2020高考生物二轮复习基因工程与克隆技术学前诊断
生物学中的基因工程和克隆技术
生物学中的基因工程和克隆技术一、基因工程1.定义：基因工程是一种通过体外DNA重组和转基因等技术，赋予生物以新的遗传特性的技术。
2.基本过程：a.提取目的基因b.目的基因与运载体结合c.导入受体细胞d.目的基因的检测与表达3.基因工程的应用：a.培育高产、优质、抗病、抗逆、早熟等农作物新品种b.生产药物、疫苗、生物制品等c.进行基因治疗和遗传病治疗d.创建转基因动植物和微生物新品种4.基因工程的安全性和伦理问题：a.食品安全b.生物安全c.环境安全d.遗传歧视和伦理问题二、克隆技术1.定义：克隆技术是指通过无性繁殖而产生的遗传物质均一的生物群。
2.克隆的类型：a.分子水平的克隆：DNA克隆b.细胞水平的克隆：细胞株、细胞系c.个体水平的克隆：植物克隆、动物克隆3.克隆技术的方法：a.核移植技术b.细胞培养技术c.分子杂交技术4.克隆技术的应用：a.生产药用蛋白和疫苗b.拯救濒危物种c.进行基因敲除和基因编辑d.制作基因工程药物和生物制品5.克隆技术的伦理问题：a.克隆人类胚胎b.克隆人类器官c.克隆人类个体d.克隆生物的权益和责任6.我国对克隆技术的政策：a.禁止生殖性克隆b.严格控制治疗性克隆c.加强克隆技术的研发和监管本知识点介绍了生物学中的基因工程和克隆技术的基本概念、应用及伦理问题。
基因工程通过体外DNA重组和转基因等技术，赋予生物以新的遗传特性，广泛应用于农业、医药、环保等领域。
克隆技术通过无性繁殖产生遗传物质均一的生物群，应用于生产药用蛋白、拯救濒危物种、进行基因敲除等领域。
同时，两者都涉及到一系列的伦理问题，需要在研发和应用过程中加强监管和探讨。
习题及方法：1.习题：基因工程的基本过程包括哪些步骤？这道题考查基因工程的基本过程。
首先，我们需要了解基因工程的基本概念。
然后，根据所学知识，我们可以知道基因工程的基本过程包括提取目的基因、目的基因与运载体结合、导入受体细胞、目的基因的检测与表达。
2017届高考生物二轮复习基因工程与克隆技术学前诊断
“基因工程与克隆技术”学前诊断考点一基因工程与蛋白质工程β肽链第6位氨基酸谷氨酸被缬氨酸代替，导致功能异常。
回答下列问题：(1)异常血红蛋白的氨基酸序列改变的根本原因是编码血红蛋白基因的__________序列发生改变。
(2)将正常的血红蛋白基因导入患者的骨髓造血干细胞中，可以合成正常的血红蛋白达到治疗的目的。
此操作________(填“属于”或“不属于”)蛋白质工程，理由是该操作________________________。
(3)用基因工程方法制备血红蛋白时，可先提取早期红细胞中的____________，以其作为模板，在______________酶的作用下反转录合成cDNA。
cDNA与载体需在____________________酶的作用下，拼接构建基因表达载体，导入受体菌后进行表达。
(4)检测受体菌是否已合成血红蛋白，可从受体菌中提取________，用相应的抗体进行__________杂交，若出现杂交带，则表明该受体菌已合成血红蛋白。
解析：(1)基因是具有遗传效应的DNA片段，遗传信息储存在基因碱基对的排列顺序中。
(2)蛋白质工程是指通过基因修饰或基因合成，对现有蛋白质进行改造，或制造一种新的蛋白质，以满足人类的生产和生活的需求，故题中所述不属于蛋白质工程。
(3)利用逆转录法获取目的基因时，需先提取mRNA，在逆转录酶的作用下逆转录合成cDNA。
cDNA与载体需要在限制酶和DNA连接酶的作用下拼接构建成基因表达载体，才可导入受体菌。
(4)检测目的基因是否翻译成蛋白质，需要从转基因生物中提取蛋白质，用相应的抗体进行抗原—抗体杂交。
