胶体金试纸条检测技术
最新实验四 胶体金试纸条检测技术
H5ＡIV细胞 毒阳性结果 阴性对照
测定
过剩的免疫金复合物继续前行， 至 参 照 区 与 固 相 抗 小 鼠 IgG 结 合（免疫金复合物中的单克隆 抗 体 为 小 鼠 IgG）， 而 显 出 红 色质控线条（R）。
测定
阴性标本则无反应线条，而仅显示质控线条。
胶体金快速诊断技术的特点
简 捷 快 速 ： 操 作 简 单 ， 一 般 只 要 5 -10min 就会出结果，而其它方法如ELISA需要1-2h， PCR 需要时间更长。
➢最常用的是双抗夹心法检测抗原
胶体金试纸条示意图
样品垫
连接垫 （胶体金垫）
质检线
吸收垫
背衬 （底板）
检测线
硝酸纤维素膜
ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ
测定
测定时将试纸条下端浸入液体 标本中，下端吸水材料即吸取 液体向上端移动，流经C处时使 干片上的免疫金复合物复溶， 并带动其向膜条渗移。
测定
若 标 本 中 有 待 测 特 异 抗 原 ， 即 可与免疫金复合物中的抗体结 合，此抗原抗体复合物流至测 试区即被固相抗体捕获，在膜 上显出红色反应线条（T）。
胶体金标记技术（Immunogold labeling technique）是以胶体金作为示踪标记物应 用于抗原抗体反应的一种新型免疫标记技术。
二、胶体金试纸条诊断技术的原理
以硝酸纤维素膜为载体，利用了微孔膜的 毛细血管作用，滴加在膜条一端的液体慢慢 向另一端渗移，通过抗原抗体结合，并利用 胶体金呈现颜色（红色）反应，检测抗原/抗 体。
（HAuCl4）的水溶胶，氯金酸在还原剂的 作用下，聚合成特定大小的金颗粒，并由于
静电作用成为一种稳定的胶体状态。
➢胶体金的质量判定标准
胶体金试纸条半定量的原理
胶体金试纸条半定量的原理胶体金试纸条是一种半定量的检测工具，它通过特殊的反应机制检测到目标物质的存在而实现定量化。
该试纸条主要由胶体金颗粒和特定的前体分子构成。
胶体金颗粒作为试纸条的核心组成部分，具有很高的表面活性和生物相容性。
这种颗粒的尺寸约为20到50纳米，具有很好的光学性质。
它们吸收和散射光线的能力非常强，所以在水溶液中能够造成很强的表面等离子共振效应。
当胶体金颗粒受到环境信号激发时，形成的电场会产生强烈的局部热效应和极化效应，从而引起表面等离子共振的出现。
这种表面等离子共振现象能够改变胶体金颜色的强度和色调。
胶体金颜色的变化是胶体金试纸条半定量原理的基础。
当前体分子接触到胶体金颗粒时，它们会与胶体金颗粒表面上的裸露离子成键。
这些前体分子能够在水中游离和沉淀，其浓度随环境信号的增加而变化。
当前体分子沉积在接触面上时，胶体金颜色的强度和色调就会相应发生变化。
胶体金试纸条的半定量原理也利用了金纳米粒子表面修饰的性质。
金纳米粒子表面修饰能够改变金纳米粒子的SERS特性，从而实现目标物质的检测。
这种修饰的方法包括吸附、共价键合、离子交换等。
胶体金试纸条的半定量原理还利用了金纳米粒子表面积的大小和相对稳态。
这些属性能够影响金纳米颗粒和前体分子之间的化学反应。
通过测量目标物质与金纳米颗粒之间的交互作用，就能够获得目标物质的数量信息。
总之，胶体金试纸条的半定量原理是通过利用胶体金颗粒、特定前体分子、金纳米颗粒表面修饰的特性，并结合虚函数的原理，使很低浓度的样品向成常见的视检品的化合物浓度转化。
这种检测方法广泛应用于生物医学、环境监测和食品安全检测等领域。
胶体金试纸条检测技术
一、简
介
胶体金试纸条诊断是采用胶体金免疫层析 技术研制而成，该技术是90年代初在免疫渗 滤技术的基础上建立的一种简易快速的免疫 学检测技术，最先用于人绒毛膜促性腺激素 （ HCG）的测定和乙型肝炎病毒表面抗原 （HBsAg）等检测。
胶 体 金 （ Colloidal gold） 是 氯 金 酸
technique）是以胶体金作为示踪记物应
用于抗原抗体反应的一种新型免疫标记技术。
二、胶体金试纸条诊断技术的原理
以硝酸纤维素膜为载体，利用了微孔膜的毛细 血管作用，滴加在膜条一端的液体慢慢向另一端 渗移，通过抗原抗体结合，并利用胶体金呈现颜 色（红色）反应，检测抗原/抗体。有三种反应模 式：夹心法，间接法，竞争抑制法。
最常用的是双抗夹心法检测抗原
胶体金试纸条示意图
