薄层色谱法鉴定果汁中的糖-孙文斌-113202F118
高效液相色谱法测定果汁中的防腐剂和甜味剂的含量
高效液相色谱法测定果汁中的防腐剂和甜味剂的含量
张晓亮
【期刊名称】《饮料工业》
【年(卷),期】2007(010)007
【摘要】以国标法(GB/T5009.28-1996食品中糖精钠的测定方法,GB/T5009.29-1996食品中苯甲酸和山梨酸的测定方法)为基础,通过大量分析对比高速离心法对样品净化在实践中应用的可行性.实验证明,此法可以比常规检验中使用的膜过滤的方法省时,更可以节约试验费用.
【总页数】3页(P40-42)
【作者】张晓亮
【作者单位】本溪市信息中心,辽宁本溪,117000
【正文语种】中文
【中图分类】O652.7
【相关文献】
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高效液相色谱法测定果汁饮料中糖精钠的不确定度评定
计 出标准偏 差为０．０２０ ｍｌ； （３）容量瓶温 度变化引起 的不确 定度 ，假 设温度变化为 ±４℃ ，水的膨胀系数在２０￣ｅ时为２．１×１０—４ｏｅ，按均匀分 布 ，取ｋ＝ ，则温度变化引起 的体积变化 区间为 ±（５ｏ．０ Ｘ ４ Ｘ ２．１×１ ）＝
度为１ ，按 正态￣ ｉ９９％的置信概率计算 ，ｕ－ｔｅｌ＝１．０％／２－０．００５０。
４．２ 标 准溶液 制备引起 的相对标准不确定度 ｕ２ ｒｅＩ １）１０．０ｒｒｄ移液管引起 的相对标准不确定度分析ｌｌａ ｒｅｌ。 （１）１０．ＯｍｌＡ
级单标移 液管体积 的不确定度 ，查检定证书给定的为 ±Ｏ．０２ｍｌ，按 三角
１ 材料 与方 法 １）检验依据 。ＧＢ／Ｔ５００９．２８—２００３《食品 中糖精钠 的测定 》；２）仪
器。高效液相色谱仪 ＬＣ一１０ＡＶＰ；紫外检测器 ＳＣＬ一１０ＡＶＰ；色谱条 件 ：色谱柱 ：Ｃ１８ ４．６ｍｍＸ２５０ｍｍ ｌＯｕｍ不锈钢柱；流动相 ：甲醇＋乙酸铵 溶液 （０．０２ｍｏｌ／Ｌ）（５＋９５）；流速 ：１．Ｏｒ ａｌ／ｒ ａｉｎ 波长 ：２３０ｎｍ 进样量 ：ｌＯｕｌ 柱温 ：３０％ ；３）试剂 。糖精钠标 准溶 液 ：浓 度ｌｍｇ／ｍｌ（国家标 准物质 研究中心 ）；４）样品处理。称取１０．００ 样Ｙｓｏ．Ｏｍｌ容量瓶中 ，用氨水 （１＋１）调ＰＨ约７，用超纯水定容 ，经０．４５ｕｍＴＪ￣系滤膜过滤后进行测定 ；５） 标准溶液配制。用 １０．ＯｒｒｄＡ级单标移液管吸取糖精钠标准溶液 （１ｍｇ／ｍ１） １０．０ ｍｌ于１００．Ｏｒａｌ容量瓶 中，用超纯水定容 ，浓度为０．１ｍｇ／ｉｒｄ。
薄层色谱法快速测定饮料中的几种添加剂
4
2+
400 +
5
1-
200 -
注: + 可以检测; - 检测不到
0 75 + 0 精 甘精
脱氢乙酸 山梨酸
对低脂肪含量的固体 饮料如 果汁精 等, 可称 取 20g 样品, 加入 20g 蒸馏水 、1% 氨水 和 1% 盐酸 溶液, 然后粉 碎匀浆 再离 心分离, 取上清液按方法部分( 4) 处理程序进行测定, 可得 到相 近结果。
条件下灵敏度较差。 表 2 薄层层析法测定几种添加剂的检测水平
序号
糖精
浓度 检 测
甘精
浓度 检测
山梨酸
浓度 检测
苯甲酸和 脱氢乙酸 浓度 检测
准溶液( 1mg / ml) 样点; 并向另一 薄层板上点 上山梨酸、苯甲 酸
( mg/ L) ( + . - ) ( m g/ L) ( + . - ) ( m g/ L ) ( + . - ) ( mg/ L ) ( + . - )
