双酚A和壬基酚长期暴露对斑马鱼繁殖的影响
双酚A及其类似物对斑马鱼胚胎及幼鱼的毒性效应
双酚A及其类似物对斑马鱼胚胎及幼鱼的毒性效应任文娟;汪贞;王蕾;杨先海;刘济宁【摘要】为探讨双酚A及其类似物对鱼类早期生长发育的毒性效应,研究了双酚A 及其7种类似物对斑马鱼胚胎及仔鱼的毒性效应.通过对胚胎的孵化率、心率、仔鱼体长等指标进行测定分析,结果显示:(1)双酚A及其7种类似物都可使斑马鱼胚胎出现心包水肿、卵黄囊肿、脊柱弯曲和尾部弯曲等症状.(2)综合考虑斑马鱼78 hpf胚胎心率、120 hpf胚胎孵化率及7 dpf仔鱼体长抑制率等指标,8种受试物中双酚P(BPP)的毒性最大,其次是双酚AP(BPAP)、双酚AF(BPAF)、双酚Z(BPZ),然后是双酚A(BPA)、双酚B(BPB)、双酚F(BPF),双酚S(BPS)的毒性最小,每种受试物的浓度与受精卵的孵化率、仔鱼心率呈明显负相关关系,与体长抑制率呈明显正相关关系.8种受试物毒性与辛醇-水分配系数(log Kow)呈正相关关系,logKow越大毒性则越大.%We evaluated the toxic effect of bisphenol A (BPA) and its seven analogues on zebrafish embryos and larvae.Based on the results of the hatching rate (120 hpf),heart rate (78 hpf),body length of larvae (7 dpf),it is indicated that:(1) BPA and its analogues caused cardiac edema,cyst vitelline,spinal curvature and tail bending;(2)the order of the toxicity is bisphenol P (BPP)＞ bisphenol AP (BPAP)＞ bisphenol AF (BPAF)＞ bisphenol Z (BPZ)＞ bisphenol A (BPA)＞ bisphenol B (BPB)＞ bisphenol F (BPF)＞ bisphenol S (BPS).The concentrations of the test substances were negatively correlated with the embryo hatching rate and the heart rate of larvae,while positive correlation with inhibition rate of larval length.In addition,the toxicity of these eight kinds of BPA analogues and the values of octanol-water partition (log Kow) were positively correlated.【期刊名称】《生态毒理学报》【年(卷),期】2017(012)001【总页数】9页(P184-192)【关键词】双酚A;双酚A类似物;斑马鱼;胚胎;仔鱼;毒性【作者】任文娟;汪贞;王蕾;杨先海;刘济宁【作者单位】环境保护部南京环境科学研究所,南京 210042;南京工业大学生物与制药工程学院,南京 211816;环境保护部南京环境科学研究所,南京 210042;环境保护部南京环境科学研究所,南京 210042;环境保护部南京环境科学研究所,南京210042;环境保护部南京环境科学研究所,南京 210042【正文语种】中文【中图分类】X171.5双酚A(bisphenol A, BPA)是全球生产量最大的化学原料之一，是生产高分子材料如聚碳酸酯、环氧树脂、增塑剂等的前体物质，广泛应用于杀菌剂、染料、医疗器械、食品包装材料和饮料容器、餐具、婴儿奶瓶及某些家庭用具等的生产，还可作为牙齿密封剂、牙科填充剂使用[1]。
