常用细胞培养基配方和缓冲液
生物培养基和溶液的配制
250 μ L、 0. 05% 溴酚蓝 250 μ L。
水定容至 1 L ,用 Whatman 1 号滤纸过滤 ,于 4 ℃保存 。
水定容至 100 mL ,分装后高压灭菌 。
26 3 mol/L NaAc(pH5 . 2) : 80 mL 水中溶解 40 . 81 g NaAc·3H2 O ,用冰醋酸约 11 . 4 mL 调 pH 至 5 . 2 ,加 27 2 mol/L NaAc(pH4 . 0) : 30 mL 水中溶解 27 . 22 g NaAc·3H2 O ,用冰醋酸约 56 mL 调 pH 至 4 .0 ,加水
附录 6 培养基与试剂的配制 定容至 100 mL ,分装后高压灭菌 。
207
28 5 mol/L NaCl : 800 mL 水中溶解 29 . 2 g NaCl ,定容至 100 mL 。
29 0 . 15 mmol/L NaCl( 即 0 . 9% NaCl 溶液 ) : 90 mL 水中溶解 0 . 9 g NaCl ,定容至 100 mL 。 7H2 O 于 100 mL 水中 。
份贮存于 - 20 ℃备用 。 于 - 20 ℃ 。
16 100 mmol/L IPTG 母液 :溶解 238 . 3 mg 的 IPGT( 异丙基硫代 β D 半乳糖苷 ) 于 10 mL 水中 ,分成小 17 2 mol/L KCl :溶解 37 . 28 g KCl 于 250 mL 水中 。 18 10 mg/mL 溶 菌 酶 ( lysozyme) :用 10 m mol/L Tris
100 mL 水中 。
206
附录 6 培养基与试剂的配制
液使用前配制 )
5 1×抽提缓冲液 : 0. 5% 的 2×抽提缓冲液 、 5 mol/L 尿素 、 10 mmol/L 巯基乙醇 、 5%苯酚 。 (1×抽提缓冲 6 DEPC( 焦碳酸二乙酯 ) 处理水 :0 .1%DEPC ,水 ,即加 1 mL DEPC(diethlpyrocarbonate) 于 1 L 水中 ,使
常用缓冲液及培养基配方
常用缓冲液及培养基配方LB液体培养基：Bacto-蛋白胨10g酵母抽提物5g氯化钠10g加950ml蒸馏水溶解，用5N氢氧化钠调pH至7.0，定容至1000ml，高压灭菌后保存。
LB固体培养基：每升LB液体培养基中加入12g琼脂粉，高压灭菌后保存。
SOB液体培养基Bacto-蛋白胨20g酵母抽提物5gNaCl 0.5g加950 ml水溶解，加入250mmol/L KCl 溶液10ml，用5 N NaOH调pH至7.0，定容至1000 ml，高压灭菌后保存。
使用前加入5ml经灭菌的2mol/LMgCl2。
SOC液体培养基SOB中加入经灭菌的葡萄糖溶液至终浓度为20mmol/L。
麦康凯固体培养基每1000ml水中加52g培养基粉，煮沸溶解后分装，高压灭菌。
NA固体培养基牛肉浸膏3g酵母浸膏1g蛋白胨蔗糖琼脂粉5g 10g 15g加950ml蒸馏水溶解，调pH至7.0，定容至1000ml，高压灭菌后保存。
TB培养基：将下列组分溶解在0.9L水中：Bacto-蛋白胨12g酵母抽提物24g甘油4ml各组分溶解后高压灭菌。
冷却到60℃，再加100ml灭菌的170mmol/L KH2PO4/ 0.72 mol/L K2HPO4的溶液。
高压灭菌或用0.22um的滤膜过滤除菌。
溶液Ⅰ葡萄糖2.25 g 50mmol/L1mol/L Tris·Cl(pH8.0) 6.25ml 20mmol/L0.5mol/L EDTA(pH8.0) 5ml 10mmol/L调pH至8.0后，用水定容至250 ml，高压灭菌后保存。
