氧化型低密度脂蛋白诱导小鼠巨噬细胞系RAW264.7向树突样细胞形态分化
氧化低密度脂蛋白通过aktmtorp70s6k途径诱导内皮细胞自噬
Oxidized Low Density Lipoprotein Induces Endothelial Cell Autophagyby Akt / mTOR / p70S6K PathwayAbstractObjective Autophagy, which is an evolutionarily conserved process, plays an important role in cells growth, development and homeostasis . Oxidative stress is a well-known stimulus of autophagy that facilitates the removal of damaged material. In this study, we investigated the role of oxidized low-density lipoprotein (ox-LDL) on autophagy andAkt/mTOR/p70S6K signaling in human umbilical endothelial vein cells (HUVECs). Methods HUVECs were exposed to ox-LDL (100 µg/ml) and isopyknic PBS then collected after 6 h and 12 h. Ultrastructure changes of endothelial cells were examined by transmission electron microscope. The autophagy levels in different groups were measured by the mRNA expression levels of microtubule -associated protein 1 light chain 3 (LC3) and sequestosome 1 (SQSTM1/p62), which were assayed by quantitativeRT-PCR. The protein expression levels of LC3, p62, P-Akt/Akt、P-mTOR/mTOR、P-p70S6K /p70S6K were investigated by Western blot.Results1.Ultrastructure changes in cells were examined with transmission electron microscope at 6 h and 12 h post ox-LDL treatment. E M images showed normal cytoplasm, mitochondria, nucleus, and chromatin in control HUVECs, while few or no autophagosomes and lysosomes were observed. In contrast, the E M images from ox-LDL-treated HUVECs displayed many autophagosomes at various developmental stages which demonstrated that ox-LDL could induce autophagy in HUVECs. The number of autophagosomes at 6 h was considerably higher than those at 12 h.2. The detection of LC3-II is used as a marker of autophagy activation. Compared to the control group, the treatment group showed increased the mRNA and protein level ofLC3-II (P＜0.05) and decreased the level of p62 (P＜0.05). Additionally, p62 interacts with the autophagic effecter protein LC3 and is degraded through theautophagy–lysosomal pathway.3. Ox-LDL inhibited the phosphorylated protein expression levels within the Akt/mTOR/p70S6K signaling pathway (P＜0.01). However, the effect of ox-LDL on the Akt /mTOR /p70S6K signaling pathway did not affect the total protein expression levels of Akt, mTOR and p70S6K.Conclusion In the present study, we provided evidence suggesting that ox-LDL (100µg/ml) could induce autophagy in HUVECs. In particular, our study demonstrated that the number of autophagosomes was significantly increased after 6 h and 12 h in HUVECs treated with ox-LDL. In contrast to the control group, the mRNA and protein expression level of LC3-II was up regulated while the level of p62 was down regulated in theox-LDL treatment group. This effect was more significant in the 6 h treatment group than in the 12 h group. Moreover, the phosphorylated protein expression levels within the Akt /mTOR/p70S6K signaling pathway was down regulated. Based on this, we imply thatox-LDL induces autophagy in HUVECs by inhibiting the Akt/mTOR/p70S6K signaling pathways.Postgraduate student: Li Ting (Neurology)Directed by Prof. : Xu-Dong Pan Keywords Ox-LDL; LC3; SQSTM1/p62; mTOR; Autophagy目录引言 (1)实验材料 (2)1.1实验细胞 (2)1.2主要试剂 (2)1.3主要仪器 (2)1.4液体及试剂配制 (3)实验方法 (5)2.1细胞培养及分组 (5)2.1.1细胞培养 (5)2.1.2分组 (5)2.2细胞复苏和冻存 (5)2.2.1细胞复苏 (5)2.2.2细胞冻存 (6)2.3细胞传代 (6)2.4反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测M RNA表达 (7)2.4.1细胞总RNA的trizol法提取 (7)2.4.2将总RNA从样品逆转录成cDNA (8)2.4.3实时定量RT-PCR (9)2.5．细胞蛋白的提取、定量及W ESTERN-B I OTTING检测 (9)2.5.1细胞总蛋白的提取 (9)2.5.2配制浓缩胶和分离胶 (10)2.5.3上样及SDS-PAGE 凝胶电泳 (10)2.5.4 转膜 (10)2.5.5 封闭 (11)2.5.6孵育抗体 (11)2.5.7 显色 (11)2.5.8条带分析 (11)2.6透射电镜观察 (11)2.7统计学方法 (12)实验结果 (13)3.1.O X-LDL诱导HUVEC S自噬的电镜表现 (13)3.2.O X-LDL对HUVEC S中LC3、P62表达的影响 (13)3.3.O X-LDL对HUVEC S中A KT/M TOR/P70S6K信号通路表达的影响 (14)讨论 (16)结论 (18)参考文献 (19)综述 (22)综述的参考文献 (28)攻读学位期间的研究成果 (34)缩略词表 (35)致谢 (36)学位论文独创性声明、学位论文知识产权权属声明 (37)引言引言动脉粥样硬化(atherosclerosis AS)是一种复杂的炎症性和代谢性疾病，在世界范围内，它是导致人类发病率和死亡率增高的主要原因之一。
小檗碱促进巨噬细胞系RAW264.7由M1促炎表型向M2抗炎表型极化
小鼠巨噬细胞极化过程中细胞内活性氧的变化
