【CN110028598A】一种优化透明质酸分子量分布的方法【专利】
一种发酵法生产高分子量透明质酸的方法[发明专利]
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(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请号 201711363083.0(22)申请日 2017.12.09(71)申请人 新疆阜丰生物科技有限公司地址 830026 新疆维吾尔自治区乌鲁木齐经济技术开发区（头屯河区）甘泉堡工业区(72)发明人 李学朋 魏璐 包鑫 张宗华 崔国梁 刘元涛 杨瑞丽 (51)Int.Cl.C12P 19/26(2006.01)C12R 1/46(2006.01)(54)发明名称一种发酵法生产高分子量透明质酸的方法(57)摘要本发明属于透明质酸生物发酵领域，公开了一种发酵法生产高分子量透明质酸的方法，其包括以下步骤：步骤1)菌株活化，步骤2)发酵，步骤3)过滤、醇沉、离心以及干燥。
本发明方法简单可行，生产的透明质酸产量和分子量高，外观洁白透亮，达到化妆品级产品的要求。
权利要求书1页 说明书4页CN 108410927 A 2018.08.17C N 108410927A1.一种发酵法生产高分子量透明质酸的方法，其包括以下步骤：步骤1)菌株活化，步骤2)发酵，步骤3)过滤、醇沉、离心以及干燥。
2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述方法包括如下步骤：步骤1)菌株活化：将兽疫链球菌取出，接种于活化培养基进行活化；步骤2)发酵：将活化好的菌种接种于发酵罐中进行发酵，发酵温度为39-40℃，溶氧为3.1L/min；发酵至6-7h，往发酵罐中添加甘油；发酵至14-15h，超声处理，然后继续发酵2h，终止发酵；发酵过程中，通过流加蔗糖溶液将残糖浓度控制在不低于30g/L；步骤3)过滤、醇沉、离心以及干燥：利用板框过滤去除菌体，得到上清液，向上清液中加入2-3倍体积的无水乙醇进行沉淀90-120min，收集沉淀得到湿物料；将湿物料进行离心、真空冷冻干燥、粉碎得高分子量透明质酸。
3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，所述甘油在发酵罐中的浓度为200-300mg/L。
一种医用透明质酸钠凝胶分子量和分子量分布系数的检测方法
一种医用透明质酸钠凝胶分子量和分子量分布系数的检测方法1 背景介绍医用透明质酸钠凝胶（Medical Sodium Hyaluronate Gel）是近年来常见的一种注射型填充物，主要用于美容整形、填充面部皱纹、改善皮肤疤痕等方面。
然而，透明质酸钠凝胶的质量控制与检测仍然是制约其发展的重要问题之一。
其中，分子量和分子量分布系数是影响透明质酸钠凝胶性能的关键因素，因此需要建立一种准确可靠的分子量检测方法。
2 现有方法及其局限性目前，常见的透明质酸钠凝胶分子量检测方法有色谱法（如凝胶色谱、高效液相色谱等）、凝胶渗透色谱法、凝胶电泳法等。
其中，凝胶色谱法是最常用的方法之一，但因为其操作复杂、耗时长等问题，难以适应分析大批量样品的需求。
凝胶电泳法虽然简单易行，但其操作过程中需要加热或者加酶，这样会对透明质酸钠凝胶的分子量和分子量分布系数造成影响。
总之，现有方法存在一定的局限性，因此需要开发一种新的检测方法。
3 原理现提出一种基于动态光散射（Dynamic Light Scattering，DLS）的透明质酸钠凝胶分子量检测方法。
DLS技术是一种基于粒子在液体中发生布朗运动所产生的激光散射现象的检测方法，可以测量物质的微观粒子的尺寸、形状、摩尔质量、分子量等信息，并且因为无需分离、样品需求少等优点，被广泛应用到生命科学、化学等领域。