中成分变质 和腐败, 使用 一些防 腐剂如 苯甲酸 和山梨酸 等; 为
表 1 在不同展开剂条件下获得 Rf 值
了增加甜度, 有时也使用一些甜味剂如糖精等。这些添加剂 多
添加剂
展开剂
Rf
数存在一定的毒性 1 。在食品卫生检查中, 为了判断食品中是
糖精
苯 乙酸乙酯 甲酸= 5 10 2
0 86
否含有这些添加剂, 通常采用薄层分析法 2 。本文通过对这几
CPH 果汁、可乐、矿泉水、汽水等, 通过两次稀释, 取 8ml 溶液于试 管
中, 然后加 3gN aCl、3 滴 10% 的 H2SO4 和 1ml 乙酸 乙酯, 振 摇 1min 后离心分离, 取 用乙酸 乙酯 层, 供薄层 测定 用。( 5) 展 开 显色: 用 10 l 微量注 射器在薄 层板上 点上糖 精和甘 精混合 标
果汁中总糖的测定
吉林化工学院食品分析实验报告实验名称果汁中总糖的测定指导教师陈萍班级食品0901 学号 09340136 姓名黄锡红日期 2012.10.17实验十七果汁中总糖的测定一、目的与要求：1、掌握食品中总糖的测定方法．二、原理：将一定量的碱性酒石酸甲、乙液等量混合，立即生成天蓝色的氢氧化铜沉淀，这种沉淀很快与酒石酸钾钠反应，生成深蓝色的可溶性酒石酸钾钠铜络合物。
在加热条件下，以次钾基蓝作为指示剂，用样液滴定，样液中的还原糖与酒石酸钾钠铜反应，生成红色的氧化亚铜沉淀，待二价铜全部还原后，少过量的还原糖把次甲基蓝还原，溶液由蓝色变为无色，即为滴定终点。
根据样液消耗量可计算出还原糖含量。
三、试剂1、碱性酒石酸铜甲液：称取15克硫酸铜(CuSO4.5H20)及0.05克次甲基蓝，溶于水中并稀释至1000毫升。
2、碱性酒石酸铜乙液：称取50克酒石酸钾钠及75克氢氧化钠，溶于水中，再加入4克亚铁氰化钾，完全溶解后，用水稀释至1000毫升，贮于橡胶塞玻璃瓶内。
3、盐酸4、葡萄糖标准溶液：精密称取1.000克经过98-100℃干燥至恒重的纯葡萄糖，加水溶解后，加5毫升盐酸，并以水稀释至1000毫升，此溶液每毫升相当于lmg 葡萄糖。
5、6N盐酸：量取50毫升盐酗口水稀释至100毫升。
6、甲基红指示液：0.1％乙醇溶液。
7、20％氢氧化钠溶液。
四、操作方法：1、样品处理：吸取样品10毫升，加水40毫升，在水浴上加热煮沸10分钟后，移入100毫升容量瓶中加水至刻度，混匀后备用。
取以上样液20毫升和30水毫升于l00毫升容量瓶中，加人5毫升6N盐酸，在68-70℃水浴中加热15分钟，冷却后，加2滴甲基红指示液，用20％氢氧化钠溶液中和至红色褪去，加水至刻度混匀。
2、标定碱性酒石酸铜溶液；吸取碱性酒石酸铜甲、乙液各5.0毫升，置于150毫升锥形瓶中，加水20毫升，加入玻璃珠2粒，从滴定管滴加约9毫升葡萄糖标准溶液，控制在2分钟内加热至沸,趁沸以每两秒1滴的速度继续滴加葡萄糖标准溶液，直至溶液兰色刚好褪去为终点，记录消耗葡萄糖标准溶液的总体积，同时平行操作三份，取其平均值，计算每：9毫升(甲乙液各5毫升)碱性酒石酸铜溶液相当于葡萄糖的质量(mg)．3、样品溶液预测：吸取碱性酒石酸铜甲、乙液各5.0毫升，置于160毫升锥形瓶中，加水20毫升，玻璃珠两粒，控制在2分钟内加热至沸，趁沸以先快后慢的速度，从滴定管中滴加样品溶液，并保持溶液沸腾状态，等溶液颜色变浅时，以每两秒1滴的速度滴定，直至溶液兰色刚好褪去为终点，记录样液消耗体积。
薄层色谱法鉴定果汁中的糖孙文斌F
薄层色谱法鉴定果汁中的糖班级：11级应生（1）班姓名：孙文斌学号：113202F0118一．实验目的了解薄层色谱法的分离原理，掌握薄层色谱法鉴定果汁中的糖的操作技术。