小鼠巨噬细胞极化过程中细胞内活性氧的变化陈为;史立言;孟繁平;李妍【摘要】目的研究巨噬细胞经典模式极化(M1极化)和替代模式极化(M2极化)过程中,细胞内活性氧(ROS)的变化.方法体外培养小鼠巨噬细胞RAW264.7细胞,分别用干扰素-γ(IFN-γ)和白细胞介素4(IL-4)诱导细胞向M1极化和M2极化.采用直接免疫荧光标记和流式细胞术分析CD86、CD16∕32和CD206表达,流式细胞术检测细胞内ROS.结果IFN-γ诱导RAW264.7细胞M1极化,对照组细胞CD86、CD16∕32和CD32阳性细胞百分率分别为(56.4±4.1)﹪、(96.2±2.0)﹪和(19.4±4.3)﹪,而50μg∕L IFN-γ诱导12 h后,3种分子的百分率分别为(67.4±5.2)﹪、(95.9±3.5)﹪和(9.7±2.0)﹪;IL-4诱导RAW264.7细胞M2极化,25μg∕L IL-4诱导12 h后,3种分子的百分率分别为(39.1±4.4)﹪、(95.9±3.3)﹪和(23.8±4.6)﹪.对照组、IFN-γ(50μg∕L)和IL-4(25μg∕L)诱导组细胞ROS相对含量分别为(34.5±4.0)﹪、(66.2±5.8)﹪和(44.9±5.5)﹪.结论极化是巨噬细胞活化和功能转变的过程,伴随其M1和M2极化,细胞内ROS均增加.【期刊名称】《吉林医药学院学报》【年(卷),期】2017(038)002【总页数】3页(P81-83)【关键词】巨噬细胞;分化;活性氧【作者】陈为;史立言;孟繁平;李妍【作者单位】延边大学医学部,吉林延吉 133002;吉林医药学院检验学院,吉林吉林132013;延边大学医学部,吉林延吉 133002;延边大学医学部,吉林延吉 133002;吉林医药学院检验学院,吉林吉林 132013【正文语种】中文【中图分类】R392巨噬细胞(macrophage)在机体内分布广泛，不仅参与免疫应答，还在炎症、组织修复和代谢调节等生理过程中发挥重要作用。
脂氧素对巨噬细胞RAW264.7的抗炎实验研究
脂氧素对巨噬细胞RAW264.7的抗炎实验研究谢大泽;黄利兴;刘东升;朱俊;谢勇;周南进【摘要】目的研究脂氧素(LX) A4和叔丁氧羟基-苯丙氨酸-亮氨酸-苯丙氨酸-亮氨酸-苯丙氨酸(BOC-2)对LPS作用巨噬细胞RAW264.7存活的影响.方法取对数生长期的巨噬细胞RAW264.7为研究载体,实验用不同浓度的脂多糖(LPS)在不同时间点处理细胞,观察LX A4和BOC-2对LPS作用巨噬细胞RAW264.7后的存活率.CCK-8法观察LPS对各组巨噬细胞RAW264.7的不良反应,Western blot法检测LX A4和BOC-2对LPS处理后巨噬细胞RAW264.7的Toll样受体4(TLR4)和pNF-κB p65蛋白水平,酶联免疫吸附(ELISA)法检测LX A4和BOC-2对LPS处理后巨噬细胞RAW264.7培养上清液中白细胞介素6(IL-6)水平.结果在1 000ng/mL浓度LPS组,作用时间6h,巨噬细胞RAW264.7内TLR4蛋白水平和pNF-κB p65蛋白水平显著高于其余各组(P＜0.05).在LPS作用下,LX A4组细胞存活率显著高于对照组(P＜0.05);BOC-2组在LPS作用后巨噬细胞RAW264.7的存活率显著低于无LPS作用(P＜0.05).在LPS作用下,LX A4组pNF-κB p65蛋白水平低于对照组及BOC-2组(P＜0.05),BOC-2组pNF-κB p65蛋白水平高于其余各组(P ＜0.05).在LPS作用下,LX A4组IL-6的水平低于对照组及BOC-2组(P＜0.05).结论 LX A4能够抑制LPS对巨噬细胞RAW264.7的作用及TLR4/NF-κB信号通路的激活,有助减轻炎性反应.【期刊名称】《重庆医学》【年(卷),期】2016(045)014【总页数】3页(P1876-1878)【关键词】脂多糖类;脂氧素类;脂氧素A4;RAW264.7;核转录因子【作者】谢大泽;黄利兴;刘东升;朱俊;谢勇;周南进【作者单位】江西省医学科学研究院,南昌330006;南昌大学第一附属医院消化内科,南昌330046;赣南医学院第一附属医院消化内科,江西赣州341000;南昌大学第一附属医院消化内科,南昌330046;南昌大学免疫与生物治疗研究所,南昌330006;南昌大学第一附属医院消化内科,南昌330046;江西省医学科学研究院,南昌330006;南昌大学免疫与生物治疗研究所,南昌330006【正文语种】中文【中图分类】R573.2脂氧素(lipoxin，LX)是继前列腺素之后的又一重要花生四烯酸代谢产物，在炎症疾病的组织中广泛表达，LX A4最具抗炎作用，其主要通过抑制核转录因子Kappa B(NF-κB)的活性及促炎因子的释放发挥抗炎作用[1]。
匹莫齐特对脂多糖诱导RAW264.7细胞诱导型一氧化氮合成酶表达的调控及其作用机制
匹莫齐特对脂多糖诱导RAW264.7细胞诱导型一氧化氮合成酶表达的调控及其作用机制刘佳【期刊名称】《河南医学研究》【年(卷),期】2024(33)7【摘要】目的运用脂多糖(LPS)诱导小鼠巨噬细胞RAW264.7细胞株,探究匹莫齐特(Pimozide)对一氧化氮和诱导型一氧化氮合成酶(iNOS)合成的影响和作用机制。
方法用含10%胎牛血清、100 U·mL^(-1)的青链霉素DMEM培养液将RAW264.7细胞稀释为每孔2×105个接种于24孔板中进行培养,分为空白对照组(仅含DMEM培养液+RAW264.7细胞)、Pimozide组(仅含RAW264.7细胞和10μmol·L^(-1)Pimozide培养液)、LPS诱导(LPS 1 mg·L^(-1))组(LPS+RAW264.7细胞)、药物处理组[含细胞和不同浓度药物,包括Pimozide低(LPS+2.5μmol·L^(-1))、中(LPS+5μmol·L^(-1))、高(LPS+10μmol·L^(-1))组]。