答案：(1)碱基对(2)不属于没有对现有的蛋白质进行改造(3)mRNA 逆转录限制酶和DNA连接(4)蛋白质抗原—抗体2．下图是科学家利用大肠杆菌生产人胰岛素的部分过程。
请结合相关知识回答问题：(1)除图示方法获得目的基因(人胰岛素基因)外，还可通过__________的方法获得目的基因。
高考生物二轮复习基础保分专题十二基因工程与克隆技术学案
基础保分专题十二基因工程与克隆技术[课前循图忆知]考点一基因工程与蛋白质工程[做真题·明方向]1．(2018·全国卷Ⅰ)回答下列问题：(1)博耶(H.Boyer)和科恩(S.Cohen)将非洲爪蟾核糖体蛋白基因与质粒重组后导入大肠杆菌细胞中进行了表达。
该研究除证明了质粒可以作为载体外，还证明了_______________________________________________________________(答出两点即可)。
(2)体外重组的质粒可通过Ca2＋参与的________方法导入大肠杆菌细胞；而体外重组的噬菌体DNA通常需与______________组装成完整噬菌体后，才能通过侵染的方法将重组的噬菌体DNA导入宿主细胞。
在细菌、心肌细胞、叶肉细胞中，可作为重组噬菌体宿主细胞的是________。
(3)真核生物基因(目的基因)在大肠杆菌细胞内表达时，表达出的蛋白质可能会被降解。
为防止蛋白质被降解，在实验中应选用______________的大肠杆菌作为受体细胞，在蛋白质纯化的过程中应添加________的抑制剂。
解析：(1)将非洲爪蟾核糖体蛋白基因与质粒重组后导入大肠杆菌中，该过程利用的技术是转基因技术。
该研究除了证明质粒可作为载体外，还证明了体外重组的质粒可以进入受体细胞，真核生物的基因可在原核细胞中表达等。
(2)重组质粒导入大肠杆菌细胞可采用Ca2＋参与的转化方法；体外重组噬菌体要通过将体外重组的噬菌体DNA和外壳蛋白(或噬菌体蛋白)进行组装获得；因为噬菌体是专门寄生在细菌中的病毒，所以宿主细胞选用细菌。
(3)为防止蛋白质被降解，在实验中应选用蛋白酶缺陷型的大肠杆菌作为受体细胞；在蛋白质纯化过程中，为防止目的蛋白质被降解，需要添加蛋白酶的抑制剂。
答案：(1)体外重组的质粒可以进入受体细胞；真核生物基因可在原核细胞中表达(2)转化外壳蛋白(或答噬菌体蛋白) 细菌(3)蛋白酶缺陷型蛋白酶2．(2018·全国卷Ⅱ节选)某种荧光蛋白(GFP)在紫外光或蓝光激发下会发出绿色荧光，这一特性可用于检测细胞中目的基因的表达。
专题15 基因工程-2023年高考生物二轮复习课件(新教材专用)
②n代后，DNA链有_2_n_+_1_条 ③第__3__代出现完整的目的基因
④n代后，含引物的DNA分子有__2n ___个
⑤n代后，共消耗_2_n+1-_2__个引物
⑥第n代复制，消耗了__2_n___个引物
⑦n代后，完整的目的基因有_2_ n-2_n_个
基因表达载体的组成
文和图36)( ) 8．干扰素是我国批准生产的第一个基因工程药物。(选择性必
√ 修3 P90“资料卡”)( ) × 9．对蛋白质的改造是通过直接改造相应的mRNA来实现的。(选
择性必修3 P93正文)( )
√ 10．转基因作为一项技术本身是中性的。(选择性必修3 P103正
文)( ) 11．治疗性克隆是指利用克隆技术获得胚胎，并将胚胎孕育成
在逆转录酶的作用下，以mRNA为模板按照碱基互补配对的原则可以合成cDNA
(2)[全国卷Ⅰ，40(1)]质粒载体作为基因工程的工具，应具备的基本条件有 ___能__自__我_复__制__、_具__有__标__记_基__因__(答出两点即可)，而作为基因表达载体，除满足 上述基本条件外，还需具有启动子和终止子。
体细胞
以农杆菌转化法为例： 将目的基因插入Ti质粒的T-
DNA上 ↓
转入农杆菌中 ↓
导入植物细胞 ↓
整合到受体细胞的DNA上
