培养工作的顺利进行。
因此，在进行植物组织培养和研究时，选择合适的培养基和合理的组分配比是非常关键的。
植物组织培养的一些注意事项
植物组织培养的一些注意事项一、常用培养基主要特性1、高盐成分培养基包括MS、LS、BL、BM、ER 等培养基。
其中MS 培养基应用最广泛,其钾盐、铵盐及硝酸盐含量均较高, 微量元素种类齐全, 其养分数量及比例均比较合适, 广泛用于植物的器官、花药、细胞及原生质体的培养。
LS、BM、ER 培养基由MS 培养基演变而来。
2 、硝酸钾含量较高的培养基包括B5 、N6 、LH、GS 等培养基。
①B5 培养基B5 培养基除含有较高的钾盐外, 还含有较低的铵态氮和较高的盐酸硫胺素, 较适合南洋杉、葡萄及豆科与十字花科植物等的培养。
②N6 培养基N6 培养基( 朱至清等1975 ) 系我国学者创造, 获国家发明二等奖, 适用于单子叶植物花药培养, 柑橘花药培养也适合, 在楸树、针叶树等的组织培养中使用效果也好。
③SH 培养基是矿盐浓度较高的一种培养基, 其中铵与磷酸是由磷酸二氢铵( NH4 H2 PO4 ) 提供的, 这种培养基适合于某些单子叶及双子叶植物的培养。
3 、中等无机盐含量的培养基①H 培养基本培养基大量元素约为MS 培养基的一半, 仅磷酸二氢钾及氯化钙稍低, 微量元素种类减少, 而含量较MS 为高, 维生素种类比MS 多。
适于花药培养。
②尼奇培养基(Niotsch 1969 ) 此培养基与H 培养基成分基本相同, 仅生物素比H 培养基高10 倍。
也适合于花药培养。
③米勒培养基(Miller 1963 ) 此培养基和Blaydes(1966) 培养基二者成分完全相同。
适合大豆愈伤组织培养和花药等培养用。
4 、低无机盐培养基大多情况下用于生根培养基。
有以下几种:①改良怀特培养基(White 1963 )②WS 培养基(Wolter & Skoog 1966)③克诺普液( Knop 1965 ) 花卉培养上用得多。
④贝尔什劳特液(Berthelot 1934)⑤HB 培养基( Holley & Baker 1963) 此培养基在花卉脱毒培养和木本植物的茎尖培养中效果良好。
培养基的组成、配制与灭菌
1、大量元素：
组织培养中，各种矿质营养主要从培养基中获得， N、P、K、Ca、Mg、S等6种大量元素依靠各种无机 盐提供。
不同植物种类和不同试验目的对元素的使用量要求 不同，需经试验确定。
目前已选择出多种培养基配方用于植物组织培养。 其中以MS应用最广泛。
通常激素母液浓度生长素类为0.1~0.5 mg/ml, 细 胞分裂素母液浓度为0.2~1.0 mg/ml.
四、培养基的配制：
1、量取母液：营养元素和激素。 2、称量蔗糖、琼脂，放入600ml左右蒸馏水的锅 内，电路上加热，使琼脂溶化。 3、加入母液，混合均匀，调整pH值。 4、分装入瓶，每瓶40－50ml。 5、封口：用4－6层称量纸封口，之后灭菌备用。
在植物组织培养中，主要通过植物激素 及生长调节物质对离体的组织、器官的形 态发生进行调控。包括诱导细胞分裂、愈 伤组织的生长、根芽的分化以及体细胞胚 胎发生等。
常用的植物激素及生长调节物涉及五大类植物 激素：
1、生长素类：IAA、IBA、NAA、2，4-D 2、细胞分裂类：6-BA、KT（Kin）、ZT、2ip 3、赤霉素类：GA3、GA4、GA7 4、脱落酸：ABA 5、乙烯：ETH
五、培养基的灭菌（高压蒸汽灭菌）：
1、加热：
灭菌前检查灭菌锅内水量是否充足， 然后将培养基放于灭菌锅内，改好盖，关 闭放气阀，打开电源，加热升温。
2、排气：
当温度升至0.5kg/cm2时，打开放气阀 彻底排出锅内冷空气。然后关闭放气阀， 促使压力继续上升。
3、温度控制：
当锅内压力升至1.1kg/cm2时，计时15－20 分钟，计时结束后，关闭电源。
