酵母还原型谷胱甘肽提取条件的优化

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热水提取酵母中谷胱甘肽的条件优化

热水提取酵母中谷胱甘肽的条件优化
范崇东;王淼;徐榕榕
【期刊名称】《食品工业科技》
【年(卷),期】2004(025)002
【摘要】谷胱甘肽常采用发酵法生产,其存在于细胞内,要得到谷胱甘肽常常采用一定的破壁手段,包括化学、物理、酶等方法.本文报导了采用热水直接抽提的方法,并且采用响祆应面分析方法对抽提的条件进行了优化,得到优化条件:温度83℃、时间14.4min,水:干细胞8.5mL/g,搅拌速度210r/min.与其它方法相比,该方法是一种简便、快速、经济、有效的方法.
【总页数】4页(P132-134,145)
【作者】范崇东;王淼;徐榕榕
【作者单位】江南大学食品学院食品生物技术学科组,无锡,214036;江南大学食品学院食品生物技术学科组,无锡,214036;江南大学食品学院食品生物技术学科组,无锡,214036
【正文语种】中文
【中图分类】TS201.2
【相关文献】
1.酵母还原型谷胱甘肽提取条件的优化 [J], 刘超;袁建国;高艳华;李峰
2.利用热水提取法从废啤酒酵母中提取谷胱甘肽的工艺条件优化 [J], 朱彦姝
3.热水提取酵母中谷胱甘肽的条件优化 [J], 范崇东
4.酵母还原型谷胱甘肽提取条件的优化 [J], 刘超; 袁建国; 高艳华; 李峰
5.西藏灵菇来源酵母菌产谷胱甘肽能力比较及提取条件优化 [J], 孟利;何静;刘峰;朱莹;张迷;李秀凉
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不同方法提取谷胱甘肽的比较

不同方法提取谷胱甘肽的比较实验一不同方法提取谷胱甘肽的比较一、实验目的1、掌握从干酵母中粗提谷胱甘肽的各种方法。

2、掌握还原型谷胱甘肽定量的方法。

二、实验原理谷胱甘肽是种重要的三肽，以还原型（GSH)和氧化型（GSSG)广泛的存在于动、植物及微生物。

在生物体内起作用的主要是GSH，是细胞内主要的还原性物质，能保护细胞免受氧化性、毒害性化合物和辐射的伤害，还是酶的辅因子。

GSH在临床上是重要的解毒药物。

谷胱甘肽是小分子物质，水中溶解度较大，细胞表面出现裂缝就能分散到溶剂中，故可用一些温和的方法提取。

本实验采用热处理、冰冻处理、酸处理、有机溶剂处理等方法提取酵母细胞中的谷胱甘肽，比较最后的得率，探讨各种提取方法的优点和缺点。

三、实验器材、材料和试剂1、器材冰箱，离心机，水浴锅，电炉，滴定管，烧杯，玻棒，研钵。

2、实验材料活性干酵母，2%偏磷酸，5%碘化钾，0.0001mol/l碘酸钾溶液，淀粉指示剂，乙酸：乙醇（2:1）,36%乙酸溶液。

四、实验步骤1、热水抽提：1g干酵母与5ml水混合，加15ml沸水，置100℃水浴保温10min，立即放入冰水速冷，取10ml离心，取5ml上清滴定，得滴定体积V1。

2、冷冻研磨后有机酸搅拌提取：1g干酵母先在研钵中研细，与10ml水混合，-20℃冷冻成半固体状，研磨5min转入小烧杯，加10ml 36%乙酸搅拌15min，取10ml离心，取5ml上清滴定，得滴定体积V2。

