二仙汤对免疫性卵巢早衰模型小鼠形态学影响_伍娟娟

收稿日期：2012－02－21基金项目：广西中医药大学校级课题（P2012072）作者简介：伍娟娟（1978－），女，主治医师，博士，研究方向：中西医结合妇科内分泌。

通讯作者：林忠（1968－），女，副主任医师，博士，研究方向：中西医结合妇科内分泌。

源滚滚，又孰能阻之者，”根据有卵泡型卵巢早衰的肾亏血瘀，肝郁脾虚的病机特点，拟具有补肾健脾，调肝活血作用的加减益经汤治疗。

本方以熟地、巴戟天、山药、杜仲调补肾之阴阳，填精补血，使肾精充盛，精血俱旺，水盛火自灭，阴平阳自秘；丹参活血通经，正如《妇科明理论》云：“一味丹参散，功同四物汤；肝藏血，司血海，主疏泄，体阴而用阳，故以柴胡调达肝气以实肝用，白芍补血养肝以养肝阴；脾胃为后天之本，气血生化之源，《兰室秘藏》云：“妇人脾胃久虚，或形赢气血俱衰，而致经水断绝不行”，故配以党参、白术健脾益气，以益气血生化之源，补后天以养先天。

全方补肾兼以活血，疏肝兼以养肝培脾，肾肝脾三经同调，使精血得补，瘀血得化，水到渠成则经水自来。

对照组经治疗后症状明显好转，生活质量改善，尤其在改善患者潮热汗出、阴道干涩等围绝经期症状方面疗效显著，这充分体现了中医整体观和辨证论治的特点。

7．3有卵泡型卵巢早衰的患者血清FSH 、LH 水平增高，血清E2、INH －b 水平降低，说明血清中4种激素水平是随着卵巢功能的变化而改变的，都能反映卵巢的储备功能。

但Seifer 等认为，INH －b可作为卵巢储备功能的直接指标，而垂体分泌的FSH 、LH 仅为间接指标，卵巢储备功能减退妇女月经第3天1NHB 下降先于FSH 升高［8］，故通过临床观察得出结论：加减益经汤治疗有卵泡型卵巢早衰有较好的疗效，其疗效是通过提高血清INHB －b 、E2水平，降低血清FSH 、LH 水平而改善卵巢储备功能的。

参考文献［1］Kalantaridou SN ，Davis SR ，Nelson LM．Premature ovarian fail-ure ［J ］．EndocrinolMetab Clin North Am ，1998，27：989－1006．［2］Coulam CB ，Adamson SC ，Annegers JR．Incidence of pre －ma-ture ovarian failure ［J ］．Obstet and Gyneco ，l 1986，67：604－655．［3］AltuntasCZ ，Johnson JM ，TuohyVK．Autoimmune targeted disrup-tion of the pituitary －ovarian axis causes premature o －varianfailure ［J ］．J Immuno ，l 2006，177：1988－1996．［4］苏应宽．新编实用妇科学［M ］．济南：山东科技出版社，1995．［5］郑晓萸．中药新药研究指导原则（试行）［S ］．北京：中国医药出版社，2002：5．［6］曹泽毅．中华妇产科学［M ］．北京：人民卫生出版社，1996：2138．［7］张玉珍．中医妇科学［M ］．北京：中国医药出版社，2002．［8］SeiferDB ，ScottRT ，Bergh PA ，et al ·Women with dec 故liningovarian reservemay demonstrate a decrease in day 3serum inhib-in B before arise in day 3follicle ·stimulating hormone ［J ］．Fer-til Steri ，1999，72（1）：63－65．中华中医药学刊二仙汤对免疫性卵巢早衰模型小鼠形态学影响伍娟娟1，刘锐1，尤昭玲2，林忠1（1．广西中医药大学附属瑞康医院，广西南宁530011；2．湖南中医药大学，湖南长沙410007）摘要：目的：观察二仙汤对免疫性POF 模型小鼠卵巢形态学影响。

方法：用小鼠透明带ZP3第330 342个氨基酸序列（NSSSSQFQIHGPR ）为免疫原建立免疫性POF 小鼠动物模型，并用二仙汤干预，观察小鼠性周期，用ELISA 法检测小鼠外周血抗透明带抗体，称卵巢重量，计算卵巢指数，在光镜下观察小鼠卵巢的组织学改变。

