上海海圣生物-斑马鱼养殖系统
低温处理对斑马鱼CNSS系统应激相关基因的影响
低温处理对斑马鱼CNSS系统应激相关基因的影响作者：邹华锋冯宇红兰兆辉吕为群来源：《江苏农业科学》2016年第08期摘要：选取斑马鱼在28、18 ℃条件下处理2周，对尾部神经系统CNSS组织的U[QX（Y15]Ⅰ[QX）]、CRH、U[QX（Y15]Ⅱ[QX）]α、U[QX（Y15]Ⅱ[QX）]β、[WTBX][STBX]M2[WTBZ][STBZ]基因表达以及斑马鱼的游泳运动行为进行了研究。
经过寒冷应激后，试验组应激相关基因CRH、U[QX（Y15]Ⅱ[QX）]α、U[QX（Y15]Ⅱ[QX）]β、[WTBX][STBX]M2[WTBZ][STBZ]表达与对照组相比均明显上升，但对U[QX（Y15]Ⅰ[QX）]基因表达没有影响。
对斑马鱼的运动轨迹进行分析表明，2个组的斑马鱼在快速游泳距离、慢速游泳距离、平均游泳速度方面均存在明显差异，低温处理组斑马鱼的慢速游泳时间明显高于对照组，平均游泳速度明显低于对照组。
行为学数据和基因表达分析均表明，寒冷处理对斑马鱼造成了应激反应，低温条件下斑马鱼活动行为的减少可能是降低机体能量消耗的一种生存策略。
关键词：斑马鱼；尾部神经系统；尾加压素；基因表达；低温中图分类号： Q344+.1文献标志码：文章编号：1002-1302（2016）08-0043-04水体温度是影响鱼类生长发育的重要环境因子，对鱼类生长、繁殖、迁移等生命过程具有重要影响[1]。
与陆地哺乳动物不同，鱼类属于变温动物，鱼类生活的环境温度波动范围更为剧烈，经常遭遇多种不可避免的剧烈温差变化，如昼夜气温骤降、季节交替等引起的温度骤变，从而对鱼类产生各种短期或长期的应激反应[2]。
如果鱼类不能适应这种剧烈温度变化引起的应激反应，通常会导致死亡，对渔业生产造成严重经济损失[3]。
应激是生物生存和进化必不可少的生理反应，鱼类尾部神经系统（CNSS）作为应激系统的一部分，与下丘脑-神经-垂体系统共同参与维持鱼类应激状态下内环境的稳态，在环[JP3]境适应、应激过程中起到至关重要的作用[4-5]。
低氧对斑马鱼胚胎发育和红细胞生成的抑制作用
2021年2月第29卷㊀第1期中国实验动物学报ACTA LABORATORIUM ANIMALIS SCIENTIA SINICAFebruary 2021Vol.29㊀No.1楚璐萌,田子颖,崔蕊,等.低氧对斑马鱼胚胎发育和红细胞生成的抑制作用[J].中国实验动物学报,2021,29(1):1-8.Chu LM,Tian ZY,Cui R,et al.Inhibition effects of hypoxia on embryonic development and erythropoiesis in zebrafish [J].Acta Lab Anim Sci Sin,2021,29(1):1-8.Doi:10.3969/j.issn.1005-4847.2021.01.001[基金项目]国家自然科学基金(31301135),河南省高等学校重点科研项目资助计划(21A320018),河南省高校科技创新人才支持计划(17HASTIT047),河南省高等学校青年骨干教师资助计划(2016GGJS-103),新乡医学院精神神经医学学科群支持计划(2016PNKFKT-08),新乡医学院产学研合作项目(2017CXY-2-14),河南省生物精神病学重点实验室开放课题(ZDSYS2016001),研究生创新支持计划资助项目(YJSCX201811Z)㊂Funded by National Natural Science Foundation of China (31301135),Key Scientific Research Projects of Henan Province (21A320018),Innovative Talents in Science and Technology of Fund Program of Universities of Henan Province(17HASTIT047),the Young Backbone TeachersFellowship in Henan Province (2016GGJS-103),the Disciplinary Group of Psychology and Neuroscience,Xinxiang Medical University (2016PNKFKT-08),Production,Study and Research Project Funding of Xinxiang Medical University(2017CXY-2-14),Open Program of Henan Key Laboratory of Biological Psychiatry(ZDSYS2016001),Graduate Innovation Support Program Funded Projects(YJSCX201811Z).[作者简介]楚璐萌(1994 ),女,在读硕士研究生,研究方向:造血分化发育研究㊂Email:670381639@ [通信作者]于海川(1979 ),男,博士,副教授,研究方向:造血分化发育㊂Email:haichuan_yu@;吴娇(1978 ),女,博士,副教授,研究方向:神经分化发育研究㊂Email:wujiao@㊂∗共同通信作者低氧对斑马鱼胚胎发育和红细胞生成的抑制作用楚璐萌1,4,田子颖1,崔蕊1,吴娇2∗,于海川1,3∗(1.新乡医学院医学检验学院,河南省分子诊断与医学检验技术协同创新中心,河南新乡㊀453003;2.新乡医学院药学院,河南新乡㊀453003;3.新乡医学院第二附属医院,河南省生物精神病学重点实验室,河南新乡㊀453002;4.