3、酸热处理：1g干酵母加20ml2%偏磷酸，60℃水浴中搅拌抽提15min，置冰水速冷，取10ml离心，取5ml上清滴定，得滴定体积V3。

4、有机混合液处理：1g干酵母加20ml有机混合液（甲酸：乙醇=2：1），室温搅拌抽提15min，置冰水速冷，取10ml离心，取5ml上清滴定，得滴定体积V4。

5、碘量法测定：取5ml待测样品，置于250ml锥形瓶中，加入5ml2%偏磷酸溶液、1ml5%碘化钾溶液和2滴淀粉指示剂，用0.0001mol/L的碘酸钾滴定至溶液由无色变为蓝色为止。

酵母细胞通透性的调控及其合成谷胱甘肽研究

酵母细胞通透性的调控及其合成谷胱甘肽研究还原型谷胱甘肽(GSH)是生物体内最丰富的非蛋白巯基化合物。

在γ-谷氨酰半胱氨酸合成酶(γ-GCS)和谷胱甘肽合成酶(GS)作用下,由谷氨酸、半胱氨酸、甘氨酸缩合而成。

谷胱甘肽具有抗氧化、维持细胞酶活、参与DNA和蛋白质的合成、抵御内毒素以及自由基对细胞的损害等功能,广泛应用于食品、化妆品及医疗保健等领域。

本文以一株具有较好GSH合成能力的SP5絮凝酵母为出发菌株,通过调控细胞通透性(细胞通透化处理,细胞壁、膜合成的调控),改变细胞培养条件,降低GSH的降解等技术,以实现GSH的过量积累与分泌。

研究的主要内容和结果如下:(1)考察自然条件下细胞摇瓶发酵合成GSH过程中细胞生长、产物合成以及糖的代谢情况,对收集的细胞进行酶法合成GSH跟踪,确定了细胞的培养时间为36 h,酶法反应时间为6 h。

采用冷冻干燥、乙醇渗透和表面活性剂处理,结果显示土温-60处理对细胞通透性和GSH合成量影响不大;冷冻处理后细胞的通透性得到改善,胞内的GSH分泌能力提高,冷冻干燥三天,细胞合成GSH的总量达到330 mg/L,相比空白提高了17.8%。

采用浓度30%乙醇处理,细胞合成的GSH能够较好的分泌至胞外,细胞酶法合成GSH量达到321 mg/L。

(2)发酵初期添加肉桂醛或柠檬醛对细胞GSH的分泌有一定的促进作用,但不利于细胞的生长,胞内GSH的浓度降低,细胞发酵合成GSH 总量没有明显提高。

收集处理细胞进行酶法合成GSH,发现细胞具有一定的GSH分泌能力,胞内的积累量也有相应的提高,采用45μg/mL浓度肉桂醛或100μg/mL的柠檬醛调控细胞生长,生长细胞催化合成的GSH总量达到相对高值,分别达到446mg/L和410mg/L。

(3)考察细胞生长过程中,培养液的装液量、碳源的种类及初始添加浓度、发酵模式、补糖量等对培养细胞酶法合成GSH的影响,发现以葡萄糖为碳源,初始葡萄糖添加浓度为45 g/L,摇瓶装液量为70 mL,24 h后静态培养12 h,并补加25 g/L葡萄糖培养细胞更有利于其酶法合成GSH,GSH的合成量达到461mg/L。

谷胱甘肽的分离与制备

谷胱甘肽的分离与制备摘要：谷胱甘肽（GSH）是一种活性功能性成分，具有良好的保健作用。

本文介绍了GSH的生产现状，综述了GSH的分离制备方法。

关键词：谷胱甘肽（GSH）、分离、粗提、精制、高纯度制备The Separation and Preparation of GlutathioneAbstract：Glutathione (GSH) is a function of active ingredient, which has a good health care. This article describes the production status of GSH, and overview the methods of separation and preparation of GSH.Keyword：Glutathione (GSH); separation; preparation; crude extraction; refined；preparation of high purity谷胱甘肽是由L-谷氨酸、L-半胱氨酸和甘氨酸缩合而成的含巯基的生物活性三肽化合物, 以还原态(GSH)和氧化态(GSSG)两种形态存在。