二、培养基的类型： 1、高盐浓度培养基：MS、B5、SH等。
植物组织培养 第2章 培养基及其配制
• (3)K • 作用：对碳水化合物合成、转移、以及氮素代
谢等有密切关系。一般为1—3mg／L为好。 • 供应物质：KCI、KN03等盐类提供。
• (4)Mg、S和Ca • Mg-是叶绿素的组成成分，又是激酶的活化剂；
S-是含S氨基酸和蛋白质的组成成分。 • Ca-是构成细胞壁的一种成分，Ca对细胞分裂、
常用的培养基及特点如下：
• (1) MS培养基 1962年，Murashige和Skoog，培养烟草细胞。 • 特点：无机盐和离子浓度较高，为较稳定的平衡溶液；硝酸
盐含量较其他培养基为高；应用广泛—基本培养基 。 • (2) B5培养基 1968年，Gamborg等，培养大豆根细胞。 • 特点：含有较低的铵，对有些植物的生长有抑制作用；适宜
• (5) KM—8P培养基 1974年，原生质体培养。 • 特点：有机成分较复杂，它包括了所有的单糖和维生素，广
泛用于原生质融合的培养。
二、培养基的成分
水、无机盐、有机物、天然复合物、 植物激素、培养体的支持材料、抗生素、 活性炭等。
• （一）水
是植物原生质体的组成成分，也是一切代谢过 程的介质和溶媒。它是生命活动过程中不可缺 少的物质。
种代谢活动，对生长、分化等有很好的促 进作用。
• V活B力l(盐有酸重硫要胺作素用)。：对愈伤组织的产生和生
• VB6(盐酸吡哆醇)：能促进根的生长。 • Vpp(烟酸)：与植物代谢和胚的发育有一定
关系。
• Vc（抗坏血酸）：有防止组织变褐的作用。 (酚类物质-醌)
一般用量：0．1—1．0mg／L。有时用量 较高。有时还使用生物素、叶酸、VB12等。
碳水化合物 最常用的碳源是蔗糖，葡
培养基的一般常用成分
（一）水制备培养基必须使用纯净的，无微量金属，杀菌性和抑菌性化学物质的蒸馏水。
注意，以加氯的水进行蒸馏所得的蒸馏水，即使在使用前通过离子交换树脂，也偶含有显著量的游离氯．所以应进行测试，如正联甲苯胺试验显色。
测试后，以硫代硫酸钠中和后或进行重复蒸馏后才能使用。
（二）琼脂琼脂俗称洋菜，英文名agar ，为由海藻类（主要足石花菜）提取出来的一种胶体多糖，即半乳聚糖水解后，产生半乳糖及少量五烷糖和有机硫。
其化学性质系为一种不带侧链的半乳聚糖甙，含有90%右旋半乳糖和10％左旋半乳糖。
在约每10个吡喃半乳糖单位有一个首位或次位的羟基被硫酸脂化。
其阴离子脂组（-SO2 -OH ）主要是与钙结合，但也有少数是和镁、钠、或钾结合。
其制造方法，一般是在每年7-9 月收集海中石花菜，洗涤并经晒干后保存。
于冬季冰冻开始时，按1：30 比例将干藻放入水中煮沸，然后加入硫酸少许并煮沸5-6 小时。
过滤后待冷，用“漏子”推成粗条，再经日晒夜冻2-3 周后，即成条状琼脂。
除少数菌种外，绝大多数细菌都不能分解琼脂，因而琼脂在培养某中无营养价值，只是在液体培养基中凝结成半固体或固体培养基而已。
国外商售琼脂一般比较纯净，国内琼脂则含有杂质较多，故在使用前应先用冷水浸泡洗涤后才能使用。
供细菌培养使用的品质优良的琼脂应具有下列特性：( l ）凝固点不超过2 ℃，通常范围在34～38 ℃。
( 2 )1L 的1.5%琼脂，在蒸汽浴中重新完全溶化，不超过45 分钟。
( 3 ）在98 ℃能完全溶解子水。
( 4 ）在45 ℃仍保待足够的液态，以利于试验时的混合均匀。
( 5 ）与水的结合水平至少在50%以上，以保证完全的溶解性。
（6）含水量不超过原重17%。
( 7 ）燃烧残余物不超过3 %。
（8）金属最高允许含量，铅0.0005%，铁0.001%，镁0.1%，钙0.2%，钠0.4%，并不得含有抗菌物质。
( 9 ）透明度：在蒸馏水中加热溶解后，呈微乳白色透明凝块。
植物组织培养培养基及其配制
（四）天然复合物
• 其成分比较复杂，大多含氨基酸、激素、
