组织切片HE染色发灰的原因分析及对策
组织切片HE染色发灰的原因分及对策
<正>2014年8月～2017年5月南京同仁医院病理科出现组织切片HE染色细胞核模糊,细胞质偏紫色,细胞核与细胞质对比度差,颜色不鲜艳现象,严重时部分区域(如子宫内膜腺体、胃镜活检标本的黏膜上皮)出现灰色云雾状现象,影响病理诊断。针对这种现象,本科室组织相关人员进行讨论并查阅相关资料,决定从影响组织切片染色各个环节入手进行原因查找,并制定相应的对策,现介绍如下。
he染色常见问题及解决办法 (3)
HE染色常见问题及解决办法问题一：染色不均匀问题描述染色结果不均匀，导致在组织切片中出现深浅不一致的染色效果。
可能的原因1.组织固定不充分：染色前，组织可能没有充分固定，导致染色时组织颜色不均匀。
2.染色时间不足：染色时间不足，可能会导致染料在组织中未完全着色。
解决办法1.可以尝试使用更加强力的组织固定剂，确保组织得到充分固定。
2.增加染色时间，确保染料充分渗透并与组织结合。
问题二：颜色过深问题描述染色结果过深，导致组织切片中细胞结构难以观察。
可能的原因1.染色时间过长：染色时间过长可能导致染料过度渗透，造成颜色过深。
2.染液浓度过高：染液浓度过高也会导致染色结果过深。
解决办法1.缩短染色时间，适当减少染色时间可以使染料渗透达到合适的程度。
2.调整染液浓度，根据实际情况尝试减少染液浓度。
问题三：背景杂色问题描述染色切片的背景出现杂色，影响组织结构的观察。
可能的原因1.去脱水不充分：组织在染色前的去脱水处理可能不充分，导致背景杂色。
2.染液污染：染液可能被外部杂质污染，导致出现背景杂色。
解决办法1.确保去脱水过程充分，使用足够的次数进行去脱水处理，确保组织完全脱水。
2.尽量避免染液的污染，严格控制实验操作的卫生条件。
问题四：细胞核染色不明显问题描述细胞核染色效果不明显，导致细胞核结构难以观察。
可能的原因1.染料浓度过低：染料浓度过低可能会导致细胞核染色效果不明显。
2.染色时间过短：染色时间过短，染料可能无法充分染色细胞核。
解决办法1.调整染料浓度，根据实际情况尝试增加染料浓度。
2.增加染色时间，确保染料充分染色细胞核。
问题五：组织失真问题描述染色后，组织出现失真现象，形状和结构不正常。
可能的原因1.组织切片过厚：组织切片过厚可能会导致在染色过程中组织形状出现失真。
2.染色时间过长：染色时间过长，细胞可能会发生变形和退缩，导致组织失真。
解决办法1.控制组织切片的厚度，尽量保持切片均匀薄片。
2.控制染色时间，避免过长的染色时间导致组织失真。
病理组织切片染色中的常见问题及解决方法
条例 能够 浇实 到位 ，随时检 查监督 。规定凡 是进入 Ｎ Ｉ Ｃ Ｕ的人 员一律
要 先洗手 、更衣 、换鞋 、戴 口罩和 帽子 】 。尤其强调对 手的清洗 和消 毒 ，在每 个 温箱 旁边 都要 放置 一瓶洗 手 消毒剂 ，医生 和护士 在对 患 儿进 行 常规检 查 之前 和检 查之 后一 定要记 得洗 手 消毒 。对每 个 患儿 的 用 品做 到 一婴 一用 一消 毒 ；保 持 空气 清新 ，无 致病 菌生 长 。有 研 究 表 明手 的清洁 和物 体表 面的 清洁 在控 制 医院感 染 中起到 了重要 的 作 用 ，在 常规 的手 清洁和 环境 清 洁的基 础上 适量 使用 消毒 剂 消毒杀 菌 能达 到较 好 的控制 医 院感染 的作 用 。医 院感染 科要 求对 整体 医 院 每 月进 行至 少一 次 以上 的环境 卫生 监测 ，其 中包 括空 气 、物体表 面