溶液Ⅱ10 mol/L NaOH 2ml10% SDS 10ml用水定容至100 ml，现配现用。
溶液Ⅲ5 mol/L 醋酸钾60ml冰醋酸11.5ml水28.5ml高压灭菌后保存。
高盐TE缓冲液10mmol/L Tris.Cl, pH 8.0*0.1mmol/L EDTA, pH 8.0*1mol/L NaCl于室温保存（可在几年内保持稳定）CTAB抽提液2%（w/v）CTAB(古立烷基三乙基溴化铵)100mmol/L Tris.Cl,pH 8.0 *1.4mol/L NaCl于室温保存（可在几年内保持稳定）CTAB/NaCl 溶液（10% CTAB/0.7mol/L NaCl）在80ml H2O中溶解4.1g NaCl,缓慢加入10一CTAB（十六烷基三乙基溴化铵），同时加热并搅拌。
常用缓冲液及培养基配方
常用缓冲液及培养基配方缓冲液和培养基是生物学实验中常用的重要试剂，它们的配方的选择对实验结果有着重要的影响。
下面将介绍几种常用的缓冲液和培养基的配方及其用途。
一、缓冲液配方1.磷酸盐缓冲液磷酸盐缓冲液常被用于细胞培养和生物化学实验中，它的使用范围很广。
常用的磷酸盐缓冲液有PBS（磷酸盐缓冲盐水），配方如下：-NaCl8g-KCl0.2g-Na2HPO41.42g-KH2PO40.24g将以上物质溶解在1L的去离子水中，pH值调到7.4，即可得到1×PBS缓冲液。
2. Tris缓冲液Tris缓冲液在分子生物学实验中常被用作DNA和RNA电泳的产物混合液。
常用的Tris缓冲液有Tris-HCl缓冲液和Tris-acetate缓冲液。
以下是Tris-HCl缓冲液的配方：- Tris 12.1 g-HCl(10M,pH7.6)10mL将Tris和HCl分别溶解在800 mL去离子水中，然后添加水调至1 L，pH值调节到目标值即可。
Tris-acetate缓冲液的配方与Tris-HCl相似，只是在Tris-HCl的基础上添加乙酸。
3. Glycine缓冲液Glycine缓冲液常被用于电泳实验中，用于电泳缓冲液和电泳媒介液的制备。
以下是Glycine缓冲液的配方：- Glycine 3 g- Tris 4.8 g-SDS0.207g-EDTA0.37g将以上物质溶解在1 L的去离子水中，pH值调至8.3，即可得到1×Glycine缓冲液。
1.LB培养基LB培养基是最常用的细菌培养基之一，用于培养大肠杆菌等革兰氏阴性菌。
以下是LB培养基的配方：- Tryptone 10 g- Yeast extract 5 g-NaCl10g将以上物质溶解在1L的去离子水中，加热至溶解，然后进行高压灭菌即可得到LB培养基。
2.M9培养基M9培养基是一种缺乏氮、氨基酸和碳的最小培养基，常被用于重组DNA的传输。
几种主要培养基配方
几种主要培养基配方在微生物学和生物化学实验中，培养基是一种提供营养物质，促进微生物或细胞生长和繁殖的人工培养介质。
培养基配方的选择取决于所培养的生物的特性和需要。
以下是几种常见的主要培养基配方：1.液体培养基液体培养基是一种透明液体，主要由多种有机和无机化合物组成。
它提供了细胞所需的所有营养物质，并具有较高的溶解性。
液体培养基可以用于菌苗投放、菌种产生等实验。
常见的液体培养基配方包括：-LB培养基：由蛋白胨、酵母提取物和盐酸混合而成。
适用于大多数细菌的培养。
-TB培养基：类似于LB培养基，但含有甘油和磷酸盐缓冲液。
适用于产生大量细胞质或蛋白质的生物学实验。
-BHI培养基：由脑心肝提取物和酵母提取物组成。
适用于革兰氏阳性菌的培养。
