胶体金试纸条技术
胶体金快速检测技术试验(传染病实验课)
实验四胶体金快速检测技术试验一、胶体金试纸条诊断技术的原理：以硝酸纤维素膜为载体，利用了微孔膜的毛细管作用，滴加在膜条一端的液体慢慢向另一端渗移，通过抗原抗体结合，并利用胶体金呈现颜色（红色）反应，检测抗原/抗体。
二、层析法免疫胶体金检测方法的优点：• 1.方便使用，体现在操作简单，不需经过特殊培训。
• 2.短时间获得检测结果，一般10－15分钟即可得出结论。
• 3.不同环境下的稳定性好，不需冷藏。
• 4.相比而言，其生产成本和检测成本均较低。
• 5.检测标本种类多：可用于查血、尿液或粪便。
•三、应用•猪伪狂犬病抗体快速金标检测卡•原理：猪伪狂犬抗体检测试剂盒（胶体金法），系采用国际最先进的胶体金免疫层析技术检测样本（全血、血清、血浆）中抗猪伪狂犬抗体的方法。
整个试验只需20分钟，操作简便、快速、准确，灵敏度高、结果直观、容易判定。
• 1.操作方法：•①在检测卡的加样孔内加入100μl待检血清或血液样品。
•②将检测卡平放于桌面上，在室温下静置5-20分钟内判定结果。
超过20分钟的结果只能作为参考。
• 2.结果判定：•♦阳性：在观察孔内，检测线区（T）及对照线区（C）同时出现紫红色线。
猪伪狂犬抗体滴度越高，检测线（T）颜色越深。
•♦弱阳性：在观察孔内，检测线区（T）及对照线区（C）同时出现紫红色线，但检测线区（T）出现的颜色很浅。
•♦阴性：在观察孔内，只有对照线区（C）出现一条紫红色线。
•♦失效：在观察孔内，对照线区（C）和检测线区（T）都不出现色线；或仅检测线区（T）出现色线。
•猪瘟病毒抗体、猪蓝耳病抗体快速金标检测卡原理、操作方法、结果判定与猪伪狂犬病抗体快速金标检测卡的基本相同••••。
胶体金试纸条的制备
引言概述：胶体金试纸条是一种常用的分析试剂，广泛应用于生化分析、环境监测等领域。
它以胶体金作为指示剂的主要成分，结合纸条的吸附性能，通过改变颜色来检测目标物质的存在。
本文将详细介绍胶体金试纸条的制备方法和其在分析应用中的优势。
正文内容：一、胶体金试纸条的制备方法1.胶体金的制备1.1还原法制备胶体金1.2化学合成法制备胶体金1.3生物法制备胶体金2.纸条的处理2.1选用合适的纸质材料2.2纸条的预处理2.3纸条的涂覆二、胶体金试纸条的特点和优势1.高灵敏度1.1胶体金的特殊光学性质1.2微米级纳米颗粒的高表面积1.3足够的反应时间2.简单易用2.1操作步骤简单2.2结果直观可见2.3不需要专业设备3.高选择性3.1可调控的颗粒大小和形状3.2可调控的胶体金表面性质3.3可选择性修饰纸条反应区域4.低成本4.1胶体金制备成本低4.2纸条材料成本低4.3适用于大规模生产5.广泛应用5.1生化分析5.2环境监测5.3食品安全检测5.4临床诊断三、胶体金试纸条在生化分析中的应用案例1.蛋白质分析1.1检测蛋白质的存在及浓度1.2快速筛选蛋白质结构1.3监测酶活性变化2.DNA分析2.1单核苷酸多态性检测2.2基因突变检测2.3DNA序列鉴定3.药物检测3.1药物快速筛选3.2药物代谢产物检测3.3药物治疗监测四、胶体金试纸条在环境监测中的应用案例1.水质监测1.1水中重金属离子检测1.2水中有机物污染物检测1.3水中微生物检测2.大气监测2.1空气中有害气体检测2.2空气中颗粒物检测2.3气候变化指示剂监测3.土壤监测3.1土壤中有害物质检测3.2土壤中养分成分检测3.3土壤微生物检测五、结合与总结胶体金试纸条作为一种快速、简便、低成本的分析工具，在生化分析和环境监测等领域具有广泛的应用前景。
它不仅可以满足快速检测的需要，还能提供定量和定性的分析结果。
未来随着技术的不断创新和进步，胶体金试纸条将在更多领域展现其优势和应用价值。
胶体金试纸条检测技术
吸收垫
背衬 （底板）
检测线 硝酸纤维素膜
测定
测定时将试纸条下端浸 入液体标本中，下端吸 水材料即吸取液体向上 端移动，流经C处时使 干片上的免疫金复合物 复溶，并带动其向膜条 渗移。
测定
若标本中有待测特异抗 原，即可与免疫金复合 物中的抗体结合，此抗 原抗体复合物流至测试 区即被固相抗体捕获， 在膜上显出红色反应线 条（T）。
阴性对 照
H5ＡIV 细胞毒纸条诊断技术 的原理
以硝酸纤维素膜为载体，利用了微 孔膜的毛细血管作用，滴加在膜条一 端的液体慢慢向另一端渗移，通过抗 原抗体结合，并利用胶体金呈现颜色 （红色）反应，检测抗原/抗体。有 三种反应模式：夹心法，间接法，竞 争抑制法。
胶体金试纸条示意 图
样品垫
连接垫
（胶体金垫） 质检线
结果易于判定：阴、阳性呈色很 明显，肉眼很容易判断。
特异性好：因为该技术大多用单 克隆抗体标记，这决定了它具有
胶体金快速诊断技术的 应用
病毒性疾病：传染性法氏囊病 、禽流感、新城疫、犬细小病 毒、猪瘟等。
寄生虫疾病：血吸虫病、旋毛 虫病、囊虫病、恙虫病。
细菌性疾病：霍乱弧菌、类鼻 疽。
H5 亚 型 AIV 尿 囊 液阳性结 果
测定
过 剩 的 免 疫 金 复 合 物 继续前行，至参照区 与固相抗小鼠IgG结合 （免疫金复合物中的 单克隆抗体为小鼠 IgG），而显出红色质 控线条（R）。