程 序 、可 能 出现 的问题 及 相应 的解 决方 法进行 了归 纳总结 ，并 对一 些 实验 步骤 与操 作 方 法进行 了改进 ，使 组织脱 水彻 底 、 固定完 全、 切 片
较 薄、 染 色效果较 好 ，提 高切 片的质 量 水平 。 【 关键 词 】病 理 组织 切 片；染 色 ；常 见问题 ；解 决方 法
中图分类号：Ｒ ３ ６ １ ． ２
文献标识码 ：Ａ
文章编号 ：１ ６ ７ １ － ８ １ ９ ４（ ２ ０ １ ３ ）２ ８ － ０ ５ ７ ８ － ０ ２
应该保 存密封容器 内 ，并且在容 器外贴上 标签 ，及时注 明材料来源 、 固定液 以及 日期等主要信 息。材料 固定 之后 ，除 了乙醇之外 ，其他 固 定液必须冲洗 干净 ，否则残 留在组 织材 料内的 固定 液可能会产生 结晶
常规HE染色易出现问题原因解决办法
常规HE染色易出现的问题原因及解决办法【关键词】he染色；问题；方法【中图分类号】r361 【文献标识码】a 【文章编号】1004-7484（2013）03-0708-01常规he染色切片质量的好坏是病理技术人员时刻关注问题。
影响he染色切片质量的因素是多方面的，本文从以下几个方面详细分析原因并提出具体解决方法供大家参考。
1 切片染色不匀原因补救办法1.1 组织取材固定不当。
如组织取材过大或过厚，不能将组织完全固定，组织切片染色后出现外周固定好的部分易着色，而中间未固定好的组织，细胞着色模糊，使染色不均。
在送检的标本中，及时用4%中性甲醛对标本固定，固定液应是标本的4倍。
大标本应切开固定。
1.2 切片薄厚不均或有横纹。
切片刀有缺口时，易造成断裂，破碎和不完整。
切片刀倾角过大上卷，不能连在一起，过小则切片皱起。
或因螺丝松动产生振动切片易造成厚薄不均或技术人员手臂摇动切片机头力量不均易造成横纹。
切片时检查切片机螺母是否拧紧。
切片刀角度是否过大或过小即可。
1.3 组织脱水，透明和浸腊处理不当（1）组织脱水用的各级乙醇未能保证相应浓度使组织脱水不彻底（2）二甲苯内的时间过长组织易碎也无法切出好片子。
（3）浸腊温度过高，组织变脆也不利切片染色。
1.4 染色过程处理不当（1）组织切片脱腊不彻底，如二甲苯时间过久，无水乙醇不纯或时间过久，室温低，组织切片上的石蜡没有全部除掉时，含腊部分不着色或着色过浅染色液试剂量少，组织切片没有全部浸到。
（2）组织切片上在捞片时有气泡，则气泡内组织可能染色不均。
2 切片染色模糊不清原因2.1 取材：组织标本已发生自溶或取材后没及时固定或固定液浓度不够；另固定前干枯标本，染色后易出现灰染现象，很难补救。
2.2 固定（1）固定剂对组织有一定媒染作用，它既可与蛋白结合又能与染料结合，可增强着色能力，同时能沉淀和凝固细胞内成分，使细胞内成分产生不同折光率造成光学差异。
故固定不良是造成切片染色模糊不清的主要原因（2）在日常病理制片中淋巴结处理不当造成切片染色后组织见发灰现象，其主要原因由于细胞密集，结构复杂导致固定液难以渗透到组织深部，从而造成组织中央固定不佳，而出现彻底发灰现象。
HE染色不良的常见问题与对策
十一、水和玻片呈现乳白色混浊改变 原因:切片从脱蜡的二甲苯经过梯度乙 醇进入水溶液时,水和玻片呈现乳白色 混浊改变，是用于脱蜡的二甲苯没有 被乙醇洗干净。 对策:更换洗涤二甲苯的乙醇液体,把切 片重新放回无水乙醇,脱去玻片上的水 分。
十二、细胞核灰蓝