GSH有多种生理功能, 对维持生物体内适宜的氧化还原环境尤为重要, 临床用于中毒性和感染性肝炎的治疗、有机物及重金属的解毒、癌症辐射和化疗的保护，而GSSG没有生理功效，因此在分离时需要注意防止其氧化。

目前GSH 的主要生产厂家有J. T. Baker、BDH、Fluka、E. Merck、Riedel- deHaen、Sigma 及日本和光纯药等国外公司[1]。

实现GSH的国产化, 不仅可改变我国谷胱甘肽原料药依赖进口的局面, 而且对我国医药工业、临床医学和食品工业均具有重大的社会效益和经济效益。

值得注意的是2011年由江南大学生物发酵与分离实验室独立研制成功了高纯度还原型、氧化型GSH生产工艺，项目在优良菌种的选育、培养基组成的优化、高密度发酵及GSH亲和层析分离等方面取得了重大突破。

面包酵母中谷胱甘肽抽提方法的研究

（津科技大学天津市工业微生物重点实验室，天津３０５天０４７）
摘要：对从面包酵母中抽提还原型谷胱甘肽（ＳＧＨ）的四种方法进行了研究。发现沸水浴抽提、微波辅助提取、超声波破碎和高压均质破碎方法均能有效地抽提胞内ＧＳ高压均质破碎法在最佳操作条件下ＧＳＨ。Ｈ抽提量最高为３７／，．５ｇ抽提率达到９．７９ｍｇ９８％；沸水浴抽提法ＧｓＨ抽提量为３８０／，．ｍｇｇ抽提率为９．％；３６２超声波破碎法和微波辅助提取ＧＨ抽提量分别为３８３ｍｇ和３５３／，３ｓ．２／ｇ．ｍｇｇ９
ａｏｅｍｅｔｎｄｆｕｔｏｓｗｅｅ９．７，６２％，ｎ６１％ａｄ９．８，ｅｐｃｉｅｙＴｈ＇ｒｅ ”ｈｇ－ｒｓｕｅｈｍｏｅｉｔｎＷａｂｖ－ｎｉｅｒｍｅｈｄｒ９８％９．３ｏｏａｄ９．２ｎ０２％ｒｓｅｔｌ．ｅ‘ ｅｎｉｈｐｅｓｏｇｎｚｉｓｖｇｒａｏｈｓｓｉｌｎｄｓｉｌｏｕｔｍｏｇｔｘｍｉｅｘａｔｔｏｓｔｅｍｏｔｕｔｂｅｏｅｆｒｎｕｔａｒｄｃｉｎａｎｅｅａｎｄｅｔｃｉｎｍｅｈｄ．ａｏｉｒｐｏｈｒｏＫｅｒｓＧＳｂｉｎｔｒａｈｅｔｃｉｎｍｉｒｗａｅａｓｓａｔｘａｔｎｕｔｏｉｄｓｕｔｎｈｇｒｓｕｅｈｍｏｅｉｔｎｙｗｏｄ：Ｈ；ｏｌｇｗａｅｔｘａｔ；ｃｏｖｓｉｎｔｃｉ；ｌａｎｃｉｐｉ；ｉｈｐｅｓｏｇｎｚｉｉｂｒｏｔｅｒｏｒｓｒｏｒａｏ