-TSB培养基：由胨、酵母提取物和盐溶液混合而成。
适用于细菌和真菌的培养。
2.固体培养基固体培养基是将适当的凝固剂添加到液体培养基中，形成固体状态。
它用于细菌、真菌和许多其他微生物的分离和培养。
常见的固体培养基配方包括：-培养基琼脂：由琼脂和液体培养基配方混合而成。
适用于各种微生物的培养。
-布置气体：含有牛血、蔗糖和琼脂的培养基。
适用于肺炎球菌和其他嗜血菌的培养。
-罗盘琼脂：含有羊血、肉蔗糖和琼脂的培养基。
适用于嗜肺军团菌的培养。
-马铃薯葡萄糖琼脂：由马铃薯汁、葡萄糖和琼脂组成。
适用于真菌的培养。
3.选择性培养基选择性培养基是一种能够选择特定细菌生长的培养基。
它包含了一些抑制其他微生物生长的成分，以便于所需微生物的分离。
常见的选择性培养基配方包括：- MacConkey琼脂培养基：含有胆盐、素碱和结晶紫的培养基。
适用于革兰氏阴性菌的培养。
-EMB琼脂培养基：含有艾希希氏菌靛蓝和素碱的培养基。
适用于弧菌、大肠杆菌等细菌的培养。
- Pseudomonas琼脂培养基：含有铜硫酸、锌酸和金属钠的培养基。
适用于绿脓杆菌的培养。
4.部分定义培养基部分定义培养基是一种含有部分有机和无机成分的培养基。
细胞培养常用试剂
Hank`s液与D-Hank`s液 用途上的比较
• Hank`s液是组织培养基本用液，常用于配 制培养基及其他用液，或洗涤组织、细胞 等。细胞在Hank`s液中可以在一段时间内 维持一定的活力。另外Hank`s液还可以用 于终止EDTA的作用。 • 配制胰酶液或者是胰酶/EDTA的基础液都是 D-hanks 液，而不能使用Hank`s液。 这是 由于钙离子和镁离子会影响胰蛋白酶的活 性，也会阻碍EDTA的作用。
PBS
• 磷酸盐缓冲液 磷酸盐是生物化学研究中使用最广泛的一种缓冲剂，由於 它们是二级解离，有二个pKa值，所以用它们配制的缓冲 液，pH范围最宽： • NaH2PO4： pKa1＝2.12， pKa2＝7.21 • Na2HPO4： pKa1＝7.21， pKa2＝12.32 • 配酸性缓冲液： 用 NaH2PO4，pH＝1～4， • 配中性缓冲液： 用混合的两种磷酸盐，pH＝6～8， • 配碱性缓冲液： 用 Na2HPO4，pH＝10～12。 因为低温时钠盐难溶，钾盐易溶，一般情况下用钾盐比 钠盐好（使用SDS-PAGE时除外）。
Hank`s液配方
• Hank`s液（原液） 原液甲： NaCl 160g KCl 8g MgSO4· 7H2O 2g MgCl2· 6H2O 2g 上述试剂加入800ml双蒸水。溶解。 CaCl2 2.8g溶于100ml双蒸水 上述二液混合，加双蒸水至1000ml，再加2ml氯仿防腐，4℃保存。 原液乙： Na2HPO4· 12H2O 3.04g KH2PO4 1.2g 葡萄糖 20g 加入800ml双蒸水，溶解。 0.4%酚红溶液 100ml 上述二液混合，加双蒸水至1000ml，再加2ml氯仿防腐，4℃保存。 使用时甲，乙原液按下列比例配成 Hanks 液
实验室常用试剂和缓冲液配方
实验室常用试剂和缓冲液配方实验室中常用的试剂和缓冲液种类繁多，根据实验需求，可以根据不同的试剂和缓冲液配方来满足实验要求。
以下是一些常见的试剂和缓冲液配方，以及其用途和制备方法。
1. 磷酸缓冲液（Phosphate buffer）磷酸缓冲液常用于生化和分子生物学实验中，用于控制溶液的pH值，适用于酸性和碱性条件下。
常见的配方包括0.1M磷酸盐缓冲液（pH7.2-7.4），需要用磷酸盐和盐酸或氢氧化钠来制备。
2. 氯化钠溶液（Sodium chloride solution）氯化钠溶液是实验室中常见的缓冲液配方之一，通常用于调节生物样品的渗透压和离子浓度。
