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微生物学检验志贺菌属
志贺菌鉴定依据
肠道选择平板上无色半透明菌落 KIA：KA－－ MIU：－ ＋/－ － 与志贺菌多价诊断血清和各群血清凝集 注意与EIEC、类志贺邻单胞菌、动力不 明显的沙门菌鉴别
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与EIEC的鉴别
生化反应鉴别试验 粘质酸盐－ － －
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微生物学检验
标本采集 ◆粪便或肛拭 ◆新鲜脓血便 ◆立即送检或床边接种 ◆保存于30％甘油盐水或卡-布培养基
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检验程序
KIA MIU、IMViC
多价血清玻片凝集 菌落涂片染色
粪便或肛拭 肠道选择平板
可疑菌落
增菌
初步鉴定 最终鉴定 报告结果
因子血清凝集 系统生化反应
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沙门菌属
肠道沙门菌 邦戈沙门菌
肠道亚种
致病沙门菌多为
萨拉姆亚种
肠道亚种
双亚利桑那亚种
亚利桑那亚种
豪顿亚种
英迪加亚种
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形态染色
革兰阴性杆菌，无芽孢、无荚膜、有周 鞭毛，多数菌株有菌毛
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沙门菌
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培养特性
兼性厌氧、营养要求不高 在肠道选择培养基上呈无色半透明S型菌落 菌落，与志贺菌菌落相似。 SS平板－－无色菌落，产H2S菌株，菌落中 心呈黑色 Mac平板－－无色菌落 EMB平板－－无色菌落
我国以B群为主
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不典型菌株的鉴定
在鉴定中如遇生化反应符合，血清学不 凝集；血清学凝集，生化反应不符合， 可考虑不典型菌株。 将不典型菌株在肉汤中反复传代，促其 恢复典型性状
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志贺菌快速鉴定试验
直接凝集试验 免疫荧光菌球法 协同凝集试验 乳胶凝集试验 分子生物学方法
肠道杆菌 志贺菌属(病原生物学与免疫学课件)
所致疾病
临床表现为发热、腹痛、里急后重、粘液脓血便等。预后良好。
急性 菌痢
1
慢性 菌痢
3
中毒 菌痢
2
全身中毒症状明显，但肠道症状不明显。病 情凶险，死亡率高。
症状不典型，迁延2个月以上。
防治原则
01 早诊断、早治疗、早隔离。 02 加强饮水、食品安全
03 防蝇灭蝇，消毒排泄物 04 选用敏感抗生素志贺菌属俗称痢ຫໍສະໝຸດ 杆菌， 是人类细菌性痢疾的病 原体。
志贺菌属的分类
痢疾 志贺菌
福氏志贺菌
鲍氏志贺菌
宋内志贺菌
生物学性状
无芽 孢
革兰阴性杆菌
无荚 膜
无鞭 毛
培养特性
痢疾 志贺菌
致病性
侵袭力
内毒素
外毒素
➢菌毛：促进细菌粘附回肠末端和结肠粘膜上。 ➢内毒素：主要致病物质
内毒素血症—发热、神志障碍。 破坏肠粘膜—炎症、溃疡 、粘液脓血便 作用于肠壁植物神经系统，里急后重。 ➢外毒素：可产生志贺毒素ST，具有三 种生物学活性，肠毒性、细胞毒性、神经毒性。
志贺菌属简介
志贺菌属简介志贺菌属是人类细菌性痢疾最常见的病原菌，通称痢疾杆菌。
根据生化反应与血清学试验该属细菌分为痢疾、福氏、鲍氏和宋内志贺菌四群。
CDC分类系统（1989）将生化性状相近的A、B、C群归为一群，统称为A、B、C血清群，将鸟氨酸脱羧酶和β-半乳糖苷酶均阳性的宋内志贺菌单列出来。
我国以福氏和宋内志贺菌引起的菌痢-最为常见。
（一）生物学特性1.形态与染色：革兰阴性短小杆菌，（2～3）μm×（0.5～0.7）μm，无荚膜，无芽胞，无鞭毛，有菌毛。