将透明质酸钠凝胶样品溶于缓冲盐水，用DLS设备测量其在散射角度为90度处的平均光散射率，并通过Stokes-Einstein公式计算得出样品的分子量。
同时，可使用基于DLS的动态尺寸分析（Dynamic Light Scattering）及相对分子量分布系数（Polydispersity Index，PDI）对透明质酸钠凝胶样品的分子量分布情况进行检测和评估。
DLS的优点在于测试样品的特征不会受到离子强度、表面电势、溶质浓度和洗脱操作等因素的影响。
4 优势和应用前景该方法具有操作简便、检测速度快、成本低廉等优点，且样品需要的量较少。
透明质酸 重均分子量
透明质酸重均分子量什么是透明质酸？透明质酸（Hyaluronic Acid，简称HA）是一种存在于人体组织和生物体中的天然高分子多糖。
它是一种无色、透明、黏稠的液体，在皮肤、关节液、眼球等部位中起着重要的生理功能。
透明质酸的化学结构由重复的N-乙酰-D-葡萄糖胺和D-葡萄糖醛酸组成，这种结构使得透明质酸具有良好的保湿性和润滑性。
它能够在皮肤表面形成一层保护膜，锁住水分，保持皮肤的水分平衡，增强皮肤的柔软度和弹性。
透明质酸的重均分子量透明质酸的重均分子量（Molecular Weight，简称MW）是指透明质酸分子中所有单体重量的平均值。
透明质酸的分子量可以通过分子量分析仪等仪器进行测定。
重均分子量是衡量透明质酸质量的一个重要指标，它与透明质酸的性质和功能密切相关。
透明质酸的重均分子量越高，其保湿性和润滑性就越好。
较高分子量的透明质酸能够形成更稳定的保湿层，长时间保持皮肤的水分，提供更好的保湿效果。
透明质酸的重均分子量通常分为低分子量、中分子量和高分子量三个等级。
低分子量透明质酸的分子量较小，更容易被皮肤吸收，能够渗透到皮肤深层，具有更好的滋润和修复作用。
中分子量透明质酸具有较好的保湿效果，能够改善皮肤的水分平衡。
高分子量透明质酸的分子量较大，能够形成保湿层，保持皮肤的水分。
透明质酸的应用透明质酸在医学和美容领域有广泛的应用。
以下是透明质酸的一些常见应用：1. 美容护肤品透明质酸是许多护肤品中的重要成分之一。
它能够提供持久的保湿效果，改善皮肤的水分平衡，增加皮肤的柔软度和弹性。
透明质酸还能够促进胶原蛋白的合成，减少皱纹和细纹的出现，使皮肤更加紧致和光滑。
2. 注射填充剂透明质酸注射填充剂是一种常见的整形美容方法。
通过将透明质酸注射到面部或身体其他部位，可以填充凹陷的皱纹和皮肤缺陷，恢复面部轮廓的丰满和平衡。
透明质酸注射填充剂具有安全、效果明显、恢复时间短等优点，成为越来越多人选择的美容方法。
3. 关节润滑剂透明质酸在医学领域被用作关节润滑剂，用于治疗关节炎等关节疾病。
透明质酸钠及其制剂中的分子量的检测方法[发明专利]
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(10)申请公布号 CN 102980951 A(43)申请公布日 2013.03.20C N 102980951 A*CN102980951A*(21)申请号 201210458087.8(22)申请日 2012.11.15G01N 30/02(2006.01)(71)申请人上海景峰制药股份有限公司地址200120 上海市宝山区罗新路50号(72)发明人叶湘武 王琼 薛亮(74)专利代理机构上海天翔知识产权代理有限公司 31224代理人吕伴(54)发明名称透明质酸钠及其制剂中的分子量的检测方法(57)摘要本发明涉及透明质酸钠及其制剂中分子量的检测方法，其是让测量的透明质酸钠溶液中透明质酸钠通过一根内装有不同孔径的高分子凝胶球的色谱柱，每一色谱柱中可供分子通行的路径有粒子间的较大间隙和粒子内的较小通孔；当透明质酸溶液流经色谱柱时，较大的分子被排除在粒子的较小通孔之外，只能从粒子间的间隙通过，速率较快；而较小的分子可以进入粒子中的较小通孔，通过的速率慢的多；经过一定长度的色谱柱，分子根据相对分子质量被分开，相对分子质量大的在前面，相对分子质量小的在后面；其测量时实验室的温度为16℃～24℃，配制的透明质酸溶液在规定浓度的±10%范围内。