河南省郑州市第七人民医院,郑州㊀450000)㊀㊀ʌ摘要ɔ㊀目的㊀本文以斑马鱼(Danio rerio )为研究对象,探讨了低氧对早期胚胎发育㊁造血分化和红系分化的影响㊂方法㊀选取受精后12h 的斑马鱼胚胎,随机分为两组,以常氧组为对照组,低氧组为实验组,实时观察斑马鱼胚胎发育形态学的变化;通过联苯胺染色㊁邻联茴香胺染色㊁AO 染色及瑞氏吉姆萨染色观察红细胞的生成及形态学变化;并通过Real time PCR 检测了斑马鱼胚胎造血相关基因的表达情况㊂结果㊀与常氧相比,低氧降低了斑马鱼胚胎卵黄囊的营养消耗,抑制了色素细胞的形成,减慢了心率,延缓了斑马鱼胚胎的孵化,观察和分析了低氧对红细胞产生和成熟的抑制作用㊂结论㊀低氧延缓了斑马鱼胚胎发育,抑制了红细胞的产生和成熟㊂ʌ关键词ɔ㊀斑马鱼;低氧;胚胎发育;造血分化;红细胞生成ʌ中图分类号ɔQ95-33㊀㊀ʌ文献标识码ɔA㊀㊀ʌ文章编号ɔ1005-4847(2021)01-0001-08Inhibition effects of hypoxia on embryonic development anderythropoiesis in zebrafishCHU Lumeng 1,4,TIAN Ziying 1,CUI Rui 1,WU Jiao 2∗,YU Haichuan 1,3∗(1.School of Laboratory Medicine,Henan Collaborative Innovation Center of Molecular Diagnosis and Laboratory Medicine,Xinxiang Medical University,Xinxiang 453003,China.2.School of Pharmacy,Xinxiang Medical University,Xinxiang 453003.3.the Second Affiliated Hospital of Xinxiang Medical University,Henan Key Laboratory of Biological Psychiatry,Xinxiang Medical University,Xinxiang 453002.4.Zhengzhou No.7People s Hospital of Henan Province,Zhengzhou 450000)Corresponding author:YU Haichuan.E-mail:haichuan_yu@;WU Jiao.E-mail:wujiao@ ʌAbstract ɔ㊀Objective ㊀The vertebrate model of zebrafish (Danio rerio )was employed to explore the effects ofhypoxia on early embryonic development,hematopoietic differentiation,and erythroid differentiation.Methods ㊀At 12hpost-fertilization,zebrafish embryos were randomly divided into two groups.The normoxic group was used as the control group,and the hypoxic group was used as the experimental group.The morphological changes of zebrafish embryos were observed in real-time.Erythropoiesis and morphological changes were observed by benzidine,O-dianisidine,acridine orange,and May-Grunwald Giemsa staining.Real time PCR was used to analyze hematopoietic gene expression in zebrafish embryos.Results㊀Hypoxia reduced nutritional consumption of the yolk sac,inhibited the formation of pigment cells, slowed down the heart rate,and delayed the hatching of zebrafish embryos.Inhibitive effects of hypoxia on the production and maturity of red blood cells were observed.Conclusions㊀Hypoxia delays zebrafish embryonic development and inhibits the production and maturity of red blood cells.ʌKeywordsɔ㊀zebrafish;hypoxia;embryonic development;hematopoietic differentiation;erythropoiesis Conflicts of Interest:The authors declare no conflict of interest.㊀㊀斑马鱼(Danio rerio)是研究发育㊁造血和遗传学的强大模型[1],其具有体外受精发育㊁产卵量大㊁胚胎透明等多种优势[2-4]㊂斑马鱼与人类之间的遗传同源性达87%[5],同时具有遗传操作和再生能力[6],这使得斑马鱼成为目前研究脊椎动物胚胎发育和造血分化的优秀动物模型[7]㊂低氧是影响水生系统的最重要的压力源之一[8-9],目前有关低氧对斑马鱼胚胎发育的影响机制研究报道非常少㊂斑马鱼胚胎发育是一个复杂的㊁高度协同的过程㊂斑马鱼与人的造血分化是保守一致的,已经发现并克隆了造血过程中的阶段特异性表达基因,包括EPO㊁Globin和GATA1等[3,10]㊂研究发现红细胞生成受到低氧环境的影响,其中一个或多个异常可能导致不同类型的红细胞生成障碍[10]㊂本文采用联苯胺染色㊁邻联茴香胺染色及瑞氏吉姆萨染色来显示红细胞的生成及形态学变化,观察了低氧下斑马鱼胚胎的整个发育过程,并对常氧和低氧下的基因表达水平进行了比较,从而加深了低氧对脊椎动物影响的认识㊂目前涉及低氧对斑马鱼影响的详细研究很少,本研究为揭示低氧影响斑马鱼胚胎发育和红细胞生成的具体过程提供了新数据㊂1㊀材料与方法1.1㊀材料1.1.1㊀实验动物本实验得到新乡医学院动物实验伦理委员会的审批(XYLL-2020163),于河南省免疫与靶向药物重点实验室中进行实验,实验动物实验使用许可证号ʌSYXK(豫)2018-0014ɔ㊂约100对状态良好的生育期的AB品系斑马鱼养殖于上海海圣斑马鱼实验养殖系统中,光照/黑暗14h/10h,水温为28ħ㊂受精卵在28.5ħ下孵育,并根据Kimmel等[2]方法进行分期㊂1.1.2㊀主要试剂与仪器3,3 ,5,5 -四甲基联苯胺(MACKLIN,中国);瑞氏吉姆萨染液(Baso,中国);AO染液(索莱宝,中国);邻联茴香胺(Sigma,美国);TRIzol试剂(ambion,美国);逆转录试剂盒(诺唯赞,中国)㊂斑马鱼养殖系统(上海海圣生物实验设备有限公司,中国);YCP系列三气培养箱(长沙华曦电子科技有限公司,中国);ZEISS Discovery.V8体式荧光显微镜(ZEISS,德国);BX51正置荧光显微镜(Olympus,日本);PikoReal TM实时荧光定量PCR检测仪(Thermo Fisher Scientific,美国);Tanon-3500凝胶成像系统(上海天能公司,中国)㊂1.2㊀方法1.2.1㊀斑马鱼的繁殖和胚胎处理斑马鱼是根据已有文献的标准条件饲养和繁殖[11],交配和胚胎培养方法由中国斑马鱼资源中心提供㊂12hpf(hours post fertilization)后收集高质量的胚胎进行实验㊂将胚胎分为低氧和常氧培养组,低氧组的胚胎暴露于5%O2浓度下㊂每12h收集1次斑马鱼胚胎,鉴定胚胎的发育阶段㊂在不同发育时期,从常氧和低氧组各随机选取10个胚胎,用ZEISS ZEN软件计算卵黄囊的比例;用Image J软件分析体表色素沉着的比例;在体视显微镜下观察并计算胚胎个体的心率㊂1.2.2㊀联苯胺染色和邻联茴香胺染色联苯胺染色按照本实验室的方法进行[12],邻联茴香胺染色参照文献方法进行[13]㊂使用体式显微镜对各发育阶段的胚胎进行观察并拍照,用Image J 软件分析整个斑马鱼中染色部分的占比㊂图像至少是从3个独立的实验中获得,每组至少有6个胚胎或幼鱼㊂1.2.3㊀瑞氏吉姆萨染色对胚胎进行断尾处理收集血细胞,制备血涂片㊂斑马鱼预处理及瑞氏吉姆萨染色方法参照文献进行,并稍作改进[14-15]㊂使用BX51正置荧光显微镜观察并鉴定红细胞类型,并依据统计学方法计算红细胞在所有血细胞中的比例㊂1.2.4㊀AO染色随机收集10个胚胎/幼鱼移至包含1mL ddH2O的EP管中,然后加入30μL10μg/mL的AO染液,避光染色1h[16-17]㊂立即使用体式荧光显微镜观察并拍摄胚胎中的荧光㊂1.2.5㊀RNA提取和Real time PCR每组随机取50个胚胎/幼鱼,溶于TRIzol试剂中提取总RNA㊂使用逆转录试剂盒将总RNA逆转录为cDNA㊂使用特异性基因引物(见表1)进行常规RT-PCR和Real time PCR㊂表1㊀实时荧光定量PCR引物名称及序列Table1㊀Primer names and sequences of Real time PCR引物名称Primer names引物序列(5 -3 )Primer sequences(5 -3 ) Z-Globin-F TTTCCGCAAAGGACAAAGCGZ-Globin-R AGGAGAGTTGGGGCTTAGGTZ-GATA1-F TTTACGGCCCTTCTCCACACZ-GATA1-R GGTGGCACCACAATTCACACZ-l-plastin-F GATGTGGATGGGAACGGTCAZ-l-plastin-R ATGAACCACCTTGGCGAACTZ-scl-F CGGGCTGACAACTAGCGTATZ-scl-R TACCTGATGAGGCGTGGGTAZ-c-myc-F TATGCTGCAAGTGACCGGAGZ-c-myc-R GCTGGATGGAGTCGTAGTCGZ-NFIL3-F TAGCCCGATGTCCTTCCAGAZ-NFIL3-R TGGTGAGTCTGGACATTGCCZ-GAPDH-F TCACATTAAGGGTGGTGCAAZ-GAPDH-R GTGATGGCATGAACAGTGCT 1.3㊀统计学分析使用GraphPad Prism7软件对实验数据进行分析㊂计量资料以平均值ʃ标准差( xʃs)表示,采用t检验比较两组样本的均值,多组间的样本采用单因素方差分析㊂P<0.05为差异有统计学意义㊂2㊀结果2.1㊀低氧延迟斑马鱼胚胎发育依据前期实验结果,最终选定5%O2浓度作为低氧条件㊂将12hpf的斑马鱼胚胎(图1A)随机分为两组,分别在常氧和低氧下培养㊂24hpf,咽囊期原基-5期视网膜色素沉着和皮肤黑色素沉积较早,卵黄囊内出现红细胞,此时出现早期心脏搏动(图1B);36hpf,原基-25期,绒毛膜中的斑马鱼胚胎出现早期运动㊁尾部色素沉着和血液循环(图1C); 48hpf,长胸鳍期,卵黄囊开始变薄,侧边带出现黑素细胞,视网膜上的虹膜色素细胞丰富,头部出现黄色(图1D);60hpf,高胸鳍期,血液循环明显,视网膜虹膜色素细胞环加深(图1E);72hpf,孵化期的突口阶段,虹膜色素细胞覆盖眼睛,背部与头部相同颜色(图1F);84hpf,斑马鱼胚胎已经发育到幼鱼期(图1G)㊂低氧下,胚胎在24hpf时发育到卵裂期的20-体节阶段,在胚胎背侧区域共观察到20个体节,相当于在常氧下19hpf时的发育阶段(图1H)㊂同样,低氧下,36㊁48㊁60㊁72㊁84hpf的胚胎发育阶段分别为原基-6期㊁原基-25期㊁高胸鳍期㊁长胸鳍期和胸鳍期,分别与常氧下的25㊁36㊁42㊁48㊁60 hpf一致(图1I㊁1J㊁1K㊁1L㊁1M),即低氧在一定程度上延迟了斑马鱼胚胎的整体发育㊂2.2㊀低氧对于斑马鱼卵黄囊㊁色素沉着㊁胚胎孵化和心率的影响在相同发育阶段,低氧组斑马鱼的卵黄囊体积明显大于常氧组(图2A㊁2B);低氧组斑马鱼眼睛㊁头部㊁躯干和卵黄囊中的色素沉着明显低于常氧组(图2A㊁2C);在相同的长胸鳍阶段,常氧组胚胎完成了孵化,低氧组胚胎仍然包裹在绒毛膜中(图2A)㊂常氧组斑马鱼在24hpf时胚胎开始出现早期的心脏搏动,而此时低氧组未发现心脏搏动㊂从24 