各组培养上清液中一氧化氮水平测定采用Griess法进行检测。
采用实时定量聚合酶链反应(RT-PCR)法和免疫蛋白印迹法分别检测iNOS mRNA表达水平和iNOS和磷酸化的信号传导及转录激活因子通路-5的蛋白表达相对水平。
结果用含10%胎牛血清、100 U·mL^(-1)的青链霉素DMEM培养液培养RAW264.7细胞24 h 后,各组培养上清液一氧化氮表达水平差异有统计学意义(F=25.69,P<0.05);Pimozide低(LPS+2.5μmol·L^(-1))、中(LPS+5μmol·L^(-1))、高(LPS+10μmol·L^(-1))组一氧化氮释放的抑制率差异有统计学意义(F=132.49,P<0.05)。
小鼠巨噬细胞RAW264_7的培养技巧及经验总结
现代生物医学进展 Progress in Modern Biomedicine Vol.12NO.22AUG.2012·技术与方法·小鼠巨噬细胞RAW264.7的培养技巧及经验总结*方瑶毛旭虎△(第三军医大学医学检验系临床微生物教研室重庆400038)摘要：RAW264.7细胞具有很强的黏附和吞噬抗原的能力，是研究微生物学、免疫学的常用细胞株。
很多研究者发现这种细胞形态极不稳定，细胞状态的评价也很困难。
本文作者结合RAW264.7培养经历及文献资料探讨RAW264.7细胞培养的经验教训和评价细胞状态的方法，旨在为培养该细胞的科研工作者提供一定的借鉴。
关键词：小鼠巨噬细胞RAW264.7（TIB-71）；细胞培养；细胞形态中图分类号：Q95-3，Q813文献标识码：A 文章编号：1673-6273（2012）22-4358-02Culture Skill and Experience of RAW264.7*FANG Yao,MAO Xu-hu △(Department of Clinical Microbiology and Immunity,the Third Military Medical University,Chongqing,400038,China)ABSTRACT:RAW264.7has doughty capability of adhesion and antigen phagocytosis,so it is commonly used in microbiology and immunology.However,many researchers find that the cell is very unstable because of its morphous variation,and it is difficult to value its state.In this paper we mainly discussed the skills and experience in culturing RAW264.7and method of evaluating cell state.We hope to provide some references to researchers who would culture such cell line.Key words:Mice macrophages;RAW264.7(TIB-71);Cell culture;Cell morpha Chinese Library Classification(CLC):Q95-3,Q813Document code:A Article ID:1673-6273（2012）22-4358-02*基金项目：国家重大科技专项（2008ZXJ09014-007）作者简介：方瑶（1987-），男，硕士，主要研究方向：病原与宿主相互作用，E-mail ：lolfang@ △通讯作者：毛旭虎，E-mail ：mxh95xy@ （收稿日期：2011-11-23接受日期：2011-12-18)RAW264.7是由Abelson 鼠白血病病毒诱导BALB/c 小鼠产生肿瘤后收集小鼠腹水单核样巨噬细胞得到的细胞株（ATCC Number:TIB-71）。
MicroRNA-155在诱导RAW264.7细胞分泌CXCL10间接促进Th1细胞分化中作用研究
国际免疫学杂志2020年1丨月第43卷第6期 Im J Iinmmio丨，Nov. 2020，V〇l.43 ,No. 6• 621••论著•MicroRNA-155在诱导RAW264. 7细胞分泌CXCL10间接促进T h l细胞分化中作用研究马志军1朱露露：高中山2马玉兰3■青海大学附属医院肿瘤外科二，西宁810001 ;2青海大学研究生院，西宁810001;3青海大学附属医院心血管内科，西宁810001通信作者：马玉兰，Email:mylfamai@163. com，电话:0971~6230751【摘要】目的探讨微小R N A(micr〇R N A，m i R)-155对氧化型低密度脂蛋白（oxidized-LDL parti-d e s^x L D L)活化的 R A W264. 7 细胞分泌的趋化因子的调控作用及其对辅助性 T细胞 1(helper T cell 1，T h l)分化的间接调控作用。