10种农药对斑马鱼的毒性与安全评价
Toxicity of Ten Pesticides to Brachydanio rerio and Safety Evaluation ZHAO Yu2ding et al (College of Plant Protection , Fujian Agricultural and Forestry University , Fuzhou , Fujian 350002) Abstract The toxicity of ten pesticides to Brachydanio rerio was investigated using standardized laboratory procedures ; the grade was compartmentalized
种药剂的 96 h LC50 > 10 mg/ L ,属于低毒级。[ 结论]该研究为 10 种农药的合理使用提供了基础资料和科学指导。 关键词 农药 ;斑马鱼 ;毒性 ;安全评价 中图分类号 S481 + . 8 文献标识码 A 文章编号 0517 - 6611(2007) 22 - 06801 - 02
6802
安徽农业科学 2007 年
表 1 供试农药 氟虫腈 毒死蜱 三唑磷 杀虫单 仲丁威 乙草胺 丁草胺 三唑磷·阿维菌素 高效氯氰菊酯 高氯·甲维盐
时间 ∥h
24 48 72 96 24 48 72 96 24 48 72 96 24 48 72 96 24 48 72 96 24 48 72 96 24 48 72 96 24 48 72 96 24 48 72 96 24 48 72 96
10 种供试农药对斑马鱼的毒性
毒力回归方程 ∥Y = a + bx ( R)
不同浓度氯胺酮多次暴露对斑马鱼发育及远期效应的影响
*[基金项目]江苏省南京医科大学科技发展基金(NMUB2018068)。
**[作者简介]殷艺娜,女,汉族,江苏常州人,生于1990年4月,硕士研究生,住院医师。
研究方向:全麻药神经毒性研究。
通信作者:马敏,E-mail:*****************[文章编号]1006-2440(2021)03-0222-05[引文格式]殷艺娜,马敏,芮琳琳,等.不同浓度氯胺酮多次暴露对斑马鱼发育及远期效应的影响[J ].交通医学,2021,35(3):222-226.不同浓度氯胺酮多次暴露对斑马鱼发育及远期效应的影响*殷艺娜1**,马敏2,芮琳琳1,常俊晓1(1南京医科大学附属常州妇幼保健院麻醉科,江苏213003;2南通大学附属医院)[摘要]目的:探究不同浓度氯胺酮多次暴露对斑马鱼胚胎、幼鱼及成鱼生长发育及学习认知功能的影响。
方法:挑选受精后24小时(24hour post fertilization ,24hpf )内形态发育正常的斑马鱼胚胎,分别于24~36hpf 和48~72hpf 时间段持续暴露于正常孵化液(对照组)及含有不同浓度氯胺酮(0.2、0.4、0.8、1.6mg/mL 氯胺酮组)孵化液中,在显微镜下观察斑马鱼受精后72h (72hpf )和受精后6天(6day post fertilization ,6dpf )的形态变化,并统计孵化率、畸形率和死亡率。
采用Noldus 幼鱼运动行为监测仪和Ethovision XT 7.0软件控制运动行为仪视频跟踪系统,记录幼鱼的自由运动轨迹,观察强光诱发的惊恐逃避反射。
采用T 迷宫对60dpf 成年斑马鱼进行运动轨迹检测以评价其学习记忆能力。
结果:(1)与对照组相比,氯胺酮暴露浓度≥0.4mg/mL 的致畸作用明显,差异均有统计学意义(P <0.05),且呈剂量相关性。
(2)与对照组相比,各浓度氯胺酮组幼鱼自由运动增强,差异均有统计学意义(P <0.05);暴露浓度≥0.4mg/mL 时,氯胺酮组对光照诱发的惊恐反射的反应能力和适应能力减弱,差异均有统计学意义(P <0.05),表现出兴奋性和抑制性效应并存。