酵母中还原型谷胱甘肽的提取方法研究

实验号
１２３４
表２正交实验结果
Ａ
Ｂ
Ｃ
Ｄ含量（％）
１
１
１
１
０．４３
１
２
２
２
１．６４
１
３
３
３
１．４５
２
１
２
３
２．０１
—１７—
发酵科技通讯
第３７卷
５
２
２
３
１
１．３８
６
２
３
１
２
１．０４
７
３
１
３
２
１．２５
８
３
２
２
３
１．８３
９
３
３
１
１
０．９８
Ｋ１
３．５２３．６９２．４５２．７８
Ｋ２
４．４３４．８５５．４８４．５１
由图３可见ＧＳＨ对照品的出峰时间为１２．９８ｍｉｎ。将图４与图５进行比较可以看出，热水
—１８—
提取所得样品谱图中含有许多其他组分，表明杂质含量较多，样品ＧＳＨ纯度为１３．５６％，而乙醇提取所得样品谱图中部分组分峰面积减小，甚至已经不存在，表明杂质含量减少，样品ＧＳＨ纯度为１９．８６％。测定结果表明，乙醇提取法所得样品蛋白质、核酸、色素等杂质溶出量少，纯度较高，从而减少了后续分离纯化的工作量。
图２料液比对热水提取ＧＳＨ的影响
由图２可看出，随着加水量的增加，浸出的ＧＳＨ含量提高，加水４倍体积时，提取ＧＳＨ含量达１．８６５％，随加水量的增加，ＧＳＨ含量无明显提高，考虑到加水量过高会延长上清液浓缩时间，加大不必要的工作量，故加水量选取为１：４。２．２乙醇提取

酵母生产谷胱甘肽的培养条件研究

ＢｕｍａｎｅｐｎｅＳｒｃａｙｉＲＳｒｎａｄＲｓｏｓｕｆｅＡｎｌｓａｓ（Ａ）ｅｐｒｎｅｉｎｈｅｕｔｈｗｄｔａｈｐｉｌｃｌｒｏｄ— ｘｅｉｔｄｓ．Ｔｅｒｓｌｓｏｅｈｔｅｏｔｕｔｅｃｎｉｍｅｇｓｔ．５％ＭｇＯ４ ’７Ｈ２ａｄ０．５％ＳＯｎ０ｍｅｈｏｉｅｗｅｅａｐｌｅｔｉｎｎｒｐｉｄ．Ｕｎｒｔｅｏｔｍａｕｔｒｏｉｉｎｄｅｈｐｉｌｃｌｕｅｃｎｄｔｏｈｇｅｈａｅｏｅ，ｉｈｒｔｎｂｆｒ
ＪＡＪａ－ｉｇ，ＺＵＹａ－ａｇＩｉｎｐｎＨＯｎｇｎ
（ｈｆｎｃｄｍｙｏｄｃｌｃｎｅ，ｈａｇＨｎｚｏ０３）ＺｅａｇＡａｅＭｅｉｉｃｓｚｅｎａｇｈｕ３０１ｉｆａＳｅｉｆ１
谷胱甘肽（ｌｔｔｏｅ简称ＧＨ）一种存Ｇｕｈｎ，ａｉＳ是在于动植物组织内和微生物细胞内主要的非蛋白巯基化合物和抗氧化基，有重要的生理功能，具广泛应用于临床上，是一种治疗肝病、肿瘤、中毒、白内障、老及变态反应的生化药物，衰同时作为一种
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微生物学杂志２０年７０７月第２卷第４７期
ＪＵＮＬＦＭＣＯＩＬＧｌ２０ｏ２ｏ４ＯＲＡＩＲＢＯＯＹＪｙ０７１７Ｎ．ＯｕＶ．
酵母生产谷胱甘肽的培养条件研究