连接垫 （胶体金垫） 样品垫 质检线 吸收垫
背衬 （底板）
检测线
硝酸纤维素膜
测
定
测定时将试纸条下端浸入液体
标本中，下端吸水材料即吸取 液体向上端移动，流经C处时使 干片上的免疫金复合物复溶， 并带动其向膜条渗移。
测
定
若标本中有待测特异抗原，即
可与免疫金复合物中的抗体结 合，此抗原抗体复合物流至测 试区即被固相抗体捕获，在膜 上显出红色反应线条（T）。
胶体金的质量判定标准 质量好的胶体金：溶液呈红色，胶体金颗粒为球 形，大小均一，无棱角。 质量差的胶体金：溶液呈紫色，大小不一，形状 各异。
胶体金标记的原理：胶体金在碱性条件下带
负电荷，与蛋白质分子的正电荷基团藉静电 吸引而形成牢固结合。
胶体金标记技术（Immunogold labeling
测
定
过剩的免疫金复合物继续前行，
胶体金层析法
胶体金层析法
胶体金层析法（Colloidal Gold Lateral Flow Assay）是一种常见的免疫层析检测技术，也被称为“快速测试纸条”或“快速诊断试纸条”。
这种技术被广泛用于医学诊断、食品安全检测、环境监测等领域。
下面是胶体金层析法的基本原理和步骤：
原理：
1.抗原-抗体反应：根据抗原和抗体之间的特异性结合原理，将被检测的分
子（如蛋白质、病毒抗原等）与特异性抗体结合。
2.胶体金标记：抗体或抗原被标记上胶体金颗粒，使其呈现颜色。
3.层析效应：在试纸条上形成的吸附带将试剂中的标记复合物隔离出来，
通过毛细管作用，使其沿着试纸条上的纵向扩散。
步骤：
1.取得待检样本（如血液、尿液、食品提取物等）。
2.将待检样本加入试剂盒中，与试剂中的抗体或抗原相结合。
3.混合物通过毛细管效应在试纸条上扩散。
4.当待检样本中存在目标分子时，会与试纸条上的抗体或抗原结合，形成可
见的标记复合物。
5.标记复合物在试纸条上的特定区域显示出色带，从而进行目标物的定性或
半定量检测。
这种技术具有简单、快速、便携、成本低等优点，在诊断和快速检测中应用广泛。
例如，它被用于临床诊断、药物滥用检测、感染病原体检测（如流感、艾滋病毒等）以及食品安全检测等领域。
胶体金试纸条的制备
抗体与胶体金的偶联机制
抗体活性的保持
在抗体与胶体金结合过程中，应确保 抗体的活性不受影响，以保证检测的 灵敏度和特异性。
抗体与胶体金的结合是通过共价键或非共价 键实现的。共价键结合力较强，但不易解离 ；非共价键结合力较弱，但易于解离。
试纸条的制备工艺
基材选择与处理
选择合适的支持膜作为试纸条的基材，如硝酸纤维素膜、 聚酯膜等，并进行预处理，以提高其亲水性和结合力。
流感检测
在流感高发季节，胶体金试纸条可以快速检测流 感病毒抗原，为防控流感提供有力支持。
食品安全检测
农药残留检测
胶体金试纸条可用于检测果蔬等农产品中的农药残留，保障食品 安全。
兽药残留检测
通过胶体金试纸条检测肉类、禽蛋等食品中的兽药残留，有助于 监控食品安全，防止药物滥用。
重金属离子检测
用于检测食品中重金属离子的胶体金试纸条，能够快速、准确地 检测出食品中的重金属含量。
新材料的应用
高分子材料
研究新型高分子材料，提高试纸条的灵敏度、稳定性和耐用性。
纳米材料
利用纳米材料的特点，增强试纸条的信号放大效果和特异性。
生物材料
探索生物相容性更好的生物材料，降低试纸条对人体的潜在风险。
新技术的开发
免疫分析技术
研究更高效、特异的免疫分析技术，提高试纸条的检测准 确性。
微流控技术
环境监测
1 2
水质监测
胶体金试纸条可用于快速检测水体中的有害物质， 如铅、汞、砷等，确保水质安全。
大气污染监测
通过胶体金试纸条检测大气中的有害气体和颗粒 物，有助于及时发现和防控空气污染。
3
土壤污染监测
胶体金试纸条可用于检测土壤中的重金属和有机 污染物，为土壤污染治理提供依据。
胶体金试纸条技术
➢ When excess immune gold compounds flow to the reference area and combine with solidphase anti-mouse IgG(monoclonal antibodies in the immune gold compounds is mouse IgG), then it will show the red quality control line.