方法培养R A W264.7细胞，向细胞内转染寡聚核苷酸（miR-Ctrl、m iR-155mimics、miR-155 inhibitor、m i R-155 mimics+ siRNA-ctrl和miR-155 mimics+ C X C L10 si R N A)，并以此对细胞进行分组。
o x L D L刺激所有细胞活化，实时定量反转录聚合酶链反应（quantitative reverse transcriptionpolymerase chain reaction,q R T-P C R)和酶联免疫吸附测定（enzyme-linked immuno sorbent assay,EL I S A)方法检测趋化因子表达情况，将上述细胞与纯化并活化的C D4 +T细胞共培养后，流式细胞术检测Thl细胞的分化情况。
结果m iR-155促进o x L D L活化的R A W264.7细胞分泌C X C L10(m R N A水平:〇xLDL刺激细胞6、12和24 h的F值分别为44. 86、214. 91、688. 88;蛋白水平:〇x L D L刺激细胞6、12和24 h的厂值分别为284.57、144.66、60.95，户值均<0.05);在1^贾264.7中上调!11丨1^-155的表达可促进01)4 +丁细胞分化为讥1细胞（厂=26.72，/^<0.05);阻断尺4琢264.7细胞中。
RAW264_7细胞M1_M2亚型的诱导和鉴定
11 2 2011陈涛 梁潇 贺明 乌宇亮 袁祖贻【摘要】 目的 诱导小鼠巨噬细胞RAW264.7分化为M1/M2亚型，并分别根据其标志物的表达情况进行鉴定。
方法 干预前一天以105个/ ml 密度铺好细胞，用不同浓度的IFN-γ+LPS 干预，刺激分化为M1亚型；用不同浓度IL-4干预，刺激分化为M2亚型。
分别于干预后12h 提取细胞的总RNA 。
用realtime PCR 方法对M1/M2亚型的标志物iNOS, CD86/MR （CD206），I 型精氨酸酶(ArginaseI ，Arg-I)进行mRNA 水平表达量的鉴定，最终选择最合适的刺激浓度进行后续试验。
结果 (1). 不同浓度干预试剂刺激12h 后，大剂量干预组RAW264.7的细胞状态差，死亡细胞数多，中小剂量组细胞状态良好，完全贴壁，但细胞的形态发生改变；(2). 2.5ng/ml IFN-γ+200ng/ml LPS 共同作用12h 后，RAW264.7的iNOS 和CD86表达量最高，较基础水平有明显差异；(3). 10ng/ml IL-4作用12h 后，RAW264.7的MR(CD206)和ArgI 的表达量最高，较基础水平有明显差异。
结论 用适当浓度的IFN-γ+LPS/IL-4刺激RAW264.7细胞12h ，可使其分化为M1/M2亚型。
【关键词】 RAW264.7细胞；M1/M2亚型；炎症；动脉粥样硬化Introduction and Identi fi cation of M1/M2 Phenotype of RAW264.7 CellsCHEN Tao1,LIANG Xiao1,YUAN Zuyi1,1Department of Cardiovascular Medicine,First Af fi liated Hospital,Key Laboratory of Environment and Gene Related Disease of Ministry Education,Xi’an Jiaotong University College of Medicine,Xi’an,710061,China.【Abstract 】 Objective To induce RAW264.7 cell line to M1/M2 phenotypes and identi fi cate the cytokines expressed on the surface. Methods Plating the cells in 12 wells plate as 105 / ml 24h before intervention and use IFN-γ+LPS to induce M1 phenotype,IL-4 to induce M2 phenotype, with different concertration. Extracting total RNA of cells after intervention. Detecting the surface marker