2017届高考生物二轮复习基因工程与克隆技术学前诊断
2018年高考生物：试卷(二十八) “基因工程与克隆技术‘(含答案和解析)
检测（二十八）“基因工程与克隆技术”课前诊断卷1.(2018届高三·MPT64基因(能控制合成MPT64蛋白)成功导入胡萝卜细胞，最终表达出肺结核疫苗。
请回答下列问题：(1)为获取MPT64基因，可从结核杆菌的细胞中提取对应mRNA，在________________的作用下合成双链cDNA片段，获得的cDNA片段与结核杆菌中该基因碱基序列______________(填“相同”或“不同”)。
(2)通常采用PCR技术扩增MPT64基因，前提是要有一段已知MPT64基因的核苷酸序列，以便根据这一序列合成______________，在操作步骤中需要加热至90～95 ℃的目的是________________________________________________________________________。
(3)根据农杆菌的特点，如果将MPT64基因插入到_______________上，通过农杆菌的转化作用，就可以使目的基因进入胡萝卜细胞，并将其插入到植物细胞中的______________上。
要确认MPT64基因是否在胡萝卜植株中表达，应检测胡萝卜植株中是否含有________________________________________________________________________。
(4)研究发现，如果将MPT64蛋白20位和24位的氨基酸改变为半胱氨酸，其保存时间将大大延长，科学家可以生产上述耐储存的MPT64蛋白的现代生物工程技术是________________________________。
解析：(1)以mRNA为模板合成cDNA的过程是逆转录，需要逆转录酶的催化。
由于DNA转录形成的mRNA过程中非编码序列不转录，所以形成的cDNA与结核杆菌中该基因碱基序列不同。
(2)在PCR技术中，以已知一段MPT64基因的核苷酸序列为模板，合成引物。
高考生物总复习第15讲基因工程及克隆技术学案
第15讲基因工程及克隆技术[考试要求] 1.工具酶的发现和基因工程的诞生(/a)。
2.基因工程的原理和技术(/b)。
3.基因工程的应用(/a)。
4.提出生活中的疑难问题，设计用基因工程技术解决的方案(/c)。
5.植物的克隆(/b)。
6.动物的克隆(/a)。
1.(2018·浙江4月选考)回答与基因工程和植物克隆有关的问题：(1)将含某抗虫基因的载体和含卡那霉素抗性基因的载体pBI121均用限制性核酸内切酶Eco RⅠ酶切，在切口处形成____________。
选取含抗虫基因的DNA片段与切割后的pBI121用DNA连接酶连接，在两个片段相邻处形成____________，获得重组质粒。
(2)已知用CaCl2处理细菌，会改变其某些生理状态。
取CaCl2处理过的农杆菌与重组质粒在离心管内进行混合等操作，使重组质粒进入农杆菌，完成________实验。
在离心管中加入液体培养基，置于摇床慢速培养一段时间，其目的是____________________________________________________________________，从而表达卡那霉素抗性基因，并大量增殖。
(3)取田间不同品种水稻的幼胚，先进行________，然后接种到培养基中培养，幼胚发生________形成愈伤组织，并进行继代培养。
用含重组质粒的农杆菌侵染愈伤组织，再培养愈伤组织，以便获得抗虫的转基因水稻。
影响愈伤组织能否成功再生出植株的因素有：培养条件如光温、培养基配方如植物激素配比、以及________________________________________________________________________________________________________________________________________(答出2点即可)。