hpf开始,无论是否低氧培养,胚胎早期心率随时间变化趋势一致,约60hpf后心率趋于稳定,而在相同发育时间,低氧组斑马鱼胚胎心率明显低于常氧组(图2D)㊂另外,相同发育阶段,低氧下的胚胎心率明显低于常氧(图2E)㊂2.3㊀低氧减少斑马鱼早期胚胎发育红细胞的生成邻联茴香胺染色结果显示,经低氧处理的斑马鱼胚胎的邻联茴香胺的着色面积显著降低,染色部位主要位于卵黄囊,而常氧组斑马鱼胚胎的染色部位则逐渐从卵黄囊转移到心脏和头部(图3A-a,c, e,g)㊂联苯胺染色结果与邻联茴香胺染色基本一致,常氧下胚胎的主要染色部位逐渐从卵黄囊和大血管转移到心脏㊁大血管和节间血管,低氧下的染色部位逐渐从卵黄囊转移到心脏和血管,节间血管染色不明显(图3B)㊂使用Image J软件对联苯胺染色结果进行分析,在同一发育阶段,低氧下胚胎的着色面积比例明显低于常氧(图3C)㊂AO染色结果显示,低氧下斑马鱼胚胎卵黄囊的前部和上部有大量的凋亡细胞(绿色荧光颗粒);但其会随着斑马图1㊀斑马鱼胚胎发育代表性图片(ˑ150)Figure 1㊀Representative images of zebrafish embryonic development(ˑ150)注:A:斑马鱼胚胎的代表性图片(ˑ150);B㊁C:斑马鱼卵黄囊体积占比和色素沉着占比;D:不同发育时间斑马鱼胚胎的心率变化;E:相同发育阶段下斑马鱼胚胎的心率的差异㊂与常氧相比,∗P <0.05,∗∗P <0.01,∗∗∗P <0.001㊂(下图同)图2㊀低氧对于斑马鱼胚胎卵黄囊㊁色素沉着和心率的影响Note.A.Representative images of zebrafish embryos(ˑ150).B,C.The proportion of yolk sac volume and the proportion of pigmentation.D.The heart rate of zebrafish embryos under normoxic and hypoxic conditions at different developmental time.E.The heart rate of zebrafishembryos under normoxic and hypoxic conditions at the same developmental pared with normal oxygen,∗P <0.05,∗∗P <0.01,∗∗∗P <0.001.(The same in the following figures)Figure 2㊀Effects of hypoxia on yolk sac,pigmentation and heart rate of zebrafish embryos鱼胚胎的发育逐渐减少(图3A-b,d,f,h)㊂2.4㊀低氧抑制红细胞成熟瑞氏吉姆萨染色结果显示,同一发育时期,低氧下斑马鱼的总红细胞(包括幼稚红细胞和成熟红细胞)比例低于常氧(图4A㊁4B)㊂图4A 中,蓝色箭头处为未成熟红细胞,胞体呈圆形,胞质丰富,细胞核呈圆形或类圆形,蓝色,多居中;红色箭头处为成熟的红细胞,胞体比未成熟红细胞小,呈椭圆形,胞质丰富,细胞核呈椭圆形,深紫色㊂低氧下84hpf 的斑马鱼血液中只有未成熟的红细胞存在㊂但是同一发育阶段下常氧和低氧相比较,红细胞总数的比例没有统计学意义(图4C)㊂以往的研究表明,斑马鱼血液中的红细胞呈连续性年龄分布,成熟的红细胞血红蛋白含量较高[18]㊂这些结果表明低氧在一定程度上抑制了红细胞的成熟㊂2.5㊀低氧对于斑马鱼胚胎发育过程中造血相关基因表达的影响通过绘制斑马鱼胚胎发育早期的造血细胞分化发育图谱,我们选定了部分重要的造血相关基因进行表达检测㊂首先使用RT-PCR 的方法观察了在正常培养过程中斑马鱼胚胎发育6㊁12㊁24㊁48㊁72hpf 时一些重要造血相关基因的表达情况(图5A),在24hpf 之后,红系特异性造血因子GATA1和Globin 随着发育时间的增加其表达强度逐渐增加;注:A:斑马鱼胚胎的邻联茴香胺染色图片和AO 染色图片(ˑ150);B:斑马鱼胚胎的代表性联苯胺染色图片(ˑ100);C:联苯胺染色量化图㊂图3㊀低氧对斑马鱼胚胎血红蛋白的生成和细胞凋亡的影响Note.A.O-dianisidine staining pictures and Acridine orange staining pictures of zebrafish embryos(ˑ150).B.Representative benzidine staining of zebrafish embryos(ˑ100).C.Quantitative line chart of Benzidine staining.Figure 3㊀Effects of hypoxia on hemoglobin production and cell apoptosis of zebrafishembryos注:A:斑马鱼胚胎血细胞的瑞氏吉姆萨染色(ˑ1000);B:不同发育时期斑马鱼胚胎中红细胞的比例;C:在相同的发育阶段,斑马鱼胚胎中红细胞的比例㊂图4㊀低氧抑制红细胞成熟Note.A.May-Grunwald Giemsa staining of zebrafish embryonic blood cells(ˑ1000).B.The proportion of red blood cells in blood of zebrafish embryos at different developmental time.C.At the same developmental stage,the proportion of red blood cells in blood of zebrafish embryos.Figure 4㊀Hypoxia inhibits red blood cell