结果：模型组小鼠逐渐出现动情周期紊乱，时间相对较早，动情间期延长，阴道细胞涂片主要表现为大量白细胞及少量有核上皮细胞；卵巢体积缩小，成熟卵泡少，卵泡颗粒细胞层较正常减少，排列紊乱，部分卵泡发育不良，卵巢间质可见较多淋巴细胞及浆细胞浸润；二仙汤处理后POF 小鼠上述情况均有不同程度改善。

结论：二仙汤对免疫性卵巢早衰小鼠的卵巢形态具有一定的改善作用。

关键词：二仙汤；卵巢早衰；自身免疫病；动物模型；形态学中图分类号：R285．5文献标识码：A 文章编号：1673－7717（2012）07－1645－03Effect of Erxian Decoction on Morphology of Mice Model ofAutoimmune Premature Ovarian FailureWU Juan-juan 1，LIU Rui 1，YOU Zhao-ling 2，LIN Zhong 1（1．Ruikang Hospital of Guangxi University of Traditional Chinese Medicine ，Nangning 530011，Guangxi ，China ；2．Hunan University of Traditional Chinese Medicine ，Changsha 410007，Hunan ，China ）Abstract ：Objective ：To explore the effect of Erxian Decoction （ED ）on expression of ovarian morphology in the immu-nological premature ovarian failure of model mice．Methods ：The immunological ovary premature model was set by immu-nogens of 330th －342th amino acid sequences （NSSSSQFQIHGPR ）and ED was used to treat the model．The sexual cy-cle ，ovarian weight and histological changes of mice ovaries were observed ；the ovarian index and anti －zona pellucida an-5461中华中医药学刊tibodies in peripheral blood were detected by ELISA．Results：Estrous cycle was disorder gradually，the time was relativelyearlier．The vaginal cell smear showed that there were a large number of leukocytes and a few of nucleate epithelial cells．The volume of ovary was reduced．The mature follicle was less．The granular cell layer of follicle was less than normaland arranged in disorder．Some follicles were dysplastic．Such situations were improved in varying degrees of all EDgroups．Conclusion：Erxian Decoction can improve the ovarian morphology of the mice．Key words：Erxian Decoction（ED）；premature ovarian failure；autoimmune disease；animal model；morphology 卵巢早衰是一种多病因所致的卵巢内卵泡耗竭或被破坏而发生的卵巢功能衰竭，是指月经初潮年龄正常或青春期延迟，第二性征发育正常的女性在40岁以前出现持续性闭经和性器官萎缩，并伴有FSH和LH升高，而雌激素降低的综合征［1］。

其病因多样化，包括自身免疫功能异常、染色体异常、遗传性因素、代谢异常、医源性及感染性因素等，其中约有20% 35%的POF与卵巢受到自身免疫性损害有关［2］。

本实验建立免疫性卵巢早衰模型，并探讨补肾通络中药对其模型小鼠卵巢形态学的影响。

1目的建立免疫性POF动物模型，并观察二仙汤对免疫性POF模型小鼠性卵巢形态学的影响，初步探讨二仙汤对免疫性POF的作用机理。

2动物与材料2．1动物SPF级BABL/c雌性小鼠60只，7 8周龄，体重1822g，由广东省医学实验动物中心提供，动物合格证号：2008A0232．2药物与试剂小鼠透明带多肽溶液：根据小鼠透明带3的第330342个氨基酸序列（NSSSSQFQIHGPR），合成透明带多肽，其分析纯度＞90%，杭州中肽生化有限公司生产；弗氏完全佐剂，美国Sigma公司；弗氏不完全佐剂，美国Sigma公司产品；Giemsa染色剂，美国Sigma公司；小鼠抗透明带抗体酶联免疫；分析试剂盒（96人/份），美国USCN LIFE公司；H－E染色液，北京博奥森公司；补佳乐，拜耳药业。

二仙汤：仙茅15g，淫羊藿15g，巴戟天15g，黄柏12g，知母12g，当归12g，广西中医学院附属瑞康实验室提供。

2．3主要仪器Multska Spectrum型酶标仪，美国thermo公司；MP－120－2型电子天平，上海第二天平仪器厂；LEICA DM LB2型双目显微镜，德国LEICA公司产；LEICA RM2255全自动轮转切片机，德国LEICA公司生产。

3实验方法3．1动物模型的建立雌性小鼠，共60只，鼠龄7 9周，体重21 23g，均经阴道脱落细胞涂片筛查，性周期正常。

随机挑选10只做为空白组，其余50只用于造模。

称取6mgZP3透明带多肽粉末，加入6mL双蒸水配成溶液，与弗氏完全佐剂按1ʒ1比例配制成免疫试剂，与弗氏不完全佐剂按1ʒ1比例配制免疫强化试剂。