动物细胞
显微注射技术
受精卵
提纯含目的基 因的表达载体
↓ 显微注射
↓ 受精卵发育
↓ 具有新性 状的个体
微生物细胞
感受态细胞法
原核细胞 Ca2＋处理细胞
↓ 感受态细胞
↓ 基因表达载体与 感受态细胞混合
× (选择性必修3 P72正文)( ) × 4．目的基因就是指编码蛋白质的基因。(选择性必修3 P76
2020届高考生物二轮复习遗传专题：第7节 遗传类实验设计题型
遗传类实验设计题型1、某科学兴趣小组偶然发现一突变雄性植株.其突变性状是其一条染色体上的某个基因发生突变的结果，假设突变性状和野生性状由一对等位基因（A、a)控制。
为了进一步了解突变基因的显隐性和在染色体上的位置，设计了杂交实验，让该株突变雄株与多株野生纯合雌株杂交，观察记录子代雌雄植株中野生性状和突变性状的数量，如表所示。
下列有关实验结果和结论的说法不正确的是（）A.如果突变基因位于Y染色体上，则Q和P的值分别为1、B.如果突变基因位于X染色体上，且为显性，则Q 和P的值分别为0、1C.如果突变基因位于X和Y染色体的同源区段，且为显性，则Q和P值分别为1/2、1/2D.如果突变基因位于常染色体上，且为显性，则Q 和P的值分别为1/2、1/22、用纯合子果蝇作为亲本研究两对相对性状的遗传,实验结果如下︰下列推断错误的是( )A.果蝇的灰身、红眼是显性性状B.由组合②可判断控制眼色的基因位于X 染色体上C.若组合①的F1 随机交配,则F2雄蝇中灰身白眼的概率为3/16D.若组合②的F1随机交配,则F2 中黑身白眼的概率为1/83、为探究等位基因D(高茎)/d(矮茎)、R(种子圆粒)/r(种子皱粒)、Y(子叶黄色)/y(子叶绿色)在染色体上的位置关系,某兴趣小组用纯种豌豆植株进行了如下实验︰请回答下列问题︰1.根据实验一可得出的结论是__________;根据实验二可得出的结论是__________;综合三组实验的结果,能否得出“三对等位基因位于三对同源染色体上”的结论?__________(填“能”或“不能”),理由是__________。
2.为进一步探究“三对等位基因是否位于三对同源染色体上”,请在实验一、二的基础上,利用纯种高茎绿色皱粒豌豆植株和纯种矮茎绿色圆粒豌豆植株设计实验(不考虑突变和交叉互换)。
实验思路︰__________;预期结果和结论︰__________。
4、已知某雌雄异株植物为XY型性别决定,其叶形宽叶和窄叶受一对等位基因(A/a)控制, 抗病和不抗病受另一对等位基因(B/b)控制。
高考生物二轮复习 第一部分 专题六 生物科技系统 第1讲 基因工程与克隆技术课件
一、练全国卷高考真题——知考查重点 1．(2016· 全国甲卷)下图表示通过核移植等技术获得某种克隆哺 乳动物(二倍体)的流程。
回答下列问题： (1)图中 A 表示正常细胞核，染色体数为 2n，则其性染色 体的组成可为______________。过程①表示去除细胞核， 该过程一般要在卵母细胞培养至适当时期再进行，去核时 常采用________的方法。②代表的过程是____________。
(6)PCR 体系中一定要添加从受体细胞中提取的 DNA 聚合酶(×) (7)外源 DNA 必须位于重组质粒的启动子和终止子之间才能进行 复制 (8)每个质粒至少含一个限制性核酸内切酶识别位点 (×) (√)
(9)将 ada(腺苷酸脱氨酶基因)通过质粒 pET28b 导入大肠杆菌并成 功表达腺苷酸脱氨酶。每个限制性核酸内切酶识别位点至少插 入一个 ada (×)基因较小基因 ，直接利用 DNA
合成 合成仪用化学方法合成，不需要模板 逆转 录法 以 RNA 为模板，在
逆转录酶作用下人工合成
方法 ①原理：
具体操作
DNA 复制 引物 、脱氧核苷酸、
②条件：模板 DNA、 人 工 PCR 技 合 术扩增 成