maturity同时其他的与造血相关的基因c-myc㊁scl㊁GATA2和NFIL3等在斑马鱼胚胎发育早期,也随着发育时间呈逐渐升高的趋势,而l-plastin 在早期的表达更加明显㊂另外,Real time PCR 结果显示了常氧和低氧下一些红系相关基因的表达差异㊂Globin 在相同的发育时期低氧下的表达强度要明显低于常氧下的表达强度,与之相反Epo 基因在低氧下则显示较高,同时其他相关造血基因在某些发育阶段也显示出低氧下表达强度低于常氧下(图5B)㊂这些基因表达的变化情况证实并解释了先前观察到的低氧抑制斑马鱼胚胎早期红系分化的结果㊂注:A:RT-PCR 分析常氧条件下斑马鱼胚胎发育过程中的mRNA 表达水平;B:Real time PCR 分析比较常氧和低氧条件下造血相关mRNA 的表达差异㊂图5㊀低氧对于斑马鱼胚胎发育中基因表达的影响Note.A.Some mRNA level was analyzed by RT-PCR during embryonic development of zebrafish.B.Real time PCR was employed to analyze the differential expression of hematopoietic related mRNA.Figure 5㊀Effects of hypoxia on gene expression in embryonic development of zebrafish3㊀讨论为了探讨低氧对斑马鱼胚胎发育和造血作用的影响,我们使用了不同的低氧浓度和低氧处理时间㊂前期的实验结果表明当受精后的胚胎直接暴露于1%O 2浓度下超过24h,死亡率几乎是100%㊂我们最终选定了5%O 2浓度作为最适低氧浓度,而12hpf 作为最佳低氧处置时间㊂斑马鱼胚胎是一个 封闭系统 ,且发育早期不能合成血红蛋白来供应自身氧气的需求,只能通过外界氧气的被动扩散才能满足斑马鱼胚胎的正常生长发育,所以绒毛膜上的孔洞是氧气和营养物质从外部水环境运输到胚胎和清除废物所必需的[19],通过独特的绒毛膜结构,未孵化的胚胎感受到低氧并影响其发育,本研究发现低氧延缓了斑马鱼的孵化时间㊂卵黄囊的主要作用是为斑马鱼早期发育提供所需的营养物质,使发育不受外界干扰[20]㊂但有研究发现抵抗动物缺氧的最重要的防御机制之一是能量消耗的下调[21],本实验结果显示:低氧下斑马鱼胚胎卵黄囊的体积占比大于常氧,即实验证实低氧抑制卵黄囊的消耗㊂同时低氧减少了胚胎的体外色素沉着,这可能是由于低氧降低细胞色素P450的表达[22],或者因为低氧影响了酪氨酸酶的活性从而延迟了胚胎色素细胞的发育[23]㊂总之,低氧从整体上抑制了斑马鱼胚胎的发育过程,而持续的低氧不利于胚胎发育和生物学进化,在某些情况下甚至可能导致严重的疾病或死亡㊂鱼类心脏对多种环境因素敏感,其中之一就是低氧㊂在低氧状态下,由于外部氧气浓度较低,通过绒毛膜被动扩散进入斑马鱼胚胎的氧气含量无法满足斑马鱼胚胎心脏形成和发挥功能的需求,从而导致其出现持续性心动过缓,通过降低心率和能量消耗从而提高成活率[24]㊂与文献报道相一致,本研究发现低氧会导致斑马鱼心率发生复杂的变化,其确切的变化取决于发育阶段,并且在较小的程度上取决于饲养温度[25]㊂同时,以往文献显示,低氧导致斑马鱼胚胎出现一定程度的心包水肿,伴有卵黄囊水肿,胚胎血管系统发育不良,血液流速变缓[26-28]㊂我们的研究结果再一次证实了这一结果,心包水肿影响血液循环㊁心率,并很可能对血细胞生成有一定影响㊂低氧不仅影响斑马鱼胚胎的形态和心脏功能,造血分化和红细胞生成也受到了影响㊂斑马鱼是研究胚胎红细胞生成的理想系统[29]㊂红细胞的产生在许多水平上受到调节,包括基因表达的控制,环境条件的改变㊂本研究结果显示胚胎发育早期低氧对红细胞产生和成熟具有抑制作用㊂这可能是由于在胚胎发育的早期,低氧下卵黄囊前部和上部的血供不足引起的细胞凋亡,但在发育后期斑马鱼胚胎出现低氧耐受,凋亡模式发生改变,细胞凋亡数量减少㊂为了揭示低氧对红细胞生成过程中基因表达可能存在的调控机制,我们检测了一些重要的造血相关基因㊂有研究表明斑马鱼胚胎发育后期,12hpf胚胎血红蛋白的表达水平开始增加,并在孵化前后达到高峰,且胚胎血红蛋白基因水平一直保持在高水平,直到成年[30]㊂本实验的初步结果表明,常氧下12hpf,红系特异性造血因子Globin开始表达,随着发育时间的增加其表达强度逐渐增加,这与已有的研究报道结果是一致的;但是低氧下Globin的表达水平降低,及HiF1α的表达水平升高,提示在斑马鱼胚胎发育早期,低氧确实影响基因表达,但其分子机制尚不清楚㊂据报道,低氧可以通过调节斑马鱼胚胎的HIF通路,影响斑马鱼胚胎造血干细胞的产生和造血末期红细胞的终末分化[31-33]㊂综上所述,低氧延缓了斑马鱼胚胎的发育,抑制了红细胞的产生和成熟㊂我们的结果加深了人们对低氧诱导脊椎动物产生影响的认识,同时也提供了低氧对斑马鱼胚胎发育和红细胞生成的最新认识㊂由于斑马鱼相对于小鼠模型具有许多优势,斑马鱼疾病模型的进一步发展将加速我们对疾病各种病理㊁生理过程的了解㊂随着斑马鱼疾病模型的可用性和日益增加的多样性,该动物系统将为疾病诊断,有效治疗和预后提供强大的基础㊂在高海拔地区,低氧与中风或癌症等疾病相关[34]㊂所以此项研究在一定程度上为探索临床上低氧性疾病提供了新的认识和见解,但低氧究竟如何影响斑马鱼的胚胎发育和造血分化,还有待进一步研究㊂参㊀考㊀文㊀献(References)[1]㊀王小琦,孙岩,张洋,等.斑马鱼模型在常见骨疾病研究中的应用[J].中国比较医学杂志,2017,27(6):86-91.Wang 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上海海圣生物-斑马鱼饲养
斑马鱼是一种小型的热带淡水鱼种类，民间多用于观赏养殖，但是在科研工作中，斑马鱼的优良性状有利于研究人类疾病发生和传播，包括研究鱼类生理机能、动物行为和水产养殖毒性试验。
虽然斑马鱼具有极高的研究价值，但是国内对于这个领域研究却还在起步阶段。
尤其在斑马鱼养殖的时候缺乏一定的标准，导致斑马鱼的死亡。
所以下面我们就为大家介绍一下斑马鱼的养殖。
