免疫固定电泳操作规程
免疫固定电泳操作规程
免疫固定电泳操作规程一．项目名称免疫固定电泳（HYDRAGEL IMMUNOFIXATION）二．检验方法名称琼脂糖凝胶免疫固定电泳三．方法学原理血清蛋白电泳中出现的异常条带主要存在于β-球蛋白和γ-球蛋白区域，通常疑为单克隆蛋白质并且提示丙球蛋白血症。
为鉴别异常条带，可运用免疫固定技术。
免疫固定电泳是一种简单的技术，电泳后的蛋白质与相应抗体形成复合物和被固定在相应的位置上，通过下列四个步骤：1．蛋白质在琼脂糖凝胶内进行电泳分离。
2．电泳后已分离的蛋白质被固定并产生免疫沉淀：应用固定剂和抗血清加于凝胶表面的泳道上，并让固定剂和抗血清在凝胶内渗透扩散。
3．使用吸水纸和清洗将未沉淀的蛋白质去除，已被沉淀的蛋白质贮留在凝胶内。
4．将蛋白质染色，并将这些免疫沉淀区带的位置与蛋白质经电泳后观察到的异常蛋白区带进行比较。
为了精确识别单克隆区带，样品同时在六条泳道上进行测试。
经电泳后，ELP作为参考泳道以显示电泳后的蛋白质。
其余五条泳道用于鉴定单克隆成分。
通过它（们）与抗血清，γ(IgG)、α(IgA)、μ(IgM)重链和κ、λ轻链（游离和非游离）反应与否进行鉴别。
该技术简单、快速、图象清晰，易于解释结果。
四．方法学溯源自1930年由Tiselius发现了移界电泳（moving boundary eectrophoresis），而后，这种技术的各种局限性已逐渐被区带电泳（zone elecrrophoresis）所克服，区带电泳的条件和支持介质的选择是电泳成败的关键。
通过免疫化学手段观察其电泳特性及抗原特性是鉴定某一蛋白成分最好的方法，免疫固定电泳技术是目前应用最广泛的方法之一。
五．仪器（一）型号：SEBIA HYDRASYS (PN1210)（二）分析和计算参数：1．处理量：约18个样本/小时2．所需样本量：10ul3．检验时间：约55分钟4．重复性：有良好的批内和批间重复性5．电泳参数：电压0－300V（可选至3000V）电流0－500mA功率0－100W六．试剂及配套品（一）试剂1．HYDRAGEL 1 IF试剂盒HYDRAGEL 2 IF试剂盒HYDRAGEL 4 IF试剂盒HYDRAGEL 9 IF试剂盒（1）商标：SEBIA（2）包装规格：10测试/20测试/40测试/90测试（3）货号：PN4301/ PN4302/ PN4304/PN43092．脱色液（1）商标：SEBIA（2）包装规格：Pack for 10×100ml（3）货号：PN4540（4）成分：柠檬酸3．洗涤液（1）商标：SEBIA（2）包装规格：Pack for 10×80ml（3）货号：PN4541（4）成分：叠氮钠4．稀释剂（1）商标：SEBIA（2）包装规格：Pack for 1×5ml（3）货号：PN4587（二）配套品：IF试剂抗体（1）商标：SEBIA(2 ) 包装规格：Pack for 5×1ml（3）PN4315七．操作步骤㈠开机，启动电泳仪。
免疫固定电泳操作规程
免疫固定电泳操作规程一．项目名称免疫固定电泳(ＨYＤRＡＧＥL IMMUＮＯFIXAＴION)二．检验方法名称琼脂糖凝胶免疫固定电泳三．方法学原理血清蛋白电泳中出现得异常条带主要存在于β—球蛋白与γ—球蛋白区域,通常疑为单克隆蛋白质并且提示丙球蛋白血症。
为鉴别异常条带,可运用免疫固定技术。
免疫固定电泳就是一种简单得技术,电泳后得蛋白质与相应抗体形成复合物与被固定在相应得位置上,通过下列四个步骤:1。
蛋白质在琼脂糖凝胶内进行电泳分离。
2。
电泳后已分离得蛋白质被固定并产生免疫沉淀:应用固定剂与抗血清加于凝胶表面得泳道上,并让固定剂与抗血清在凝胶内渗透扩散、３。
使用吸水纸与清洗将未沉淀得蛋白质去除,已被沉淀得蛋白质贮留在凝胶内。
4、将蛋白质染色,并将这些免疫沉淀区带得位置与蛋白质经电泳后观察到得异常蛋白区带进行比较。
为了精确识别单克隆区带,样品同时在六条泳道上进行测试。
经电泳后,ELP作为参考泳道以显示电泳后得蛋白质。
其余五条泳道用于鉴定单克隆成分。
通过它(们)与抗血清,γ(IｇG)、α(ＩｇA)、μ(IgM)重链与κ、λ轻链(游离与非游离)反应与否进行鉴别、该技术简单、快速、图象清晰,易于解释结果。