原因:可能的原因是由于组织处理温度过高、 过热,在石蜡停留的时间过长；或者固定时间 太短,接下来就直接在高浓度的乙醇中行脱水 处理。 对策:理论上来说,加热处理仅在组织浸蜡步 骤才使用,组织不能在热的蜡液中停留过长时 间。如果由于某些原因不能进行下步包埋处 理,完成浸蜡处理后的组织,可将组织连同塑 料包埋盒一并放置在室温空气中,冷却凝固, 以备包埋。待需要包埋时再重新加温直至石 蜡融化即可。组织在处理前必须确保固定良 好,脱水最好能从低浓度的乙醇开始。
原因:伊红染液的pH值可能大于5；也可能是 蓝化液残留过多；切片太薄；或切片经伊红 染色后在乙醇脱水时间过长。 对策:检查伊红染液的pH值,如果必要的话,用 乙酸将其调节在416～510之间,从而使伊红 染色色彩艳丽。确保每次蓝化步骤完成后,使 用的弱碱性溶液被充分洗去,玻片上没有残留 的弱碱性溶液。检查切片的厚度。脱水时不 要让切片在低浓度乙醇停留时间过长,因为含 水多的低浓度乙醇会将伊红的颜色分化掉。
四、细胞核呈红、棕色改变
原因:主要有苏木精染色液过度氧化和 切片在苏木精染液染色后返蓝不足。 对策:首先,每次染色之前检查苏木精染 色液的染色能力,发现氧化过度应及时 更换。其次,可用流水、温水或弱碱性 溶液如稀氨水、0. 2%碳酸氢钠等,在苏 木精染色后,给切片以足够的蓝化时间。
五、伊红着色淡
二、细胞核染色苍白、暗淡
原因:即苏木精染色太淡，此类问题可能有3个影 响因素,切片在苏木精染色液停留时间太短；苏木 精染色液过度氧化,失去染色能力,不能再继续使用； 分化步骤处理时间过长。如果是骨组织细胞核暗 淡,则多数是由于脱钙过度造成。 对策:切片重新染色。如果组织在酸性固定液如 Zenker、Bouin及非中性缓冲甲醛液固定时间过 长,细胞核染色能力将减弱,须增加其在苏木精染色 液的时间,或用一些方法增加组织的嗜碱性,以改善 细胞核的着色。
HE染色经验总结
HE染色经验总结优质的HE染色切片应该具备切片完整、无皱褶、细胞核着色清晰呈蓝色、细胞质呈鲜红色、核仁核膜核内染色质颗粒清晰，核质蓝红分明、对比清晰、透明度好等属性；劣质的HE染色切片会出现切片不完整，染色灰暗，红蓝对比不明显，有甚者染色后的切片镜下呈云雾状、组织结构不清楚等状况，对于科研党和病理检验工作者来说，想要一张好的组织HE染色图，看似简单但也不简单。
目前，我们收集了一些导致组织切片染色不佳的原因及解决办法，希望对大家的科研工作有一定的帮助。
1．切片污染：包括染液的污染和组织污染所谓染色的污染，是由于苏木精染液的氧化膜或伊红染液的絮状沉淀和其他试剂中的沉淀物所致。
污染物遮盖该部位的细胞或组织而难以观察期形态改变。
这种污染可通过定期的过滤各种染液和试剂而避免。
而所谓的组织污染是由于切片和贴片过程中，被其他病例的组织和细胞污染。
如果是不同类型的组织，容易在显微镜下发现；如果是相同类型而不同病变的组织污染，不容易在镜下发现，可导致误诊。
因此在摊片时要非常小心，恒温贴片盆的水要常常更换或于每例贴片后用纸在水面及时把残余的蜡片拖走，以保证不污染。
还有，取材时也可能造成组织污染，在甲例取材后，如不及时把取材台和刀剪冲洗干净，若留下残余组织，在乙例取材时把甲例的残余组织误作为乙例取材，同时放进脱水盒内，这样同一切片内，包括甲乙两例组织，这种组织污染也可产生严重后果。
2．细胞核染色苍白、暗淡，苏木素染色过浅造成此类问题的原因可能有3个，切片在苏木精染色液停留时间过短，苏木素染色液过度氧化，失去染色能力，盐酸酒精的分化步骤处理时间过长。
此类问题可以更换新的苏木素及调节染色和分化时间来解决。
3．染色不均匀不透亮呈雾化状态即部分组织和细胞染色尚可，部分组织模糊不清楚，这种染色组织无法诊断。
