HPLC梯度洗脱法同时测定刺五加注射液中紫丁香苷与刺五加苷E含量
HPLC法测定刺五加软胶囊中刺五加苷E的含量
210科技创新导报 Science and Technology Innovation Herald学 术 论 坛刺五加软胶囊是由刺五加浸膏、精制玉米油等成分混合制成的中药软胶囊,具有益气健脾、补肾安神的作用。
临床用于体虚乏力,食欲不振,腰膝酸痛,失眠多梦。
本文参考有关文献[1～4],建立了高效液相色谱法(HLPC)测定刺五加软胶囊中刺五加苷E 的含量方法,实验结果表明,该法操作简便、准确、重现性好,可作刺五加软胶囊中刺五加苷E 的质量控制方法。
1 仪器与试药1.1仪器Agilent1100型高效液相色谱仪,紫外检测器;TU-1901紫外分光光度计(北京普析通用仪器有限责任公司);十万分之一天平(梅特勒)。
1.2试药刺五加苷E对照品(中国药品生物制品检定所提供批号111713-200502供含量测定用);刺五加软胶囊(自制批号:20100301、20100302、20100303规格为0.3g);乙腈为色谱纯,水为去离子水,其他试剂为分析纯。
2 方法与结果2.1色谱条件与系统适用性试验色谱柱:Diamonsil C18(250mm×4.6mm,5μm);乙腈-0.1%磷酸溶液(15:85);流速:1.0ml/min;检测波长:210nm;柱温:室温;进样量:10μl,理论板数以刺五加苷E 峰计不得低于2000。
2.2对照品溶液的制备精密称取刺五加苷E对照品5.08mg,置于50ml量瓶中,先用2ml50%甲醇溶解,再加甲醇溶解并定容至刻度,摇匀,配成浓度为101.6g/ml的甲醇溶液。
再精密量取该甲醇溶液5ml置10ml量瓶中,加甲醇定容至刻度,制成含刺五加苷E50.8g/ml的对照品溶液。
2.3供试品溶液的制备取本品10粒,除去胶皮取内容物,精密称定,取相当于2粒的量,精密称定。
置250ml三角瓶中,加10ml正已烷,混合均匀后移入分液漏斗中,依次用20,10,10ml乙腈提取三次,合并乙腈层于蒸发皿上蒸发至干,用1ml甲醇溶解,取SPE-C18小柱(依次用10ml甲醇和10ml纯化水洗涤,吹干),上样,用甲醇洗脱至25ml容量瓶中,控制流速在1ml/min,定容,即得。
HPLC法测定刺五加浓缩液中紫丁香苷的含量
HPLC法测定刺五加浓缩液中紫丁香苷的含量作者：孔祥臣闫秋野林兰波王厚伟来源：《中国实用医药》2010年第06期【摘要】目的采用高效液相色谱法测定刺五加浓缩液中紫丁香苷的含量。
方法选用AgilentC18色谱柱,流动相:甲醇-水(20:80);检测波长:265 nm。
结果紫丁香苷对照品线性范围0.130 5～1.044 0μg(r=1.000 0),平均回收率为99.42%,RSD=0.82%(n=6)。
结论 HPLC法简便,准确,重现性好。
可用于刺五加浓缩质量控制。
【关键词】刺五加浓缩液;紫丁香苷;HPLCDetermination of syringin in ciwujia concentrated liquid by HPLCKONG Xiang-chen, YAN Qiu-ye,LIN Lan-bo,et al.Heilongjiang agricultural college of vocational technology, Heilongjiang Jiamusi 154002,China【Abstract】 Objective A HPLC methods was developed for the contents determination of Syringin in Ciwujia Concentrated Liquid.Methods The AgilentC18 column was used with a mobil phase was Methanol-Water(20:80).The detection Wavelength was 265nm.ResultsThe Linear range of reference substance of Syringin was 0.130 5-1.044 0 μg(r=1.000 0),The average recovery rate was 99.42%and the RSD=0.82%(n=6).Conclusion The method simple,sensitive and accurate.It can be used for quality of Ciwujia Concentrated Liquid.