四．方法学溯源自1930年由Tｉｓｅlius发现了移界电泳(moviｎg bounｄａry ｅectrophoresis),而后,这种技术得各种局限性已逐渐被区带电泳(zoｎe eｌecrｒophoresiｓ)所克服,区带电泳得条件与支持介质得选择就是电泳成败得关键。
通过免疫化学手段观察其电泳特性及抗原特性就是鉴定某一蛋白成分最好得方法,免疫固定电泳技术就是目前应用最广泛得方法之一。
五．仪器（一）型号:ＳＥBIA HＹＤRASYＳ(PＮ12１0)（二）分析与计算参数:1．处理量:约18个样本/小时2．所需样本量:10ul3．检验时间:约55分钟4．重复性:有良好得批内与批间重复性5．电泳参数:电压0—30０V(可选至３０00V)电流0—500mＡ功率0-１00Ｗ六．试剂及配套品（一）试剂1．HＹDＲＡGEＬ1 IF试剂盒HＹDＲAＧＥL 2IF试剂盒HYDRＡGEL 4IF试剂盒HYＤＲAGＥL 9 ＩＦ试剂盒（1）商标:ＳＥBIA（2）包装规格:10测试/2０测试／40测试/90测试（3）货号:ＰN４301/ＰN４３0２／PN4３04/ＰN４３０９2．脱色液(1) 商标:SＥＢIA(2)包装规格:Ｐａcｋfｏr １０×100ml(3) 货号:PＮ4５40(４) 成分:柠檬酸3、洗涤液（1）商标:ＳEBＩA（2）包装规格:Paｃk foｒ10×80ｍl（3）货号:ＰＮ4541（4）成分:叠氮钠4.稀释剂（1）商标:SEＢIA（2）包装规格:Paｃｋfｏr1×５ml（3）货号:PN458７（二）配套品:ＩＦ试剂抗体(1) 商标:SEBIA(2 ) 包装规格:Pａcｋfor 5×1mｌ(３)PＮ4３15七．操作步骤㈠开机,启动电泳仪。
免疫固定电泳操作规程
免疫固定电泳操作规程项目名称免疫固定电泳( HYDRAGEL IMMUNOFIXATION)检验方法名称琼脂糖凝胶免疫固定电泳方法学原理血清蛋白电泳中岀现的异常条带主要存在于B -球蛋白和丫 -球蛋白区域，通常疑为单克隆蛋白质并且提示丙球蛋白血症。
为鉴别异常条带，可运用免疫固定技术。
免疫固定电泳是一种简单的技术，电泳后的蛋白质与相应抗体形成复合物和被固定在相应的位置上，通过下列四个步骤： 1．蛋白质在琼脂糖凝胶内进行电泳分离。
2．电泳后已分离的蛋白质被固定并产生免疫沉淀：应用固定剂和抗血清加于凝胶表面的泳道上，并让固定剂和抗血清在凝胶内渗透扩散。
3．使用吸水纸和清洗将未沉淀的蛋白质去除，已被沉淀的蛋白质贮留在凝胶内。
4．将蛋白质染色，并将这些免疫沉淀区带的位置与蛋白质经电泳后观察到的异常蛋白区带进行比较。
为了精确识别单克隆区带，样品同时在六条泳道上进行测试。
经电泳后，ELP作为参考泳道以显示电泳后的蛋白质。
其余五条泳道用于鉴定单克隆成分。
通过它(们)与抗血清，丫(IgG)、a (IgA)、卩(IgM)重链和K、入轻链(游离和非游离)反应与否进行鉴别。
该技术简单、快速、图象清晰，易于解释结果。
方法学溯源自 1930 年由 Tiselius 发现了移界电泳( moving boundary eectrophoresis )，而后，这种技术的各种局限性已逐渐被区带电泳( zone elecrrophoresis )所克服，区带电泳的条件和支持介质的选择是电泳成败的关键。
通过免疫化学手段观察其电泳特性及抗原特性是鉴定某一蛋白成分最好的方法，免疫固定电泳技术是目前应用最广泛的方法之一。
仪器型号： SEBIA HYDRASYS (PN1210)分析和计算参数：处理量：约 18 个样本 / 小时所需样本量： 10ul检验时间：约 55 分钟重复性：有良好的批内和批间重复性电泳参数：电压 0 — 300V (可选至 3000V)电流 0－ 500mA功率 0— 100W试剂及配套品试剂HYDRAGEL 1 IF式剂盒HYDRAGEL 2 IF式剂盒HYDRAGEL 4 IF式剂盒HYDRAGEL 9 IF式剂盒商标：SEBIA包装规格：10测试/20测试/40测试/90测试货号：PN4301/ PN4302/ PN4304/PN4309脱色液(1)商标：SEBIA(2)包装规格：Pack for 10 x 100ml(3)货号：PN4540(4)成分：柠檬酸3 •洗涤液商标：SEBIA包装规格：Pack for 10 x 80ml货号：PN4541成分：叠氮钠4 .稀释剂商标：SEBIA包装规格：Pack for 1 x 5ml货号：PN4587配套品：IF试剂抗体(1) 商标：SEBIA(2 ) 包装规格：Pack for 5 x 1ml(3) PN4315操作步骤㈠开机，启动电泳仪。