解析(1)构建重组质粒时限制性核酸内切酶Eco RⅠ剪切得到的是粘性末端，DNA连接酶连接两个DNA片段之间形成的是磷酸二酯键。
高考生物二轮复习基础保分专题十二基因工程与克隆技术学案
基础保分专题十二基因工程与克隆技术[课前循图忆知]考点一基因工程与蛋白质工程[做真题·明方向]1．(2018·全国卷Ⅰ)回答下列问题：(1)博耶(H.Boyer)和科恩(S.Cohen)将非洲爪蟾核糖体蛋白基因与质粒重组后导入大肠杆菌细胞中进行了表达。
该研究除证明了质粒可以作为载体外，还证明了_______________________________________________________________(答出两点即可)。
(2)体外重组的质粒可通过Ca2＋参与的________方法导入大肠杆菌细胞；而体外重组的噬菌体DNA通常需与______________组装成完整噬菌体后，才能通过侵染的方法将重组的噬菌体DNA导入宿主细胞。
在细菌、心肌细胞、叶肉细胞中，可作为重组噬菌体宿主细胞的是________。
(3)真核生物基因(目的基因)在大肠杆菌细胞内表达时，表达出的蛋白质可能会被降解。
为防止蛋白质被降解，在实验中应选用______________的大肠杆菌作为受体细胞，在蛋白质纯化的过程中应添加________的抑制剂。
解析：(1)将非洲爪蟾核糖体蛋白基因与质粒重组后导入大肠杆菌中，该过程利用的技术是转基因技术。
该研究除了证明质粒可作为载体外，还证明了体外重组的质粒可以进入受体细胞，真核生物的基因可在原核细胞中表达等。
(2)重组质粒导入大肠杆菌细胞可采用Ca2＋参与的转化方法；体外重组噬菌体要通过将体外重组的噬菌体DNA和外壳蛋白(或噬菌体蛋白)进行组装获得；因为噬菌体是专门寄生在细菌中的病毒，所以宿主细胞选用细菌。
(3)为防止蛋白质被降解，在实验中应选用蛋白酶缺陷型的大肠杆菌作为受体细胞；在蛋白质纯化过程中，为防止目的蛋白质被降解，需要添加蛋白酶的抑制剂。
答案：(1)体外重组的质粒可以进入受体细胞；真核生物基因可在原核细胞中表达(2)转化外壳蛋白(或答噬菌体蛋白) 细菌(3)蛋白酶缺陷型蛋白酶2．(2018·全国卷Ⅱ节选)某种荧光蛋白(GFP)在紫外光或蓝光激发下会发出绿色荧光，这一特性可用于检测细胞中目的基因的表达。
高三生物复习计划
高三生物复习计划1复习目标1、用恰当的专业术语，阐述已学过的生物学概念和原理，用适当的表达形式准确地描述一些生物现象和事实。
2、能对生物的结构和功能、部分和整体、生物与环境的一些关系问题进行分析和解答。
3、能选用恰当的方法验证简单的生物学事实、探究简单的生物学问题，并对实验信息进行处理和分析。
4、培养学生严谨的科学态度和科学素质的同时，着重培养学生的创新意识和创造能力第一轮：基础知识复习本阶段时间为一个学期，复习内容按章节顺序进行，以教材为主，让学生扎扎实实掌握基础知识，准确掌握重要概念、、原理、过程等，并辅以适量的训练题。
学生在完成一轮复习后能够理清知识点，自己能画出知识网络。
在复习的同时对以前学习的不足进行修补，而且习题要跟上，及时检测学生的掌握情况。
在高考中，除了基础知识的考查外，还重视能力的考查，而生物学中一般要考查的能力有理解能力、实验与探究能力、获取信息的能力、综合运用能力。
这些能力需要在一轮复习中，通过知识的讲解和习题的分析训练来培养和加强。
第二轮：专题复习本阶段时间大约为2个月，在已经复习过基础的前提下，进一步夯实基础，对知识加宽加深，适当兼顾知识的综合，以专题的习题将知识进行合理的综合、归纳、整理，让学生从更高的层次上掌握知识。
本阶段主要分七个专题专题一：实验专题专题二：细胞及其生命历程专题三：细胞的代谢专题四：遗传变异和进化专题五：生命活动的调节专题六：生物与环境专题七：生物技术实践。