2.培养特性：需氧或兼性厌氧，液体培养基中呈浑浊生长，在普通琼脂平板和SS培养基上形成中等大小、半透明的光滑型菌落，宋内志贺菌可形成扁平、粗糙的菌落医学|教育网搜集整理。
3.生化反应：志贺菌属的细菌KIA：K／A、产气-／+、H2S-，MIU：动力-、吲哚+／-、尿酶-，氧化酶-，不产生赖氨酸脱羧酶，氧化酶试验阴性。
4.抗原结构：志贺菌属只有O抗原而无鞭毛抗原，个别菌型及新分离菌株有K抗原。
（二）致病性致病物质：侵袭力：菌毛粘附于肠粘膜上皮细胞，诱导细胞内吞。
内毒素：破坏肠粘膜；肠壁通透性；肠壁植物神经——腹痛，腹泻，里急后重，粘液脓血便。
外毒素（志贺毒素，ST）：肠毒素活性；细胞毒活性；神经毒活性。
所致疾病：细菌性痢疾，简称菌痢医学|教育网搜集整理。
1.急性菌痢。
2.中毒性菌痢。
3.慢性菌痢。
传染源为病人和带菌者，经粪口传播。
（三）微生物学检验1.标本采集尽可能在发病早期及治疗前采集新鲜粪便，选择脓血便或粘液便，必要时可用肛拭子采集。
2.检验办法及鉴定（1）分离培养：取粪便（粘液或脓血部分）或肛拭标本接种GN肉汤增菌及再开展分离培养。
一般同时接种强弱选择性不一样的两个平板。
强选择鉴别培养基可用沙门、志贺菌选择培养基（SS）；弱选择培养基可用麦康凯或中国蓝培养基。
培养18～24h后选取可疑菌落开展下列鉴定。
（2）鉴定1）初步鉴定：挑选可疑菌落3～4个先用志贺菌属多价诊断血清作试探性玻片凝集试验。
食品微生物检验：志贺氏菌、弧菌课件
l 人类对志贺氏菌的易感性极高，大约10个 ~200个细菌即可使10％~50％受攻击的人致 病。 l 病后有一定的免疫力，但是免疫期短，也 不稳固。可能因细菌菌型多，各型细菌之间无 交叉免疫性之故。
2、临床症状 l 志贺氏菌食物中毒引起的细菌性痢疾可 分为急性和慢性两大类、6个不同的型。
(1) 急性细菌性痢疾 l 急性细菌性痢疾又分为急性典型、急性非 典型和急性中毒性菌痢三型。
l 此抗原可以阻止菌体抗原与相应免疫血清 发生凝集。
(五)抵抗力 l 志贺氏菌属的细菌与沙门氏菌属及其他肠道 杆菌相比，对理化因素抵抗力较低。
l 对酸较敏感，必须使用含有缓冲剂的培养基。
l 在外界环境中的生存力，宋内氏志贺氏菌 最强、福氏志贺氏菌次之，而痢疾志贺氏菌最 弱。 l 一般潮湿的土壤中能生存34d，37℃的水中 存活20d，而在冰块中可存活3个月，粪便中的 细菌在室温情况下(20℃左右)可存活11d。含 有高浓度胆汁的培养基能抑制某些志贺氏菌株 的生长。
2、耐药性变异
l 自从广泛使用抗菌素以来，志贺氏菌属的耐药菌 株不断增加，给防治工作带来许多因难。
l 国内部分地区报告，志贺氏菌对四环素的耐药率 达74％ 、氯霉素73.6％~97％ 、链霉素84％~98％、 金霉素75％~100％ 、磺胺类97％~100％ ，可见对 国内常用几种抗菌素的耐药率相当高。
l 本菌为兼性厌氧菌，但厌氧培养时，生长较不 旺盛。
l 营养要求不高，在普通培养基上易于生长。 l 最适温度为37℃左右，但在10℃~40℃范围内 亦可生长，最适pH约为7.2。
l 在固体培养基上经培养18h~24h后，菌落 圆形、透明、隆起并微凸、直径约2mm~3mm、 表面光滑、湿润、边缘整齐。
l健康带菌者是指临床上无肠道症状而又能排 出志贺氏菌者。这种带菌者是主要的传染源， 特别是在饮食上，炊事员和保育员中的带菌者 危险性更大。
第四节志贺菌属
• 生化反应
• 抗原结构
志贺菌革兰染色
志贺菌菌落特征(MAC)
志贺菌KIA（K A－－）MIU（－－－）
志贺菌IMViC试验（－＋－－）
临床意义
致病物质
所致疾病
致病物质
• 侵袭力 菌毛 • 内毒素 • 外毒素 志贺毒素
所致疾病
• 急性细菌性痢疾 • 慢性菌痢 • 带菌者
微生物学检验
（一）检验程序 （二）标本采集 （三）检验方法 （四）耐药性 （五）结果分析与报告
志贺菌检验程序
• 在抗生素使用前采集新鲜粪便中脓、血、 黏液部分，床边接种或立即送检，不能及 时接种者可用卡-布运送培养基送检，昏迷 不能排便病人可用肛拭取样。
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第四节 志贺菌属