【Key words】 Ciwujia Concentrated Liquid;Syringin;HPLC作者单位:154002黑龙江省农业职业技术学院刺五加浓缩液为生产刺五加注射液的原料,厂方内控标准仅采用可见-紫外分光光度法测定总黄酮的含量,笔者采用高效液相色谱法对刺五加浓缩液中活性成分紫丁香苷进行含量测定,方法简便,结果准确,可做为刺五加浓缩液的质量控制方法。
刺五加中两种主要活性成分的含量比较
刺五加中两种主要活性成分的含量比较【摘要】目的：观察刺五加中紫丁香苷和刺五加苷E的含量。
方法：采用HPLC法，AgilentZorbaxSB·C18(4．6mm×250mm，5斗m)色谱柱，以甲醇．乙腈m．1％磷酸溶液(5：10：85)为流动相，流速1．0ml／min，检测波长为210nm，进样量为10ml/min，测定刺五加苷E的含量；《中国药典)2010年版一部方法测定紫丁香苷的含量。
结果刺五加苷E质量浓度在0．02032—0．2032mg／ml范围内与峰面积呈良好的线性关系(r=0．9999)，加样回收率97．7％，RSD=0．56％(n=9)。
结论：测定刺五加中刺五加苷E的含量非常必要。
【关键词】刺五加；HPLC；含量测定刺五加是刺五加科植物的一种，其以干燥根茎入药，功能主治为益气健脾，其对于脾肺气虚有着很好的疗效同时也可以有效补肾安神，用于治疗食欲不振、缓解肾虚腰膝方面的病症作用显著，并且也可以治疗失眠。
现在刺五加是我国的一种重要的中药饮片，并且收录于我国的药典当中，并且对于其中的活性物质含量和其他有效成分都提出了相应的要求。
刺五加在我国明朝时就被李时珍的本草纲目所载，以五叶相交而得名，并且对于其在风湿和强筋壮骨方面的作用加以肯定。
刺五加药物当中，药效主要发挥成分是丁香苷和刺五加苷e以及异嗪皮啶，其对于关节肿胀的缓解作用非常明显，可以有效改善关节炎的症状，在临订应用当中并无明显缺点。
其中最为重要的两种有效成分就是刺五加苷e和紫丁香苷，针对其进行有效测定作用非常重要。
一、试验方法（一）色谱条件与系统适用性试验色谱柱：AgilentZorbaxSB-C18柱(4．6mm×250mm，5恤m)；柱温为30℃；流动相：甲醇．乙腈m．1％磷酸溶液(5：10：85)；流速：1．0ml／min；检测波长：210rim；进样量10“l。
作者单位：063000河北唐山市食品药品检验中心在上述色谱条件下，理论板数按刺五加苷E峰计不低于2500。
应用HPLC法测定刺五加中紫丁香苷的含量
应用ＨＰＬＣ法测定刺五加中紫丁香苷的含量作者：王晓鹏来源：《中国新技术新产品》2008年第16期摘要：目的：采用高效液相色谱法测定不同产地刺五加中紫丁香苷的含量。
方法：采用C18柱，流动相：甲醇-水（20：80），流速：1.0ml/min，检测波长：265nm。
结果：伊春产刺五加紫丁香苷含量最高；但五个产地中刺五加紫丁香苷含量均远高于2005年版《中华人民共和国药典》一部中关于刺五加紫丁香苷含量的要求。
关键词：高效液相色谱法；刺五加；紫丁香苷刺五加为五加科植物刺五加的干燥根及根茎或茎[1]。
国内外对刺五加的药理作用研究表明：刺五加可增强机体非特异性防御能力，除具有免疫调节、抗肿瘤、抗衰老、抗辐射损伤及抗疲劳等作用外，还可治疗心血管疾病、糖尿病及神经衰弱等症[2]。
本文以紫丁香苷含量为指标，采用高效液相色谱法对不同产地刺五加中紫丁香苷进行含量测定，研究紫丁香苷在不同产地的含量分布规律，为刺五加药材的优质供应提供理论依据及参考。