环境雌激素实验室模拟暴露方法
生生物，具有与哺乳动物类似的生理系统，在鱼类中 发现的雌激素效应可以用来预测环境雌激素对人类 的影响。因此，在实验动物的选择上，鱼类成为了环 境毒理学者的首选”１。 本文从实验鱼类、暴露系统、暴露方式、评价指 标四方面对国内外典型环境雌激素实验室暴露的研 究进行了总结，力求为环境雌激素实验室模拟暴露 中鱼类实验动物的选择、环境雌激素实验室暴露机 制、长期慢性毒性机制及雌激素效应的研究提供实 验和理论依据。 １
万方数据
中国实验动物学报２０１０年８月第１８卷第４期Ａｃｔａ Ｌａｂ
Ａｎｉｔａ Ｓｃｉ Ｓｉｎ，Ａｕｇｕｓｔ，２０１０，Ｖ０１．１８．Ｎｏ．４
３５７
的雌激素活性及其作用机制进行详细深入的研究， 能获得单种环境雌激素的毒理学数据。对于环境雌 激素的研究而言，单一暴露是基础和必要的。目前， 关于单一环境雌激素实验室模拟暴露的报道非常 多，主要集中在炔雌醇、烷基酚和双酚Ａ等化合物 的研究。 ３．２混合暴露 混合暴露是两种或两种以上的环境雌激素，同 样设定多种浓度对实验鱼类进行实验室暴露实验。
４评价指标
在环境雌激素对鱼类实验室模拟暴露后，我们 可以在分子、细胞、组织、个体及种群水平等多方面 来表征环境雌激素的暴露及效应的生化、生理、行为 或能量上的变化。评价指标包括行为观察；死亡率、 生长率；各组织中环境雌激素的浓度及生物富集因 子；性腺指数（ＧＳＩ）和肝脏指数（ＨＳＩ）；血清中卵黄 蛋白原含量（Ｖｔｇ）；鱼鳃、性腺、肝、肾等靶器官的病 理学变化；繁殖指标等。 ４．１脏器系数 通过检测实验鱼类的脏器系数可获得靶器官病 理性增长或萎缩的信息，有助于初步判断环境雌激 素在生物体内的作用位点，并能为深入研究其雌激 素效应提供信息。脏器系数一般包括性腺指数 （ｇｏｎａｄｏｓｏｍａｔｉｅ ｉｎｄｅｘ，ＧＳＩ）和肝脏指数
环境内分泌干扰物与致病研究进展
环境内分泌干扰物与致病研究进展作者：拜思琼何俊霞肖文媛郭淼夏溪郭忠来源：《甘肃科技纵横》2022年第02期摘要：环境内分泌干扰物逐渐引起人们关注，导致生命质量下降威胁着人群健康。
人类不可避免地暴露在环境污染物中，这些污染物具有非直接性干预机体生长和功能的作用。
研究证实环境内分泌干扰物对生殖系统有不良影响，许多破坏性活动都与雌激素、雄激素和甲状腺激素作用有关。
近年发现环境内分泌干扰物的存在对其他疾病（如糖尿病，甲状腺、大脑发育或功能障碍）、肿瘤以及癌症发生也有潜在风险。
本文就环境内分泌干扰物中不同物质对机体产生影响的最新研究进行阐述。
关键词：环境内分泌干扰物；疾病；研究进展中图分类号：R5文献标志码：A内分泌干扰物（Endocrine Disrupting Chemicals，EDCs），也称为环境激素（Environmental Hormone，EH），是一類能损害内分泌系统的外源性物质[1]。
它们类似雌激素对生物体起作用，即使数量极少，也能让生物体的内分泌失衡而出现种种异常现象，EDCs 是对公众健康的严重和紧迫的威胁，有可能成为全球主要的环境风险之一。
美国食品和药物管理局的一项检查发现，超过1800种化学物质会扰乱至少三种内分泌通路中的一种（雌激素、雄激素和甲状腺），如食品添加剂、水果/蔬菜中的杀虫剂、肉类中的抗生素（和其他兽药）、化妆品中的不同类型的防腐剂等。
根据欧洲委员会的指示筛选的575种化学品中，有320种显示了内分泌紊乱的证据或潜在证据[2]。
本文就环境中内分泌干扰物中不同物质对机体产生影响的最新研究进行总结。
1EDCs与生殖系统近年女性雌激素依赖性肿瘤发病率增加，研究表明EDCs对生殖系统具有毒性作用与此有关。
目前具有内分泌干扰活性的化学物质有70余种，已证实或疑似具有致生殖系统异常的EDCs主要有以下几类：1.1女性生殖系统EH1.1.1双酚A双酚A（BPA）是一种用于聚碳酸酯生产的单体，其雌激素效应早在80年前就被首次描述。