1、温度：饲养适宜的温度较为宽松大概在6到38℃，一般业内认为28.5℃是养殖斑马鱼的最适宜温度，通常情况下在低温的情况下，应该先控制房间温度在28℃左右，也可以通过鱼缸专用加热棒对于鱼缸缓慢加温。
较高的养殖温度可能导致水体的溶氧度降低，且容易导致细菌的滋生，影响斑马鱼的健康。
而较低的温度则会让它生长发育过程变慢，产暖量降低。
2、pH值鱼类养殖都离不开水质的酸碱度，PH值对于鱼类的生长繁殖起着重要的影响。
大多数斑马鱼养殖环境的水体PH值在7.0-8.0之间，也就是说斑马鱼比较适宜偏碱性的水质，而水质7.0以下就是说酸性的话，就会造成斑马鱼的死亡。
3、硬度水的总硬度指水中Ca2+和Mg2+等离子的总浓度。
斑马鱼适宜于较高硬度的水，水体硬度超过100mg/L CaCO3有利于斑马鱼的生长繁殖。
但是，这种适应是有限的。
目前，尚没有系统全面的研究不同范围的硬度条件对斑马鱼生长发育方面的影响。
3、盐度斑马鱼属于淡水鱼，但是可以耐受很大的盐度范围。
斑马鱼养殖适宜盐度通常为0.25‰。
养殖系统的盐度控制范围为0.25-0.75‰4、溶解氧溶解氧是鱼类养殖中的重要条件参数。
低水平的溶解氧往往会造成养殖系统内鱼类的大量死亡。
斑马鱼具有较快的新陈代谢速率，因而消耗氧气的水平也比较高。
建议养殖水体的溶解氧水平基本维持或者不低于6.0mg/L （28.0℃），以维持斑马鱼的健康生长和活动。
然而水体溶氧度也不是越高越好。
水体内通空气过度，会造成气体达到和超过饱和浓度，产生大量气泡，对鱼造成致命危害，产生气泡病。
斑马鱼饲养设备多少钱
斑马鱼作为一种集观赏性和科研性于一体的生物，其饲养已经行成一种风尚。
对于酒店和实验室来说，饲养斑马鱼就意味着需要选择合适的饲养设备，而饲养设备多少钱也成为了他们关心的问题。
受饲养设备规格、材质等因素的因素，目前市面上的斑马鱼饲养设备多少钱也不是固定的，而是在一定的区间上下浮动，这个浮动区间一般是在几万到几十万之间，具体价格需要参考规格、材质等因素。
规格对斑马鱼饲养设备价格的影响不难理解，一般而言，规格越大，饲养设备的价格也就越高。
斑马鱼饲养设备一般分为独立式和集中式，独立式饲养设备常用的配置为4~5层，用户也可根据不同需求来定制层数及高度，主要包含养殖水槽、不锈钢鱼架、过滤箱、UV灯、水泵、气泵、控制系统等。
不锈钢架为316L不锈钢材质，采用全角度焊接，经久耐用。
不锈钢架底部带底脚调节螺丝，在不平整的地面可以通过调节螺丝来将不锈钢架调整至水平状态。
国内外不同型号规格的饲养设备价格从几万到几十万都有，具体价格要根据各厂家实际配置决定。
其次，影响斑马鱼价格的因素是材质，材质越好，产品质量越高，价格也就越高，产品质量是价格的基本因素。
目前市面上的养殖设备的生产厂家众多，生产所使用的材质也是各不相同，如塑料材质、玻璃材质和亚克力材质等。
材质不同，成本投入也就不同。
当然，目前也有厂家所生产的养殖水槽采用性能优异的PC材质，注塑一次成型，耐高温高压，抗摔性强，防漏坚固，经FDA认证，性价比高。
不可否认的是，即使采用的是同样的材质，材质的质量也是不一样的，这就导致市场上价格的多样性。
好的材质价格可以高达几十万，劣质的材质价格可能会低至几千元。
上海海圣生物实验设备有限公司成立于1997年，是一家从事水生物养殖设备制造的专业生产型企业，专为各高等院校、研究院所度身设计、制造水生物实验养殖系统，如中国水产科学研究生院东海水产研究所、黄海水产研究所、北京大学等。
近年来，海圣在斑马鱼养殖设备研发上取得新进展，开发出二代新品，既提升了性能又降低了运行成本。
斑马鱼养殖密度计算
对于实验室、酒店、超市等场合的斑马鱼养殖来讲，经常遇到这样一个问题：多大的空间需要养殖多少量的斑马鱼才能够既保证斑马鱼的正常生长，又能保证养殖单元的美观性？这就涉及到斑马鱼养殖密度的计算了，只有正确计算，合适养殖，才能够有效利用养殖单元的空间，又能够保障斑马鱼的生长发育和美观性。
一般而言，成熟的斑马鱼养殖的密度是每升水养殖6～9条斑马鱼是比较理想的养殖密度。
但是对于初次养鱼的人，密度越小越好，并需添置充气泵，这样能够保障斑马鱼的正常生长发育。
在选择养殖单元上也不容忽视，目前，已经有不少生产厂家制造的水生物实验养殖系统质量合格、设计合理，规格齐全，可以满足不同科研和酒店、超市等场合的需要，其具有完整且独立的循环系统以提供良好的水质，淡海水养殖均可使用，并配有恒温设备，可以根据不同研究需要调节水温。
大大节省了养殖的人工投入，实现自动化斑马鱼养殖，既省心又省力。
当然，对于酒店、超市、家庭等室内斑马鱼养殖来讲，其养殖密度是基于一定的计算，肯定不可能出现密集养殖的现象，但是它的养殖密度还是受到个人的审美和实际需要的影响。
有的人会喜欢密度越小越好，有的人则喜欢密度越大越好，因人而异，全凭个人喜好。
个人审美习惯和实际需要则是完全不需要斑马鱼养殖密度计算的，个人喜欢就好。
当然，市面上在售的养殖单元规格齐全，大小不一，能够满足个人对养殖单元空间大小的需求。
有的厂家还会提供限定时间内内免费送上门安装和维修，终身提供技术支持与配件，免去用户的后顾之忧。
上海海圣生物实验设备有限公司成立于1997年，是一家从事水生物养殖设备制造的专业生产型企业，专为各高等院校、研究院所度身设计、制造水生物实验养殖系统，如中国水产科学研究生院东海水产研究所、黄海水产研究所、北京大学等。
近年来，海圣在斑马鱼养殖设备研发上取得新进展，开发出二代新品，既提升了性能又降低了运行成本。
海圣拥有完善的售后服务体系，保修期内免费上门维修，48小时内到达现场。
斑马鱼养殖系统单位哪家好
当下，斑马鱼养殖已经成为一种常态，无论是科研实验室，还是日常酒店，都非常常见。
斑马鱼的养殖避免不了会用到养殖系统，目前市场上生产该系统的单位众多，那么斑马鱼的养殖系统单位哪家比较好呢？市场上有很多斑马鱼养殖单元具有以下优点：一、产品特点养殖缸底部有“V”形导流槽设计，固体沉淀物能聚集到“V”形导流槽中，随流水被带出水槽，能有效排出残饵及鱼类排泄物。
0.8L养殖缸，这是一种独特的0.8L养殖水槽，转为基因筛选设计。
水槽体积小，空间利用率高。
能够比较大限度地满足用户实验用于的数量要求和分组需要，同时节省药物的使用量。