1 仪器与药品岛津LC-2010AHT型高效液相色谱仪；试剂：甲醇为色谱纯，水为娃哈哈纯净水，其余试剂为分析纯。
紫丁香苷由中国药品生物制品检定所提供；样品分别在黑龙江尚志、林口、伊春、铁力、绥棱采集，阴干，粉碎，过60目筛。
2 色谱条件色谱柱：HYPERSIL C18 （4.6mm× 150mm5?m）；检测波长：265nm；流速：1.0ml/min；流动相：甲醇-水（20：80）。
3 线性关系考察3.1对照品溶液的制备精密称取紫丁香苷约3.15mg置25ml容量瓶中，用甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，即得。
3.2标准曲线绘制取紫丁香苷对照品溶液分别进样1、3、5、10、15、20?l ，以进样量与峰面积进行线性回归，线性研究结果见表-1。
以进样量（?滋g）为横坐标，峰面积积分值为纵坐标，绘制标准曲线，回归方程为Y=2.354×105X+7675 (r=0.9999)；线性范围为0.126～2.520?滋g。
用HPLC法测定刺五加根叶中紫丁香苷的质量分数
ＨＰ Ｃ Ｔ ｅｍ ｓ ａｔ ｎｏ ｒ ｇ ｏ ｏｔ ｆｒ ｔ ｆ ｃｎｈｐ ｎｘｓｎｉ ｓｓｉ Ｌｎｉｎ ．６ ％ ， ｅ Ｌ ． ｈ ａｓｆ ｃｉ ｆｓ ｉ ｉ ｆ ｍ ｃｒ ｘｏ ｏ ｏ ａ ｔｏａａ ｅｔｏｕ ｎ ｉ ａｇｉ ０ ４ ６ ｔ ｒ ｏ ｙｎ ｎ ｒ ｅ ｏ Ａ ｃ ｊ ｓ ｈ
ｆｏ ｅ ｒｅ ｆｓｅ ｏ ａ ｔ ｏ ａｎ ｘ ｓ ｎ ｉｏ ｕ ｓ０． ６％ ； ｅ ｍａ ｓｆａ ｔ ｎ ｏ ｙ ｉｇｎ ｆｏ ｃ ｒｅ ｆ ｒ ｏ ｆ ｒ ｍ ｏ ｔｘ ｏ ｔ ｍ ｆＡｃ ｎ ｈ ｐ ａ ｅ ｔ ｓ ｓ ｉ ３１ ｃ Ｔｈ ｓ ｒ ｃｉ ｆ ｓ ｒｎ ｉ ｒ ｍ ｏ ｔｘ ｏ ｏ ｔｏ ｏ
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刺五加中两种主要活性成分的含量比较
膝酸痛 ， 心脾不足 ， 失 眠多梦。其是《 中国药典》 ２ ０ １ ０ 年 版一 部 收载 的 中药饮 片 品种 ， 其 检 验标 准 规 定 了其 活性成 分 紫丁香 苷 的含 量 限 度 ｊ ， 并 没有 对 其 他 活 性 成分进行控制。明朝李时珍《 本草纲 目》 称刺五加 ， 以
１ ． ２ 试药
刺 五加 苷 Ｅ对 照 品 （ 批号 １ １ １ ７ １ ３ ． ２ ０ ０ ５ ０ ２
中国食 品药 品检 定研 究 院 ） ； 刺 五加 样 品 １ ６批 （ 经 本 中心 中药 鉴别 师 张继 强 确认 均 为 正 品 ） ； 乙腈 、 甲醇 为 色谱 纯 ， 磷 酸 为优 级纯 ， 水为 纯化 水 。
五 叶交 加 者 良 ， 故 名 五加 。五加 治 风 湿 ， 壮筋骨 ， 其 功
２ ． ２ ． １ 对 照 品溶液 的制 备 ： 精 密称 取五 氧化 二磷 减 压 干燥 的刺五加 苷 Ｅ对 照 品适 量 ， 加 甲醇 制成 每 １毫 升
含０ ． １ ｍｇ的溶 液 ， 作为 对照 品溶 液 。 ２ ． ２ ． ２ 供 试 品溶 液 的制 备 ： 取 本 品粗粉 约 ２ ｇ ， 精密 称 定， 置２ ５ ｍ ｌ 量瓶 中 ， 加 甲醇 适量 ， 超 声处 理 ３ ０ ｍｉ ｎ ， 放
【 关键 词】 刺五加 ； Ｈ Ｐ Ｌ Ｃ ； 含 量测定 【 中图分类号】 Ｒ ９ １ ７ 【 文献标 识码 】 Ａ
【 文章编 号】 １ ０ ０ ２—７ ３ ８ ６ （ ２ ０ １ ５ ） １ ８— ２ ８ ４ ７— ０ ３
刺 五 加 是 五 加 科 植 物 刺 五 加 的 干燥 根 和 根 茎 或
品溶液 。 ２ ． ３ 专 属性 考察 精 密量取 ． ２ ． ２项下 的对 照 品溶液 、
刺五加注射液中3个主要活性成分与相应单体在大鼠体内的药动学比较
刺五加注射液中3个主要活性成分与相应单体在大鼠体内的药动学比较标签：紫丁香苷；刺五加苷E；异嗪皮啶；刺五加注射液；药动学比较刺五加注射液是刺五加药材经“水提醇沉”法提取制成的棕红色灭菌溶液，临床上主要用于肝肾不足所致的短暂性脑缺血发作、脑动脉硬化、脑血栓和脑栓塞。