斑马鱼在环境监测中的应用
养 。喜酸性水 ， 宜水 温 ２ 适 ５～３ １℃ ， 热带 鱼 中既 耐寒 是
（０ ℃ 以上 ） 耐 热 （ ０℃ ） 鱼种 。 １ 又 ４ 的
２ 养 殖
斑 马鱼 ５月龄 成 熟 ， ５月 龄 繁 殖 为好 ， 以 大量 繁 殖 需 ７月 到 １年 的成 鱼 。繁 殖 用 水 要 求 ｐ 值 ６ ５～ ． ， 度 ６～８ Ｈ ． ７５ 硬 。
洗 数 次 ， 后放 入 光 照 培 养箱 中进 行 孵 化 。如 不 需 繁 殖 ， 移 然 可
基金项 目： 甘肃省教育厅基金 （ 编号 ：８ １—０ ） 甘肃省 自然科学基 ００ ８；
金 （ 号 ：０ ７ Ｓ３ １ ） 甘 肃 省 重 点学 科 生 态 经 济 学 。 编 ２ ０ Ｇ ０６ ４ ；
晒 或 紫外 线 消 毒 ， 不能 日晒 的 可 用 ４ 盐 水 浸 ２ ３ ｉ。 ％ Ｏ～ ０ｍ ｎ ５ 斑 马 鱼 在 环境 监 测 中的 应 用 ５ １ 在 环 境 激 素监 测 中的 应 用 ．
试 ， 果 表 明 ， 马 鱼 可 以灵 敏 、 速 地 监 测 工 业 废 水 和 生 活 结 斑 快
去玻璃珠等 ， 并减少投喂量 ， 否则鱼容 易肥胖而影响繁殖 。除
了 自然产 卵 ， 可进 行 人 工授 精 得 到 受 精 卵 。 也
４ 疾 病 防 治
作者 简介 ： 刘在平（ ９７ ） 男 ， １７一 ， 安徽 滁州人 ， 士研 究生 ， 硕 研究方 向 为环境化学 。Ｅ—ｍ ｉ ｌ ｚｉｉｇ５ ５ ２ ．ｏ ａ ：ｕａ ｎ ｌ１ ＠１６ ｔｍ。 ｌｉ ｐ 通信作者 ： 张松林 ， ， 士， 男 博 教授 。研究方向为环境污染化学 和退 化
饲养 ， ３— 过 ７ｄ即可再 次产卵。用虹 吸的方法收集受 精卵 ，
双酚A(BPA)等内分泌干扰物不容忽视
All rights reserved人类健康的新杀手——双酚 A（BPA）等内分泌干扰物作者：黎朋 （密理博中国 实验室纯水市场部） 近日，多家媒体报道美国环保组织环境工作组（EWG）对多家商业机构发出的小票收据（包括购物单 据、银行 ATM 打印凭证等）进行抽检化验。
结果显示，超过 40%的小票收据含有过量的有毒化学物质双酚 A，浓度比已知含有该物质的商品（塑料瓶罐）要高出 250 至 1000 倍。
据悉，长期接触双酚 A 或严重扰乱 人体激素分泌，甚至可能致癌。
一时间把有机化工原料双酚 A 推上了风口浪尖。
此外， 尽管倍受关注的 “奶粉疑致婴儿性早熟事件” 已被卫生部盖棺定论 “奶粉中激素含量没有异常” 、 “激素检测结果表明婴儿性早熟与食用的奶粉无关”，可是人们的疑虑仍未被消除——是什么导致婴儿的 性早熟？虽然许多专家和研究者已对性早熟原因进行了分析，可是笔者认为，除了食物和生理的原因外， PC 塑料奶瓶或塑料餐饮器具中含有双酚 A 的影响不应被忽视。
动物实验发现双酚 A 有模拟雌激素的作用， 是一种内分泌干扰物质。
双酚 A 是什么？双酚 A 学名 2,2-双（4-羟基苯基）丙烷，又称二酚基丙烷，结构如图所示，英文缩写名称为 BPA。
白 色针状晶体，熔点 156-158 ℃，分子量 228。
工业上主要是由苯酚和丙酮在酸性介质中缩合制成。
BPA 主要 用于制备环氧树脂（约占 65％）和聚碳酸酯（约占 35％），其钾盐或钠盐是生产聚砜的原料，少量用作橡 胶防老剂等。
在塑料品制造过程中，添加 BPA 可以使其具有无色透明、耐用、轻巧和突出的防冲击性等特 性，因此广泛用于罐头食品和饮料的包装、奶瓶、水瓶、太空杯、密封胶，以及其他数百种日用品的制造 过程中。
如一些奶瓶、太空杯等聚碳酸酯（PC）类塑料容器，该容器的“身份证”——三角形内数字编号 （一般在容器底部）为 7，会含有 BPA。
BPA 的影响有多大？是否有使用限制？近年来，动物试验研究发现 BPA 有模拟雌激素的效果，即使很低的剂量也能使动物产生雌性早熟、精 子数下降、前列腺增长等作用。