测定
阴性标本则无反应线条，而仅显 示质控线条。
胶体金快速诊断技术的 特点
简捷快速：操作简单，一般只要 5-10min 就会出结果，而其它 方 法 如 ELISA 需 要 1 -2h ， PCR 需要时间更长。
➢基础金核 ➢双离子 内层负离子（AuC12－） zeta电位 z排 体et斥 间a电， 的位以 溶可液维以中持外使胶层胶体离金体子的金层稳颗定粒H状+之分态间散。相在互胶
胶体金检测试纸生产工艺
胶体金检测试纸生产工艺本项目主要从事犬、猫传染病抗体胶体金检测试纸的生产，以微孔滤膜为固相载体，膜上包被已知抗体，待加入检测样本后，经毛细管虹吸作用或微孔滤膜的渗滤作用，使标本中的抗体与膜上包被的抗体或抗原结合，再通过胶体金标记物与复合物反应，可形成肉眼可见的红色产物。
目前应用最为广泛的胶体金免疫技术有侧向横流模式，又称金标免疫层析法（ImmUnOgoIdChrOmatograPhyASsay,GICA ）O金标免疫层析法试纸条主要是通过毛细管虹吸作用反应,它由以下几部分组成:样品垫、胶体金垫、NC 膜（硝酸纤维素膜）、吸水滤纸、以及PVC 底板，NC 膜（硝酸纤维素膜）上包括一条检测线（T 线）和一条质控线（C 线）一次层叠起来，如下图所示：图3 金标免疫层析法示意图在吸水材料的牵引下，待测抗原在试条上向上走，首先与金标抗体结合成抗原抗体复合物，抗原抗体复合物上行到检测线时，被测抗原的另一结合位点与包被在此处的单抗结合，形成两个抗体结合一个抗原（双抗体夹心）的金标复合物，因有金颗粒在此沉积，故T 线显红色。
未结合抗原的金标抗体上行到C 线时，与“抗金标抗体”结合，所以C 线也显红色。
检测结果判定：T 线与C 线均显线，表明检测结果为阳性；C 线显线，T 线不显，表明结果为阴性。
若C 线不显线，则检测结果无效。
工艺流程如下所示：NC«（跚咬纤假素膜）PVC 底板 测试线（TtK 1）M 析方向样品稀释液噪声：N ；一般固体废物：不合格品(S1)；废防粘纸(S2)；边角料(S3)；废包装物(S4)；危险废物：废一次性滴管(S5)玻璃器具清洗废水(S6)；玻璃器具淋洗废水(S7)；超声波清洗废水(S8)、超声波冲洗废水(S9)o图4胶体金检测试纸生产过程示意图工艺流程简述： (1)检测：外购硝酸纤维素膜、金结合垫、吸水垫、样品垫均人工目视进行检验。
①硝酸纤维素膜：人工目视干燥后的包被膜表面应洁净、无污染、破损等，如有，需用笔标出。
胶体金试纸条检测技术
一、简
介
胶体金试纸条诊断是采用胶体金免疫层析 技术研制而成，该技术是90年代初在免疫渗 滤技术的基础上建立的一种简易快速的免疫 学检测技术，最先用于人绒毛膜促性腺激素 （ HCG）的测定和乙型肝炎病毒表面抗原 （HBsAg）等检测。
胶 体 金 （ Colloidal gold） 是 氯 金 酸
technique）是以胶体金作为示踪记物应
用于抗原抗体反应的一种新型免疫标记技术。
二、胶体金试纸条诊断技术的原理
以硝酸纤维素膜为载体，利用了微孔膜的毛细 血管作用，滴加在膜条一端的液体慢慢向另一端 渗移，通过抗原抗体结合，并利用胶体金呈现颜 色（红色）反应，检测抗原/抗体。有三种反应模 式：夹心法，间接法，竞争抑制法。
最常用的是双抗夹心法检测抗原
胶体金试纸条示意图
连接垫 （胶体金垫） 样品垫 质检线 吸收垫
背衬 （底板）
检测线
硝酸纤维素膜
测
定
测定时将试纸条下端浸入液体
标本中，下端吸水材料即吸取 液体向上端移动，流经C处时使 干片上的免疫金复合物复溶， 并带动其向膜条渗移。
测
定
若标本中有待测特异抗原，即
可与免疫金复合物中的抗体结 合，此抗原抗体复合物流至测 试区即被固相抗体捕获，在膜 上显出红色反应线条（T）。
胶体金的质量判定标准 质量好的胶体金：溶液呈红色，胶体金颗粒为球 形，大小均一，无棱角。 质量差的胶体金：溶液呈紫色，大小不一，形状 各异。
胶体金标记的原理：胶体金在碱性条件下带
负电荷，与蛋白质分子的正电荷基团藉静电 吸引而形成牢固结合。
胶体金标记技术（Immunogold labeling
测
定
过剩的免疫金复合物继续前行，
胶体金试纸条原理
胶体金试纸条原理
胶体金试纸条是一种常用的快速检测方法，它的原理是基于胶体金颗粒的表面等离子体共振（SPR）现象。
胶体金试纸条通常由两部分组成：胶体金颗粒和检测区域。
胶体金颗粒具有特殊的物理性质，当受到特定物质的作用时，其表面等离子体共振会发生变化。
这种变化会导致颗粒的形状、颜色或聚集状态发生改变。
在使用胶体金试纸条进行检测时，样品溶液会被加到试纸条的检测区域上。
如果样品中含有需要检测的物质，这些物质会与胶体金颗粒产生特定的相互作用。
这种作用可以是物质与金颗粒表面的化学反应，也可以是物质与金颗粒之间的物理吸附。
当作用发生时，胶体金颗粒的表面等离子体共振发生改变，导致颗粒的形状、颜色或聚集状态发生变化。
这种变化可以通过肉眼观察或色谱仪等设备进行检测。
根据试纸条上颗粒的变化程度，可以判断样品中目标物质的浓度或存在与否。
需要注意的是，不同的胶体金试纸条适用于不同的检测目标物质。