其原因是由于染色时二甲苯脱蜡不彻底，导致组织处理不当。
常见于冬季室温低时，二甲苯的脱蜡能力降低，或使用多次脱蜡的二甲苯所致，克服办法是在冬季室温低时(14℃以下)，把二甲苯缸在水浴缸中适当加温到30℃再脱蜡，或更换新的二甲苯。
常规HE染色易出现的问题、原因及解决方法
常规HE染色易出现的问题、原因及解决方法
作者：刘燕
作者单位：解放军第401医院病理科 青岛 266071
1.田玉旺.李琳.苗金红.邢宜.朱红艳常规HE染色切片易出现的问题、原因及解决方法[会议论文]-2009
2.田玉旺.李琳.朱红艳.邢宜.苗金常规HE染色易出现的问题、原因及解决方法[期刊论文]-诊断病理学杂志2008,15(6)
3.杨艳丽.徐戬常规石蜡切片制作过程及HE染色的体会[会议论文]-2009
4.章克萍.龙飞.汪雁常规HE染色过程中分色蓝化透明方法的改良[期刊论文]-江西医学院学报2008,48(4)
5.马恒辉.周晓军HE染色常见问题与对策[期刊论文]-临床与实验病理学杂志2008,24(4)
6.王永军.刘世正.杨会钗.王小玲.吴国祥常规HE染色中蓝化方法的改进[期刊论文]-诊断病理学杂志2005,12(6)
7.徐戬.杨艳丽.王域平常规石蜡切片制作过程及HE染色[期刊论文]-中国实用医刊2009,36(13)
8.陈宣世.刘俊才.陈勇.李霞斌.柴利HE染色两次分化法在病理制片技术中的应用与探索[会议论文]-2009
9.陈宣世.刘俊才.陈勇.李霞斌.柴利HE染色两次分化法在病理制片技术中的应用与探索[期刊论文]-重庆医学2010,39(22)
10.杨群.胥维勇.何娟.徐科伟.胥颖.杨红不同固定液冷冻切片HE染色质量的对比观察[期刊论文]-实用医院临床杂志2010,7(3)
本文链接：/Conference_7188717.aspx。
HE染色常见问题与对策
HE染色常见问题与对策HE是最基本的也是最重要的病理学染色技术。
一张质量上乘的HE切片是病理医生得以做出正确诊断的关键。
许多所谓的“疑难病理案例”,大多数是由于制片质量差所造成的。
制片质量差不仅在中小医院病理科会发生,有些大医院也会出现。
因为, HE染色是一种多步骤、多因素决定的实验方法,无论是手工还是机器操作,都存在着许多影响因素,甚至会出现不理想的染色结果,从而导致误判和误诊。
所以,除提高病理医生的诊断水平外,培训病理技术人员、提高技术人员的业务素质也是当务之急。
本文对HE染色中常见的几个问题及其对策,进行分析与讨论如下。
1切片在脱蜡后出现大片白色的斑点原因:由于烤(烘)片温度太低,玻片在脱蜡前没有充分烤(烘)干;切片在二甲苯停留时间不足,或二甲苯使用过久,造成脱蜡不尽。
对策:如果玻片是由于没有烤(烘) ,先用无水乙醇处理去除玻片上的水分,然后重新用二甲苯脱去石蜡。
如果烤(烘)干不足的现象比较严重,可能导致切片脱落,则无法补救。
如果白色斑点是由于切片在二甲苯停留时间不足造成,或使用的二甲苯过久,切片则需退回到二甲苯停留时间相对长些,或更换二甲苯,脱色、漂白、重新染色。
2细胞核染色苍白、暗淡,即苏木精染色太淡原因:此类问题可能有3个影响因素,切片在苏木精染色液停留时间太短;苏木精染色液过度氧化,失去染色能力,不能再继续使用;分化步骤处理时间过长。
如果是骨组织细胞核暗淡,则多数是由于脱钙过度造成。
对策:切片重新染色。
如果组织在酸性固定液如Zenker、Bouin及非中性缓冲甲醛液固定时间过长,细胞核染色能力将减弱,须增加其在苏木精染色液的时间,或用一些方法增加组织的嗜碱性,以改善细胞核的着色。
