基因工程复习ppt

二、基因表达载体的构建——核心 1.过程:
（1）用_限__制__酶__切下目的基因，使其产生黏__性__末__端_。
（2）用同__种__限__制__酶_ 切割质粒，使其出现一个切 口，露出相__同__的__黏__性__末__端。
（3）将切下的目的基因片段插入质粒的__切__口__处， 再加入适量_D_N_A_连__接__酶___，形成了一个重组质粒
转基因牛
用大肠杆菌生产人类生长激素
目的基因： 人类生长激素
过程：
获取目的基因 构建基因 （人生长激素基因） 表达载体
重组载体导 入大肠杆菌
（Ca2+处理法）
筛选出含有重组 载体的受体细胞
目的基因的 检测和鉴定
工程菌
（选择性培养基）
表达成功的标志是？
大肠杆菌生产出人类生长激素
抗虫棉 叶子
正常棉 叶子
性同位素标记的 耐盐基因 作探针进行分子杂交检测， 又要用 将转基因水稻移栽到盐碱地方的法从个体
水平鉴定水稻植株的耐盐性。
3、将人的生长激素基因导入细菌细胞内制造“工程菌”。
1）在此转基因工程中，目的基因是 生长激素基因
2）将质粒与生长激素基因结合构建重组载体的过程通常
是在 体外 完成的，此过程必须用的的工具酶是
3）经过转化后，有的细胞可能导入了重组载体， 利用选择性培养基 就可以把含有重组载体的受体 细胞筛选出来。
3）将重组质粒导入细菌，常用的方法是用 Ca2+ 处理细菌，作用是 增加细菌细胞壁的通透性，
使细菌吸收重组质粒的能力增强
4）获得转基因动物，需要将目的基因导入动物的 受精卵 中，原因是 受精卵具有全能性，
可使目的基因在相应的组织细胞表达
5）将目的基因导入双子叶植物细胞，常采用 农杆菌转化法。目的基因能否在此植物体内稳定遗 传的关键是 目的基因是否整合到植物细胞染色体上 可以用 DNA分子杂交技术进行检测。
若要检测胰岛素基因是否插入到细菌DNA上，可用 放射性同位素或荧光物质标记的胰岛素基因 作探针 与细菌DNA杂交，该杂交技术称为 DNA分子杂交技术
（4）重组质粒中抗生素抗性基因的作用是？ 鉴别和筛选含有目的基因的受体细胞
2002年，中国转基因棉花达到150万公 顷，已经占到棉花产量的1／3.
我国大豆食用油近七成是“转基因”产 品与杂交育种、诱变育种相比较，基因工程育 种的优点有哪些？ 目的性强、克服远源杂交不亲和性、育种周期短
抗虫基因作物的意义？
限制酶和DNA连接酶 3）通常用 感受态细胞法 法将重组载体导入受体细胞
4）转化完成后得到的细菌，实际上有的根本没有导入重
组质粒，所以在基因工程的操作步骤中必须要有 筛选
5）若将重组质粒导入细菌后，目的基因在“工程菌”中
表达成功的表志是什么工？程菌生产出人的生长激素
转基因抗虫棉的培育过程
目的基因： 抗虫基因（Bt毒蛋白基因）
（3）从乳汁中源源不断获得目的基因的产物的同 时，转基因动物又可无限繁殖。
乳腺生物反应器
将药物蛋白基因与乳腺蛋白基因的启动子等 调控组件重组在一起，通过显微注射等方法， 导入哺乳动物的受精卵中，将受精卵送入母 体，使其发育成转基因动物。转基因动物进 入泌乳期后，可以通过分泌乳汁生产所需要 的药品，称为乳腺生物反应器或乳房生物反 应器。
3）人的胰岛素基因之所以能“嫁接”到大肠杆菌 的DNA上，原因是 人的胰岛素基因和大肠杆菌DNA分
子的空间结构、化学组成相同
1)将带有目的基因的重组载体与相应的受体细胞放 在一起培养，通过一定方式进行诱导，使重组载体 进入受体细胞，且能在受体细胞内稳定存在和表达 的过程过程称为 转化
2）由于重组DNA分子成功导入受体细胞的频率 低 所以在转化后通常需要进行 筛选 操作。
SUCCESS
THANK YOU
2020/1Leabharlann 13建立生物反应器（用转基因的动物生产药物）
设问:就基因药物而言，最理想的表达场所是哪里？
转基因动物的乳腺。
设问:为什么乳腺能成为基因药物最理想的表达场所呢？
（1）乳腺是一个外分泌器官，乳汁不进入体内循 环，不会影响转基因动物本身的生理代谢反应。
（2）从乳汁中获取目的基因产物，产量高，易提 纯，表达的蛋白质已经过充分的修饰加工，具有稳 定的生物活性。
1、基因工程的工具有哪些？ 2、限制酶的作用特点？ 3、基因表达载体有何功能？ 4、基因表达载体上的启动子的功能？ 5、核酸探针的制作方法？
1)基因工程中，除质粒外，噬菌体 和 动植物病毒 也可作为运载体。 2）目的基因获取后，需要进行 基因表达载体的构建 其组成必须有 启动子、目的基因、终止子、标记基因 此步骤是基因工程的核心。
若要检测胰岛素基因是否翻译成胰岛素，可采用 抗原—抗体杂交 检测
1、要确定抗虫基因导入受体细胞后，是否能够稳定遗传 并表达，需要进行分子水平的检测和个体水平的鉴定工 作。请写出在个体水平上的鉴定过程：
让害虫吞食转基因棉花的叶子，观察害虫的存 活情况，以确定转基因棉花是否具有抗虫性状。
2、为了确定耐盐转基因水稻是否培育成功，既要用放射
过程：
获取目的基因 （抗虫基因）
构建基因 表达载体
重组载体导入 棉花体细胞
（农杆菌转化法）
目的基因 的检测和
鉴定
植物组 织培养
转基因抗虫棉
用转基因奶牛生产人类胰岛素
目的基因： 人类胰岛素基因
过程：
获取目的基因 （人胰岛素基因）
构建基因 表达载体
重组载体导 入受精卵
（显微注射法）
目的基因 的检测和
鉴定
减少农药的用量，降低了生产的成本，减少了 农药对环境的污染。
总结：什么叫转基因动物？
将目的基因导入到动物的受精卵里，目的基因若 与受精卵染色体DNA整合，细胞分裂时，该基因随 染色体的倍增而倍增，使每个细胞中都带有目的 基因，使性状得以表达，并稳定地遗传给后代， 从而获得基因产品。这样一种新的个体，称为转 基因动物。
乳腺生物反应器的优点：①产量高；②质量好； ③成本低；④易提取。
思考:用基因工程技术实现动物乳腺生物反应器 的操作过程是怎样的？
①获取目的基因（例如血清白蛋白基因） ②构建基因表达载体（在血清白蛋白基因前加 特异表达的启动子） ③显微注射导入哺乳动物受精卵中 ④形成胚胎 ⑤将胚胎送入母体动物 ⑥发育成转基因动物（只有在产下的雌性个体 中，转入的基因才能表达）。