因此，在选择试纸条时，需要根据具体的检测要求选择合适的试纸条。
此外，在进行胶体金试纸条检测时，正确的操作步骤和仪器校准也是保证检测准确性的重要因素。
胶体金试纸条的制备
抗体与胶体金的偶联机制
抗体活性的保持
在抗体与胶体金结合过程中，应确保 抗体的活性不受影响，以保证检测的 灵敏度和特异性。
抗体与胶体金的结合是通过共价键或非共价 键实现的。共价键结合力较强，但不易解离 ；非共价键结合力较弱，但易于解离。
试纸条的制备工艺
基材选择与处理
选择合适的支持膜作为试纸条的基材，如硝酸纤维素膜、 聚酯膜等，并进行预处理，以提高其亲水性和结合力。
流感检测
在流感高发季节，胶体金试纸条可以快速检测流 感病毒抗原，为防控流感提供有力支持。
食品安全检测
农药残留检测
胶体金试纸条可用于检测果蔬等农产品中的农药残留，保障食品 安全。
兽药残留检测
通过胶体金试纸条检测肉类、禽蛋等食品中的兽药残留，有助于 监控食品安全，防止药物滥用。
重金属离子检测
用于检测食品中重金属离子的胶体金试纸条，能够快速、准确地 检测出食品中的重金属含量。
新材料的应用
高分子材料
研究新型高分子材料，提高试纸条的灵敏度、稳定性和耐用性。
纳米材料
利用纳米材料的特点，增强试纸条的信号放大效果和特异性。
生物材料
探索生物相容性更好的生物材料，降低试纸条对人体的潜在风险。
新技术的开发
免疫分析技术
研究更高效、特异的免疫分析技术，提高试纸条的检测准 确性。
微流控技术
环境监测
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水质监测
胶体金试纸条可用于快速检测水体中的有害物质， 如铅、汞、砷等，确保水质安全。
大气污染监测
通过胶体金试纸条检测大气中的有害气体和颗粒 物，有助于及时发现和防控空气污染。
3
土壤污染监测
胶体金试纸条可用于检测土壤中的重金属和有机 污染物，为土壤污染治理提供依据。
胶体金试纸条检测原理
胶体金试纸条检测原理
检测是一种仪器，旨在检测物质的性质或其他特定的基于物质的性质来改变物质的属性。
胶体金试纸条是一种现代检测方法，它用于检测物质中的矿物质成分。
经常运用在家庭、工厂、学校、政府机构等各种场所。
胶体金试纸条的检测原理体现在液体中矿物成分及其组成物的测定。
它是由耐候钢制成，内部有一层内衬，表面有很多孔，每个孔都有不同粒度的金粒，金粒结合了特定的矿物质，检测后能够读取矿物的含量。
检测的原理就是将试纸放入液体中，金粒就会吸附到试纸上，从而测量出液体中矿物的量。
实际检测过程中，先将胶体金试纸放入液体中，然后通过特定的检测仪器，对金粒的吸附量进行测量，即可测出液体中某一种特定矿物的含量。
经常使用胶体金试纸条可以检测水中硫酸钙、氯化物、硫化物、氢氧化物等一系列指标。
胶体金试纸条具有实用简便、可靠准确等优势，检测过程无需复杂的装备和仪器设备，无需昂贵的仪器维护和耗材消耗，只需一台计算机，几个金粒试纸条，以及常规的信号转换器即可完成检测。
此外，胶体金试纸条还可以用于环境污染检测，能够快速有效地检测出污染物质的存在，并准确测量出污染物质的含量，以及对环境污染的严重程度进行评估。
胶体金试纸条是现代环境污染检测的重要手段，因为它的检测精度高，可靠性强，快速反应，成本低，受到各界的青睐。
总之，胶体金试纸条是一种可靠、准确、经济的检测方法，广泛应用于家庭、工厂、学校、政府等许多场所的检测中，对提高生活质量和安全性具有重要的意义，值得我们去深入研究。
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If there are a test specific antigen in the specimen, it can be combined with immune antibodies in the gold complexes. when the antigen-antibody complex flows to the test area, it can be captured by solid phase antibody and show reaction red line on the membrane.
When excess immune gold compounds flow to the reference area and combine with solidphase anti-mouse IgG(monoclonal antibodies in the immune gold compounds is mouse IgG), then it will show the red quality control line.
The quality of the colloidal gold standard: Good quality colloidal gold: the solution is red, colloidal gold particle is spherical, uniform size, no edges and corners. Poor quality colloidal gold: the solution is purple, size is differ, a variety of shapes.