例如:建议上述组织切片最好使用Weigert铁苏木精染色液;如果组织是用Zenker液固定的,可将切片脱蜡后放在5%碳酸氢钠溶液3～4 h,流水冲洗5 min后染色;如果组织是用Bouin液固定的,可将切片脱蜡后放在5%碳酸锂1 h,流水冲洗10 min后染色。
常规HE染色易出现的问题、原因及解决方法
??技术交流??常规染色易出现的问题、原因及解决方法田玉旺李琳朱红艳邢宜苗金红北京军区总医院病理科北京关键词】染色问题方法中图分类号文献标识码】文章编号——一常规染色切片质量的好坏是病理技术人员时刻关注的问题。
影响染色切片质量的因素是多方面的本文从以下几个方面详细分析原因并提出具体的解决办法供同行参考。
染色中组织切片脱落的原因组织自身原因及处理不当①组织自身原因如凝血块、血栓、干涸或过硬的组织及组织碎屑等其切片染色时易脱落②组织脱水、透明不足以致石蜡不能浸入勉强切出的片子脱蜡时收缩入水或染色后又膨胀因而易脱落③组织脱水、透明过度浸蜡时间过长或温度太高引起组织收缩硬脆导致切片不完整染色时导致脱落。
对发脆的组织可选用下面方法处理使切片完整、不易脱片①用棉球蘸氨水或冰醋酸涂抹蜡块组织表面左右②蜡块修出组织面放人冰水混合液中几分钟或用冰块贴敷组织面。
切片①切片过厚组织附贴在载玻片上不平使切片与玻片之间存有一定间隙切片与玻片之间的吸附力减弱②破碎不整齐的切片③展片水温低切片有皱褶、附贴不牢或附贴时切片下含有气泡④烤片时间短或温度低、烤片温度过高或时间过长、组织被烤焦或收缩变形发生皱褶均易脱片⑤载玻片清洗不洁净含有油脂或混入脏东西等。
故载玻片应先放人清洗液内浸泡捞出后彻底水洗乙醇进一步脱脂而后干燥箱烘干备用。
现多采用免洗载玻片效果较好。
对于特殊组织要进行特殊处理如脑、脊髓等组织捞片后不能马上直接烤片待切片与载玻片之间水分充分沥干后再放到烤片箱的铁板上进行烤片以避免切片出现气泡。
染色①脱蜡后未经自高至低的各级乙醇缓冲调解逐渐入水②染色时用水冲洗过猛或振荡过度致切片与载玻片脱离③染液或试剂的酸碱度不适宜或在其中停留时间过久如染色所用的返蓝液碱性过大时易引起切片脱落。
针对这种现象我们可以采用自来水返蓝因为自来水多呈弱碱性同样可达到返蓝目的④染色过程中切片多用盐酸乙醇进行分化工作中发现脱片也易发生在盐酸乙醇分化后。
病理HE切片常见的质量问题及处理方法
病理HE切片常见的质量问题及处理方法【摘要】目的探索病理HE切片常见的质量问题,并提出相应的预防和处理方法,提高HE切片质量。
方法回顾性地复习一定时期内本科所有的病理HE玻片,按照病理HE玻片中出现的质量问题进行总结、分析和分类,然后归纳。
结果病理HE切片常见的质量问题基本上都是由于病理技术员经验不足、操作不当、责任心不强所造成。
结论应加强从业病理技术员的系统而严格的工作培训,病理技术员要积极主动认真地工作,积累工作经验,端正工作态度,寻找出现质量问题的根源,提高HE切片的质量水平。
【Abstract】Objective To investigate the common quality problems on HE seetiong, and propose prevention and managements to improve the quality of HE stainings. Methods A retrospective review of all HE slides at a certain period of time were done to sum