双酚A对斑马鱼肝脏和性腺的作用-图文(精)
曹娜等 : 双酚 A 对斑马鱼肝脏和性腺的作用 2197 位(Gi m eno et al. , 1998 ; Z illio ux et al. , 2001 。
在精巢中 , 发现大量的非细胞成分和空洞, 这可能是暴露造成细胞凋亡和局部坏死引起, 或者整个精小囊中的内容物被消除造成的, 而这些凋亡和坏死现象增加却没有新的细胞生成, 则造成了精巢非细胞组成的增加, 或者产生空洞。
对内分泌干扰物对精巢以及精子发生的抑制作用研究表明 , 鲤鱼被暴露于烷基酚和 17 雌二醇后 , 导致原始生殖细胞增殖减少, 此种现象可能导致不育或者精子发生能力下降 (G i m eno et al. , 1996 。
本试验中 , 观察到高浓度组精巢中强嗜碱性固缩核的产生, 而发生固缩的细胞主要是精原细胞和精母细胞, 这与之前的研究结果相吻合 ( L ynn et al. , 2003 。
这也说明了 BPA 本身的细胞毒性。
4 结论炔雌醇 ( 17 ethiny lestradio, l EE 至 60 d 后 , 暴露组卵巢发育受到抑制或者发育延迟, 但是卵泡直径比对照组大 ( Lynn et al . , 2003 , 这与本试验结果相类似。
本试验单个卵泡直径增大现象并没有明显的浓度剂量效应 , 表现为 0 2 m g ( P < 0 05, 而 2 m g - 1 L 浓度组增加显著 - 1 L 暴露组这种现象不明显 ( P > 0 05, 可能是较高浓度BPA 对卵巢以及体内循环系统产生影响, 卵黄物质运输轻度障碍导致该浓度下BPA 对单个卵母细胞发育作用不大 ( Lynn et al. , 2003 。
卵泡闭锁情况在正常卵巢中也会发生, 主要原因之一是卵巢在发育过程中缺乏必要的营养 , 使第时相的卵母细胞向第受到阻碍, 甚至使第时相过渡时, 卵黄的形成时相时相的卵母细胞向第转变也会受到抑制, 还有一种情况就是一部分过分成熟未能排出的卵子也会发生萎缩现象 ( 楼允东 , 1980 。
双酚a副产物
双酚A可能会导致内分泌失调、影响生殖系统以及诱发儿童性早熟。
双酚A是一种有机化工原料，也叫BPA，溶于乙醇和脂类，属于脂溶性物质，可以通过呼吸、消化等进入人体内，会对内分泌系统产生影响，容易导致机体内激素分泌异常，从而出现内分泌紊乱的情况。
患者通常会出现肥胖、痤疮以及月经失调等现象。
双酚A与合成雌激素-己烯雌酚相似，会对生殖系统产生干扰，有可能会对排卵产生影响，还有可能会降低男性精子的质量和活性，同时还有可能会出现前列腺增生的情况，严重时有可能会导致不孕不育。
除此之外，对儿童也具有一定的危害，容易出现性早熟的情况。
日常应注意避免使用塑料制品，接触含有双酚A的物品以后应注意勤洗手，能够在一定程度上减少对身体的损害。
壬基酚和双酚A对雄性斑马鱼(Danio rerio)卵黄蛋白原mRNA的诱导效应
Ｓｃ ｏ ｌ ｆＬｉｅＳｃｅ ｃ ， ｓ ｉａＮｏ ｍａ ｉｅｓｔ， ａ ｇ ａ ２ ０ ６ ｈ ｏ ｆ ｉｎ ｅ ＥａｔＣｈｎ ｒ ｌ ｏ Ｕｎｖ ｒｉｙ Ｓｈ ｎ ｈ ｉ ０ ０ ２ Ｒｅ ｅｖ ｄ ｅ ｒａｙ ０ ８ ｃ ｉｅ １Ｆ ｂ ｒ ２ ０ ｕ ａ ｃ ｐ ｅ ａｃ ０ ８ ｃ ｅ ｔ １Ｍ ｒｈ２ ０ ｄ
５ ０ ｇＬ ０ ￣ ．～：Ｂ Ａ：５ 、１ ０ ５ 、５ ０ ０ ０ ｇＬ ，Ｖ Ｇ ｍＲ Ｐ ０ ０ 、２ ０ ０ 、１ ０ ￣ ． ） Ｔ ＮＡ表 达量 均显著 增加 ，Ｖ Ｇ ｍＲＮ 表达量 与暴 露浓 度 Ｔ Ａ 具有 明显 的剂量 ． 效应 关系．在 １ ｄ的暴露 期 内 ，随着 暴露 时间 的延 长 ，ＶＴ ＮＡ 表达 量均显 著增加 ，Ｖ Ｇ ｍＲ Ａ ０ Ｇ ｍＲ Ｔ Ｎ 表 达量 与暴露 时间呈 明显 的时 间． 应关 系 ； 止暴露 后 ， Ｔ ＮＡ表 达量迅 速下 降 ， ２诱导 的表达 消失得 最快（ｄ ， 效 停 Ｖ Ｇ ｍＲ Ｅ ４）