啤酒废酵母中还原型谷光甘肽提取

作者简介：马德功（９０一，，河南南阳人，硕士研究生，研究方向：品资源开发。１８）男食
提工艺条件，为谷胱甘肽的工业生产和啤酒废酵
母的开发与利用提供参考，具有非常重要的社会价值和经济价值。
基于谷胱甘肽的重要生理作用，国内外学者对其生物学功能和制备方法进行了广泛研究。
ＧＨ的制备方法有酶处理法、热水抽提法、Ｓ乙醇抽提法、微波法等。从猪血、玉米和鲜酵母中提取谷胱甘肽的方法，国内已有少数几篇文章
２ＱｎｄｏＢｇｔｏｅｗｅｏ，Ｌｄｉｏａ２６０）．ｉｇａｒｈｎＳａｅｄＣ．ｔ，Ｊｎｎ６４０ｉＭｏａ
ＡｓａｔＧｕａｉｅ（Ｓｂｔｃ：ｌｔｔｏｒｈｎＧＨ）ｉａｎｔａａｔｅｐｐｉｅｔａｃｎｇｔｉｆｅｆｅｒｄｌｗｔｉｏｒｏｉ．Ｉｉｓａｕｌｃｖｅｔｔａｅｒｏｅａｉｅｉｎｕｄｅｎｔｓｒｉｄｈｄｔｒｈｃｈｂｓｈ
波辅助法、热水抽提法和其它抽提法从啤酒废酵母中提取ＧＨ，主要探讨了微波辅助法和热水抽提法的提取Ｓ
工艺条件，分析比较了不同方法的提取效果。结果表明：热水抽提和微波处理是两种简便、有效的方法，其
中微波法具有好的应用前景。
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啤酒废酵母中还原型谷光甘肽提取
马德功，崔文文
（山东轻工业学院食品与生物工程学院，济南１２．青岛明月海藻集团有限公司，胶南