一、分类 二、细菌特性 三、临床意义 四、微生物学检验
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志贺菌属分为A、B、C、D 4群： A 群 为 痢 疾 志 贺 菌 （ S . dysenteriae），B群为福氏志贺菌 （S. flexneri），C群为鲍氏志贺菌 （S. boydii），D群为宋内志贺菌 （S. sonnei）。 在1989年CDC分类系统中将生 化特征相近的A、B、C群归为一群， 统称为志贺菌A、B、C血清群；而 将生化特性与之相异，即鸟氨酸脱 羧酶和-半乳糖苷酶均为阳性的宋 内志贺菌单列一类。
志贺菌属检验
文件页码：1/21．概述志贺菌属分为4个群（种）：A群为痢疾志贺菌，B群为福氏志贺菌，C群为鲍氏志贺菌，D群为宋内志贺菌。
2. 标本类型粪便、肛拭子标本。
3. 鉴定3.1 形态与染色革兰阴性杆菌。
3.2 培养特性在麦康凯琼脂平板上35℃培养18～24小时，形成无色透明的小菌落。
在SS琼脂平板上呈无色透明或半透明的较小菌落。
3.3 生化反应氧化酶试验阴性，发酵葡萄糖、甘露醇，不发酵乳糖、蔗糖，三糖铁琼脂（TSI）为K/A，甲基红和硝酸盐还原试验阳性，动力、VP、枸橼酸盐、脲酶、H2S和醋酸盐试验均阴性。
3.4 鉴别要点3.4.1 本菌属特征在SS平板上无色透明或半透明的小菌落，TSI为K/A，发酵葡萄糖，不发酵乳糖，无动力，脲酶、H2S试验均阴性。
符合上述特征者，可通过血清凝集试验作出诊断。
如血清不凝集，应进一步鉴别。
3.4.2志贺菌属种间鉴别见表1表1 志贺菌属种间鉴别的关键性试验（阳性%）菌名半乳糖苷酶鸟氨酸甘露醇乳糖福氏志贺菌 1 0 95 1痢疾志贺菌30 0 0 0鲍氏志贺菌10 2 97 1宋内志贺菌90 98 99 2*注：*为迟发反应。
3.5 操作步骤3.5.1 观察菌落特征，挑取可疑菌落，做TSI试验。
参见《三糖铁试验标准操作规程》。
3.5.2 血清学鉴定参见《志贺菌血清学检测标准操作规程》。
3.5.3 鉴定从SS琼脂平板上挑取纯菌落，用微生物鉴定仪或传统生化反应进行细菌鉴定。
4. 药敏参见《药物敏感性试验标准操作规程》。
5. 质量控制参见《质量管理程序》。
6. 检验结果解释与分析一般志贺菌不进入血液，所以只取粪便和肛拭子标本作培养。
本菌大多数菌株对氯霉素、链霉素、氨苄西林耐药，多数菌株对卡那霉素、庆大霉素敏感。
7. 临床意义志贺菌属引起细菌性痢疾，表现为腹痛、发热、大量水样便，1-2日后转为少量腹泻（有里急后重现象），便中含有多量的血、黏液和白细胞。
临床主要有两种类型：急性细菌性痢疾，又分典型和不典型两种，后者症状不典型，容易造成误诊和漏诊；慢性细菌性痢疾，常因急性菌痢治疗不彻底，造成反复发作、迁延不愈，病程超过2个月以上视为慢性菌痢。
志贺菌
志贺菌的抵抗力
本菌对理化因素的抵抗力较其他肠道杆菌 为弱。对酸敏感，在外界环境中的抵抗力能 以宋内氏菌最强，福氏菌次之，志贺氏菌最 弱。一般56～60℃经10分钟即被杀死。在 37℃水中存活20天，在冰块中存活96天，蝇 肠内可存活9～10天，对化学消毒剂敏感，1% 石碳酸15～30GN增菌液 培养条件：36±1℃ 6—8h 当培养液出现轻微混浊即中止培养。 操作： 称取检样25g，加入装有225mLGN增 菌液的500mL广口瓶内，固体食品用均质器 以8000～10000r/min打碎1min，或用乳钵加 灭菌砂磨碎，粉状食品用金属匙或玻璃棒研 磨使其乳化，于36℃培养6～8h。培养时间 视细菌生长情况而定，当培养液出现轻微混 浊时即应中止培养。
细菌性痢疾是最常见的肠道传染病,夏秋两 季患者最多。传染源主要为病人和带菌者,通 过污染了痢疾杆菌的食物、饮水等经口感染。
志贺氏菌引起的细菌性痢疾，主要通过消化 道途径传播。根据宿主的健康状况和年龄， 只需少量病菌（至少为10个细胞）进入，就 有可能致病。人类对志贺氏菌易感，10～200 个细菌可使10～50%志愿者致病。
2.所致疾病 传染源是病人和带菌者. 传播途径主要为粪一口.人类对志贺氏菌较易 感. 痢疾志贺菌引起病情较重;宋内志贺菌多引起 轻型感染;福氏志贺菌感染易转变为慢性,病程 迁延;福氏和宋内志贺菌是我国常见的流行型 别.