在每一个专题的复习中，进一步将知识进行归类，使学生把知识形成一个有机的整体，特别强调知识的整合，迅速提高学生解答题目的能力。
第三轮：综合强化训练本阶段时间大约为1个月，该阶段的主要任务是培养学生的整体意识和应试能力，提高应试技巧和心理素质。
通过大量接触最新的各地模拟试题适应高考的要求并进入备考状态。
在这段时间内，还应该回归课本，查缺补漏，对不熟的知识加强记忆。
通过最后的练习等给学生以信心，调整学生心态，让学生以最好的状态去参加考试。
高考生物二轮、三轮复习课件 专题八第一讲
回归命题本源 1.植物组织培养过程原理—— 细胞的全能性 。 2.植物体细胞杂交需要用 酶解法 去除细胞壁(纤维素酶、果胶 酶)，动物组织分散成单个细胞需用 胰蛋白酶 处理。 3.植物组织培养的培养基中添加蔗糖的目的有两个：一是提供
营养 ，二是调节 渗透压 。
4.植物体细胞杂交的过程，实质上是不同植物体细胞的 原生质体 融合的过程，打破了 生殖 限的，并且动物细胞有 止分裂。 6.传代培养中遗传物质发生改变、有不死性的细胞具有 癌 细胞的特 性。 7.动物细胞培养中，细胞的增殖方式为 有丝 分裂，培养出来的多 数细胞基因型 相同 (相同、不同)。 隔离的限制。 5.动物细胞培养分为 原代 培养和
(3)过程①可采用的操作方法是________(填字母代号)。
(4)过程②采用的生物技术是______________。 (5)对早期胚胎进行切割，经过程②可获得多个新个体。这利 用了细胞的________性。 (6)为检测人乳铁蛋白是否成功表达， 可采用________(填字母 代号)技术。 A.核酸分子杂交 C.抗原－抗体杂交 B.基因序列分析 D.PCR
二、细胞工程
重温高考经典
2.下列有关细胞工程的叙述中，正确的是 ( ) ①培养基中添加蔗糖的目的是提供营养和调节渗透压 (2008· 江苏，20A) ②去除植物细胞的细胞壁和将动物组织分散成单个细胞均 需酶处理 过程 远缘杂种 (2008· 全国Ⅰ，5B) (2009· 全国Ⅰ，4B) (2009· 全国Ⅰ，4A) ③不同种植物原生质体融合的过程属于植物体细胞杂交 ④利用植物体细胞杂交技术可克服生殖隔离的限制，培育
④用限制性核酸内切酶可以切割烟草花叶病毒的核酸 (2010· 浙江，2A) ⑤将人的干扰素基因重组到质粒后导入大肠杆菌，获得能产 生人干扰素的菌株 到细菌 DNA 上，属于基因工程 (2010· 大纲全国Ⅱ，5B) (2010· 大纲全国Ⅱ，5D) (2010· 江苏，18B) ⑧动物的生长激素基因转入植物后不能表达(2010· 江苏，18C) ⑨限制性核酸内切酶和 DNA 连接酶是两类常用的工具酶 (2009· 浙江，3B) ⑥自然界中天然存在的噬菌体自行感染细菌后其 DNA 整合 ⑦转抗虫基因的植物，不会导致昆虫群体抗性基因频率增加
高考生物二轮复习 第一部分 专题五 现代生物科技专题 第1讲 基因工程与克隆技术
一
专题讲座部分
部
分
专
现代生物科技专题
题
五
第1讲
基因工程与克隆技术
——————————考纲知识排查——————————
简要概括参考答案：①DNA 分子结构的统一性；所有生物 共用一套遗传密码；基因重组、酶的专一性等等
②限制酶、DNA 连接酶、运载体；限制酶和 DNA 连接酶具 有专一性；运载体应具有限制酶切点、启动子和标记基因。
⑩胚性细胞的制备→早期胚胎培养→胚胎Байду номын сангаас植→胚胎在受 体雌性动物中发育→新个体；克隆器官用于移植、野生动物保护 等
⑪获取(效应)B 淋巴细胞→B 细胞与骨髓瘤细胞融合→第一 次筛选获得杂交瘤细胞→第二次筛选获得能产生单一抗体的杂 交瘤细胞→杂交瘤细胞的体内或体外培养
⑫特异性强、灵敏度高；a.作为诊断试剂；b.用于治疗疾病 和运载药物，如“生物导弹”
生长素向基部运输，促进下端生根。(4)检验转基因棉的抗虫性状， 常用方法是投放棉铃虫看棉铃虫是否死亡，种植转基因抗虫棉能 减少农药的使用，以减轻环境污染。