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论与其它方法相比，乙醇提取法是一种简便、快速、经济、有效的方法。关键词：面包酵母；还原型谷胱甘肽；乙醇；二次提取中图分类号：Ｔ２Ｑ９文献标识码：Ａ文章编号：１７．７Ｘ（０１０．２４０６２９９２１）７０３．４
ＯｐｉｚｔｏｆＣｏｉｉＩｏｔａｔＯｆＧｌｔｔｉｎｎＹｅｓｔｍｉａｉｎｏｎｄｔＯｌｆｒＥｘｒｃｉｎＯｕａｈｏｅｉａｔＳ
谷胱甘肽ｆ．ｌｔｔｉｎ，ＧＨ是由谷氨酸、半ＬｇｕａｈｏｅＳ）
面包酵母属酿酒酵母（ＣｏｅＳＳａｈｒｅａｍｅ
胱氨酸和甘氨酸经肽键缩合而成的具有多种重要生理ｃｒｖｉｅＣＯｅｅｉａ）Ｌ。１，由山东省食品发酵工业研究设计ｓ１，．５２硝基苯甲酸）（ＴＢ）８％ＤＮ９功能的活性三肽。ＧＨＳ具有清除自由基、解毒、延缓院提供：５ ’ 二硫双（．衰老和抗疲劳等多种生理功，在临床上用于肝（生化试剂，Ｓｇ）；还原型谷胱甘肽（ｉｍａ高纯度，Ａｅｃ）；其他生化试剂均为中国医药（ｍｒｓｏ集团）上海化学试剂公司产品。
ｂｓｃｎｒｘｒｃｉｎｍｅｈｄＣｏｃｕｓｏｍｐｒｄｗｉｔｅｔｏｓｅｈｎｌｘｒｃｉｎｍｅｈｄｐｏｅｅａｙｅｏｄａｙｅｔａｔｏｔｏ．ｎｌｉｎＣｏａｅｔｏｈｒｍｅｈｄ，ｔａｏｔａｔｔｏｒｖｄｔｂｈｅｏｏ
ｅｔｃｉｎｗｅｅｏｔｉｅｙＬ９ｏｔｏｏａｄｓｎａｄｗｅｅｖｌａｅｙｓｃｎａｙｅｔｃｉｎＲｅｕｔＨＷａｘｒｔｒｂａｎｄｂ（）ｒｇｎｌｅｉｎｒａｉｔｄｂｅｏｄｒｘｒｔ．ｓｌＧＳＳａｏ３ｈｇｄａｏｓ
ｃｎｅｉｎ，ａｔｎｆｅｔｖｅｈｄｆｒｔｅｅｔａｔｎｏｌｔｔｉｎ．ｏｖｎｅｔｆｓｄｅｃｅｍｔｏｏｘｒｃｏｆｇｕａｈｏｅａｉｈｉ
ＫｅｏｄｓｂｋｒｓｙａｔｇｕａｈｏｅｅｈｎｌｓｃｎｒｘａｔｎｙＷｒ：ａｅ＇ｅｓ；ｌｔｔｉｎ；ｔａｏ；ｅｏｄｙｅｔｃｉａｒｏ
２ＪｎｕｉｌｉｌｅｅｒｅｔＪｎｎＪｎｎ５０３Ｃｉａ．ｉｇＬＢｏｇｃＲｓａｃＣｎｅｏｉ，ｉ０１，ｈｎ）ｏａｈｒｆａａ２
Ａｓａｔ０ｂｅｔｅＴｘａｔｌａｉｅＧＨ）ｒｍａｅＳｅｓｗｔｏｔ，ｔａｏ，ｃｓｅｔｅｂｔｃ：ｊｅｖｏｅｔｃｇｔｈｏ（Ｓｆｂｋｒａｔｉｈｔｅｅｎｌａｉｒｐｃｖｌｔｒｉｒｕｔｎｏ ’ｙｈｗａｒｈｄｅｉｙｏ
ＬＩＣｈｏ，ＵａＹＵＡＮｉｎｇｏ，Ｊａ — ｕＧＡＯｎｈａ，ｅｇＹａ — ｕ２ＬＩＦｎ
（．ｃｏｌｆｈｍｓｙａｄＣｅｉｌｎｉｅｉ，ｎｖｒｉｆｉａ，ｉｎ５０２Ｃｉ；１ＳｈｏｏＣｅｉｒｎｈｍｃＥｇｎｒｇＵｉｓｙｏｄｎｎＪａ０２，ｈａｔａｅｎｅｔｎ２ｎ
１２仪器．
脏保护、治愈肿瘤和治疗内分泌紊乱等疾病】。
ｇｔｔｅｂｓｘｒｃｉｎｍｅｈｄｅｈｅｔｅｔａｔｔｏ．ＭｅｈｏｓＢａｅｎｔｉｇｅｆｃｏｘｅｉｎ，ｈｐｉｌｃｎｉｏｓｆｒｅｈｎｏｏｔｄｓｄｏｈｅｓｎｌａｔｒｅｐｒｍｅｔｔｅｏｔｍａｏｄｔｎｏｔａｌｉ
摘要：目的采用热水、乙醇、盐酸提取面包酵母中的还原型谷胱甘肽，获得最优的提取方法。方法在单因素试验的基础上对乙醇提取法的乙醇浓度、ｐＨ、温度、提取时间进行Ｌ（正交试验并采用二次提取验证提取效果。结果在４）３０℃，
ｐ．，乙醇含量５Ｈ１００％条件下提取４ｎ能有效地提取还原型谷胱甘肽，采用二次提取法验证其提取率达￣９．。结０ｍｉ，ｔ５４Ｊ％
２４３
食品与药品
ＦｏｎｒｇｏｄａｄＤｕ
２１年第１卷第Ｏ期０１３７
酵母还原型谷胱甘肽提取条件的优化
刘超袁建国，高艳华，李峰
（．１济南大学化学化工学院，山东济南２０２；２济南京鲁生物中心，山东济南２０１）５０２．５０３
ｅｅｔｅｙｅｔｃｅｔ０ｅｈｎｌｏ０ｍｉｔ０ ℃ ａｄｐ１．ｈｘｒｃｉｎｒｔｅｃｅ５４．ａｉａｅｆｃｉｌｘｒｔｄｗｉ５％ｔａｏｒｎａｖａｈｆ４４ｎＨ．Ｔｅｅｔｔａｅｒａｈｄ９．％ｖｌｔｄ０ａｏｄ