可以制备不同浓度的氯化钠溶液，常见的配方为0.9%氯化钠溶液（生理盐水）。
3. 碳酸氢盐缓冲液（Bicarbonate buffer）碳酸氢盐缓冲液常用于细胞培养和生理实验中，用于维持细胞培养基或实验液的pH稳定。
一种常见的配方为10mM碳酸氢盐缓冲液（pH7.2-7.4），需要用碳酸氢钠和盐酸来制备。
4. Tris缓冲液（Tris buffer）Tris缓冲液是一种常见的生化实验缓冲液，可以调节到不同的pH值。
常见的配方为50 mM Tris缓冲液（pH 7.4），需要用Tris（三氯甲烷磺酸，Tris-HCl）和盐酸来制备。
5. PBS缓冲液（Phosphate-buffered saline）PBS缓冲液是一种用于细胞和组织处理的常见缓冲液，具有稳定pH值和离子浓度的特点。
常见的配方为10mMPBS缓冲液（pH7.4），需要用磷酸盐和盐酸或氢氧化钠来制备。
6. 甘氨酸缓冲液（Glycine buffer）甘氨酸缓冲液常用于蛋白质电泳实验中，用作电泳缓冲液和传递缓冲液。
常见的配方为25mM甘氨酸缓冲液（pH8.3），需要用甘氨酸和盐酸来制备。
7. BSA溶液（Bovine serum albumin solution）BSA溶液是实验室中常见的蛋白质标准物质，用于测定蛋白质浓度和酶活性等实验。
常用培养基配方范文
常用培养基配方范文培养基（Culture medium）是一种用于细菌、真菌、植物细胞、动物细胞和其他微生物的繁殖和生长的营养物质。
常用的培养基可分为发酵培养基、微生物培养基和细胞培养基。
下面列举了一些常用的培养基配方。
1. LB培养基（Luria-Bertani medium）成分：-牛肉提取物：10克-酵母提取物：5克-热可溶性淀粉：10克-氯化钠：10克-水：1升2. NB培养基（Nutrient broth）成分：-牛肉提取物或肉蔻精：8克-酵母提取物：4克-葡萄糖：4克-水：1升3. MacConkey培养基成分：-水解动物蛋白：17克-中和胆盐：1.5克-中性红：0.03克-水：1升4. TSB培养基（Tryptic soy broth）成分：-大豆胨：17克-酵母提取物：3克-水：1升5. BHIA培养基（Brain Heart Infusion Agar）成分：-脑心汤固体：37克-水：1升6.R2A培养基成分：-水解酵母提取物：0.5克-蛋白胨：0.5克-葡萄糖：0.5克-脱脂乳粉：0.5克-黄豆粉：0.5克-高氯酸钠：0.3克-多聚体1466：0.05克-水：1000毫升7.比尔斯氏培养基（BHI培养基）成分：-大豆胨：37克-脑心汤固体：2克-水：1升8. 培养基199（Medium 199）成分：-高锰酸钾：0.015克-硫酸：1.55克-磷酸一氢钠：0.184克-高氯酸钠：8.0克-溴酚蓝：0.4克-d-葡萄糖：5.55克-l-谷氨酸：40.525克-苏打粉：0.84克-水：1升9. DMEM培养基（Dulbecco's Modified Eagle's Medium）成分：-苔藓胶原酸：1克-乳糖：1克- 谷氨酸：584mg- 水：1000ml这只是一小部分常见的培养基配方，实际上有很多种不同的培养基，它们根据不同的生物特性和培养需求来设计。
不同的培养基可以提供细菌、真菌、细胞等微生物生长需要的各种营养物质。
常用培养基配制
Na3citrate x H2O
88.2 g
15 mM
H2O
至800 ml
1M HCl调节pH值至7.0
H2O
至1升
20X SSPE
/升
终1 X浓度
NaCl
175.3 g