酶等一些复杂化合物。它对细胞和组 织的增殖与分化有明显的促进作用，
于双子叶植物特别是木本植物。
• (3) White培养基 1943年，White，培养番茄根尖。 • 特点：无机盐数量较低，适于生根培养。
（养4。）N6培养基 1974年，朱至清等，水稻等禾谷类作物花药培
广特泛点应：用成于分小较简麦单、，水K稻N及O其3和他（植N物H4的）花2S药O4培含养量和高其。他在组国织内培已 养。
种代谢活动，对生长、分化等有很好的促 进作用。
• V活B力l(盐有酸重硫要胺作素用)。：对愈伤组织的产生和生
• VB6(盐酸吡哆醇)：能促进根的生长。 • Vpp(烟酸)：与植物代谢和胚的发育有一定
关系。
• Vc（抗坏血酸）：有防止组织变褐的作用。 (酚类物质-醌)
一般用量：0．1—1．0mg／L。有时用量 较高。有时还使用生物素、叶酸、VB12等。
提供能量，而且也促进对N的吸收，增加蛋白质在植物体中的积 累。
• (3)K • 作用：对碳水化合物合成、转移、以及氮素代
谢等有密切关系。一般为1—3mg／L为好。 • 供应物质：KCI、KN03等盐类提供。
• (4)Mg、S和Ca • Mg-是叶绿素的组成成分，又是激酶的活化剂；
S-是含S氨基酸和蛋白质的组成成分。 • Ca-是构成细胞壁的一种成分，Ca对细胞分裂、
常用的培养基及特点如下：
• (1) MS培养基 1962年，Murashige和Skoog，培养烟草细胞。 • 特点：无机盐和离子浓度较高，为较稳定的平衡溶液；硝酸
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進氧的釋放和NADP(輔酶)的還原。
由於Fe元素很不安定，很容易產生沉澱， 因此在配製培養基時，常將FeSO4與嵌合劑 乙二胺四乙酸鈉(Na2EDTA)先分別配成溶液， 再相互混合成嵌合鐵，以防止沉澱，並幫 助植物吸收。
為了使用方便，無論是大量元素還是微量 元素，都要先配製成母液(Stock solution)，並貯存在4℃的冰箱中。
常用的微量元素分列如下：
鐵(Fe)：FeSO4。
鋅(Zn)： ZnSO4 。
銅(Cu)：CuSO4。
鈷(Co)：CoCl2 。
鉬(Mo)：Na2Mo4。
鋁(Al)：AlCl3 。
鎳(Ni)：NiCl2。
2.有機營養成分 ─ 包括維生素来自氨基酸。 3.植物生長調節物質 ─ 包括植物激素及植
物生長調節劑。 4.碳水化合物(醣類)。 5.其他 ─ 部分培養基會添加活性碳、滲透調
節劑或天然植物組織提取物，如椰子水等。 6.固定劑，如洋菜。
一、無機營養成分
無機營養成分就是植物所需的礦物質或無機元素 對植物的生長、發育產生非常重要的作用。如： 1.氮(N)、硫(S)、磷(P)是蛋白質、氨基酸、核酸 和許多生物酶主要的組成份，其與上述物質的結 構、功能、活性有不可或缺的關係。 2.N佔蛋白質含量的16-18%，是植物的生命元素； P是高能化合物ATP的主要成份，在能量代謝及生 物合成中扮演重要角色，P也是DNA的組成份之 一，與生物的遺傳、代謝及生長發育有直接的關 係。
3.K在纖維素、木質素的合成過程中扮演重 要角色，也是體內多種酶的活化劑，K元素 充足能使莖桿堅韌，植株強壯。
4.S是胱氨酸及甲硫氨酸等含硫氨基酸的主 要成分，與蛋白質的合成有關。
5.鎂(Mg)是葉綠素分子結構的一部分，缺鎂 則葉綠素合成受阻，植物無法進行光合作用； Mg也是染色體的組成分，參與細胞的分裂過 程。
沒有任何一種培養基可以適合所有類型的植物， 或其組織器官，也沒有任何一種培養基可適合同 一種植物各階段的生長及發育，目前所使用的培 養基都是在前人研究的基礎上經過綜合分析及改 進而成的。
目前所使用的各種培養基，其主要成分大致可將 其分劃分為幾大類，包括：
1.無機營養成分 ─ 含大量元素、微量元素 及鐵鹽。