3L养殖缸设有芯片插口及二维码面贴处，新款养殖水槽设有芯片插口及二维码面贴处，可配电子芯片及二维码，实验人员通过手持设备或服务器端即可对养殖缸的记录内容进行编辑，建立斑马鱼信息库数字化管理系统。
不锈钢预过滤器，模具一次成型，定期清洗便可长期使用，不再需要过滤棉，大大节省了耗材费用，降低了设备的运行成本。
流水式盖板，与传统的盖板不同，本盖板在表面做出一个缓坡状的下水口，将进水管放在盖板的坡面上，养殖水沿着坡面缓慢流入缸内。
二、技术参数1. 系统支架：不锈钢316L材质；2. 养殖缸（可选）：PC材质，注塑一次成型，食品级、耐高温高压（国际标准），抗摔性强，防漏坚固。
养殖水槽采用自洁性设计，能有效进行水体交换，每个养殖缸供水单独可控。
现有规格：0.8L、1.5L、3L、10L、20L；3. 水循环装置：包含供水、供气管路，循环泵，增氧泵，斑马鱼专用出水、出气调节阀；4. 水处理装置（设有不锈钢网预过滤器，代替传统的过滤棉，节省耗材费用，降低运行成本）：包含过滤系统（四级过滤）、紫外线杀菌系统、加热系统等；5. 全自动控制系统：可自动控制水循环、紫外杀菌、温度调节、曝气等；6. 鱼缸配置：三．设备选配1. 光照：T5灯管，微电脑时控开关，可根据实验需要进行光照时间的设置，自动开启或关闭，有记忆性；2. 冷暖机：制冷范围10-30℃；3. 净水供水单元：出水量4种规格可选，80L/H、250L/H、500L/H、1000L/H；4. pH及电导率调节仪：可监测和调节pH和电导率，pH调节范围7.2-7.6，电导率调节范围500-550μS/cm。
胚胎期双酚A暴露对斑马鱼发育及神经行为的影响
胚胎期双酚A暴露对斑马鱼发育及神经行为的影响潘睿;胡晶莹;户宜;姚谦;李卫华;田英;高宇【摘要】目的·运用斑马鱼模型初步探讨胚胎期双酚A (bisphenol A,BPA)暴露对斑马鱼发育和神经行为的影响.方法·对受精后小时数(hours post-fertilization,hpf)为4的正常斑马鱼受精卵以不同浓度BPA(0、2.5、25、250、2 500μg/L)作染毒处理;观察并记录斑马鱼存活率、畸形率和孵化率,以及斑马鱼胚胎24 hpf自主运动和48 hpf心率,并对发育至144 hpf的斑马鱼幼鱼进行神经行为学检测.结果·各浓度BPA均未影响斑马鱼的存活率、畸形率和孵化率.暴露于2 500 μg/L浓度BPA的斑马鱼胚胎24 hpf自主运动和48 hpf心率低于对照组(P=0.000),发育至144 hpf的幼鱼运动总距离和平均速度降低(P=0.000).暴露于250 μg/L和2 500 μg/L浓度BPA的斑马鱼幼鱼在强光刺激惊恐反射检测中运动行为改变,主要表现为在强光刺激下运动总距离减少(P＜0.05).结论·胚胎期BPA暴露对斑马鱼具有一定的发育毒性和神经毒性.【期刊名称】《上海交通大学学报（医学版）》【年(卷),期】2019(039)005【总页数】5页(P458-462)【关键词】双酚A;斑马鱼;胚胎期;发育;神经行为【作者】潘睿;胡晶莹;户宜;姚谦;李卫华;田英;高宇【作者单位】上海交通大学公共卫生学院,上海200025;复旦大学生殖与发育研究院,上海市计划生育科学研究所,国家卫生健康委员会计划生育药具重点实验室,上海200032;上海交通大学附属儿童医院上海市儿童医院生物医学信息研究中心,上海200040;上海交通大学公共卫生学院,上海200025;复旦大学生殖与发育研究院,上海市计划生育科学研究所,国家卫生健康委员会计划生育药具重点实验室,上海200032;上海交通大学公共卫生学院,上海200025;上海交通大学医学院附属新华医院环境与儿童健康重点实验室,上海200092;上海交通大学公共卫生学院,上海200025【正文语种】中文【中图分类】R114双酚A（bisphenol A，BPA）的化学结构与性激素具有同源性，是一种环境内分泌干扰物（endocrine disrupting chemicals，EDCs）。
斑马鱼养殖
斑马鱼作为一种观赏性的模式生物，广泛存在于家庭、酒店和科研实验室，是日常生活中比较常见的一种鱼类，相信很多人也有冲动养殖斑马鱼。
但和其他生物的养殖一样，在养殖斑马鱼的过程中需要注意到很多问题。
一、养殖设备的要求。
日常室内和科研实验室养殖时需要选择合适且质量合格的水族箱，这样能够保证斑马鱼的正常生长，不会影响日常观赏和科研活动。
首先，因为斑马鱼的体型比较娇小，一般是3－4厘米，一般选择比较小的水族箱。
但是也是要注意到养殖量，当养殖量很大时，需要选择较大点的水族箱。
目前市面上在售的水族箱规格齐全，能够满足不同科研和酒店、家庭养殖斑马鱼的需要。
二、养殖水质的要求。
斑马鱼养殖起来很简单，对水温水质的要求要并不高。
一般而言，它的养殖水温要保持在27度左右即可，但若水温低于这一范围，斑马鱼也能够调整自身积极适应，不会影响斑马鱼的正常生存。
在水质方面，斑马鱼养殖的水质维持在中性或偏软性水都是可以的，均是斑马鱼能够接受的水质区间。
当然，在斑马鱼亲鱼繁殖期间，其生存水质需要用软水，因为这样的水质能够提升卵子受精率和孵化率。
不少水族箱和养殖缸具有完整且独立的循环系统，及时进行水体流动和循环，以保持良好的水质，达到淡海水养殖均可使用的标准，配有恒温设备，可以根据不同研究和养殖需要调节水温，不会影响其生存环境。
三、养殖饲料的要求。
斑马鱼食性相当单一，喂养起来也是十分便捷，天然饵料和人工配合饲料都可以满足它的生长需要。
对于饵料，市面上不少生产厂家能够特别针对斑马鱼配置了相应的饵料，能够满足不同数量及成长阶段的斑马鱼饲养要求。
上海海圣生物实验设备有限公司成立于1997年，是一家从事水生物养殖设备制造的专业生产型企业，专为各高等院校、研究院所度身设计、制造水生物实验养殖系统，如中国水产科学研究生院东海水产研究所、黄海水产研究所、北京大学等。
近年来，海圣在斑马鱼养殖设备研发上取得新进展，开发出二代新品，既提升了性能又降低了运行成本。
斑马鱼养殖系统
提及斑马鱼的养殖系统，相信很多人都是一脸茫然，不明所以。
简单来说，这是针对斑马鱼的大批量饲养而设计出来的一个养殖系统，能够自动化实现循环、消毒、净化、水质调整，净水补充等过程，一起来详细了解一下。