150 mM
NaH2PO4xH2O
27.6 g
10 mM
Na2EDTA
7.4 g
10 mM
H2O
至800 ml
10 M NaOH调节pH值至7.4
/升
终1 X浓度
Na2HPO4x7H2O
64 g
47.8 mM
KH2PO4
15 g
22 mM
NaCl
2.5 g
8.6 mM
NH4
5 g
18.7 mM
添加剂
/升
终1 X浓度
抗生素(如果需要)
氨苄青霉素
50 µg/ml
氯霉素
20 µg/ml
卡那霉素
30 µg/ml
四环素
12 µg/ml
半乳糖苷(如果需要)
寡聚腺苷酸
oligo(dT)
寡聚脱氧胸苷酸
OMP
乳清苷(一磷)酸
Pi
无机磷酸
PAAG
聚丙烯酰胺凝胶
PAGE
聚丙烯酰胺凝胶电泳
PBS
磷酸盐缓冲液
PCR
聚合酶链式反应
PEI
聚乙烯亚胺
PEG
聚乙二醇
PIPES
哌嗪-1,4-二乙磺酸
PNK
多聚核苷激酶
pNPP
对硝基苯磷酸
poly(A)
多聚腺苷酸
poly(A)+
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6800.00
8000.00
D-核糖
0.50
0.50
无水磷酸二氢钠
121.74
—
乙酸钠
50.00
50.00
磷酸氢二钠
—
47.70
胸腺嘧啶
0.30
0.30
L-丙氨酸
25.00
25.00
吐温80
20.00
20.00
L-精氨酸盐酸盐
70.00
70.00
尿嘧啶
0.30
0.30
L-天门冬氨酸
30.00
30.00
15.00
15.00
烟酰胺
0.025
0.025
L-苯丙氨酸
25.00
25.00
对氨基苯甲酸
0.05
0.05
L-脯氨酸
40.00
40.00
盐酸吡哆醛
0.025
0.025
L-丝氨酸
25.00
25.00
盐酸吡哆醇
0.025
0.025
L-苏氨酸
30.00
30.00
核黄素
0.01
0.01
L-色氨酸
10.00
10.00
pH（加碳酸氢钠）
7.7±0.3
7.4±0.3
7.6±0.3
7.3±0.3
渗透压（无碳酸氢钠）
250±5%
280±5%
245±5%
243±5%
渗透压（加碳酸氢钠）
300±5%
290±5%
285±5%
295±5%
以上数据仅为参考，以产品说明书为准。
199细胞培养基
成分（mg/L）
MD500
MD501
成分（mg/L）
36
36
36
36
36
L-缬氨酸
46
46
46
46
46
46
46
46
46
D-葡萄糖
1000
1000
1000
1000
1000
1000
1000
1000
1000
酚红
10
10
10
10
10
6
6
10
10
丁二酸钠
—
—
—
—
—
100
100
—
—
丁二酸
—
—
—
—
—
75
75
—
—
D-泛酸钙
1
1
1
1
1
1
1
1
1
重酒石酸胆碱
—
—
—
—
—
1.8
116.6
L-色氨酸
9.02
9.02
五水硫酸铜
0.0013
0.0013
L-酪氨酸
38.4
38.4
九水硝酸铁
0.05
0.05
L-缬氨酸
52.85
52.85
七水硫酸亚铁
0.417
0.417
D-葡萄糖
3151
3151
氯化钾
311.8
311.8
HEPES
3574.5
—
氯化镁
28.64
28.64
次黄嘌呤
2
2
无水硫酸镁
50
50
50
50
L-天门冬氨酸
20
20
20ห้องสมุดไป่ตู้
20
L-胱氨酸盐酸盐
65.15
65.15
65.15
65.15
L-谷氨酸
20
20
20
20