二．实验原理对多组分的复杂混合物，无论是有机物或无机物，薄层色谱法是有效的分离手段之一。
硅胶是常用的吸附剂，使用与酸性和中性物质的分离，在一定条件下，硅胶对各种糖分的吸附能力不同。
同时，选择适当的展开剂，利用各种糖分的分配系数的差异，从而达到分离。
显色后得到色谱图，与在相同条件下已知糖分的色谱图比较就能鉴定果汁中的糖分。
未知物组分的鉴定是通过在同一块薄层板上分别点上标准样品和未知样品，通过比较斑点的比移值来定性鉴定。
其中比移值Rf计算公式为：Rf = 原点至斑点中心的距离/ 原点至展开剂前沿的距离由于在相同条件下，物质的Rf值是一定的，因而比移值Rf可以进行物质的定性分析。
分离之后，可以用适当的方法定量测定，如刮下有色斑点。
将被测物浸取后用比色法测定其含量，或用薄层扫描仪扫描直接测出被测物的含量。
三. 实验器材层析缸（筒）（10cm×10cm）；微量注射器，若仅作定性鉴定，则可用玻璃毛细管来替代；薄层板：用10×10cm玻璃板制作硅胶板、可剪截型薄层层析板（10 cm × 10 cm，0.2-0.25 mm铝基硅胶G板，天津市天河医疗有限公司）；吸附剂：硅胶G（(青岛海洋化工有限公司生产，200～260 目，化学纯）展开剂1：正丁醇：丙酮：水＝4：3：1显色剂1：苯胺－二苯胺磷酸（临用时配制：2g二苯胺、2ml苯胺、20ml85％磷酸，与200ml丙酮混溶）显色剂2：：把10ml硫酸缓慢倒入90rnl乙醇中混合冷却，制得10％的硫酸溶液标准糖溶液：麦芽糖、果汁、蜂蜜、果糖、葡萄糖，分别溶于10％异丙醇中，使其浓度为100mg/ml新鲜果汁、蜂蜜、无水乙醇四. 实验步骤（1）制作薄层板将玻璃板洗净至不挂水，晾干后置于干燥洁净处备用。
果汁中糖的组成及其含量的气相色谱分析
果汁中糖的组成及其含量的气相色谱分析
宋永青
【期刊名称】《饮料工业》
【年(卷),期】1991(000)001
【摘要】无
【总页数】1页(P13)
【作者】宋永青
【作者单位】无
【正文语种】中文
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果汁中糖精钠的薄层层析实验结果与分析
果汁中糖精钠的薄层层析实验结果与分析本实验是用果汁做对照，而后测得了样品中的糖精钠含量。
我们要通过多次测定结合对比的方法来得出最终的数据。
由于用到了高效液相色谱法和薄层层析这两种方法，所以我认为只有一个样品的话，是不能够很好地说明问题的。
故选取了四组平行的不同的水果做了一系列的测试，并且都留下了空白样。
20xx 年4月26日，首先将所有的准备工作就绪之后开始进行检测了。
此外，在我校的实验室里面还购置了一台层析柱。
这是因为当你买回来新鲜的水果之后再加入食盐或者白砂糖的时候会影响到结
果的稳定性。
因为食盐具有吸附作用，可以使一些杂质吸附到食盐上去，从而导致实验结果产生偏差。
现在，让我们来看看所获得的实验结果：1、20xx 年4月27日20xx 年5月2日20xx 年6月12日，分别对测定过程中所获得的色谱图进行了解读，并找到各组中存在的主要区别。
20xx 年3月11日和20xx 年10月22日，又分别重复了同样的操作步骤。
每次操作完成后就在显微镜下观察是否与之前保持着一致。
同时我们也知道，一般来讲在进行层析时颜色越深，则被萃取物质所占的百分率越大。
而层析图中紫红色部分表示有机溶剂，其它颜色表示无机离子，淡蓝色则代表的是高分子化合物。
那么既然这些无机离子才是造成果汁中糖精钠的残余的主要原因。
