三章中药药物分析方法

荧光光谱与其激发光谱具有镜像特点。 一般荧光的波长比激发光波长要长些。
4、定量分析方法
（1）标准曲线法
以荧光强度F对标准溶液浓度C作工作 曲线（或回归方程）。在相同条件下测定 试验样溶液的荧光强度，由工作曲线（或 回归方程）求出试样中荧光物质的含量。
（2）比例法
取已知量的对照品，配成标准溶液 （Cs），测定其荧光强度（Fs），然后在相 同条件下测定试样溶液的荧光强度（Fx）， 按比例关系计算试样中荧光物质的含量。常 用空白校正。
③导数光谱绘制 选择适当的波长间隔(△λ)绘制， 为好。△λ愈大，△A亦增大，测定灵敏度增大， 但分解降低，通常选样1～2nm。
④测定方法 常用工作曲线法，可根据实际情况选 择DhDp或Do作为信号参数。
（4）应用与示例
清宫冲剂中胆酸的二阶导数光谱测定法
（i）干扰情况的考察
胆酸对照液与样品的二阶导数光谱显示，在397nm， 386nm波长处有相应的吸收峰和吸收谷。阴性样品二阶导 数光谱呈近乎平直线条，见下左图。猪去氧胆酸的二阶导 数光谱将360～420nm区间的吸收消除为二次无关吸收，不 干扰样品中胆酸的含量测定如下中图。下右图表明，胆酸 二阶导数光谱，其峰-谷振幅值D与浓度具有良好的线性关 系，因此，可用397nm，386nm两波长的振幅D为定量参数， 用峰-谷法进行测定。
本法加样回收率：六应丸为98.8％，RSD=1.8％；六神丸 为100.7％，RSD=2.2％；牛黄消炎丸为93.0％，RSD＝1.1％。
６、紫外光谱法中对仪器和试剂的要求
（1）仪器的校正和检定：包括波长精度、吸收度 的准确性、 杂散光等。
（2）对溶剂的要求：用1 cm石英池盛装溶剂，以 空气为空白，测定其吸光度，溶剂和吸收池 的吸光度在220nm —240nm范围内不得超过 0.40；在241nm —250nm 范围内不得超过 0.20；在251nm —300nm 的范围内不得超过 0.10；300以上不得超过0.05。
紫外分光光度计
0.575
光源
单色器 吸收池 检测器 信号处理及显示
第四节 荧 光 分 析 法
1、分子荧光的产生
当处于基态单线态的分子吸收了一定频率的 紫外可见光后，可以跃迁到激发单线态的各个不 同能级，然后经过振动弛豫到达第一激发态的最 低振动能级，如果以发射光量子的方式，跃迁回 到基态各个不同振动能级，即产生荧光。
A1=A1a + A1b + A1s A2 =A2a + A2b + A2s 若两波长处的背景吸收相同，即A1s= A2s 二式相减，得，A=(A2a- A1a)+( A2b- A1b) 由于 a 组份在两波长处的吸光度相等，因此，
A=( A2b- A1b)=(2b-1b)lcb 从中可求出cb 同理，可求出ca.
激发光谱 测定样品对每一波长的激发光所发射的 荧光强度，以激发光波长为横座标，荧光强度为 纵座标作图，得荧光物质的激发光谱。
发射光谱 从激发光谱上可找到发生荧光最强时的 激发光波长，以此进行激发，将物质发射的荧光 通过单色器分光，测定每一个波长的荧光强度， 以荧光强度对荧光波长作图，得荧光光谱。
（2）荧光光谱的特点
D= 57.3066C – 0.1547(r=1.000)
(ⅳ)样品测定
精密称取约2.5g样品粉末加50ml氯仿回流提取4小 时，常压回收氯仿至干，用60％醋酸溶解，定容 于10ml量瓶中，精密吸取1.0ml样品液于15ml具塞 刻度试管中，按标准曲线项下操作，测峰-谷振幅 值D，按回归方程计算样品中胆酸含量。
第一节 中药药物分析件的选择 定量分析方法验证
定量分析方法验证
内容包括
准确度、精密度 线性与范围 专属性、检测限、定量限 耐用性
第二节 化学分析法
重量分析法：挥发法、萃取法和沉淀法
滴定分析法
酸碱滴定法 沉淀滴定法 配位滴定法 氧化还原滴定法
重量分析法
2、分子结构与荧光的关系及其影响因素
荧光与分子结构的关系 分子荧光的产生必须同 时具备2个条件： 物质分子必须具有能吸收一定频率 紫外－可见光的特定结构和有较高的荧光量子 效率 影响因素 温度、溶剂的粘度、极性和溶液的PH 值、荧光猝灭剂、散射光的干扰。
3、荧光光谱及其特点
（1）荧光激发光谱和发射光谱
图所示的三种情况：
图a)：X,Y 组份最大吸收波长不重迭，相互不干扰，可以按两个单一组份处理 。图b)和c) ：X,Y 相互干扰，此时可通过解联立方程组求得X和Y的浓度：
Ax y 1


