D值是指在一定温度下

D值是指在一定温度下，杀灭90%微生物（或残存率为10%）所需的灭菌时间。在一定灭菌条件下，不同微生物具有不同的D值；同一微生物在不同灭菌条件下，D值亦不相同。因此D值随微生物的种类、环境和灭菌温度变化而异。
Z值是指灭菌时间减少到原来的1/10所需升高的温度或在相同灭菌时间内，杀灭99%的微生物所需提高的温度。
72.Nk为t时被杀灭的微生物数；
73.N为t时存活的微生物数。
74.由此得出，灭菌时微生物的死亡遵循对数规则。
75.微生物存活数与灭菌时间关系图
76.微生物耐热参数（D值）:
77.
78.D值是指在特定灭菌条件下，使微生物数量下降一个对数单位或杀灭90%所需要的时间（分钟）。
79.
80.灭菌温度系数（Z值）:
九、仿制化学药品注射剂的技术要求
十、化学药品注射剂说明书和标签内容的技术要求
本讲座主要探讨无菌保证工艺研究及评价
包括：制备工艺的选择
工艺参数的确定
工艺的验证
注射剂灭菌工艺及其验证
三、无菌保证工艺研究与验证要求
1.最终灭菌产品的无菌保证水平规定为:
2.微生物污染概率不超过百万分之一
3.
4.2.采用无菌生产工艺的产品:
F值为在一定温度（T）下，给定Z值所产生的灭菌效果与在参比温度（T0）下给定Z值所产生的灭菌效果相同时，所相当的灭菌时间，以min为单位。F值常用于干热灭菌。F值的数学表达式如下：式中，Δt为测量被灭菌物温度的时间间隔，一般为0.5～1min，T为每个时间间隔Δt所测得被灭菌物温度，T0为参比温度。
113.——孢子（菌株）稳定
114.——耐热性强于被灭菌物品中常见的污染菌
115.——系非致病菌
116.——易于培养，孢子萌发率要在90%以上
117.——有效期长
118.——保存及使用方便
119.——安全性好
120.
121.微生物挑战试验
122.湿热灭菌工艺验证用生物指示剂的来源主要有两类:
123.一类是采用标准生物指示剂，这类生物指示剂可从市场购买；
《注射剂2008’新法规解析及应对方案系列培训班》
注射制剂无菌保证
工艺技术要求的探讨
注射制剂无菌保证工艺技术要求
一、前言
二、
三、二、注射剂基本技术的要求
四、
五、三、无菌保证工艺研究与验证要求
六、
七、四、无菌药品生产关键工艺的法规要求
八、
九、(以最终湿热灭菌药品工艺为例)
一十、
一、前言
1970年~1975年，美国因输液污染所导致的并发败血症事件有400多起，这在美国国内引起强烈的反响。FDA从1975年开始进行了深入、广泛的调查，发现这些事件并不是出于企业违规生产，而是整个生产体系中的不稳定因素所致。
56.微生物挑战试验（残存概率法）
57.灭菌前微生物污染水平---数量和耐热性
58.---过程控制
59.
60.热力灭菌的动力学原理
61.
62.微生物耐热参数——（D值）
63.温度系数——Z值
64.FT值——T℃灭菌时间
65.F0值——标准灭菌时间
66.无菌保证值（SAL）
67.灭菌率L
68.对数规则：Arrhenius质量作用定律
107.
108.微生物挑战试验
109.所谓湿热灭菌工艺的生物指示剂微生物挑战试验，系指将一定量已知D值的耐热孢子接入被灭菌的产品中，在设定的湿热灭菌条件下灭菌，以验证设定的灭菌工艺是否确实能赋予产品所需的SAL为10－6而进行的试验及评价过程。
110.
111.微生物挑战试验
P和BP对这方面有专门的论述。一般说来，对生物指示剂选择的原则性要求是：
干热灭菌法系指物品于干热灭菌柜、隧道灭菌器等设备中、利用干热空气达到杀灭微生物或消除热原物质的方法。适用于耐高温但不宜用湿热灭菌法灭菌的物品的灭菌，如玻璃器具、金属制容器、纤维制品、固体试药、液状石蜡等均可采用本法灭菌。
干热灭菌条件一般为160～170℃×120min以上、170～180℃×60min以上或250℃×45min以上，也可采用其它温度和时间参数。总之，应保证灭菌后的产品其SAL≤10-6。干热过度杀灭后产品的SAL应≤10-12，此时物品一般无需进行灭菌前污染微生物的测定。250℃ 45min的干热灭菌也可除去无菌产品包装容器及有关生产灌装用具中的热原物质。
24.
25.同时明确如下要求：
26.无菌药品生产企业，首先应根据特定的处方选择最佳的灭菌方法，然后再选择包装材料
27.使用热不稳定的包装材料不能作为选择无菌生产工艺的理由
28.因其他因素选择的包装容器不能进行最终灭菌，药品生产企业仍有责任不断寻找可接受的替代容器，使得产品可以在可接受的时间范围内采用最终灭菌的方法
124.另一类需用从日常生产污染菌监控分离出的最耐热微生物孢子制备，并测得相关参数（最佳生长条件、耐热性等）后方可使用。
125.