L-谷氨酰胺
300
300
300
300
甘氨酸
10
10
10
10
L-组氨酸
15
15
15
15
L-羟脯氨酸
20
20
20
20
L-异亮氨酸
50
50
50
50
L-亮氨酸
50
50
50
50
L-赖氨酸盐酸盐
94
氯化钠
4505
D-葡萄糖
4500
无水磷酸二氢钠
108.7
酚红
15
五水亚硒酸钠
0.0173
HEPES
5958
L-丙氨酸
25
丙酮酸钠
110
L-精氨酸盐酸盐
84
维生素H
0.013
L－天门冬酰胺
25
烟酰胺
4
L－天门冬氨酸
30
盐酸吡哆醛
4
L-胱氨酸盐酸盐
91.24
D-泛酸钙
4
L-谷氨酸
75
核黄素
0.4
L-谷氨酰胺
pH（无碳酸氢钠）
7.5±0.3
7.5±0.3
8.0±0.3
6.7±0.3
pH（加碳酸氢钠）
7.8±0.3
7.8±0.3
8.2±0.3
7.0±0.3
渗透压（无碳酸氢钠）
237±5%
235±5%
235±5%
260±5%
渗透压（加碳酸氢钠）
279±5%
280±5%
280±5%
292±5%
以上数据仅为参考，以产品说明书为准。
—
—
—
—
L-精氨酸盐酸盐
126
126
126
126
126
126
126
126
126
L-天门冬酰胺
—
—
—
13.2
13.2
—
—
—
—
L-天门冬氨酸
—
—
—
13.2
13.2
—
—
—
—
L-胱氨酸盐酸盐
31.29
31.29
31.29
31.29
31.29
31
31
31.29
31.29
L-谷氨酸
—
—
—
14.7
14.7
—
—
—
—
L-谷氨酰胺
292
292
292
292
292
—
—
292
292
甘氨酸
—
—
—
7.5
7.5
—
—
—
—
L-组氨酸盐酸盐
42
42
42
42
42
42
42
42
42
L-异亮氨酸
52
52
52
52
52
52
52
52
52
L-亮氨酸
52
52
52
52
52
52
52
—
52
L-赖氨酸盐酸盐
72.5
72.5
72.5
72.5
72.5
72.5
72.5
—
5957.5
酚红
5
—
—
5
维生素H
0.2
0.2
0.2
0.2
D-泛酸钙
0.25
0.25
0.25
0.25
氯化胆碱
3
3
3
3
叶酸
1
1
1
1
i-肌醇
35
35
35
35
烟酰胺
1
1
1
1
对氨基苯甲酸
1
1
1
1
盐酸吡哆醇
1
1
1
1
核黄素
0.2
0.2
0.2
0.2
盐酸硫胺
1
1
1
1
维生素B12
0.005
0.005
0.005
0.005
42
渗透压（加碳酸氢钠）
276±5％
以上数据仅为参考，以产品说明书为准。
BME细胞培养基
成分（mg/L）
MD100
MD101
MD102
MD103
无水氯化钙
200
140
200
200
氯化钾
400
400
400
400
无水硫酸镁
97.67
97.67
—
97.67
磷酸二氢钾
—
60
—
—
氯化钠
6800
8000
6800
酚红
10
10
10
6
丁二酸钠
—
—
—
100
丁二酸
—
—
—
75
维生素H
1
1
1
1
D-泛酸钙
1
1
1
1
重酒石酸胆碱
—
—
—
1.8
氯化胆碱
1
1
1
—
叶酸
1
1
1
1
i-肌醇
2
2
2
2
烟酰胺
1
1
1
1
盐酸吡哆醛
1
1
1
1
核黄素
0.1
0.1
0.1
0.1
盐酸硫胺
1
1
1
1
pH（无碳酸氢钠）
5.9±0.3
6.8±0.3
5.9±0.3
4.2±0.3
1.8
—
—
氯化胆碱
1
1
1
1