Ａｂ ｔ ｃ：ｎ ｕ ｅ ｆ ｃｓ ｆ１￣ｅｔ ｄｏ （ ２， ｏ ｙｐ ｅ ｏ （Ｐ ａ ｄｂｓｈｎ ｌ （Ｐ ） ｎｖｔ ｌｇｎｎ（ Ｔ ｍＲ ｌ ｓｒ ｔＩｄ ｃｄ ｅ ｅｔ ｏ ７ － ｒ ｉｌＥ ）ｎ ｎ ｌ ｎ ｌＮ ） ｎ ｉ ｅｏ— Ｂ Ａ ｏ ｉｌ ｅｉ Ｖ Ｇ） ＮＡ ｉ ｍａ ａ ｓａ ｈ ｐ Ａ ｅｏ ｎ ｅ
第３ ， 期
壬基酚和双酚 Ａ对雄 性斑 马鱼（ ｎｏＪ Ｄ卵黄蛋 白原 Ｄａ ｉ ） Ｐ ． ｍＲ ＮＡ 的诱导效应
黄 晔 ，任 华 ，孙 竹 筠 ，周 忠 良
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第31卷增刊2007年9月水 产 学 报J O URNA L O F F ISHER IES O F CH I NAV o.l 31,Supp.lSep .,2007文章编号:1000-0615(2007)增刊-0059-06收稿日期:2007-03-09作者简介:沈万赟(1982-),男,上海市人,硕士,从事鱼类毒理学研究,E-m ai:l t g ss _s now@h ot m ai.l co m 通讯作者:周忠良,T e:l 021-********,E-m ai:l zhouz@l m ai.l ecnu .edu .cn双酚A 和壬基酚长期暴露对斑马鱼繁殖的影响沈万赟, 周忠良, 李祥军(华东师范大学生命科学学院,上海 200062)摘要:内分泌干扰物的研究目前正逐渐成为国际研究新的热点,但长期暴露条件下对生殖情况的研究目前较少。
本文研究了环境类雌激素双酚A (BPA )以及和壬基酚(NP)联合的作用,对暴露一个世代的斑马鱼(F 1)(Danio rerio )的生殖情况、子代质量的影响。
将健康的受精卵48h 后暴露于200,500,1000L g #L -1BPA 以及三个浓度与30L g #L-1NP 的联合,同时设置空白对照和30L g #L-1N P 对照。
130dph 将成鱼置于清水喂养20d,统计每天的产卵量、产卵次数、畸形率、孵化率、卵径、破膜时间以及耐饥时间。
以此为终点评估暴露后斑马鱼的生殖能力和子代质量。
与对照相比NP ,BPA 可以抑制斑马鱼的生殖,两种类雌激素联合作用可以极显著地抑制斑马鱼的生殖(P <0.01);BPA 各浓度组导致F 1代畸形率上升(P <0.05);高浓度BPA 抑制产卵量(P <0.05);BP A 200,500L g #L -1会延长F 1代的破膜时间和耐饥时间(P <0.01),而BPA1000L g #L -1则产生相反的效果(P <0.05)。
双酚A 对斑马鱼的生殖有明显的抑制作用,双酚A 和壬基酚有协同效应。
长时间暴露于双酚A 会影响斑马鱼的生殖能力和子代质量。
关键词:斑马鱼;双酚A;壬基酚;生殖能力;子代质量中图分类号:Q 591.9;S 917 文献标识码:AE ffects of long ter m exposure to bisphenol A and nony l phenolon the reproducti on of zebrafish (Danio rerio)SHEN W an -yun ,ZHOU Zhong -liang ,L I X i a ng -jun(School of L i fe Science ,East Ch i na N ormal Universit y,Shanghai 200062,China )Abst ract :The effects of bispheno l A (BPA ),nony l p heno l(N P),and their m ix ture on the reproductive ab ility and offspring quality o f