热稳定的 DNA 聚合酶
(2)基因表达载体的构建——重组质粒的构建： ①基因表达载体的组成：
特定核
黏性末端
②T4 DNA 连接酶
苷酸序列
上切割
限制酶切割位点
② 在 特 定 位 点 能连接 和平末端
黏性末端 ③具有特殊的
标记基因
质粒、 λ 噬菌体的衍 生物、动植物病毒等
常用 类型
EcoR Ⅰ 限制 E· coli DNA 连 接 酶 Sma Ⅰ 限 酶、T4 DNA 连接 制酶 酶
高考知识点现代生物技术
高考知识点现代生物技术现代生物技术是当今科技发展的重要组成部分，对于高考生物科目来说，掌握相关知识点是非常重要的。
本文将介绍一些常见的高考知识点以及与现代生物技术的关联。
首先，我们来了解基因工程。
基因工程是一项应用广泛的现代生物技术，它利用分子生物学方法对基因进行操作，从而改变生物体的遗传性状。
在高考中，常见的涉及基因工程的考点主要有基因克隆、基因组编辑以及转基因技术。
基因克隆是指通过人工手段复制一个个体的所有基因，实现基因的无性繁殖。
在基因克隆技术中，最典型的代表是“多利羊”克隆实验成功。
这一技术的发展使得人们可以通过克隆获得相同遗传信息的生物体，从而有利于繁殖珍稀濒危物种、医学和农业领域的应用。
基因组编辑是指通过引入CRISPR-Cas9等工具对生物体的基因组进行修改的技术。
它可以用于疾病基因的研究以及基因疾病的治疗。
例如，科学家们可以通过基因组编辑技术修复携带基因突变的细胞，使其恢复正常功能。
这一技术的出现为人类遗传病的治疗提供了希望。
转基因技术是将外源基因导入到目标生物中，使其获得新的性状或功能的一种技术。
在高考中，常见的转基因作物知识点包括转基因玉米、大豆等。
转基因技术的出现带来了农作物抗虫害、耐草甘膦等特性的提高，这对于解决粮食安全、减少农药使用等具有重要意义。
除了基因工程，高考中还常涉及到细胞培养技术。
细胞培养技术是将细胞在体外培养并繁殖的一种技术。
通过细胞培养技术，科学家们可以研究细胞的生长、分化和功能等方面，也可以用于生物药品的生产。
例如，重组蛋白药物的生产就依赖于细胞培养技术。
此外，高考中还会涉及到PCR技术。
PCR技术是一种快速、敏感、特异性强的核酸扩增技术。
通过PCR技术，科学家们可以从极少数量的DNA样本中扩增出足够的细胞核酸进行研究。
PCR技术广泛应用于疾病诊断、法医学鉴定以及亲子鉴定等领域。
除了上述几个知识点，高考中还会涉及遗传工程、克隆动物的伦理问题以及生物安全等。
高考生物二轮复习大题分析与表达练6基因工程类大题突破
6.基因工程类大题突破1.(2022山东枣庄模拟)三氯生是一种抑菌物质，具有优异的贮存稳定性，可以替代抗生素用于基因工程中筛选含目的基因的受体细胞。
已知fabV(从霍乱弧菌中发现的烯酯酰ACP还原酶)基因可以使大肠杆菌抵抗三氯生。
图1图2(1)通过PCR方法获取fabV基因时，Taq酶只能从延伸DNA链，而不能从头开始合成DNA，因此需要先根据设计两种特异性引物序列。
反应体系的初始温度设置在90~95 ℃的目的是。
(2)在步骤④中，需将大肠杆菌菌液利用法接种到加有的细菌培养基上，待菌落长成后，直接挑取菌落加入PCR反应系统中进行基因鉴定。
PCR过程中不需要先提取细菌DNA的原因是: 。
(3)某科研团队将可以受温度调控的基因插入上述选出的重组质粒中，构建了温度调控表达质粒(如图2)。
其中C基因在低温下会抑制P1，R基因在高温下会抑制P2。
如果将lacZ基因和GFP基因插入图2质粒中，使其最后表现为低温下只表达GFP蛋白，而高温下只表达lacZ蛋白。
则lacZ 基因应插在之间，GFP基因插在之间。
2.(2022海南琼海三模)2020年中国政府提出“努力争取2060年前实现碳中和”的目标。
发展利用生物能源是实现碳中和的有效途径。