一、产品特点养殖缸底部“V”形导流槽设计，固体沉淀物能聚集到“V”形导流槽中，随流水被带出水槽，能有效排出残饵及鱼类排泄物。
0.8L养殖缸，转为基因筛选设计。
水槽体积小，空间利用率高，可满足用户实验用于的数量要求和分组需要，同时节省药物的使用量。
3L养殖缸设有芯片插口及二维码面贴处，新款养殖水槽设有芯片插口及二维码面贴处，可配电子芯片及二维码，实验人员通过手持设备或服务器端即可对养殖缸的记录内容进行编辑，建立斑马鱼信息库数字化管理系统。
不锈钢预过滤器，模具一次成型，定期清洗便可长期使用，不再需要过滤棉，大大节省了耗材费用，降低了设备的运行成本。
流水式盖板，与传统的盖板不同，本盖板在表面做出一个缓坡状的下水口，将进水管放在盖板的坡面上，养殖水沿着坡面缓慢流入缸内。
二、技术参数1. 系统支架：不锈钢316L材质；2. 养殖缸（可选）：PC材质，注塑一次成型，食品级、耐高温高压（国际标准），抗摔性强，防漏坚固。
养殖水槽采用自洁性设计，能有效进行水体交换，每个养殖缸供水单独可控。
现有规格：0.8L、1.5L、3L、10L、20L；3. 水循环装置：包含供水、供气管路，循环泵，增氧泵，斑马鱼专用出水、出气调节阀；4. 水处理装置（设有不锈钢网预过滤器，代替传统的过滤棉，节省耗材费用，降低运行成本）：包含过滤系统（四级过滤）、紫外线杀菌系统、加热系统等；5. 全自动控制系统：可自动控制水循环、紫外杀菌、温度调节、曝气等；6. 鱼缸配置：三、产品用途1. 满足斑马鱼等小型模式生物的产卵、孵化、生长等过程；2. 应用于胚胎学、发育生物学、毒理学、分子生物学等科目的相关分析测试研究；3. 建立药物筛选、治疗的研究平台；4. 应用于环境科学、农业科学的一些重大问题的研究与解决。
余甘子提取物的化妆品功效研究——斑马鱼实验
余甘子提取物的化妆品功效研究——斑马鱼试验采用斑马鱼试验，探究余甘子提取物在化妆品中的功效。
方法：用过饱和氯化钠溶液处理斑马鱼尾部，使其尾部面积因皱缩而变小，建立保湿功效评价模型；检测胶原基因相对表达量来判断是否拥有抗皱功效；使用经皮吸收的方式进行给样，通过对比斑马鱼体表黑色素含量，检测是否拥有美白功效；观察斑马鱼胚胎自主翻滚次数，检测是否拥有温和无刺激功效。
结果：余甘子提取物拥有保湿、抗皱、美白、温和无刺激功效，在化妆品中拥有良好的潜在应用价值。
文｜鹿王成志 舒小康 吴 艳关键词：斑马鱼；余甘子；化妆品功效；斑马鱼实验随着经济的发展以及人们健康意识的提高，消费者对纯天然化妆品的需求不断提升。
相比于化工原料制造的化妆品，使用天然原料制造的化妆品更受消费者青睐，尤其是使用各种植物提取物为原料的天然化妆品。
截至2015年，化妆品已经使用的原料中将近有三分之一属于植物原料[1]，而其中又属植物提取物较受消费者的欢迎。
植物提取物含有一定的活性成分[2]，这些成分拥有良好的化妆品功效，且丰富的植物提取物种类为化妆配方设计带来了更多选择性。
因此，植物提取物应用在化妆品当中，既满足了消费者对于纯天然的追求[3]，又满足了化妆品厂商对功效多样性的追求。
中药作为中华文明流传下来的瑰宝，除了有药用价值外，还有保健作用，可以作为保健品食用，因此中草药化妆品也成为化妆品的行业风口之一，其中中草药提取物更是提供了许多化妆品原材料。
余甘子(Phyllanthus emblica L.)是一种分布在我国南方的特色经济树种[4]，是第一批列入“既是食物又是药物的物品名单”的中药材，同时也是联合国卫生组织指定的世界推广种植的3种保健植物之一。
作为药材其已经拥有2000余年的历史，在中药、藏药、蒙药、白药、壮药中都有广泛应用。
余甘子含有上百种成分，主要包括多酚(单宁)、黄酮、还原糖、多糖、萜类，甾醇、挥发油以及多种营养成分[5，6]，其维生素C含量极高[7]，能够提高人体免疫力，延缓衰老。
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斑马鱼是国际标准组织推荐的毒性实验的标准用鱼之一,一直被广泛的应用于环境监测领域。
为了满足科研机构对斑马鱼的大量需求，需要对斑马鱼进行人工繁殖，下面一起来看一下吧。
简单来看，斑马鱼是属于比较小型的淡水鱼类，成年的个体体长一般在20-40毫米之间，其食性较复杂, 比较容易饲养和管理。
即使在小容器内进行人工饲养，它们也能正常生长、繁殖，丝毫不会产生影响。
目前，斑马鱼的生存情况堪忧，是一种濒临绝种的鱼类，很少有比较自然的水域能够满足它的栖息，主要原因是外来种鱼类、农药和水土保持不当，严重破坏了斑马鱼鱼的生存空间。
简单了解了斑马鱼后，我们可以再来看看它的繁殖情况。
斑马鱼繁殖力强，几乎一年四季都可繁殖，每次产卵约10至20粒，产卵量依雌鱼体型大小不同，在食物充足的水域，2至3天产卵一次，仔鱼孵化约8至14日，快慢跟水温有关。
体外受精，出生卵直径约0.1公分，仔鱼孵化出来约为0.3公分，一星期可达0.5公分，一个月长到1公分，约半年就成熟达3公分，大的约4公分左右，寿命约3至4年。
雄鱼发情时腹鳍会明显变黑，头顶两眼中有明显黑线，会占地盘，怀卵之雌鱼进入会立即上前交配，未怀卵雌鱼或其他雄鱼进入时会立即上前驱赶。
青鳉鱼若有适当环境非常容易繁殖，不过授精卵应迅速移开到其他环境，否则会被成鱼吃掉。
上海海圣生物实验设备有限公司成立于1997年，是一家从事水生物养殖设备制造的专业生产型企业，专为各高等院校、研究院所度身设计、制造水生物实验养殖系统，如中国水产科学研究生院东海水产研究所、黄海水产研究所、北京大学等。
近年来，海圣在斑马鱼养殖设备研发上取得新进展，开发出二代新品，既提升了性能又降低了运行成本。
海圣拥有完善的售后服务体系，保修期内免费上门维修，48小时内到达现场。
定期回访及维护设备，积极听取和处理反馈意见，提供终身技术支持及配件。
它不断吸收国内外先进技术，积极完善生产工艺，获得多项专利，已通过了ISO9001:2015质量管理体系认证、ISO14001:2015环境管理体系认证和ISO 45001:2018职业健康安全管理体系认证，养殖设备达FDA检测标准，无毒无害，质量有保证！。