zebrafish w hich w ere expo sed fo r a generation w ere i n vestiga ted i n t h is paper .The 48-ho ur -o ld egg sw ere expo sed to bispheno lA at 200,500,1000L g #L -1,to nony l p heno l at 30L g #L -1and to t h e ir m ix ture until 130dph .Then zebrafish w ere fo stered i n t h e c l e an w a ter fo r 20day s .R ecorded once fecundity ,ti m es o f reproduction ,m a lfo r m ation rate ,ha tch i n g rate ,egg size ,surv i v al days and egg she l-l breaking ti m e as endpo ints to eva luate the repr oductive ability and o ffspring qua lity .C o m pared w it h con tro ,lthe fecundity o f NP and BPA reduced (P <0.05).B P A re sulted in the elev ation o fm alfo r m ation rate (P <0.05).200,500L g #L -1o f BPA could pro l o ng the surv i v al day s and egg s he l-lbreak i n g ti m e o f F 1o ffspri n g (P <0.01)w hile 1000L g #L -1o f BPA had the rev erse result(P <0.05).B ispheno lA w ould sign ificantl y restrain reproducti v e ability o f zebrafish.B ispheno l A and nony l p heno lhav e syner g istic effec.t Long-ti m e expo sure to b ispheno lA w o ul d significantly affect the reproductive ability and o ffspri n g qua lity o f zebrafish.K ey w ords:Danio rerio;b ispheno lA;nony lpheno;l repr oductive ability;offspring qua lity随着工业的飞速发展,越来越多具有内分泌干扰作用的物质,由于其可能对人类[1-2]及动物[3-4]的健康和繁殖产生极为不利的影响,近年来受到普遍关注,成为人们研究的热点。
其中,壬基酚(NP)和双酚A(B P A)都是公认的内分泌干扰物,有类似雌激素类的作用,在水体中会对多种鱼类产生雌激素效应[5-6],干扰正常的内分泌调节。
鱼类的整个繁殖过程是在雌激素调节下进行的,因此,环境中的类雌激素化合物对鱼类正常生殖活动的影响是鱼类生理生态学研究的重要内容之一。
目前,对这方面的研究工作大多数是建立在鱼类某一生理阶段上进行的亚急性研究,而在整个世代暴露的慢性影响研究资料较少。
自然水域中,多数情况下污染物对鱼类的影响是长期,可能作用于整个性腺发育和繁殖过程,慢性毒性研究的结果将更接近于实际环境,有助于人们对环境雌激素类物质对鱼类生理生态影响机理的了解。