紫苏种子含大量油脂，出油率达35%~64%，三酰甘油(TAG)是紫苏种子的主要储藏脂类，DGAT1是TAG合成的关键酶。
科研人员将紫苏DGAT1基因导入微藻中，培养高产生物柴油的工程藻，如图所示。
注:Bam HⅠ和Hin dⅢ是两种限制酶。
回答下列问题。
(1)从紫苏组织细胞中提取总RNA时，需要加入RNA酶抑制剂，目的是。
将RNA 逆转录合成的cDNA作为模板，PCR扩增DGAT1基因，反应体系中需加入酶，其作用是。
为使DGAT1基因两端分别添加Bam HⅠ和Hin dⅢ识别序列，可将相应序列分别添加在两种引物的(填“5'”或“3'”)端。
(2)构建DGAT1基因表达载体的目的是，使DGAT1基因能够表达并发挥作用。
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【2019最新】精选高考生物二轮复习基因工程与克隆技术学前诊断分子β肽链第6位氨基酸谷氨酸被缬氨酸代替，导致功能异常。
回答下列问题：(1)异常血红蛋白的氨基酸序列改变的根本原因是编码血红蛋白基因的__________序列发生改变。
(2)将正常的血红蛋白基因导入患者的骨髓造血干细胞中，可以合成正常的血红蛋白达到治疗的目的。
此操作________(填“属于”或“不属于”)蛋白质工程，理由是该操作________________________。
(3)用基因工程方法制备血红蛋白时，可先提取早期红细胞中的____________，以其作为模板，在______________酶的作用下反转录合成cDNA。
cDNA与载体需在____________________酶的作用下，拼接构建基因表达载体，导入受体菌后进行表达。
(4)检测受体菌是否已合成血红蛋白，可从受体菌中提取________，用相应的抗体进行__________杂交，若出现杂交带，则表明该受体菌已合成血红蛋白。
解析：(1)基因是具有遗传效应的DNA片段，遗传信息储存在基因碱基对的排列顺序中。
(2)蛋白质工程是指通过基因修饰或基因合成，对现有蛋白质进行改造，或制造一种新的蛋白质，以满足人类的生产和生活的需求，故题中所述不属于蛋白质工程。
(3)利用逆转录法获取目的基因时，需先提取mRNA，在逆转录酶的作用下逆转录合成cDNA。
cDNA与载体需要在限制酶和DNA连接酶的作用下拼接构建成基因表达载体，才可导入受体菌。
(4)检测目的基因是否翻译成蛋白质，需要从转基因生物中提取蛋白质，用相应的抗体进行抗原—抗体杂交。
答案：(1)碱基对(2)不属于没有对现有的蛋白质进行改造(3)mRNA 逆转录限制酶和DNA连接(4)蛋白质抗原—抗体2．下图是科学家利用大肠杆菌生产人胰岛素的部分过程。
请结合相关知识回答问题：(1)除图示方法获得目的基因(人胰岛素基因)外，还可通过__________的方法获得目的基因。
(2)图示所获得的人胰岛素基因在大肠杆菌中不能表达，需要质粒为其提供________________等调控因子；质粒含有一个或多个__________切割位点，供目的基因插入其中；质粒上还含有______，供重组DNA的鉴定和选择。
(3)图中切割人胰岛素基因和质粒的酶(酶A)相同，其目的是________________。
将重组DNA分子导入大肠杆菌前，常需用________处理大肠杆菌，使其成为感受态细胞。
(4)由于大肠杆菌中没有________________________等结构，其内合成的人胰岛素没有活性，需要经过再加工。
解析：(1)获得目的基因的方法除题图所示方法外，还有人工合成法。
(2)图示所获得的人胰岛素基因由于不含启动子和终止子，因此需要载体——质粒提供。
质粒上还应含有一个或多个限制酶切割位点，供目的基因插入其中；质粒上还含有标记基因，供重组DNA的鉴定和选择。
