微生物实验复习题

兽医微生物学实验复习题1、兽医微生物实验室注意事项是什么？答：①防止病原微生物的散布；②防火；③节约；④标记；⑤记录；⑥安全；⑦清洁与秩序2、观察细菌常用什么显微镜？它主要有哪几部分组成？答：光学显微镜光学部分:目镜、物镜、反光镜、聚光器；机械部分：镜座、镜臂、镜筒、粗调节器、细调节器。

3、油镜用毕后，为什么必须把油镜擦净？答：油镜的原理是通过香柏油的光路折射能更加清晰的观察微生物，油具有粘附性，且不溶于水，所以，在观察完后，香柏油会粘附在镜头上，不擦去的话，风干后镜头就变得模糊不清，甚至报废了，又因为是油所以简单的用擦镜纸擦拭是擦不干净的，二甲苯属于有机溶剂，4、用过多的二甲苯或酒精乙醚混合液擦拭镜油有什么危害？答：过多的二甲苯或酒精乙醚混合液容易脱胶，使油镜脱落。

5、使用油镜时用什么作为物镜与玻片间的介质，有几种？答：可用与玻璃的折光系数相近的油类，有7种，如柏木油。

6、观察细菌时显微镜的操作步骤是什么？主意事项是什么？答：将显微镜物镜镜头转为油镜对好光线（开高集光器，开大光圈，调好反光镜）使亮度最强在载物台上放上载玻片，并在玻片上放一滴香柏油将标本移至载物台正中转动粗准焦螺旋，使油镜浸入油滴中左眼由目镜注视镜内，慢慢地转动细准焦螺旋，直至物像清晰为止注意事项：1.调节粗准焦螺旋的时候要慢2.观察完后要用二甲苯擦拭油镜7、微生物绘图要求有哪些？答：①绘出一个视野，圆形。

②细菌大小比例合理，必须标明名称。

③标名显微镜的放大倍数，标明菌名。

④绘图一律用铅笔。

8、制备细菌染色标本片时应注意哪些事项？答：①干燥好的抹片固定时，使抹面向上，以其背面在酒精灯外焰上如钟摆样来回拖动过数次，略作加热，但不能太热，以不烫手为度进行固定。

9、涂片固定的意义何在？固定时应注意什么问题？有哪些固定方法？答：意义：涂片固定可将涂片上的细菌杀死，使之固定而不会到处漂移，并且死菌比活菌更容易着色，为后面染色做准备。

注意：若用火焰固定时，抹面向上，以其背面在酒精灯外焰上如钟摆样来回拖动过数次，略作加热，但不能太热。

固定方法：火焰固定和化学固定。

10、细菌染色的原理是什么？答：细菌的等电点较低，约在pH 2～5之间，故在中性、碱性或弱碱性溶液中，菌体蛋白质电离后带负电荷，易与带正电荷的碱性染料如龙胆紫及碱性复红等结合，使细菌被染成紫色或红色。

11、试述细菌革兰氏染色法的步骤及结果。

革兰氏染色的原理是什么？答：原理：G＋菌：细胞壁厚，肽聚糖网状分子形成一种透性障，当乙醇脱色时，肽聚糖脱水而孔障缩小，故保留结晶紫-碘复合物在细胞膜上。

呈蓝紫色。

Gˉ菌：肽聚糖层薄，交联松散，乙醇脱色不能使其结构收缩，其脂含量高,乙醇将脂溶解，缝隙加大，结晶紫-碘复合物溶出细胞壁，沙黄复染后呈红色。

步骤：①加草酸铵结晶紫染色液 1-2min，水洗；②加革兰氏稀碘液 1-3min，水洗；③加95%酒精脱色 0.5min，水洗；④10倍稀释石碳酸复红液复染 10-30s，水洗；⑤吸干或自然干燥，镜检结果：革兰氏阳性菌呈蓝紫色，革兰氏阴性菌呈红色。

12、什么是培养基？试述制备培养基的原则和要求。

（实验指导书19页）答：培养基用人工方法将多种物质按照各类微生物生长的需要而合成的一种混合营养基质，一般用于分离和培养细菌。

1 原则和要求：选择适合细菌生长的温度；2 选择适合细菌生长的环境；3 应纯化4 接种量少5 选择适合细菌生长的培养基；6 按无菌操作13、试述普通肉汤培养基的制备方法及其用途。