Colloidal god
It is gold chloride acid (HAuCl4) hydrosol, gold chloride acid can aggregat into a certain size of gold particles under the action of reducing agent and become a stable colloidal state by electrostatic interactions.
Sample pad
Strip structure
Colloidal gold pad The line of control line (C) absorbent paper
Tomographic direction
PVC baseplate
holding wire（T）
NC membrane
measure
The colloidal gold strip testing 术
Introduction
The colloidal gold strip diagnosis is developed by colloidal gold immune chromatography technology. The technology was established on the basis of the immune infiltration technology in the early 90 s. It is a simple and rapid immunological detection technology. The first to use it to detect human chorionic gonadotropin (HCG)and hepatitis B virus surface antigen(HBsAg),and so on.
绒毛膜促性腺激素(HCG)胶体金试纸条诊断实验
绒毛膜促性腺激素（HCG）胶体金试纸条诊断实验摘要：目的：掌握胶体金试纸条诊断技术的原理，使用方法及结果的判定；掌握绒毛膜促性腺激素（HCG）胶体金试剂盒的制作技术。
胶体金是氯金酸(HAuC14)的水溶胶，利用HAuCl4在还原剂(柠檬酸钠)的作用下，聚合成特定大小的金颗粒，形成带负电的疏水胶溶液，由于静电作用成为一种稳定的胶体状态，故称胶体金。
本实验所用到的双抗夹心法是胶体金检测平台最常用的检测方法，主要用于检测比较大的生物分子及颗粒性抗原。
关键词：胶体金绒毛膜促性腺激素（HCG）免疫金胶体金试剂盒双抗夹心法绒毛膜促性腺激素（HCG）是胎盘合体滋养层细胞所分泌的一种糖蛋白激素，胎盘绒毛膜的合体滋养层产生。
其主要功能就是刺激黄体，有利于雌激素和黄体酮持续分泌，以促进子宫蜕膜的形成，使胎盘生长成熟。
HCG结构中包括α、β两个亚基，α-亚单位为垂体前叶激素所共有，β链为其独有，β亚基被用来制备特异性抗体测定血中的HCG，专用名为β-HCG。
胶体金快速诊断技术具有简捷快速，结果易于判定，特异性好等特点。
该技术操作简单，一般只要5-10min 就会出结果，阴、阳性呈色很明显，肉眼很容易判断。
该技术大多用单克隆抗体标记，具有很好的特异性。
胶体金试纸条诊断是采用胶体金免疫层析技术研制而成，该技术是90年代初在免疫渗滤技术的基础上建立的一种简易快速的免疫学检测技术，最先用于人绒毛膜促性腺激素（HCG）的测定和乙型肝炎病毒表面抗原（HBsAg）等检测。
双抗夹心法需要准备待测抗原的配对抗体，一个抗体用胶体金标记并固定在结合垫上，另一个抗体固定在NC膜的检测线(T线)上。
另外，还需要准备能与金标抗体(即胶体金标记抗体)特异结合的二抗并固定于NC膜的控制线(C线）上。
1.仪器和材料1.1可编程切条机切条机是将试纸板快速切割成一定宽度的单份试纸，适合各类不同规格试纸的研发与生产。
其最大的特点是一根一根切下来，可以随时终止并更改宽度。
【免疫胶体金试纸条】竞争抑制法与夹心法(过程详解)
胶体金试纸条：竞争抑制法与夹心法实验过程详解1.胶体金试剂条竞争抑制法加样品时反应过程胶体金试纸条检测多抗原决定簇的抗原通常采用夹心法原理建立免疫胶体金试纸条。
如果检测小分子半抗原时，采用常规的夹心法原理就无法建立，通常采用竞争抑制法。
以下是竞争抑制法原理建立的免疫胶体金试纸条的工作过程：A. 胶体金试剂条，紫色区域为抗体与胶体金复合物吸附的胶体金垫。