利用本方法可以保证检测透明质酸钠中分子量重复性，对数据分析和产品的研究有很大帮助，减小测量带来误差，特别适合实验室对其进行的检测工作。
(51)Int.Cl.权利要求书1页 说明书4页(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请权利要求书 1 页 说明书 4 页1/1页1.透明质酸钠及其制剂中分子量的检测方法，其是让测量的透明质酸钠溶液中透明质酸钠通过一根内装有不同孔径的高分子凝胶球的色谱柱每一色谱柱中可供分子通行的路径有粒子间的较大间隙和粒子内的较小通孔；当透明质酸溶液流经色谱柱时，较大的分子被排除在粒子的较小通孔之外，只能从粒子间的间隙通过，速率较快；而较小的分子可以进入粒子中的较小通孔，通过的速率慢的多；经过一定长度的色谱柱，分子根据相对分子质量被分开，相对分子质量大的在前面，相对分子质量小的在后面；其特征在于，所述测量时实验室的温度为16℃～24℃，配制的透明质酸溶液在规定浓度的±10%范围内。
一种全分子量分布的透明质酸钠及其制备方法和应用[发明专利]
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专利名称：一种全分子量分布的透明质酸钠及其制备方法和应用
专利类型：发明专利
发明人：凌沛学,邵华荣,曾庆恺
申请号：CN202110874694.1
申请日：20210730
公开号：CN113512134B
公开日：
20220520
专利内容由知识产权出版社提供
摘要：本发明提供了一种全分子量分布的透明质酸钠的制备方法，所述方法包括：步骤1)：对透明质酸钠固体原料进行喷淋双氧水和紫外照射处理，获得透明质酸钠降解物料；步骤2)：将透明质酸钠降解物料溶解于水中，用NaOH溶液调pH至碱性，获得透明质酸钠碱性溶液；步骤3)：对透明质酸钠碱性溶液进行超声处理；步骤4)：将透明质酸固体原料配制成浓度为0.1％～1％(w/v)的透明质酸钠溶液，以20％～60％(v/v)的添加比例与超声后的透明质酸钠碱性溶液混合均匀；步骤5)：分别采用硅藻土和活性炭进行吸附处理，并采用纳米滤膜过滤浓缩，干燥后即得。
本发明的制备方法，能够获得较好补水保湿、抗炎及细胞保护等活性的透明质酸钠。
申请人：梅晔生物医药股份有限公司,山东美貌制药有限公司,山东贯天下生物科技有限公司
地址：271100 山东省济南市莱芜高新区李陈庄工业园金源路6号
国籍：CN
代理机构：北京秉文同创知识产权代理事务所(普通合伙)
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不同分子量范围的透明质酸钠的分离和测定分子量的方法[发明专利]
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专利名称：不同分子量范围的透明质酸钠的分离和测定分子量的方法
专利类型：发明专利
发明人：刘继东,杨强,杨晨
申请号：CN202111455129.8
申请日：20211201
公开号：CN114113400A
公开日：
20220301
专利内容由知识产权出版社提供
摘要：本发明属于医药和分析检测领域，涉及一种不同分子量范围的透明质酸钠的分离和/或测定分子量的方法。