(3)用同一种限制酶切割目的基因和质粒，以便获得相同的末端。
将重组DNA分子导入大肠杆菌前，需用Ca2＋处理大肠杆菌，使其成为感受态细胞。
(4)由于大肠杆菌中没有内质网、高尔基体等结构，其内合成的人胰岛素没有活性，需要经过再加工。
答案：(1)人工合成(2)启动子、终止子限制酶标记基因(3)获得相同的末端Ca2＋(4)内质网、高尔基体3．(2016·天津高考)人血清白蛋白(HSA)具有重要的医用价值，只能从人血浆中制备。
下图是以基因工程技术获取重组HSA(rHSA)的两条途径。
(1)为获取HSA基因，首先需采集人的血液，提取______合成总cDNA，然后以cDNA为模板，使用PCR技术扩增HSA基因。
下图中箭头表示一条引物结合模板的位置及扩增方向，请用箭头在方框内标出另一条引物的位置及扩增方向。
(2)启动子通常具有物种及组织特异性，构建在水稻胚乳细胞内特异表达rHSA 的载体，需要选择的启动子是________(填写字母，单选)。
A．人血细胞启动子B．水稻胚乳细胞启动子C．大肠杆菌启动子 D．农杆菌启动子(3)利用农杆菌转化水稻受体细胞的过程中，需添加酚类物质，其目的是________________________________________________________________________。
(4)人体合成的初始HSA多肽，需要经过膜系统加工形成正确空间结构才有活性。
与途径Ⅱ相比，选择途径Ⅰ获取rHSA的优势是____________________________________________________________。
(5)为证明rHSA具有医用价值，须确认rHSA与______的生物学功能一致。
解析：(1)要想合成总cDNA，需要采集人的血液获得总RNA。
由于DNA的复制只能从脱氧核苷酸单链的5′端向3′端延伸，因而引物均应结合在DNA单链的3′端，而DNA的两条链反向平行，由此可以确定引物在另一条脱氧核苷酸单链的位置和方向。
(2)若要从水稻胚乳细胞内获得目的产物，需要控制该目的基因只在水稻胚乳细胞内表达。
由题干中的信息“启动子通常具有物种及组织特异性”可知，此处需要选择水稻胚乳细胞启动子。
(3)酚类物质能吸引农杆菌，因此在水稻受体细胞中添加该类物质，能吸引农杆菌移向水稻受体细胞，有利于目的基因的成功转化。
(4)途径Ⅰ和Ⅱ的主要区别是途径Ⅰ的受体细胞是真核细胞，途径Ⅱ的受体细胞是原核细胞。
由于人体合成的初始HSA多肽需要经膜系统加工形成正确的空间结构才有生物活性，所以选择途径Ⅰ获取rHSA更具有优势。
(5)rHSA是基因工程的产物，其是否具有医用价值，还需要在个体水平上进一步确认其与HSA的生物学功能是否一致。
答案：(1)总RNA(或mRNA)(2)B (3)吸引农杆菌移向水稻受体细胞，有利于目的基因成功转化(4)水稻是真核生物，具有膜系统，能对初始rHSA多肽进行高效加工(5)HSA4.(2016·江苏高考)下表是几种限制酶识别序列及其切割位点，图1、图2中标注了相关限制酶的酶切位点，其中切割位点相同的酶不重复标注。
请回答下列问题：限制酶Bam HⅠBclⅠSau3AⅠHindⅢ识别序列及切割位点图2(1)用图中质粒和目的基因构建重组质粒，应选用__________________两种限制酶切割，酶切后的载体和目的基因片段，通过________酶作用后获得重组质粒。
为了扩增重组质粒，需将其转入处于________态的大肠杆菌。
(2)为了筛选出转入了重组质粒的大肠杆菌，应在筛选平板培养基中添加________，平板上长出的菌落，常用PCR鉴定，所用的引物组成为图2中________________________________________________________________________。