126.湿热灭菌工艺验证中常用的生物指示剂
127.菌种名称常规D121℃值/min
嗜热脂肪芽胞杆菌Bacillus stereatherno philus1.5～3.0
枯草芽胞杆菌Bacillus subtilis ATCC52300.3～0.7
96.灭菌率L：
97.L指在某一温度T(℃)下灭菌lmin所获得的标准灭菌时间。
98.L=10 (Ti-TR) /Z
99.Ti——灭菌温度
100.TR——标准参照温度
101.Z——微生物死亡率常数
102.
103.
104.微生物挑战试验
105.微生物挑战试验
106.生物指示剂--简称为BI（biological indicator）:是对特定灭菌工艺具有一定耐受性并且能够定量测定灭菌效力的微生物制剂，适用于制备生物指示剂的微生物多为芽胞类细菌，这是因为，除辐射灭菌外，芽胞类细菌比常规的生长态微生物对灭菌工艺具有更强的耐受性。生物指示剂既可用来测定一个给定的灭菌工艺条件的灭菌效果，也可判别它是否符合无菌保证要求。
16.凡是可以最终灭菌的产品务必要最终灭菌
17.
18.
19.决策树越往下，风险越大
20.需要提供的必要证据越多
21.5.基本原则:
22.无菌产品应在灌装到最终容器后进行最终灭菌（首选）
23.如因产品对热不稳定不能进行最终灭菌时，可采用最终灭菌方法的替代方法----过滤除菌和/或无菌生产工艺（退而求其次）
29.任何商业考虑均不能作为不使用具有最高无菌保证水平的最终灭菌方法的理由
30.常用的灭菌方式及其无菌保证水平
31.1、过度杀灭法
32.微生物残存概率＜10-6
33.2、残存概率法
34.微生物残存概率＜10-6
35.3、无菌生产工艺
36.无菌保证一般只能达到10-3水平
37.
38.最终灭菌工艺的验证要求
二、已经批准注册的化学药品注射剂和多组分生化药注射剂也应参照《技术要求》进行相关研究，并在申报再注册时提供相关研究资料。
三、对已上市化学药品注射剂、多组分生化药注射剂进行仿制、改变剂型或者改变给药途径研究时，研究者应当慎重考虑已上市品种的研究基础。
以化学药品注射剂为例:
一、化学药品注射剂剂型选择的必要性、合理性
凝结芽胞杆菌Bacillus coagulans0.4～0.8
梭状芽胞杆菌Clostridium sporogenes0.4～0.8
例:
国产非治病性嗜热肪芽胞菌芽胞（ATCC 7953）
D值-------------D121值1.74
二、化学药品注射剂规格的合理性、必要性
三、化学药品注射剂原、辅料质量控制及来源
四、化学药品注射剂处方及制备工艺合理性、可行性研究，特别是灭菌工艺的选择及验证研究、工艺稳定性研究等
五、化学药品注射剂质量研究及质量标准制订
六、化学药品注射剂稳定性研究
七、化学药品注射剂非临床安全性评价的技术要求
八、化学药品注射剂临床研究技术要求
F0值为一定灭菌温度（T）下，Z为10℃时所产生的灭菌效果与121℃，Z值为10℃所产生的灭菌效果相同时所相当的时间（min）。也就是说，不管温度如何变化，t分钟内的灭菌效果相当于在121℃下灭菌F0分钟的效果。在湿热灭菌时，参比温度定为121℃，以嗜热脂肪芽孢杆菌作为微生物指示菌，该菌在121℃时，Z值为10℃。则：显然，即把各温度下灭菌效果都转化成121℃下灭菌的等效值。因此称F0为标准灭菌时间（min）。F0目前仅应用于热压灭菌。
88.FT＝DT×ΔlgN
89.式中:
90.DT为在T(℃)下微生物的D值；
91.ΔlgN为T(℃)下灭菌程序使微生物数下降的对数单位数。
92.F0值:
93.标准灭菌时间（用于湿热灭菌），系灭菌过程赋予待灭菌物品在121℃下的等效灭菌时间（分钟）。
94.FH值:
95.标准灭菌时间（用于干热灭菌），系灭菌过程赋予待灭菌物品在170℃下的等效灭菌时间（分钟）。
39.最终灭菌工艺：
40.过度杀灭法（Fo≥12）
41.残存概率法（8≤Fo＜12）
42.
43.目标：灭菌后的微生物残存概率＜10-6
44.过度杀灭设计方法：
45.一种灭菌设计方法，只需要最少的关于产品生物负载的信息。最差条件的生物负载猜测用来确定所产生的杀灭力需要获得灭菌物上的PNSU为10-6。在使用这个方法时，确效计划必须证明FBIO和FPHY都大于12分钟。
采用干热灭菌时，被灭菌物品应有适当的包装和装载方式，保证灭菌的有效性和均一性。
干热灭菌法验证与湿热灭菌法相同，应进行热分布试验、热穿透试验、生物指示剂验证试验或细菌内毒素灭活验证试验。以确认灭菌柜中的温度分布符合设定的标准、确定最冷点位置、确认最冷点标准灭菌时间（FH）能达到设定标准并达到SAL要求。常用的生物指示剂为枯草芽孢杆菌孢子(Spores of Bacillus subtilis)。细菌内毒素灭活验证试验是证明除热原过程有效性的试验。一般将不小于1000单位的细菌内毒素加入待去热原的物品中，证明该去热原工艺能使内毒素至少下降3个对数单位。细菌内毒素灭活验证试验所用的细菌内毒素一般为大肠杆菌内毒素（Escherichia coli endoxin）。验证时，一般采用最大装载方式。