：① 按以下剂量称各种试剂置于铝锅中：牛肉膏 5g 蛋白胨 10g 氯化钠 5g 磷酸氢二钾1g 蒸馏水 1000ml② 上述成分加热溶解后，以氢氧化钠溶液调整酸碱度至ph 7.4~7.6③ 将肉汤分装于试管中，塞上棉塞，用包装纸包扎好待灭菌④ 将培养基置于高压蒸气锅内，121°C灭菌15~30min。

用途：①用作细菌的液体培养②检查细菌的发育状况，以及形成的沉淀物、菌膜、菌环等③制作固体培养基的基础14、试述普通琼脂培养基的制备方法及其用途。

答：① 普通肉汤500ml 琼脂10g② 加热煮沸，待琼脂完全融化后，将ph调至7.4~7.6，再加热煮沸20min③ 分装，包扎④ 灭菌121°C，15~30min。

用途：① 细菌的分离培养，纯培养② 观察菌落形状及保存菌种③ 制作特殊培养基的基础15、什么是灭菌？有哪些方法？高压蒸汽灭菌为什么要将灭菌锅的冷空气排净尽？灭菌完毕后什么情况下才可以打开锅盖取灭菌物品？答：灭菌：杀灭物体上所有微生物。

包括杀灭细菌芽孢，霉菌孢子在内的全部病原微生物和非病原微生物。

灭菌方法：① 物理消毒法:干热灭菌法：火焰、热空气、红外线灭菌；湿热灭菌法：煮沸、较低温度杀灭液态食品中的微生物、流通蒸汽，高压蒸气锅；辐射灭菌法：可见光线、紫外线等。

② 化学消毒法:酒精等.原因：排除灭菌器内原有的冷空气,为了防止高压锅内存在的冷空气时,虽压强达到规定数目,但实际温度却不足,会影响灭菌效果.灭菌完毕后,要等到压强降下来后,将气门慢慢打开,放气.排完气体后,开盖,取灭菌物品.16、染菌或接种有微生物的培养基或培养器皿为什么不能直接洗涤而需要先经过高压蒸汽灭菌?答:因为高压蒸汽灭菌可以杀灭存留在培养基或培养器皿中的任何微生物,甚至芽孢,可以防止微生物外泄,若直接洗涤,则微生物会通过下水道污染水源,若为致病菌将导致更为严重后果.17、对含糖培养基进行高压灭菌时，应采用多大的压力、多长时间灭菌为宜？答：103.41KPa，121°C,15~30min。

18、对血清、噬菌体浓缩液、氨基酸溶液、维生素溶液能否进行高压蒸汽灭菌?采用何种方法除菌为宜？答：不能用高压蒸气锅灭菌，因为这些溶液不耐高温，在高压蒸气灭菌锅内，温度达121°C,可使这些溶液变质,应该使用流通蒸汽灭菌(间歇灭菌法/丁达尔灭菌法)19、干热灭菌的温度和时间是多少？不同的灭菌方法适用的对象分别有哪些？答：热空气灭菌法是160°C，2h。

火焰灭菌分为灼烧和焚烧，灼烧适用于耐烧的接种环、金属器皿、试管口等。

焚烧适用于烧毁物品的灭菌；热空气灭菌法适用于高温下不损坏、不变质、不蒸发的物品，如各种玻璃皿、瓷器、金属器械等的灭菌。

20、细菌分离培养的目的是什么？何谓纯培养？答：主要是在含多种细菌的病料或培养物中挑选出某种细菌。

　如果在一个菌落中所有细胞均来自于一个亲代细胞，那么这个菌落称为纯培养21、培养皿培养时为什么要倒置？答：① 主要是为了便于搬运和操作方便 ② 培养时会有水滴在盖上，避免形成菌落。

22、细菌分离培养的方法有哪些？常用什么方法？细菌保藏的种类与方法有哪些？答：分离培养的方法有：划线分离培养法、纯培养的获得与移植法、肉汤增菌培养法，穿刺培养，倾注培养法，利用化学药品的分离培养法，通过实验动物分离培养。