亦可用于冠心病、心绞痛合并神经衰弱和更年期综合症等。
紫丁香苷、刺五加苷E及异嗪皮啶是从刺五加中分离得到的3种有效活性成分，分别属于苯丙素类、木脂素类和香豆素类化合物，是刺五加注射液发挥药效作用的物质基础[1-3]。
药理实验表明，单体紫丁香苷、刺五加苷E及异嗪皮啶分别具有调节免疫功能[4-5]，保护心肌[6]，保护神经系统[7-8]，抗肿瘤[4]以及抗氧化[9]等作用。
目前国内外对刺五加注射液中紫丁香苷、刺五加苷E的药代动力学研究已有报道[11]，而对刺五加注射液中异嗪皮啶在大鼠体内的药代动力学研究未见报道。
本实验通过液相色谱质谱联用技术，考察静脉给予刺五加注射液后紫丁香苷、刺五加苷E及异嗪皮啶在大鼠体内药代动力学行为，与分别静脉给予3个单体药物后的药代动力学行为进行比较，初步探索刺五加注射液中共存成分对3个有效成分药动学行为的影响，为临床合理用药提供依据。
1 材料1.1 仪器Agilent1200高效液相色谱仪购自美国Agilent公司，包括G1322A 在线脱气机、G1312B二元泵、G1367D自动进样器、G1316B DAD检测器等模块；Agilent6410三重四级杆串联质谱仪购自美国Agilent公司，配备电喷雾（ESI）离子源；TGL-16G高速台式离心机，购自常州澳华仪器有限公司；SK-1快速混匀器涡流混悬仪，购自常州澳华仪器有限公司。
1.2 试药及试剂紫丁香苷、刺五加苷E、异嗪皮啶、牡荆苷（内标物质）均购于沈阳泷浦科技有限公司，纯度均>98%，批号分别为LPZ022，LPC031，LPQ069，LPM041。
刺五加注射液购自黑龙江乌苏里江制药有限公司，批号20120112，规格250 mL/支。
【推荐下载】不同产地刺五加中刺五加苷E含量的高效液相色谱测定
不同产地刺五加中刺五加苷E含量的高效液相色谱测定 【编者按】医药论文是科技论文的一种是用来进行医药科学研究和描述研究成果的论说性文章。
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不同产地刺五加中刺五加苷E含量的高效液相色谱测定 作者：吴少杰，邢朝斌，劳凤云，赵宝瑞 【摘要】目的建立刺五加中刺五加苷E含量的测定方法，并比较不同产地的刺五加中刺五加苷E含量，为进一步研究不同品系的刺五加中刺五加苷E的含量与其遗传学的关系奠定基础。
方法刺五加苷E的提取采用超声提取法;选用YMC ODS色谱柱(150 mm 4.6 mm, 5 m)，检测波长220 nm，以0.1%磷酸水溶液-乙腈(89∶11)为流动相，体积流量1.0 ml/min。
结果超声波提取法对刺五加苷E提取率稍低于溶剂提取法，但操作简便，耗时较短。
刺五加苷E的线性范围为0.625～10.004 g(r = 0.999 92);平均回收率为100.64%，RSD为2.97%。
结论建立的刺五加苷E提取和测定方法适合于快速准确地分析大量样品。
【关键词】刺五加; 刺五加苷E; 高效液相色谱法 Abstract：Objective To establish a method for determination of Eleutheroside E content in Eleutherococcus senticosus from different provenances, which will afford a base for further research on the relationship between the heritage of Eleutherococcus senticosus and the content of Eleutheroside E. MethodsA supersonic extraction method was adopted for the extraction of Eleutheroside E.HPLC determination conditions were as follows:YMC ODS