但是由于我们没有使用更为灵敏的检测器，如电子鼻等来检测这些无机离子，这就使得这个假设不能成立。
即：即使所有的成分都已经消失掉了，但是糖精
钠依旧存在。
但是虽然该实验的研究结果仍未达到预期目标。
高效液相色谱法测定果汁中甜蜜素的含量
（ 三明出入境检验检疫局，三明 365000 ） 摘 要： 甜蜜素在紫外可见光范围内不被吸收，但加入次氯酸钠后，次氯酸钠 N中的氯将甜蜜素的氨基置换， 生成 N， 二氯环己胺， 再被正己烷萃取出来， 在
ODSC18 柱上，以 乙 腈 （ V ） ∶ 水 （ V ） = 70 ∶ 30 为 流 动 相 进 行 分 离，检 测 波 长 314 nm，外标法定量。方法检测限为 2 mg / kg，回收率 71. 0% ～ 110. 5% ，方法 适用于果汁中甜蜜素的测定。 关键词： 高效液相色谱法； 果汁； 甜蜜素（ 环已基氨基磺酸钠） 甜蜜素的化学名称为环己基胺基磺酸钠，是 一种高甜 度 的 甜 味 剂，其 甜 度 为 蔗 糖 的 30 ～ 80 倍，具有水溶性好，甜味清爽，稳定性好，热量低 等特性，而且风味自然，后苦不明显，是一种在我 国广泛使用的甜味剂。甜蜜素的安全性一直受到 很大的争议，美国曾大量使用甜蜜素，但由于其 会导致膀胱癌的 报 道，美 国 自 1969 年 起 全 面 禁 用，至今世界上仍有包括美国、英国、日本等国在 内的 40 多个国家禁止使用甜蜜素作为食品甜味 剂，但也有我国、欧盟、澳大利亚、新西兰在内的 80 多个国家允许在食品中添加甜蜜素 。 目前我国对 食 品 中 甜 蜜 素 检 验 方 法 的 主 要 是气相色 谱 法 、分 光 比 色 法 和 薄 层 层 析 法 ，国 标采用气相色谱 法 ，其 最 低 检 测 限 为 4 g （ 相 当 于400 mg / kg ） ，难以 达 到 日 本 等 进 口 国 对 食 品 中甜蜜素不得 检 出 的 要 求 ，而 且 采 用 气 相 色 谱 法检测要使用 冰 浴 进 行 温 度 控 制 ，很 容 易 因 为 季节和 环 境 温 度 的 影 响 导 致 实 验 失 败 ，因 此 ， 本文参考北欧 食 品 分 析 委 员 会 的 相 关 研 究 ，用 高效液相色谱法对 果 汁 中 的 甜 蜜 素 进 行 快 速 的 分离和检测 。 1 材料与方法 1. 1 仪器 Agilent 1100 型 高 效 液 相 色 谱 仪，配 有 DAD 溶液 = 1∶ 1 ； 次氯酸钠水溶液 = 1 ∶ 1 ； NaOH 溶液： 0. 5 mol / L。 1. 3 色谱条件 150 × 4. 6 mm（ I. D. ） ，粒 色谱柱： Suplco C18 ， 径 5 μm ； 流动相： 乙腈 ∶ 水 = 70 ∶ 30 ； 检测波长：
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薄层色谱法鉴定果汁中的糖
班级：11级应生（1）班姓名：孙文斌学号：113202F0118
一．实验目的
了解薄层色谱法的分离原理，掌握薄层色谱法鉴定果汁中的糖的操作技术。
二．实验原理
对多组分的复杂混合物，无论是有机物或无机物，薄层色谱法是有效的分离手段之一。
硅胶是常用的吸附剂，使用与酸性和中性物质的分离，在一定条件下，硅胶对各种糖分的吸附能力不同。
同时，选择适当的展开剂，利用各种糖分的分配系数的差异，从而达到分离。
显色后得到色谱图，与在相同条件下已知糖分的色谱图比较就能鉴定果汁中的糖分。
未知物组分的鉴定是通过在同一块薄层板上分别点上标准样品和未知样品，通过比较斑点的比移值来定性鉴定。