iNOS, CD86/MR,(CD206),ArginaseI (ArgI) of M1/M2 phenotypes, respectively, by realtime PCR on RNA level to select the proper inducing concertration. Results (1). Cells retain well growth condition with inventional reagents of middle and smallest concertation but highest concertation; (2). iNOS and CD86 of RAW 264.7 cell increas-ing mostly after stimulated by 2.5ng/ml IFN-γ+LPS200ng/ml for 12h; (3). MR and Arg I of RAW 264.7 cell increasing mostly after stimulated by 10ng/ml IL-4 for 12h. Conclusion RAW264.7 cell can be induced to M1/M2 phenotypes after stimulated by proper concertration of IFN-γ+LPS/IL-4,respectively.【Key words 】 RAW264.7 cell line; M1/M2 phenotypes; In fl ammation; Atherosclerosis(AS)动脉粥样硬化（AS ）被认为是慢性炎症性疾病［1］，巨噬细胞参与了病程中脂质沉积到斑块破裂的所有过程［2］。
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Ｃｉｃｌ ｄｃｌｏ ｒａｏ ｈｎ ，０７ Ｖ １１ ， ｏ ２ ｌｉ ｉ ｕｎｌ ｆ ｉａ２０ ． ｏ．４ Ｎ ． ｎ ａ Ｍｅ ａ Ｊ Ｃ
中 国临 床 医学
２ ０ 年 ４月 第 １ ０７ ４卷
第 ２期
论著
氧 化 型 低 密 度 脂 蛋 白诱 导 小 鼠 巨 噬 细 胞 系 ＲＡ ６ ． Ｗ２ ４ ７向树 突样 细 胞 形 态 分 化
ｌ ｅ ｄ ｆｅ ｅ ｔ ｔ ｄ ｉ ｔ ｅ ｄ ｉｉ ｌ ｅ ｃ ｌ ｆｅ ８ ．Ｃｅ ｌ ｕ ｆ ｃ ｒ ｅ ｓ ｉｖ ｌ ｅ ｎ ｄ ｎ ｒｔ ｅｌ ｍｍ ｕ ｅｍａ ｕ ａ ｉｎ ａ ｄ ａ ｔ ｉ ｉ ｒ ｎ ｉ ｅ ｎ ｏ ｄ ｎ ｒｔ ｉ ｅｌ ａ ｔ ｒ４ ｈ ｎ ｆ ａ ｃ ｋ ｓ ｌ ｓ ｒ ａ ｅｍａ ｋ ｒ ｎ ｏ ｖ ｄ ｉ ｅ ｄ ｉｉ ｃ ｌ ｉ ｃ ｎ ｔｒ ｔ ｎ ｃｉ ｏ —
沈玲 红 王彬尧 何 奔 曾锦章 周 目的 ： 讨 氧 化 型 低 密 度 脂 蛋 白 （ ｘ ＤＩ 能 否 诱 导 成 熟 的 巨噬 细 胞 转 化 为 树 突 状 细 胞 。 方 法 ： 鼠 巨 噬 细 胞 系 探 ｏＬ ） 小
中 图分 类 号 Ｑ １ ． ５３ ５ 文献标识码 Ａ
Ｏ ｘ ｄ ｚ ｄ Ｌｏ ｄ ｎ ｉｙ Ｌｉ ｐｒ ｔｉ ｏ ｉ ｉｅ ｗ— ｅ ｓ ｔ ｐｏ ｏ ｅｎ Ｐｒ ｍｏｔｓ Ｄｅ ｄｒｔｃ Ｌｉ ｅ Ｃｅｌ ａ ｓ ｔｏ ｒ ｍ ｅ ｎ ｉｉ ｋ ｌｓＴｒ ｎ ｉｉ ｎ ｆ ｏ ＲＡＷ ２６ ７ Ｍ ｕ ｉ ａ ｒ — ４ ｒｎｅ Ｍ ｃ ｏ
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“ ／ 浓 度 下诱 导 ４ ｇ ｍｌ ８ｈ最佳 。 结论 ：ｘ ＤＬ能 够 诱 导 成 熟 的 巨噬 细 胞 分 化 为 树 突 状 细 胞 ， 能 加 剧 动 脉 粥样 硬 化 炎 症 和 免 ｏＬ 可
疫反 应 。
关键 词 动 脉 粥 样 硬 化 ； 氧化 型低 密度 脂蛋 白 ； 巨噬 细胞 ； 树 突 状 细 胞 ； 免 疫 成 熟
ｌｗ－ ｅ ｓｔ ｉ ｏ ｒ ｔ ｉ （ ｘ ＤＩ ） Ｍ ｅ ｈ ｄ ： Ｌ ｏ ｄ ｎ ｉｙ ｌ ｐ ｏ ｅｎ ｏ Ｌ ． ｔ ｏ ｓ Ｏｘ ＤＬ ｔ ｅ ｔ ｄ ＲＡＷ ２ ４ ７ ｍｕ ｉ ｅｍ ａ ｒ ｐ ａ ｅｃ ｌ ｌ ｅ ｗａ ｂ ｅ ｖ ｄ ｂ ｈ ｓ ｏ — ｐ －ｒ ａ ｅ ６ ． ｒｎ ｃ ｏ ｈ ｇ ｅ ｌ ｉ ｓｏ ｓ ｒ ｅ ｙ ｐ ａ ｅｃ ｎ ｎ ｔａ ｔｍｉｒ ｓ ｏ ｅ ａ ｄ ｃ ｌ ｓ ｒ ａ ｅ ｍａ ｋ ｒ ｓａ ａ ｙ ｅ ｙ ＦＡＣＳ Ｒｅｕ ｔ ： Ｌ － ｒ ａ ｅ ｒ ｓ ｃ ｏ ｃ ｐ ｎ ｅ ｌ ｕ ｆ ｃ ｒ ｅ ｓ ｗａ ｎ ｌ ｚ ｄ ｂ ． ｓ ｌ Ｏｘ ＤＬ ｔ ｅ ｔｄ ＲＡＷ ２ ４ ７ ｍｕ ｉ ｅ ｍａ ｒ ｐ ａ ｅ ｃ ｌ ｓ ６ ． ｒｎ ｃ ｏ ｈ ｇ ｅｌ
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