[答案] (1)限制性核酸内切酶(或限制酶) 选择 (2)T－DNA 筛选获得 T－DNA 片段的植物(棉花)细胞 (3)细胞分裂素浓度 芽顶端合成的生长素向基部运输，促进 根的分化 (4)投放棉铃虫 农药
[答案] C
2．(2015·四川卷)将苏云金杆菌 Bt 蛋白的基因导入棉花细胞 中，可获得抗棉铃虫的转基因棉，其过程如下图所示(注：农杆菌 中 Ti 质粒上只有 T—DNA 片段能转移到植物细胞中)。
(1)过程①需用同种________酶对含 Bt 基因的 DNA 和 Ti 质 粒进行酶切。为将过程②获得的含重组质粒的农杆菌筛选出来， 应使用________________培养基。
2017届高三生物(通用版)二轮复习 第1讲 基因工程和细胞工程 Word版含答案
专题限时集训(十五)(限时：40分钟)1．(2015·全国卷Ⅰ)HIV属于逆转录病毒，是艾滋病的病原体。
回答下列问题：(1)用基因工程方法制备HIV的某蛋白(目的蛋白)时，可先提取HIV中的________，以其作为模板，在________的作用下合成________，获取该目的蛋白的基因，构建重组表达载体，随后导入受体细胞。
(2)从受体细胞中分离纯化出目的蛋白，该蛋白作为抗原注入机体后，刺激机体产生的可与此蛋白结合的相应分泌蛋白是________，该分泌蛋白可用于检测受试者血清中的HIV，检测的原理是____________________。
(3)已知某种菌导致的肺炎在健康人群中罕见，但是在艾滋病患者中却多发。
引起这种现象的根本原因是HIV主要感染和破坏了患者的部分________细胞，降低了患者免疫系统的防卫功能。
(4)人的免疫系统有________癌细胞的功能。
艾滋病患者由于免疫功能缺陷，易发生恶性肿瘤。
【解析】(1)HIV的遗传物质是RNA，所以要想获得相应的目的基因，应以HIV的RNA为模板，在逆转录酶的作用下合成cDNA(或DNA)。
(2)目的蛋白注入机体后相当于抗原。
在抗原的刺激下，机体进行体液免疫，由浆细胞产生相应抗体(分泌蛋白)，由于该抗体能与目的蛋白(抗原)发生特异性结合，所以可通过抗体检测出有无目的蛋白，从而确定体内有无HIV。
(3)HIV主要攻击人体的T(或T淋巴)细胞，从而降低机体免疫系统的防卫功能。
(4)癌细胞在机体中属于抗原，人体的免疫系统能够监控和清除癌细胞。
【答案】(1)RNA逆转录酶cDNA(或DNA)(2)抗体抗原抗体特异性结合(3)T(或T淋巴)(4)监控和清除2．(2014·全国卷Ⅱ)植物甲具有极强的耐旱性，其耐旱性与某个基因有关。
若从该植物中获得该耐旱基因，并将其转移到耐旱性低的植物乙中，有可能提高后者的耐旱性。
回答下列问题：【导学号：15482076】(1)理论上，基因组文库含有生物的________基因；而cDNA文库中含有生物的________基因。
高考生物二轮专题复习 第一部分 专题5 第1讲 基因工程与克隆技术课件
蛋白质工程1.蛋白质工程操作的基本原理和设计思路是什么？
2.蛋白质工程和基因工程的关系是什么？
第二页，共42页。
植物的组织培养1.植物组织培养的基本原理和一般操作流程是怎样的？
2.植物组织培养有哪些应用？
克 隆技动 体物 细细 胞胞 克培 隆养与12..动 体物 细细 胞胞 克培 隆养 的的 操基 作本 流操 程作 及过 应程 用和 是条 什件 么分 ？别是什么？
请回答： (1)重组载体中 SHH 基因转录合成 RNA 探针时，________(填“需 要”或“不需要”)启动子。
(2)步骤②中，用 Ca2＋处理大肠杆菌，使之成为________细胞，然后导入 重组载体。实验中，用添加氨苄青霉素的培养基培养大肠杆菌，未导入 质粒的细菌将会死亡，原因是这些细菌不含有________基因。 (3)能表达 LacZ 基因的大肠杆菌在含有 IPTG 和 X-gal 的培养基上会 形成蓝色菌落，易于识别。根据上述原理可以初步判断________(填 “蓝色”或“白色”)菌落中的大肠杆菌为重组菌。 (4)将制备的探针加入角化囊肿切片中，探针将与____________形成杂 交带，进而判断 SHH 基因的转录情况。