3.临床感染类型 (1)急性菌痢 局部症状有脓血便,腹痛,里急后 重. 急性中毒性菌痢,以小儿多见,无明显的消化道 症状,主要表现全身严重的中毒症状.各型志贺 菌都有可能引起.临床主要有高热,神志障碍,休 克,病死率较高. (2)慢性菌痢 病程>2月,迁延不愈,局部症状为 主. 4.病后建立的型特异免疫(SIgA)短暂,不持久, 无交叉
第十三章志贺菌属(Shigella)
抗原与分类
根据O抗原分类
菌 种 痢疾志贺菌 福氏志贺菌 鲍氏志贺菌 宋内志贺菌 群 A B C D 型 1~10 1~6，X，Y变种 1~18 1 亚型 2a
致病性与免疫性
致病物质
1.侵袭力 侵袭力是志贺菌的主要致病因素。细菌借菌毛及相关
在上皮细胞内增殖。
结构的协同粘附在回肠末端和结肠的粘膜上皮细胞表面，继而进入，
免疫性
免疫期短，也不稳固。
抗感染免疫主要依赖肠道局部免疫，包括肠道粘膜
细胞吞噬功能及slgA等。
微生物学检查
新鲜脓血便/肛拭
及时送检/暂用30%甘油缓冲盐水保存
快速诊断
分离培养
SS平板集试验 双糖培养基（生化反应） 血清学反应（玻片凝集） 最后诊断
防治原则
2.毒素
（1）内毒素 破坏肠粘膜上皮---炎症、溃疡、粘液脓血便； 作用于肠壁，通透性增加---毒血症的症状； 作用于肠壁植物神经---腹痛、腹泻、里急后重； 多由痢疾志贺菌产生，又称志贺外毒素(shigella dysenteriae exotoxin)，具有细胞毒素、肠毒素和 神经毒素3种生物学活性。
（2）外毒素
所致疾病
传染源：患者和带菌者
传播途径：经口感染
所致疾病：细菌性痢疾(bacterial dysentery) 急性典型菌痢：发热、头痛、乏力、食欲下降等。 腹痛、腹泻、排便次数增加，里急后 重，脓血便。
非典型菌痢，易误诊导致慢性菌痢或带菌者。
急性中毒性菌痢：多见于小儿，主要为内毒素引起微循 环障碍发生DIC所致。
切断传染途径：加强粪便管理、水源管理及食品
防
卫生监督等。
试用的口服菌苗：链霉素依赖株 (Sd)口服重组活
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Shigella sonnei - rod prokaryote (x 22,400) causes shigellosis (bacterial dysentery)
一.生物学性状
形态结构 ✓G-短小杆菌 ✓※无鞭毛，有菌毛
基因组特征 ✓福氏志贺菌，染色体3个致病岛
培养特征: ✓营养要求不高； ✓SS选择鉴别培养基
生化反应:
✓能分解葡萄糖，产酸不产气; ✓※不分解乳糖（宋内志贺菌迟 缓发酵）
志贺菌克氏双糖反应
斜 面 不
大 肠
发
杆
酵
菌
底层
产酸 ＋
不产
⊕
气
抗原结构与分类
O抗原：群特贺菌 A
福氏志贺菌 B
鲍氏志贺菌 C
宋内志贺菌 D
型 1~15 1~6,X,Y变型 1~20 1
亚型 8a,8b,8c 11个
二. 致病性
致病物质
1.侵袭力
✓侵袭回肠末端和结肠的 黏膜上皮。
✓有利于菌粘附至肠粘膜 诱导细胞内吞。
内毒素 • 肠粘膜通透性↑→毒素吸收→发热、神志障
碍、休克 • 破坏肠粘膜→炎症、溃疡、脓血粘液便 • 肠壁植物神经→肠蠕动失调、痉挛→腹痛
、里急后重
外毒素：志贺毒素 Stx
所致疾病
✓传染源:患者和带菌者 ✓传播途径：粪-口途径 ✓菌痢：发热、腹痛、腹泻、
里急后重、脓血黏液便
三.微生物学检查
新鲜脓血便/肛拭
※及时送检/暂用30%甘油缓冲盐水保存
快速诊断
荧光菌球试验 协同凝集试验 免疫染色 乳胶凝集 PCR
分离培养
SS平板（无色半透明小菌落） 双糖培养基（生化反应） 血清学反应（玻片凝集） 毒力试验（豚鼠角膜结膜炎）
预防：
四.防治原则
✓对患者及时诊断、隔离、彻底治疗
✓控制传染源，切断传播途径，加强卫生管理
✓活疫苗：Sd(链霉素依赖株)
治疗：易引起耐药性, 联合用药。
总结
1.志贺菌属的结构特点？生化反应特点？ 2.志贺菌属的致病物质？引起的疾病及其
典型临床表现？ 3.什么是Sd？