斑马鱼(Danio rerio)是一种目前广泛应用于毒理学研究的模式动物,世代周期相对较短,孵化120d后能进行繁殖,便于进行世代周期实验,迄今为止利用斑马鱼在亚急性水平上进行内分泌干扰物对繁殖的影响研究已进行的比较深入[6-7]。
本文报道了整个世代长时间暴露于壬基酚、双酚A两种环境雌激素类化合物,对其繁殖成功率以及胚胎发育的影响,初步探讨了壬基酚和双酚A 联合作用效应,为生态毒理学研究提供一些有意义的参数。
1材料和方法1.1试剂双酚A(Sig m a公司)、壬基酚(Fluka公司)分别以丙酮(国药集团化学试剂有限公司)助溶配置成100L g#L-1,30L g#L-1的母液,4e避光保存。
1.2亲鱼的喂养和产卵亲鱼采购自曹安花鸟市场。
30尾雄鱼和20尾雌鱼分别放入20L玻璃水槽中驯养半个月。
水温(26?1)e,自然光照,每天喂以冰冻红虫(共鳞实业有限公司)两次。
2周后按照雌雄1B 2比例配对,日夜比14h B10h下产卵。
1.3暴露设计收集亲鱼的受精卵放入清水中孵化,两天后将发育良好的受精卵按照每升150粒放入玻璃缸中,分别暴露于BPA(200L g#L-1,500L g#L-1, 1000L g#L-1),NP(30L g#L-1),及两种物质的混合物(BPA200L g#L-1+NP30L g#L-1,BPA 500L g#L-1+N P30L g#L-1,BPA1000L g#L-1 +NP30L g#L-1)中,(丙酮浓度最高< 0.001%),每个浓度组设3个平行。
24h更换一半的试液。
孵化后2~14dph喂以草履虫,每天3次。
14dph将幼鱼转入到2L容器中继续暴露;14~ 40dph喂以幼鱼饲料(山东海洋水产研究所),每日定时投喂4次。
40dph将幼鱼移入4L容器中。
40~130dph每日投喂4次鱼虫干粉。
60 dph将鱼转移到8L容器中。
所有实验用受试鱼卵卵生的F1水温控制在(26?1)e。
1.4生殖力和子代质量130dph将F1代斑马鱼按雌雄比为1B2 (n\4)的配比放入到盛有清水的自制玻璃产卵箱(20c m@15c m@20c m)中,水温(26?1)e。
每天早晚喂以冰冻红虫(共鳞实业有限公司),光照时间为日B夜=14h B10h。
每天早上记录产卵情况,如有产卵情况则更换全水。
从第五次产卵开始统计产卵量、卵径等数据,产卵统计时间为20d。
受精卵孵化在24孔板中进行,每孔1粒,置于光照培养箱中,温度为(26?1)e,光照时间为日B夜=14h B10h。
统计受精卵的孵化率、孵化速度以及胚胎的畸形率和初孵仔鱼在饥饿条件下的存活时间。
1.5计算方法畸形率=每组畸形个数/每组孵化数;孵化率=每组孵化个数/每组产卵数1.6统计分析实验数据通过spss13.0统计软件(StatSo f,t60水产学报31卷Inc.)进行显著性检验和作图,图中的数据点用平均值?标准差(M ean?SE)表示。
利用方差分析(O ne-W ay ANOVA)来检验产卵次数,卵径,孵化率、孵化速度、畸形率、饥饿条件下的存活时间的显著性,用最小极差法(LSD)进行多重比较,P< 0.05为差异显著。
利用(Ch-i square tests)检验产卵次数的显著性,P<0.05为差异显著。
2结果2.1F1代斑马鱼的繁殖成功率图1显示了暴露130d后各试验组的实验鱼平均每次产卵数,从图中可以看到,BPA200L g# L-1(每尾112.56?9.66粒)、BPA500L g#L-1 (每尾76.00?6.09粒)以及NP30L g#L-1(每尾125.50?24.50粒)等低浓度试验组斑马鱼每次产卵数与对照组(每尾93.00?7.96粒)有所不同,但是差异不显著;而高浓度组BPA1000 L g#L-1(50.75?7.66粒)以及联合浓度组BPA 200L g#L-1+NP30L g#L-1(0粒)、BPA500L g# L-1+NP30L g#L-1(0粒)、BP A1000L g#L-1+ N P30L g#L-1(0粒)的平均产卵数都显著低于对照组(P<0.01)。