第十八页，共42页。
解析：不同限制酶有不同的识别序列和切割位点，体现了酶具有 专一性；限制酶 2 和 3 识别序列分别是 CCGCGG 和 GGATCC， 均为 6 个碱基对；限制酶 1 和 3 剪出的黏性末端相同；三种限制 酶均不能识别和切割 RNA 中核糖核苷酸序列。 答案:D
第十九页，共42页。
(3)将重组表达载体导入受精卵常用的方法是________________。为了 获得母羊，移植前需对已成功转入目的基因的胚胎进行________。利 用胚胎分割和胚胎移植技术可获得多个转基因个体，这体现了早期胚 胎细胞的________。 (4)若在转 htPA 基因母羊的羊乳中检测到________，说明目的基因 成功表达。
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“基因工程与克隆技术”学前诊断考点一基因工程与蛋白质工程β肽链第6位氨基酸谷氨酸被缬氨酸代替，导致功能异常。
回答下列问题：(1)异常血红蛋白的氨基酸序列改变的根本原因是编码血红蛋白基因的__________序列发生改变。
(2)将正常的血红蛋白基因导入患者的骨髓造血干细胞中，可以合成正常的血红蛋白达到治疗的目的。
此操作________(填“属于”或“不属于”)蛋白质工程，理由是该操作________________________。
(3)用基因工程方法制备血红蛋白时，可先提取早期红细胞中的____________，以其作为模板，在______________酶的作用下反转录合成cDNA。
cDNA与载体需在____________________酶的作用下，拼接构建基因表达载体，导入受体菌后进行表达。
(4)检测受体菌是否已合成血红蛋白，可从受体菌中提取________，用相应的抗体进行__________杂交，若出现杂交带，则表明该受体菌已合成血红蛋白。
解析：(1)基因是具有遗传效应的DNA片段，遗传信息储存在基因碱基对的排列顺序中。
(2)蛋白质工程是指通过基因修饰或基因合成，对现有蛋白质进行改造，或制造一种新的蛋白质，以满足人类的生产和生活的需求，故题中所述不属于蛋白质工程。
(3)利用逆转录法获取目的基因时，需先提取mRNA，在逆转录酶的作用下逆转录合成cDNA。
cDNA与载体需要在限制酶和DNA连接酶的作用下拼接构建成基因表达载体，才可导入受体菌。
(4)检测目的基因是否翻译成蛋白质，需要从转基因生物中提取蛋白质，用相应的抗体进行抗原—抗体杂交。
答案：(1)碱基对(2)不属于没有对现有的蛋白质进行改造(3)mRNA 逆转录限制酶和DNA连接(4)蛋白质抗原—抗体2．下图是科学家利用大肠杆菌生产人胰岛素的部分过程。
请结合相关知识回答问题：(1)除图示方法获得目的基因(人胰岛素基因)外，还可通过__________的方法获得目的基因。
(2)图示所获得的人胰岛素基因在大肠杆菌中不能表达，需要质粒为其提供________________等调控因子；质粒含有一个或多个__________切割位点，供目的基因插入其中；质粒上还含有______，供重组DNA的鉴定和选择。
(3)图中切割人胰岛素基因和质粒的酶(酶A)相同，其目的是________________。
将重组DNA分子导入大肠杆菌前，常需用________处理大肠杆菌，使其成为感受态细胞。
(4)由于大肠杆菌中没有________________________等结构，其内合成的人胰岛素没有活性，需要经过再加工。
解析：(1)获得目的基因的方法除题图所示方法外，还有人工合成法。
(2)图示所获得的人胰岛素基因由于不含启动子和终止子，因此需要载体——质粒提供。