Strip structure
Colloidal gold pad The line of control line (C) absorbent paper Sample pad
Tomographic direction PVC baseplate holding wire（T）
NC membrane
The principle of the colloidal gold strip diagnosis technology
Using the nitrocellulose membrane as the carrier and making use of the capillary effect of microporous membrane, we add liquid on one side of the membrane, then the liquid move to the other end slowly. After the combination of antigenantibody, we can take advantage of the colloidal gold color reaction to detect antigen or antibody. It is the most commonly method to detect antigen by using double clamp method
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The principle of colloidal gold labeling: colloidal gold is negatively charged in alkaline conditions. Therefore, it can form a solid combination with protein molecules positively charged groups by electrostatic attraction. Immunogold labeling technique: it is a new type of immune markers technology. As a tracer marker, colloidal gold is applied to the antigen-antibody reaction
Negative samples is no response line, and only show quality control line.
Colloidal god
It is gold chloride acid (HAuCl4) hydrosol, gold chloride acid can aggregat into a certain size of gold particles under the action of reducing agent and become a stable colloidal state by electrostatic interactions.
measure
When measuring, we make the bottom of test paper strip immerse in the liquid samples, then the bottom absorbs liquid and move towards the upper end. when the liquid flow through the C , the immune gold complex dissolve on the strip.
The colloidal gold strip testቤተ መጻሕፍቲ ባይዱng technology
Introduction
The colloidal gold strip diagnosis is developed by colloidal gold immune chromatography technology. The technology was established on the basis of the immune infiltration technology in the early 90 s. It is a simple and rapid immunological detection technology. The first to use it to detect human chorionic gonadotropin (HCG)and hepatitis B virus surface antigen(HBsAg),and so on.