up, analysis and classify the quality problem in accordance with slides.Results The most common problems on quality are basically due to the inexperience of pathology technicians, improper operation,and poor responsibility. Conclusion Pathology technician practitioners should be trained strictly andsystemically. Theyshould take the initiative to work seriously, accumulate work experience, correct work attitude, look for the root causes of quality problems to improve the quality of HE sections.【Key words】HE sections;Quality;Management;Prevention; Retrospect苏木精(Hatmatoxylin)伊红(Eosin)染色法,简称HE染色法,是生物学和医学的细胞与组织学最广泛应用的染色方法[1]。
he染色细胞核发灰的处理方法
he染色细胞核发灰的处理方法在生物实验中，HE染色是一种常用的细胞染色方法。
然而，有时会遇到细胞核发灰的情况，这可能是由于染色时间、染色剂浓度、温度控制、缓冲液使用、细胞固定、染色后清洗等方面的不当处理所致。
下面将介绍如何处理HE染色细胞核发灰的方法。
1.染色时间控制染色时间是影响HE染色效果的重要因素。
染色时间过短会导致细胞核未充分染色，而染色时间过长则可能导致细胞核过度染色。
因此，需要控制好染色时间，根据实际情况选择合适的染色时间。
2.染色剂浓度染色剂浓度也是影响HE染色效果的关键因素。
浓度过高会导致细胞核过度染色，而浓度过低则会导致细胞核未充分染色。
因此，需要调整好染色剂浓度，以获得最佳的染色效果。
3.温度控制温度对HE染色的影响也很大。
不同温度下染料的溶解度和分散度不同，会影响染色效果。
因此，需要控制好染色温度，以保证染料在细胞核中均匀分布。
4.缓冲液使用使用适当的缓冲液可以避免染料直接接触细胞核导致的效果。
因此，在HE染色过程中，需要使用适当的缓冲液，如磷酸盐缓冲液等。
5.细胞固定细胞固定是HE染色前的重要步骤，固定剂的使用时间、浓度和温度等参数都需要仔细控制。
不合适的固定剂会导致细胞核发灰或过度收缩。
因此，需要选择合适的固定剂，并严格控制固定剂的使用条件。
6.染色后清洗染色后清洗不彻底会导致染料过多地嵌入细胞核，影响观察效果。
因此，需要彻底清洗细胞核，以去除多余的染料。
7.光学显微镜观察在光学显微镜下观察处理结果，并根据观察结果进行调整。
如果细胞核仍然发灰，可能是由于染色时间或染色剂浓度不当所致，需要进一步调整。
8.染色失败处理如果经过上述处理后细胞核仍然发灰，可能是由于染色失败所致。
此时，可以尝试以下方法：更换染色剂或缓冲液、增加固定剂的使用时间、降低染色温度等。
如果以上方法仍然无法解决问题，可能需要重新制备样品并重新进行HE染色。
总之，在HE染色过程中，需要注意多个因素的控制，包括染色时间、染色剂浓度、温度控制、缓冲液使用、细胞固定、染色后清洗等。