B. 在样品垫处加样，样品中的抗原就会向胶体金垫处移动（扩散）下图为胶体金垫中的胶体金吸附有抗体（示意图）样品中的抗原或半抗原就会与吸附有抗体的胶体金（免疫胶体金）结合,夹心法胶体金试纸条中，胶体金中吸附的针对某一种抗原决定簇的抗体（Ab1），免疫胶体金为Ab1吸附到胶体金上，即Ab1-Au ，由于胶体金为红紫色，故而肉眼可见紫红色物质吸附至胶体垫。
在竞争抑制法胶体金试纸条中，T 线事先已经吸附着半抗原与另外一个载体蛋白复合物（与免疫所用的载体蛋白不同），由于该 复合物是无色的，当样品中没有半抗原时，NC 膜上T 线就会与胶体金上的抗体结合，从而显示红紫色的，当遇上样品半抗原，该 半抗原就会与吸附抗体的胶体金结合，形成半抗原：抗体1胶体金复合物，在T 线处的半抗原与载体的复合物，就无法再与Ab1-胶体金，再反应，形成复合物，由于胶体金是红紫色的，故而样品中有半抗原存在时，T 线就不会显示红 紫色。
如果样品中没有对映的抗原，则T 线就形成载体蛋白2-半抗原：抗体1-胶体金 复合物，从而显示红紫色。
上图中三角形代表半抗原左图为T 线中吸附的是半抗原-载体蛋白复合物捕获Ab1-胶体金复合物，从而在T 线显示红紫色条带。
其中的兰色方框表示载体蛋白，三角形表示半抗原，当吸附在胶体金上的抗体，没有结合半抗原时，就能结合到T 线上，反之，当吸附在胶体金上的抗体被半抗原结合后，就无法再与T 线上的半抗原-载体蛋白复合物结合。
注意，T 线上的载体蛋白是无色的，因而T 线没有结合胶体鑫时就是无色的，上述兰色方框，只是用来代表载体蛋白，并不表示载体蛋白是蓝色的。
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吸收垫
背衬 （底板）
检测线 硝酸纤维素膜
测定
测定时将试纸条下端浸 入液体标本中，下端吸 水材料即吸取液体向上 端移动，流经C处时使 干片上的免疫金复合物 复溶，并带动其向膜条 渗移。
测定
若标本中有待测特异抗 原，即可与免疫金复合 物中的抗体结合，此抗 原抗体复合物流至测试 区即被固相抗体捕获， 在膜上显出红色反应线 条（T）。
阴性对 照
H5ＡIV 细胞毒纸条诊断技术 的原理
以硝酸纤维素膜为载体，利用了微 孔膜的毛细血管作用，滴加在膜条一 端的液体慢慢向另一端渗移，通过抗 原抗体结合，并利用胶体金呈现颜色 （红色）反应，检测抗原/抗体。有 三种反应模式：夹心法，间接法，竞 争抑制法。
胶体金试纸条示意 图
样品垫
连接垫
（胶体金垫） 质检线
结果易于判定：阴、阳性呈色很 明显，肉眼很容易判断。
特异性好：因为该技术大多用单 克隆抗体标记，这决定了它具有
胶体金快速诊断技术的 应用
病毒性疾病：传染性法氏囊病 、禽流感、新城疫、犬细小病 毒、猪瘟等。
寄生虫疾病：血吸虫病、旋毛 虫病、囊虫病、恙虫病。
细菌性疾病：霍乱弧菌、类鼻 疽。
H5 亚 型 AIV 尿 囊 液阳性结 果
测定
过 剩 的 免 疫 金 复 合 物 继续前行，至参照区 与固相抗小鼠IgG结合 （免疫金复合物中的 单克隆抗体为小鼠 IgG），而显出红色质 控线条（R）。
测定
阴性标本则无反应线条，而仅显 示质控线条。
胶体金快速诊断技术的 特点
简捷快速：操作简单，一般只要 5-10min 就会出结果，而其它 方 法 如 ELISA 需 要 1 -2h ， PCR 需要时间更长。
➢基础金核 ➢双离子 内层负离子（AuC12－） zeta电位 z排 体et斥 间a电， 的位以 溶可液维以中持外使胶层胶体离金体子的金层稳颗定粒H状+之分态间散。相在互胶
胶体金颗粒对蛋白质有
很强的吸附功能，而不被坏其 生物活性，可以与蛋白质等 （葡萄球菌A蛋白、免疫球蛋 白）等非共价结合，形成胶体 金标记物。
胶体金试纸条诊断技术
一、简 介
胶体金试纸条诊断是采用胶体 金免疫层析技术研制而成，该技 术是90年代初在免疫渗滤技术 的基础上建立的一种简易快速的 免疫学检测技术，最先用于人绒 毛 膜 促 性 腺 激 素 （ HCG） 的 测 定和乙型肝炎病毒表面抗原 （HBsAg）等检测。
胶体金（Colloidal gold）是氯 金酸（HAuCl4）的水溶胶，氯 金酸在还原剂的作用下，聚合成 特定大小的金颗粒，并由于静电 作用成为一种稳定的胶体状态。
➢胶体金的质量判 ✓定质标量准好的胶体金：溶液呈红色，胶
体金颗粒为球形，大小均一，无棱 角。
✓质量差的胶体金：溶液呈紫色，大 小不一，形状各异。
胶体金标记的原理：胶体金在碱 性条件下带负电荷，与蛋白质分 子的正电荷基团藉静电吸引而形 成牢固结合。
胶 体 金 标 记 技 术 （ Immunogold labeling technique）是以胶体金作为示 踪标记物应用于抗原抗体反应的