column (150 mm 4.6 mm, 5 m), water containing 0.1% phosphoric acid and acetonitrile (89∶11) as mobile phase, with a flow rate of 1.0 ml/min, and UV detect wavelength 220 nm. ResultsAs compared with organic solvent extraction method, supersonic extracting method was easy and time-saving, despite its slightly low extracting rate. The linear range of Eleutheroside E was 0.625-10.004 g (r = 0.999 92),average recovery coefficient was 100.64%, RSD = 2.97%. ConclusionThe determination method is suitable for the precisely analysis of EleutherosideE. Key words：Eleutherococcus senticosus; Eleutheroside E; HPLC 剌五加为五加科植物刺五加Eleutherococcus senticosus的干燥根、茎及根茎。
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HPLC梯度洗脱法同时测定刺五加注射液中紫丁香苷与刺五加苷E
含量
【摘要】采用HPLC梯度洗脱法测定刺五加注射液中紫丁香苷与刺五加苷E 含量，表明：样品经Cosmosil C18柱，使用紫外检测器2.1.2实验方法
2.1.2.1对照品溶液的配制取紫丁香苷对照品、刺五加苷E对照品适量，精密称定，分别加50%甲醇制成每1ml各含紫丁香苷40μg、刺五加苷E40?g的溶液，即得。
3结果与讨论
3.1紫丁香苷、刺五加苷E含量的测定
3.1.1 色谱条件的选择色谱柱为以十八烷基键合硅胶为填充剂柱3.1.2.3验证方法对照品溶液的制备精密称取紫丁香苷、刺五加苷E对照品适量，加甲醇制成每1ml含0.04mg的溶液，即得。
测定法分别精密吸取对照品溶液2μl、3μl、4μl、5μl、6μl，注入液相色谱仪，测定，即得。
以测得的峰面积作为纵坐标，进样量表2 紫丁香苷含量测定准确度验证结果
实验结论：紫丁香苷、刺五加苷E峰面积积分值的RSD为0.99%，回收率90.5-99.8%之间。
3.1.4 专属性实验以刺五加提取液作为供试品，以不加样品用含量测定用溶剂水作为阴性对照验证含量测定的专属性。
表3紫丁香苷、刺五加苷E含量测定结果
相对标准偏差（%）：0.99%
专属性实验结论：含量测定：供试品在与对照品相同保留时间处，有可检测出的峰，理论板数和分离度符合系统适用性要求。
阴性对照在与对照品相同保留时间处，没有可检测出的峰。
3.1.5 样品中紫丁香苷、刺五加苷E含量测定供试品溶液的制备精密量取本品3ml（250ml规格），置10ml量瓶中，加水溶解并稀释至刻度，摇匀，即得。
测定方法分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μL（HPLC），注入液相色谱仪，测定，即得。
按实验方法测定5次。
分离度大于1.8
4 结论
样品经以上条件进行梯度洗脱，样品中紫丁香苷、刺五加苷E与相邻杂质峰分离度大于1.5，平均回收率90.5-99.8%之间，变异系数RSD<4%。
此方法适合进行两有效成份的检测。
参考文献
[1]中华人民共和国药典2010年版二部
[2]杨书良、杨渡等。
大孔吸附树脂富集刺五加中紫丁香苷和刺五加总苷的研究[J]中草药2008.39（9）1327
[3]刘树民杨补科卢芳等。
刺五加苷B、苷E在体外大鼠肠道菌群中的代谢中国药师2011.08-1092。