x 1
lcx


y 1
lc
y
Ax y 2


x 2
lcx


y 2
lc
y
其中，X,Y 组份在波长 1 和 2 处的摩尔吸光系数 可由已知浓度的 X, Y 纯
4.导数光谱法
（1）导数光谱的特点
零阶光谱的λmax处，对应于奇阶导数光谱（n=1、 3、5……）的零点和偶阶导数（n=2、4……）的 极值点（峰或谷），零阶导数的拐点波长，对应 于奇阶导数光谱的极值点和偶阶导数光谱的零点。
导数光谱的极值数=n+1个，即随着导数阶次的增 加，极值数增加，谱带变窄，变锐，分辨率提高， 使重叠的谱带被分离，谱带的精细结构更明显、 更突出，有利于物质的鉴别。
高斯曲线及其一至四阶导数曲线
（2）定量依据
若某吸收服从Lambert-beer定律，A=ECL则根据
导数光谱的定义有：d
n
A

d
n
E
（n=1、2、3……）
CL
dn dn
式中L为光积长度，对于给定物质在一定波长处
d nE
dn
为定值，令导数值为D，则 d n A d nE
D CL kC
样品，胆酸对照品溶 液二阶导数光谱
A．样品 B. 胆酸对照品 C.阴性样品
胆酸、猪去氧胆酸二 阶导数光谱
1．胆酸
2．猪去氧胆酸
对照品溶液 二阶导数光谱
(ⅱ)测定条件：零阶光谱扫描波长：190～550nm； 二阶导数光谱扫描波长，360～420nm；Δλ=5nm。
(ⅲ)标准曲线 ：精密称定胆酸对照品约30mg，置 100ml量瓶中，加入60％醋酸稀释至刻度，分别精 密吸取0.1、0.2…1.0ml于15ml具塞刻度试管中， 加60％醋酸至1.0ml，加入稀硫酸14．0ml，摇匀， 70℃水浴中放置20分钟，取出静置20分钟后，用 1.0ml 60％醋酸加14.0ml上述稀硫酸作空白，测 二阶导数光谱。中间波长397nm，386nm，测出各 峰-谷振幅值D，得回归方程：
3）精密称取胆红素2mg于50ml棕色量瓶中， 加入适量冷(10℃以下)的酸性氯仿(150ml
仿中含0.05ml浓盐酸)，于冰水浴中超声振 荡20分钟，稀释至刻度，制成储备液。准
吸取0，4、0．8、1，2、1.6、2.0ml储备
于10ml量瓶中，加冷酸性氯仿至刻度，测
光照前后在453nm处的吸收度。回归方程 为Δ A=0.0804C + 0.00570 (r=0.9995)。 除光照反应外，其余操作均需避光。
dn dn
由此可见，在一定波长处，导数值D与被测组分
浓度C成线性关系，这是该法的定量依据。
（三）被测组分定量信息
①零阶光谱的绘制。在同一坐标中绘制被测组分l， 常用被测组分对照品溶液和干扰组分的吸收曲线， 得零阶光谱曲线。
②微分阶数（n） n越大，分辨越高，但信噪比降低， 通常不超过4阶，一般由干扰组分吸收曲线形状而 定。
4）分别制得六应丸、六神丸、牛黄消炎丸的空白样品对 照液，在453nm处测得各自光照前后的A值，计算ΔA。实验表 明三种成药ΔA值为零或几乎为零。说明其他干扰组分在以上 光照条件下不干扰胆红素的测定。
5）精密称取六应丸、六神丸各60mg，牛黄消炎丸120mg置 10ml带塞的试管中，准确加入冷酸性氯仿10ml，冰水浴中振荡 20分钟，过滤，弃去初滤液，测续滤液光照前后的A值，算出 ΔA值。由回归方程算得样品的含量。
滴定分析法
标准溶液
化学计量关系
指示剂
被测物质
标准溶液 待测溶液
第三节 紫外-可见分光光度法的应用
一、原理
Lambert-Beer 定律：
当入射光波长一定时，待测溶液的吸光度A与其浓度和 液层厚度成正比， A kbc 即k 为比例系数，与溶液性质、温度和入射波长有关。
当浓度以 g/L 表示时，称 k 为吸光系数，以 a 表 示，即 A abc
4、导数光谱法
（1）导数光谱及其特征
通常的吸收光谱，其吸收度是波长的函 数A=C·E=C·ƒ（λ）。对波长求导，将其微分 数（dnA/dλn～λ）对波长扫描可得导数光 谱图。
特征： A.导数光谱的阶数愈高，峰形愈尖锐且数
量亦增多。 B.在零阶光谱的极大处，其相应的奇阶光 谱通过零点。在零阶光谱的两拐点处，奇阶 导数光谱为极大或极小。 C.偶阶导数光谱的形状与零阶光谱类似， 零阶光谱的峰值对应于偶阶导数光谱的值， 零阶光谱的拐点在偶阶导数光谱中通过零点。 D.导数光谱谱带的极值数等于导数阶数加1。
第三章 中药药物分析方法
药物分析教研室
控制中药质量，对保证中医临床用药安全、合 理、有效、可靠极为重要。而中药中有效成分含量 的多少与其质量优劣有直接关系，另一方面，含有 毒剧成分的中药，只有严格控制其毒剧成分的含量， 才能确保临床用药的安全和有效。因此，中药成分 的定量分析是中药质量标准研究的核心部分，亦是 质量控制中最能有效考察中药材内在质量的项目， 同时也是中药稳定性考察的依据。
E 1% 1cm

A Cl

0.507 0.0025

202.8
样品B12 (%)