其中比移值Rf计算公式为：
Rf原点至斑点中心的距离/ 原点至展开剂前沿的距离
由于在相同条件下，物质的Rf值是一定的，因而比移值Rf可以进行物质的定性分析。
分离之后，可以用适当的方法定量测定，如刮下有色斑点。
将被测物浸取后用比色法测定其含量，或用薄层扫描仪扫描直接测出被测物的含量。
三. 实验器材
层析缸（筒）（10cm×10cm）；微量注射器，若仅作定性鉴定，则可用玻璃毛细管来替代；薄层板：用10×10cm玻璃板制作硅胶板、可剪截型薄层层析板（10 cm × 10 cm，0.2-0.25 mm铝基硅胶G板，天津市天河医疗有限公司）；吸附剂：硅胶G（(青岛海洋化工有限公司生产，200～260 目，化学纯）
展开剂1：正丁醇：丙酮：水＝4：3：1
显色剂1：苯胺－二苯胺磷酸（临用时配制：2g二苯胺、2ml苯胺、20ml85％磷酸，与200ml丙酮混溶）
显色剂2：：把10ml硫酸缓慢倒入90rnl乙醇中混合冷却，制得10％的硫酸溶液
标准糖溶液：麦芽糖、果汁、蜂蜜、果糖、葡萄糖，分别溶于10％异丙醇中，使其浓度为100mg/ml
新鲜果汁、蜂蜜、无水乙醇
四. 实验步骤
（1）制作薄层板
将玻璃板洗净至不挂水，晾干后置于干燥洁净处备用。
将10 g硅胶G加适量
的水(约25 mL)，在研钵中用研杵向一个方向研磨制成均匀的有适当粘稠度的胶浆，立即倾倒于玻璃板中央，迅速振荡，使硅胶层厚度均匀。
涂布好的薄层板于室温下在水平台上晾干，并在105°C温度下活化30 min后，贮于干燥器中备用。
硅胶层的厚度约为0.1 mm，使用前用氯仿-甲醇(8:2)预洗，在105°C温度下加热干燥1 h。
（2）点样
在10×10cm的硅胶G薄板上离底边2cm处用铅笔划线，用微量注射器或玻璃毛细管点样（新鲜果汁及标准糖液），各斑点之间相距2cm且每个斑点的直径不超过2mm，每个样品点4次，每次点样后用冷风吹干或间隔一定时间使其自然干燥。
在板上标出起始线和欲展开的前沿线，一般展开距离为7cm以上。
（3）展开
把点样后的薄层板在红外灯烘干（若无红外灯，则在空气中晾干），将配好的展开剂倒入展开缸中，使展开剂在缸中的深度至少有1cm深，盖上盖子，混合均匀。
等数分钟后让溶剂在展开缸中饱和后，再将已点好样的晾干的薄层板迅速的放入缸内，尽量不破坏缸内的气氛，盖上盖子。
让薄层板的下部浸入展开剂溶液中约0.5cm以上（但注意不要让点样的斑点浸入到展开剂的溶液中，以免被溶液浸洗下来）；
由于吸附剂的毛细管作用，展开剂和斑点不断向上迁移，直到展开剂前沿到事先预定好的刻度线后（一般完成一次展开过程需要25－30分钟），可取出薄层板，。
在红外灯下将展开剂蒸发（或在空气中晾干，此过程大约需15分钟）。
（4）显色
在通风橱中，在薄层板上喷雾显色，随即在100°C下烘烤10－20min，注意观察各种糖的颜色和计算Rf，并以此鉴定果汁中的糖分。
五. 结果与讨论
1. 计算出果汁中所含糖的Rf；
实验结果如下：从左往右样品分别为：麦芽糖、葡萄糖、果糖、果汁、蜂蜜。
结果如下表
名称麦芽糖葡萄糖果糖果汁蜂蜜
5.0 5.3 5.1 4.3 5.5
原点至斑点
中心的距离
cm
7.5 7.7 7.9 7.8 7.9
原点至展开
剂前沿的距
离cm
Rf 0.667 0.688 0.645 0.551 0.696
讨论：从上表可以看出各种物质的Rf值不同，计算出的Rf值中，果汁的Rf值与果糖的Rf值最接近，故果汁中最有可能含有果糖。
在点样时，样品点过大，可能会导致样品色谱变宽；果汁色谱颜色深，其原因可能是样品浓度过高;。