具体地，一种通过高效液相色谱测定透明质酸钠样品的分子量的方法，其中，色谱条件如下：色谱柱为SRTSEC‑150(5μm,7.8x300mm)、SRTSEC‑500(5μm,7.8x300mm)和SRTSEC‑2000(5μm,7.8x300mm)三根色谱柱串联；流动相为氯化钠水溶液，浓度为
0.18‑0.22mol/L，其中按照体积百分比加入0.01％‑0.05％ProClin200试剂；色谱柱温度(同检测器温度)为40℃‑50℃；流速为0.7‑0.9ml/min；并且进样体积为90‑110μl。
本发明的方法有效地分离和检测不同分子量的透明质酸钠混合物且成本低；另外，使用ProClin200试剂替代流动相中常加入的叠氮钠，降低了剧毒和易爆炸的风险，提高了安全性。
申请人：沈阳兴齐眼药股份有限公司
地址：110163 辽宁省沈阳市东陵区泗水街68号
国籍：CN
代理机构：中国贸促会专利商标事务所有限公司
代理人：刘海罗
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(19)中华人民共和国国家知识产权局
(12)发明专利申请
(10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请号 201910352440.6
(22)申请日 2019.04.29
(71)申请人 扬州中福生物技术有限公司
地址 225000 江苏省扬州市广陵区鼎兴路
35号
(72)发明人 朱翔 魏涛
(74)专利代理机构 北京轻创知识产权代理有限
公司 11212
代理人 盛晓磊
(51)Int.Cl.
C08B 37/08(2006.01)
(54)发明名称
一种优化透明质酸分子量分布的方法
(57)摘要
本发明属于透明质酸制备技术领域，提供了
本发明提供了一种优化透明质酸分子量分布的
方法，在常温下将平均分子量为Mr a 的透明质酸
采用洗脱剂稀释形成洗脱液，并倒入已填充硅胶
的填充柱中进行洗脱处理，在所述硅胶柱的尾端
分别截取m(m≥3)个时间段内的流出液，分别对
不同时间段的流出液，进行提纯处理并进行GPC
检测，根据GPC检测结果及目标优化范围，获取一
个或多个时间段的流出液并进行混合。
本发明的
优化透明质酸分子量分布的方法，采用硅胶层析
法对透明质酸分子量进行进一步筛选，经提纯处
理之后，获得的透明质酸分子量分布范围更窄，
相同平均分子量批次与批次之间的粘度更稳定，
作用功效更明确。
权利要求书1页 说明书7页 附图5页CN 110028598 A 2019.07.19
C N 110028598
A
1.一种优化透明质酸分子量分布的方法，其特征在于，将平均分子量为Mr a的透明质酸采用洗脱剂稀释形成洗脱液，并倒入已填充硅胶的填充柱中进行洗脱处理，在所述硅胶柱的尾端分别截取m(m≥3)个时间段内的流出液，分别对不同时间段的流出液，进行提纯处理并进行GPC检测，根据GPC检测结果及目标优化范围，获取一个或多个时间段的流出液并进行混合。
2.根据权利要求1所述的优化透明质酸分子量分布的方法，其特征在于，所述填充柱为高2m，直径20cm的钢制填充柱。
3.根据权利要求1所述的优化透明质酸分子量分布的方法，其特征在于，所述硅胶的直
径为5-8μm，
每一硅胶的孔径为
4.根据权利要求1所述的优化透明质酸分子量分布的方法，其特征在于，所述洗脱液中的透明质酸浓度为0.1％～
5.0％。
5.根据权利要求1所述的优化透明质酸分子量分布的方法，其特征在于，所述洗脱剂为0.1mol/L～0.2mol/L的氯化钠溶液。
6.根据权利要求1所述的优化透明质酸分子量分布的方法，其特征在于，所述洗脱处理的洗脱速度为50mL/min～100mL/min。
7.根据权利要求1-6中任一项所述的优化透明质酸分子量分布的方法，其特征在于，所述纯优化处理采用乙醇沉淀法。
权 利 要 求 书1/1页
2
CN 110028598 A。