中药黄芪对糖尿病大鼠CYP450 2E1活性的影响

中药黄芪对糖尿病大鼠CYP450 2E1活
性的影响
（作者:___________单位: ___________邮编: ___________）
【摘要】目的用探针药物研究黄芪对大鼠CYP450活性的影响。

方法采用四氧嘧啶诱发糖尿病大鼠，正常大鼠为对照组，给予黄芪水提物诱导，通过HPLC检测探针药物的代谢率来评价各组CYP450 2E1活性。

结果给药组动物血液中的氯唑沙宗的含量与模型组和空白组的含量无显著区别（P0.05）。

结论黄芪对大鼠CYP2E1活性无明显影响。

【关键词】CYP450 氯唑沙宗探针药黄芪
Abstract:ObjectiveTo evaluate the effect of Huangqi on CYP2E1 activity of diabetic rats with probe drug.MethodsDiabetic rat model was induced by alloxan.The rats were given the aqueous extracts of Huangqi orally for six days.The activity of CYP2E1was evaluated by measuring chlorzoxazone, a drug probe for CYP2E1,and its metabolites were detected by HPLC.ResultsHuangqi had no effect on plasma concentration of
cholrzoxazone,there was no significant difference when compared with control group and diabetic-model group(P＞0.05).ConclusionHuangqi has no effect on CYP2E1 activity.
Key words:CYP450; Chlorzoxazone; Probe drug; Huangqi
黄芪作为一种常用中药，不论是组方配伍汤剂，还是提取物的注射剂，均已经在临床上广泛应用于糖尿病（中医“消渴”）的治疗［1］，但黄芪对CYP450酶系的影响尚属空白，因此本实验研究了黄芪对细胞色素P450的影响。

细胞色素P450（cytochrome P450,CYP）酶系一般简称药酶，在外源性物质和内源性物质的代谢中起着极其重要的作用［2］。

本实验用探针药物法，通过体内实验来评价黄芪对CYP 2E1活性的影响，CYP 2E1底物为氯唑沙宗(chlor zoxazone)［3,4］。

1 器材与方法
1.1 药物黄芪（购自河南省药材公司，经河南中医学院中药鉴定学科鉴定为正品），粉碎并准确称量，经水煎浓缩，使其浓度相当于1 g/ml的原药萃取液。

冷藏备用。

1.2 试剂四氧嘧啶、氯唑沙宗为Sigma公司试剂，氯仿、甲酸和2-丙醇为分析纯试剂，乙腈为色谱纯试剂。

1.3 仪器高效液相色谱（美国Waters公司）；Millennium2010色谱工作站。

1.4 动物SD大鼠，雄性（230±20）g，二级，购自郑州大学医学院实验动物中心。

1.5 方法
1.5.1 模型制作大鼠随机分为两组，实验组在空腹12 h后按200 mg/kg体重腹腔注射2％四氧嘧啶，正常对照组大鼠腹腔注射相同体积的生理盐水。

造模期间检测体重、血糖（强生血糖仪）。

于第7天，禁食12 h，眼内眦静脉丛取血测血糖。

空腹血糖升高，体重下降，表明已制备2型糖尿病模型。

因四氧嘧啶对肝脏可能有潜在损伤，故监测谷丙转氨酶（GPT）。

将已制备成2型糖尿病模型的大鼠（且GPT无明显改变者）随机分为模型组、给药组，每组5只。

1.5.2 给药方法给药组每天清晨空腹灌胃给予黄芪提取液1次，0.3 ml/100 g，空白对照组、模型组给予相同体积的生理盐水，诱导时间为6 d。

黄芪诱导后的第6天在乙醚麻醉下，于大鼠的右侧颈静脉处做插管手术，次日给予探针药物氯唑沙宗。

氯唑沙宗按20 mg/kg的剂量加入少量聚山梨酯-80研磨，再加入生理盐水制成乳浊液静脉注入，并于给药后的0.17，0.5，0.83，1.17，1.5 h由插管处取出约0.25 ml血液，立即以4 000 r/min离心5 min，准确取出100 μl血清，加入内标，混匀，再加入650 μl氯仿，混悬振荡2 min，离心（5000 r/min，5 min），取有机相氯仿500 μl，氮气下干燥，加入流动相100 μl溶解，取80 μl进样。