质粒上还应含有一个或多个限制酶切割位点，供目的基因插入其中；质粒上还含有标记基因，供重组DNA的鉴定和选择。
(3)用同一种限制酶切割目的基因和质粒，以便获得相同的末端。
将重组DNA分子导入大肠杆菌前，需用Ca2＋处理大肠杆菌，使其成为感受态细胞。
(4)由于大肠杆菌中没有内质网、高尔基体等结构，其内合成的人胰岛素没有活性，需要经过再加工。
答案：(1)人工合成(2)启动子、终止子限制酶标记基因(3)获得相同的末端Ca2＋(4)内质网、高尔基体3．(2016·天津高考)人血清白蛋白(HSA)具有重要的医用价值，只能从人血浆中制备。
下图是以基因工程技术获取重组HSA(rHSA)的两条途径。
(1)为获取HSA基因，首先需采集人的血液，提取______合成总cDNA，然后以cDNA为模板，使用PCR技术扩增HSA基因。
下图中箭头表示一条引物结合模板的位置及扩增方向，请用箭头在方框内标出另一条引物的位置及扩增方向。
(2)启动子通常具有物种及组织特异性，构建在水稻胚乳细胞内特异表达rHSA的载体，需要选择的启动子是________(填写字母，单选)。
A．人血细胞启动子B．水稻胚乳细胞启动子C．大肠杆菌启动子 D．农杆菌启动子(3)利用农杆菌转化水稻受体细胞的过程中，需添加酚类物质，其目的是________________________________________________________________________。
(4)人体合成的初始HSA多肽，需要经过膜系统加工形成正确空间结构才有活性。
与途径Ⅱ相比，选择途径Ⅰ获取rHSA的优势是____________________________________ ________________________。
(5)为证明rHSA具有医用价值，须确认rHSA与______的生物学功能一致。
解析：(1)要想合成总cDNA，需要采集人的血液获得总RNA。
由于DNA的复制只能从脱氧核苷酸单链的5′端向3′端延伸，因而引物均应结合在DNA单链的3′端，而DNA的两条链反向平行，由此可以确定引物在另一条脱氧核苷酸单链的位置和方向。
(2)若要从水稻胚乳细胞内获得目的产物，需要控制该目的基因只在水稻胚乳细胞内表达。
由题干中的信息“启动子通常具有物种及组织特异性”可知，此处需要选择水稻胚乳细胞启动子。
(3)酚类物质能吸引农杆菌，因此在水稻受体细胞中添加该类物质，能吸引农杆菌移向水稻受体细胞，有利于目的基因的成功转化。
(4)途径Ⅰ和Ⅱ的主要区别是途径Ⅰ的受体细胞是真核细胞，途径Ⅱ的受体细胞是原核细胞。
由于人体合成的初始HSA多肽需要经膜系统加工形成正确的空间结构才有生物活性，所以选择途径Ⅰ获取rHSA更具有优势。
(5)rHSA是基因工程的产物，其是否具有医用价值，还需要在个体水平上进一步确认其与HSA的生物学功能是否一致。
答案：(1)总RNA(或mRNA)(2)B (3)吸引农杆菌移向水稻受体细胞，有利于目的基因成功转化(4)水稻是真核生物，具有膜系统，能对初始rHSA多肽进行高效加工(5)HSA4.(2016·江苏高考)下表是几种限制酶识别序列及其切割位点，图1、图2中标注了相关限制酶的酶切位点，其中切割位点相同的酶不重复标注。
请回答下列问题：限制酶Bam HⅠBclⅠSau3AⅠHindⅢ识别序列及切割位点图1图2(1)用图中质粒和目的基因构建重组质粒，应选用__________________两种限制酶切割，酶切后的载体和目的基因片段，通过________酶作用后获得重组质粒。
为了扩增重组质粒，需将其转入处于________态的大肠杆菌。
(2)为了筛选出转入了重组质粒的大肠杆菌，应在筛选平板培养基中添加________，平板上长出的菌落，常用PCR鉴定，所用的引物组成为图2中________________________________________________________________________。