第三章 植物組織培養常用的成分培養基
培養基的成分直接關係到培養物的生 長及分化，因此了解培養基的成分、特點 及其配製對實驗的成功與否至關重要。自 然狀態下生長的綠色植物由於能進行光合 作用，並能合成自身生長發育所需的有機 成分及生長因子，因此只要吸收土壤中的 無機礦物元素就能正常的生長。
進行植物組織培養時，由於只是切取植物體的一 部分，他們無法合成生長發育所需的全部物質 ， 加上人們對植物體的各種組織和器官所需營養成 分的了解不多，因此對培養基組成分的探索曾走 過一段漫長極艱辛的路程。
三.植物生長調節物質
植物生長調節物質是一類調節植物生長發 育的物質。植物生長物質可分為兩類；其 一為植物激素，另一類是植物生長調節劑。 植物激素是指自然狀態下，在植物體內合 成，並可運送到植物的其他部位來調節植 物生長與分化的微量(1μmole/L以下)有機物。 植物生長調節劑是指一些具有植物激素活 性的物質。
活化醣解作用以及作為三羧酸循環中某 些酶的活化劑。
3.B ─ 能促進糖的運輸，影響植物花器的發育 和受精作用，還具備抑制有毒酚化合物的形 成。缺B時細胞分裂停滯，癒傷組織表現老化 現象。
4.Zn ─是吲哚乙酸生物合成的必需元素，也是 谷氨酸脫氫酶、乙醇脫氫酶的活化劑。
5.Cu ─是細胞色素氧化酶、多酚氧化酶的成 分，可影響細胞的氧化還原反應。
(一)大量元素 ─ 常用大量元素分列如下：
1.氫(H)、碳(C)、氧(O)：H2O、糖。 2.氮(N)：(NH4)2SO4、NH4H2PO4、KNO3、
Ca(NO3)2及NH4NO3等。 3磷(P)：KH2PO4、NH4H2PO4及NaH2PO4等。 4.鉀(K)：KNO3 及KCl。 5.鈣(Ca)：CaCl2及Ca(NO3)2 。 6.鎂(Mg)：MgSO4及MgCl2。 7.硫(S)：各種硫酸鹽。
植物生長調節物質既可以刺激植物生長， 也可抑制植物的生長，對植物生命活動起 真正的調節作用。在植物組織培養中使用 的生長調節物質主要有生長素(Auxins)和 細胞分裂素(Cytokinin)，少數培養基中還 添加徒長激素(激勃素GA3)、離酸(abscisic acid)及乙烯(ethylene)等。
6.鈣(Ca)是細胞壁的組成份，同時與糖的運 轉有關，缺乏時細胞壁形成受阻，幼苗腐爛 壞死。Ca也是細胞中重要的信息分子，能活 化各種酶，以調節植物對環境的改變。
7.根據植物對不同元素需要量的多寡，而將 元素區分為大量元素及微量元素，大量元素 在培養基中的濃度大於0.5mmol/L，而微量 元素的濃度則小於0.5mmol/L。
(二)微量元素
培養基中的微量元素包括鐵(Fe)、錳(Mn)、銅 (Cu)、鋅(Zn)、氯(Cl)、硼(B)、鉬(Mo)等。這些 元素有的能影響蛋白質及酶的活性，有的參與生 物新陳代謝的調節或參與某個生命活動的過程。 例如： 1. Fe ─ 是酶的重要組成份也與葉綠素的成分有
關，缺鐵時細胞分裂停止。 2. Mn ─ 在葡萄糖分解過程中扮演重要角色，能
碘(I)：KI 。
錳(Mn)：MnSO4 。
硼(B)：H3BO3 。
二.有機營養成分
有機營養成分包括維生素及氨基酸等。維生素在某 些酶系統中具有催化作用，能加速酶功能的發揮， 硫氨素(Thiamin，維生素B1)幾乎是所有植物都需 要的維生素，缺少維生素B1時離體培養的根就不能 生長。鹽酸呲哆醇(Pyrodoxin，維生素B6)和烟酸 (Nicotinic acid，維生素F)可刺激植物的生長。 此外，一般會用到的維生素還包括維生素A，抗壞 血酸(Ascorbic acid，維生素C)、維生素H(Biotin) 及葉酸(Folic acid，維生素H)等，其中ascorbic acid可防止維生素B1氧化而失去作用，並可延緩培 植體的褐化；葉酸在光培養下可促進組織增殖，但 在暗培養下則呈抑制的現象。