1.6 数据处理和统计分析AUC0～8 h用梯形法计算，Cmax和tmax可以从药-时曲线直接读出。

Ke和t1/2运用药代动力学专用软件PAS
2.0计算。

给药前后药代动力学参数的差异用SPSS10.0统计，显著性检验采用配对t检验。

2 结果
从表1中可以看出在造模第5天，大鼠的体重平均值下降，血糖均值上升，造模前后体重和血糖的t检验表明，P0.01，均有极显著差异，说明用四氧嘧啶成功地诱导了大鼠糖尿病的形成。

表1 体重、血糖和GPT(略)
大鼠腹腔注射四氧嘧啶后2 d开始出现多饮、多尿及体重不增等典型糖尿病症状，于给药后1周，糖尿病组大鼠血糖较对照组血糖明显增加（P＜0.001）。

因四氧嘧啶对肝脏可能有潜在损伤，故监测GPT。

结果表明，给药前后GPT无显著差异。

对氯唑沙宗的对照品进样量和峰面积数据进行线性回归，可以得到氯唑沙宗的回归方程为Y=285.986 5+7.684e+0.05X（图1），两者的相关系数均为1，呈线性相关，表明可以从方程推算样品氯唑沙宗的含量。

运用药动学PAS 1.0 软件对氯唑沙宗药动学数据进行处理，分别按单室、双室、三室模型以最小二乘法拟和后，氯唑沙宗同单室模型相吻合，权重为1/CC。

0～1.5 h的药动学参数（表2）以及药时曲线（图2）可以看出：给药组动物血液中的氯唑沙宗的含量与模型组和空白组的含量无显著区别（P0.05）。

表2 各组血浆中2种探针药物的药动学参数(略)
3 讨论
药物在机体内的生物转化主要由肝细胞内滑面内质网上的肝药酶催化，其中的细胞色素P450（CYP450）同工酶是催化药物进行
氧化、还原、水解等代谢作用的重要的酶系。

CYP450不仅在药物的代谢、降解和排泄中起着重要作用，所以研究中药与CYP450酶系的关系意义重大。

不但可以推知中药的体内代谢过程，而且可以为临床中西药物的合理搭配使用提供直接依据。

本实验采用四氧嘧啶诱导糖尿病大鼠模型，应用氯唑沙宗作为CYP2E1的探针药物来观察比较中药黄芪对肝药酶活性是否有影响。

同时，由于四氧嘧啶对肝脏有潜在损伤，所以测定GPT可以监测有无肝损伤。

从实验结果来看，0～1.5 h的药动学参数（表2）以及药时曲线（图2）可以看出：给药组动物血液中的氯唑沙宗的含量与模型组和空白组的含量无显著区别（P0.05）。

这表明黄芪很可能对CYP2E1没有作用，提示当黄芪和CYP2E1酶底物的药物合用时，很可能不会发生药物的相互作用。

综上所述，研究中药对CYP450酶系的影响，可以为临床中西药物的合理配伍应用，中药与中药间的相互作用提供指导具体原则，同时还可以为中药的药物代谢动力学提供研究思路和科学的研究数据。

【参考文献】
［1］侯士良.中药八百种详解［M］.郑州：河南科学技术出版社,1999:830.
［2］侯艳宁,程桂芳,朱秀媛.黄芩甙对小鼠肝细胞色素P450
及其亚家族的诱导［J］.解放军药学学报,2000，16(2):68.
［3］闫淑莲.Cocktail探针药物同时评价连翘对肝细胞色素P450的影响［J］.中国药学杂志,2003，38(10):761.
［4］李玲,张远.糖尿病模型大鼠肝脏CYP2E1酶活性的变化［J］.药学学报,1998，33（12）：891.。