大鼠脊髓损伤后对红核神经元逆行性损伤的实验研究

第３ ２卷第 １期
Ｖｏ ２， ． Ｌ ３ Ｎｏ １
济
宁 医 学
院
学 报
２０ ０ ９年 ２月
Ｆ ｂ， ０ ９ ｅ ２ ０
Ｊ ＯＵＲＮＡＬ Ｉ ＮＧ ＯＦＪＮＩ ＭＥＤＩ ＣＡＬ ＣＯＬ ＥＧＥ Ｌ
大鼠脊髓 损伤后对红核神 经元逆 行性损伤 的实验研究
孔 令胜 于如 同 聂冬丽 陈德 勤 赵万巨
关键 词 Ｓ Ｉ； Ｎ； 行性损 伤 Ｃ Ｒ 逆 脊髓 损 伤 不 仅 引 起 损 伤 局 部 神 经 组 织 变 性 坏
（ ．５ｍｌ１０ ０３ ／ ０ｇ体 重 ） 腔 注 射 麻 醉 ， 醉成 功 后 ， 腹 麻
大 鼠俯卧固定于脑立体定位仪上。手术野备皮 ， 碘 伏消毒 ， 以第 １ 肋为标志沿后正 中线切开皮肤 ， ３ 长 约 ３ｍ， ｃ 分离棘突两旁肌 肉， 咬除 Ｔ３一 １ １ Ｌ 椎板 ， 用 显微神经外科器械打开椎管至椎弓根部 ， 暴露脊髓 ， 长约 １ｒ 并保持硬脊膜完整 ， ０ ｍ， ａ 用血管钳固定 Ｔ ２ １、 Ｌ ２椎体 ， 以保证重物下落高度 的准确。以 Ｔ ３棘突 １ 相对应的脊髓为损伤区 ， 以脊髓后正 中血管为中 并 心， 用电磁程控铁棒下落打击装置损伤脊髓 ， 造成脊 １ 材 料 与方法 髓挫伤 ， 打击力量为 １ ２ ５ｇｃ 铁棒重 １ｇ下 ０× ． ／ｍ（ ０， 试验动物 ： 成年健康雄性 Ｓ Ｄ大 鼠 ２ Ｏ只， 体重 落 ２ ５ｍ， ． ｃ 棒下端直径 ２５ ｍ， ．ｍ 与硬脊膜接触时间为 ０ １）然后逐层缝合肌肉及皮肤 ， ．ｓ ， 撞击成功标准为 ： ２０± ０ ， ５ ２ ｇ徐州 医学 院实验 动物 中心 提供 。 试剂 ： 辣根过氧化酶（ Ｚ＞ ． ，Ｖ型 ） 四甲基 撞 击 的脊 髓组 织水肿 、 Ｒ ３０ Ｉ 、 出血 ， 鼠尾 巴出现 痉挛性 摆 大 联 苯胺 （ ＭＢ 、 Ｔ ） 焦油紫 均 为美 国 Ｓｇ ａ 司产 品 ， ｉｍ 公 其 动 ， 双后肢躯体 回缩样 扑动， 双后肢呈 现弛缓性瘫 他 试剂 均为 国产 分析纯 或化 学纯 。 痪 。手术 过程 中进 行 持 续监 测 肛 温 ， 并用 白炽 灯 照 主要仪器 ： 江湾 Ｉ型 Ｃ立体定 向仪 ， 上海第二 射的方法使大 鼠体温稳定在 ３ ． ３ ． ａ范围 内。 ６０— ７ Ｏ＝ 【 军医大学修配厂 ； 水循环半导体冰冻切片机 ， 青海无 术毕， 待动物苏醒后 ， 分笼喂养并使室温保持在 ２ ５ 线 电厂 ；Ｈ ３ Ｃ（ ． １ ） 密数显 酸 度计 ， 海 Ｐ Ｓ一 Ｔ ００ 级 精 上 ３￣ ０ Ｃ。各组术后均肌 肉注射青霉 素 ２ ００单位， ５０ 天达仪器有 限公 司 ；ＥＣ Ｗｉ Ｌ ＩＡ Ｑ ｎ图象处理与分 析 每天 ２ 次共 ３ 。术后每天 ３次按压膀胱直至建立 ｄ 系统 ， 国 ；ｌ ｕ Ｈ ０ Ｆ０ ／ Ｍ —Ｃ ２ 德 Ｏｙ ｓ ３ Ｒ ２０ Ｐ ｍｐ Ｃ Ｂ ０显微 照 排空反射或予以穿刺排尿。