常用的是划线分离培养法。

菌种保存的方法有：传代培养保存、沙土管保存、液氮保存、冷冻干燥保存。

23、细菌菌落特征怎样描述？答：细菌菌落的特征描述应从：菌落的大小、形状、边缘、表面性状、隆起度、颜色及透明度、硬度与溶血这几个方面去描绘。

菌落大小：不足1mm，露滴状；1~2mm，小菌落；2~4mm，中等大菌落；4~6mm，巨大菌落。

形状：圆形、不正形、跟足形、葡萄叶形。

边缘：整齐、锯齿状、网状、树叶状。

隆起度：有隆起、轻度隆起、中央隆起、陷凹等。

颜色：无色、灰白色、光滑透明、半透明。

硬度：黏液状、膜状、干燥、湿润。

溶血：若为鲜血琼脂平板上，则看是否溶血。

24、在挑取固体培养基上的细菌作平板分区划线时，为什么在每区之间都要将接种环上剩余的细菌烧掉？答：烧掉接种环上剩余的菌 ① 为了保证下个区域的细菌量较少，更容易在培养后得到单一菌落 ② 防止接种环在上次划线时被其它细菌污染而影响下一个区域；③ 保证了无菌操作。

25、革兰氏染色的关键步骤是什么？答：革兰氏染色中关键的一步是：加稀释的碳酸复红染料。

该步必须保证染色的时间不过长，保证在10~30s之间。

因为在未知菌情况下。

若为阴性菌则该步对其无多大影响；若为阳性菌，染色时间久了，复红也会进入细胞壁内，将原来的结晶紫与碘所形成蓝紫复合物覆盖而呈红色。

26、当你对未知菌进行革兰氏染色时，怎样保证操作正确，结果可靠？答：未知菌革兰氏染色时必须保证：1、2两步即加草酸结晶紫和碘的时间在1~3min；而加95%酒精脱色时，看到颜色浮于酒精上是最佳，可用水洗掉；最后用复红染料应把握好时间，10~30s最佳，不宜过长也不宜过短。

27、进行革兰氏染色时注意那些事项？答：1.革兰氏染色成败的关键是酒精脱色。

如脱色过度，革兰氏阳性菌也可被脱色而染成阴性菌；如脱色时间过短，革兰氏阴性菌也会被染成革兰氏阳性菌。

脱色时间的长短还受涂片厚薄及乙醇用量多少等因素的影响，难以严格规定。

2.染色过程中勿使染色液干涸。

用水冲洗后，应吸去玻片上的残水，以免染色液被稀释而影响染色效果。

3.选用幼龄的细菌。

G+菌培养12h-16h，E.coli培养24h。

若菌龄太老，由于菌体死亡或自溶常使革兰氏阳性菌转呈阴性反应。

28、M．R 试验与V.P试验的中间代谢产物和最终代谢产物有何异同？为什么最终代谢产物会有不同？糖分解实验怎样识别？（实验书37）答：MR试验和VP试验中葡萄糖被发酵后均可产生丙酮酸，但在VP试验中2个丙酮酸又可脱羧生成2个酰甲基醇，而MR试验中只代谢得到丙酮酸。

代谢产物的不同是根据细菌种类的不同而不同，有的细菌能使丙酮酸脱羧而有的不能。

VP试验中，当加入甲液，乙液后，静置15min，培养基呈红色为阳性，不变色为阴性；MR试验中，当加入甲基红试剂后，若培养基呈红色为阳性，不变色为阴性；29、解释所做生化试验的原理？作生化实验时有哪些主意事项？答：原理：不同种类的细菌，由于细胞内新陈代谢酶系不同，对营养物质的吸收、利用、分解排泄及合成产物有很大的差别，生化试验是检测某种细菌能否利用某种物质及其对某种物质的代谢及合成产物，确定细菌合成和分解代谢产物特异性来鉴定细菌的种类。

注意事项：1.纯培养物方可进行生化试验；2.接种时要避免交叉污染；3.标记准确；4.试剂可用标准菌株作对照。

30、试述生化试验在细菌鉴定中的作用与意义？答：生化试验在对革兰氏染色反应和菌体及菌落形态相同或相似的细菌的鉴定上尤为重要，它可根据细菌内在的区别进行鉴定，如它们对物质的吸收，对物质的代谢及合成产物的个不相同来确定其特异性，进而鉴别出细菌的种类。

31、试述药敏试验的意义。

圆纸片法的检测注意事项？答：各种病原微生物对抗菌药物的敏感性不同，同种细菌不同菌株对同一种药物的敏感性也各有差异，检测细菌对抗菌药的敏感性，可以筛选最有效的药物用于临床，控制细菌性传染病的流行至关重要。