(3)若BamHⅠ酶切的DNA末端与BclⅠ酶切的DNA末端连接，连接部位的6个碱基对序列为________________________，对于该部位，这两种酶________(填“都能”“都不能”或“只有一种能”)切开。
(4)若用S au3AⅠ切图1质粒最多可能获得________种大小不同的DNA片段。
解析：(1)基因工程中选择合适的限制酶切割质粒和目的基因时，应保留目的基因和至少一个标记基因结构的完整性，即遵循“目的基因切两侧，标记基因留一个”的基本原则，最好选择切割产生不同末端的两种限制酶同时切割质粒和目的基因，以避免目的基因的反向插入带来的不正常表达，因此据图分析应选择的限制酶为BclⅠ和HindⅢ，切割后质粒上保留的四环素抗性基因作为标记基因。
酶切后的载体和目的基因通过DNA连接酶的作用形成重组质粒，重组质粒需要导入Ca2＋处理后的处于感受态的大肠杆菌(处于感受态的大肠杆菌细胞膜的通透性大大增加，便于重组质粒进入)。
(2)由上述分析可知，为了筛选出导入重组质粒的大肠杆菌，应先配制含四环素的选择培养基，平板上长出的菌落为导入普通质粒或重组质粒的大肠杆菌菌落，进一步鉴定出导入重组质粒的大肠杆菌，可利用PCR扩增的方式，结合电泳技术来分析处理。
DNA 的两条链是反向平行的，在PCR 过程中，当引物与DNA 母链通过碱基互补配对结合后，DNA 聚合酶只能从引物的3′端延伸DNA 链，因此应选择引物甲和引物丙。
(3)因为BclⅠ和BamHⅠ酶切产生的黏性末端相同，所以可以被DNA 连接酶连接，连接部位的6个碱基对序列为，但是连接后形成的DNA 中不再具有BclⅠ和BamHⅠ的识别序列，连接部位不能被这两种酶切开。
(4)由图可知，能被限制酶BclⅠ和BamHⅠ切割的序列也能被Sau3AⅠ识别并切割，因此图中质粒上存在3个Sau3AⅠ的切割位点，若将3个切割位点之间的DNA 片段分别编号为a 、b 和c ，则完全酶切(3个切割位点均被切割)会产生3种大小的DNA 片段，即为a 、b 和c ；考虑只切1个切割位点，有三种情况，都产生一种大小的DNA 片段，即大小均为a ＋b ＋c ；考虑切2个切割位点，则会产生a ＋b 、c 、a ＋c 、b 、b ＋c 、a 几种不同大小的DNA 片段。
综上所述，若用Sau3AⅠ识别并切割图中质粒，最多可获得7种大小的DNA 片段，即为a ＋b ＋c 、a ＋b 、a ＋c 、b ＋c 、a 、b 、c 。
答案：(1)BclⅠ和HindⅢ 连接 感受 (2)四环素 引物甲和引物丙⎝ ⎛⎭⎪⎫G GATC A C CTAG T T GATC C A CTAG G (3)都不能 (4)75．多聚半乳糖醛酸酶(PG)能降解果胶，使细胞壁破损。
成熟的番茄果实PG 的合成量显著增加，能使果实变红变软，但不利于保鲜。
利用基因工程的方法减少PG 基因的表达，可延长番茄的保质期。
科学家将PG 基因接到Ti 质粒上，导入番茄细胞中，得到转基因番茄。
请回答下列问题：(1)转基因番茄的培育过程中涉及的工程手段所依据的生物学原理是______________________________。
对该农产品进行销售时需进行标注，以维护消费者对转基因产品的__________和__________。
一些消费者担心转基因番茄的安全性，主要表现在________________________________________________________________________(至少答出一点。
)(2)将PG 基因接到Ti 质粒上，属于基因工程操作流程中的________________________________________________________________________。