３ ｄ后符合以下 条件的 相 系统 ， 日本 ； 电子 天平 ， 上海 天平仪 器厂 ； 脊髓 损 伤 大 鼠入选实 验 动 物组 ： １ 双 后 肢痉 挛 性 瘫 痪 ，２ （） （） 自 动打击装置 ， 徐医附院神经外科、 江苏徐州新飞科 体温稳定在 ３ ３℃范 围内。大 鼠死亡及 时复制 ６～ ７ 技有限公司联合研制 ； 汉密尔顿显微 注射系统 ， 模 型补 充 。 上海 医用 激光 仪器厂 。 Ｈ Ｐ逆行示踪及动物灌 注： Ｒ 脊髓损伤后 ２ ｄ ８ 将 实验动物分组 ： 成年健康雄性 ｓ Ｄ大 鼠 ２ ０只随 ２ 组动物 各 ｌ ０只用 １ ％水合 氯醛溶 液 （ ．５ ｌ ０ ０ ３ｍ／ 机分 为 ２组 ： １ （ ）假手 术 组 （ ｈｍ组 ） 仅做 椎 板 切 １０ 体 重 ） 腔 注 射 麻 醉 ， 醉成 功 后 将 大 鼠 固定 Ｓａ ： ０ｇ 腹 麻 开术 。 （ ） 髓 损 伤 组 （ Ｃ 组 ） ２脊 ＳＩ 。２组 动 物 ４周 后 于立体定 向仪 上 ， 部切 口在 脊 髓损 伤远 侧 咬 除 Ｌ 背 ２ 行 Ｈ Ｐ逆 行示踪 术 。 Ｒ 椎 板 ， 露原 伤灶 下 方 的 脊 膜 ， 原 发 伤 灶 下 方 约 暴 在 改良 Ａｉ 法大 鼠脊髓损 伤模型 的制备 ： ｌｎ ｅ 参考 ５ ｍ处 用汉 密尔顿 微量 注射器 缓慢 注射 ２ ％ 的 ｍ ０ Ｂｓｏ等 报 道 的 改 良 Ａｌ ａｓ ｌｎ法 制 备 大 鼠脊 髓 损 伤 ＨＲ ｅ Ｐ生理 盐 水 溶 液 ２ １速度 ０ ２ ｌｍｉ， 注 １ ｌ ， ． １／ ｎ 推 ｘ Ｉ ｘ 模型。手术前大 鼠正常进食 ， １％水合氯醛溶液 后提针 １ ｍ继续 推注， 用 ０ ｍ 完毕 留针 １ｍｎ 分层缝合 ０ ｉ， 死、 洞形成 和胶 质瘢痕形 成 ，导致传 导功 能受 空 损［ ， １ 还可 以通过损伤区域 的传导通路引起上行性 ］ 运 动 神 经 元 萎 缩 、 性 坏 死 ，造 成 逆 行 性 损 伤 。 变 辣根 过 氧化 酶法 （ ｏｓｒｄｓ ｅｏｉａｅ Ｈ Ｐ 是 利 Ｈ ｒ ａｉ ｐｒｘｄｓ， Ｒ ） ｅ ｈ 用轴浆运输现象追踪神经元之 间联系的一种方法 ， 在脊 髓损 伤 功 能 恢 复 的形 态 学 研 究 中起 着 重 要 作 用 。本实 验通过 Ｈ Ｐ示 踪 技术 来 研 究 脊 髓 损 伤 后 Ｒ 对逆 行性脑 红 核神经元 的损伤作 用 ， 现介 绍如下 。
（ 济宁医学院 附属 医院 徐州医学院附属医院）
提 要 目的 研 究大鼠脊髓损伤后对脑红核神经元的逆行性损伤作用 。方法 采用改良Ａｌ ｌｎ法制 ｅ 备大鼠 Ｓ Ｉ Ｃ 模型 ， 伤后 ２ ｄ ８ 采用辣根过氧化酶逆行示踪技术标记 Ｒ Ｎ神经元 ， 应用四甲基联苯胺呈 色反应显 示红核脊髓束神 经元的存活情况。结果 Ｓ Ｉ ２ ｄ Ｒ Ｃ 后 ８Ｈ Ｐ标记 Ｒ Ｎ神经元胞体模糊， 排列零散 ， Ｒ Ｈ Ｐ标记 Ｒ Ｎ 神经元数 目 与假手术组比较显著减少（ ０ ０ பைடு நூலகம் ， Ｐ＜ ．０ ） 差异有统计学意 义。结论 大鼠 Ｓ Ｉ Ｃ 后对脑 Ｒ Ｎ神 经元 和 Ｒ Ｔ具有逆行性的损伤作用， Ｓ 这在 Ｓ Ｉ Ｃ 后神 经功能恢复的形态学研 究中起着重要作用。