(3)若Bam HⅠ酶切的DNA末端与BclⅠ酶切的DNA末端连接，连接部位的6个碱基对序列为________________________，对于该部位，这两种酶________(填“都能”“都不能”或“只有一种能”)切开。
(4)若用Sau 3A Ⅰ切图1质粒最多可能获得________种大小不同的DNA 片段。
解析：(1)基因工程中选择合适的限制酶切割质粒和目的基因时，应保留目的基因和至少一个标记基因结构的完整性，即遵循“目的基因切两侧，标记基因留一个”的基本原则，最好选择切割产生不同末端的两种限制酶同时切割质粒和目的基因，以避免目的基因的反向插入带来的不正常表达，因此据图分析应选择的限制酶为Bcl Ⅰ和Hind Ⅲ，切割后质粒上保留的四环素抗性基因作为标记基因。
酶切后的载体和目的基因通过DNA 连接酶的作用形成重组质粒，重组质粒需要导入Ca 2＋处理后的处于感受态的大肠杆菌(处于感受态的大肠杆菌细胞膜的通透性大大增加，便于重组质粒进入)。
(2)由上述分析可知，为了筛选出导入重组质粒的大肠杆菌，应先配制含四环素的选择培养基，平板上长出的菌落为导入普通质粒或重组质粒的大肠杆菌菌落，进一步鉴定出导入重组质粒的大肠杆菌，可利用PCR 扩增的方式，结合电泳技术来分析处理。
DNA 的两条链是反向平行的，在PCR 过程中，当引物与DNA 母链通过碱基互补配对结合后，DNA 聚合酶只能从引物的3′端延伸DNA 链，因此应选择引物甲和引物丙。
(3)因为Bcl Ⅰ和Bam HⅠ酶切产生的黏性末端相同，所以可以被DNA 连接酶连接，连接部位的6个碱基对序列为T GATC C A CTAG G ⎝ ⎛⎭⎪⎫G GATC A C CTAG T ，但是连接后形成的DNA 中不再具有Bcl Ⅰ和Bam HⅠ的识别序列，连接部位不能被这两种酶切开。
(4)由图可知，能被限制酶Bcl Ⅰ和Bam HⅠ切割的序列也能被Sau 3AⅠ识别并切割，因此图中质粒上存在3个Sau 3AⅠ的切割位点，若将3个切割位点之间的DNA 片段分别编号为a 、b 和c ，则完全酶切(3个切割位点均被切割)会产生3种大小的DNA 片段，即为a 、b 和c ；考虑只切1个切割位点，有三种情况，都产生一种大小的DNA 片段，即大小均为a ＋b ＋c ；考虑切2个切割位点，则会产生a ＋b 、c 、a ＋c 、b 、b ＋c 、a 几种不同大小的DNA 片段。
综上所述，若用Sau 3AⅠ识别并切割图中质粒，最多可获得7种大小的DNA 片段，即为a ＋b ＋c 、a ＋b 、a ＋c 、b ＋c 、a 、b 、c 。
答案：(1)Bcl Ⅰ和Hind Ⅲ 连接 感受 (2)四环素 引物甲和引物丙 (3)T GATC C A CTAG G⎝ ⎛⎭⎪⎫G GATC A C CTAG T 都不能 (4)75．多聚半乳糖醛酸酶(PG)能降解果胶，使细胞壁破损。
成熟的番茄果实PG 的合成量显著增加，能使果实变红变软，但不利于保鲜。
利用基因工程的方法减少PG 基因的表达，可延长番茄的保质期。
科学家将PG 基因接到Ti 质粒上，导入番茄细胞中，得到转基因番茄。
请回答下列问题：(1)转基因番茄的培育过程中涉及的工程手段所依据的生物学原理是______________________________。
对该农产品进行销售时需进行标注，以维护消费者对转基因产品的__________和__________。
一些消费者担心转基因番茄的安全性，主要表现在________________________________________________________________________ (至少答出一点。
)(2)将PG基因接到Ti质粒上，属于基因工程操作流程中的________________________________________________________________________。