免疫固定电泳报告解读
免疫固定电泳报告解读免疫固定电泳是一种重要的实验技术，广泛应用于生物医学研究和临床诊断领域。
通过将待检测的抗原与抗体结合后进行电泳分离，可以对蛋白质分子进行定量和定性分析。
本文将针对免疫固定电泳的原理、方法和报告解读进行详细介绍。
**一、免疫固定电泳的原理**免疫固定电泳是结合了免疫学和电泳技术的一种生物化学方法。
其原理基于抗原与抗体结合的特异性，在电泳条件下可以将待检测的蛋白质分子进行分离和检测。
具体步骤如下：1. 样品制备：待检测的蛋白质样品首先与特异性抗体结合，形成抗原-抗体复合物。
2. 电泳分离：将样品加载到电泳凝胶中，施加电场进行电泳分离。
抗原-抗体复合物根据大小和电荷的差异在电场作用下发生迁移，完成分离。
3. 免疫检测：电泳结束后，将凝胶转移到膜上，并进行免疫检测。
通过特异性的抗体标记，可以定量和定性检测抗原的存在。
**二、免疫固定电泳的方法**免疫固定电泳的方法主要包括样品制备、电泳分离和免疫检测三个步骤。
具体操作如下：1. 样品制备：将待检测的蛋白质样品与特异性抗体结合，形成抗原-抗体复合物。
通常采用预实验确定最佳的抗原-抗体比例，以保证实验的准确性。
2. 电泳分离：将样品加载到聚丙烯酰胺凝胶中，施加电场进行电泳分离。
根据抗原-抗体复合物的大小和电荷差异，进行分离。
通常采用双向电泳，以获得更好的分离效果。
3. 免疫检测：电泳结束后，将凝胶转移到膜上，进行免疫检测。
通常采用酶联免疫吸附试验（ELISA）或放射免疫沉淀分析（RIA）等方法，通过特异性抗体标记进行检测。
**三、免疫固定电泳报告解读**免疫固定电泳的报告通常包括电泳图谱和免疫检测结果，解读主要针对以下几个方面：1. 电泳图谱分析：通过电泳图谱可以观察到抗原-抗体复合物的分离情况，包括带电率、分子量等信息。
根据复合物的迁移位置和带电率，可以初步判断抗原的存在和性质。
2. 免疫检测结果：通过免疫检测可以定量和定性地检测抗原的存在。
免疫固定电泳(HYDRAGEL IMMUNOFIXATION)操作规程(1)
免疫固定电泳(HYDRAGEL IMMUNOFIXATION)操作规程（1）一、项目名称免疫固定电泳（HYDRAGEL IMMUNOFIXATION）二、检验方法名称琼脂糖凝胶免疫固定电泳三、方法学原理血清蛋白电泳中出现的异常条带主要存在于β-球蛋白和γ-球蛋白区域，通常疑为单克隆蛋白质并且提示丙球蛋白血症。
为鉴别异常条带，可运用免疫固定技术。
免疫固定电泳是一种简单的技术，电泳后的蛋白质与相应抗体形成复合物和被固定在相应的位置上，通过下列四个步骤：1、蛋白质在琼脂糖凝胶内进行电泳分离。
2、电泳后已分离的蛋白质被固定并产生免疫沉淀：应用固定剂和抗血清加于凝胶表面的泳道上，并让固定剂和抗血清在凝胶内渗透扩散。
3、使用吸水纸和清洗将未沉淀的蛋白质去除，已被沉淀的蛋白质贮留在凝胶内。
4、将蛋白质染色，并将这些免疫沉淀区带的位置与蛋白质经电泳后观察到的异常蛋白区带进行比较。
为了精确识别单克隆区带，样品同时在六条泳道上进行测试。
经电泳后，ELP作为参考泳道以显示电泳后的蛋白质。
其余五条泳道用于鉴定单克隆成分。
通过它（们）与抗血清，γ(IgG)、α(IgA)、μ(IgM)重链和κ、λ轻链（游离和非游离）反应与否进行鉴别。
该技术简单、快速、图象清晰，易于解释结果。
四、方法学溯源自1930年由Tiselius发现了移界电泳（moving boundary eectrophore sis），而后，这种技术的各种局限性已逐渐被区带电泳（zone elecr rophoresis）所克服，区带电泳的条件和支持介质的选择是电泳成败的关键。
通过免疫化学手段观察其电泳特性及抗原特性是鉴定某一蛋白成分最好的方法，免疫固定电泳技术是目前应用最广泛的方法之一。
五、仪器（一）型号：SEBIA HYDRASYS (PN1210)（二）分析和计算参数：1、处理量：约18个样本/小时2、所需样本量：10ul3、检验时间：约55分钟4、重复性：有良好的批内和批间重复性5、电泳参数：电压0－300V（可选至3000V）电流0－500mA功率0－100W。
免疫固定电泳操作规程
免疫固定电泳操作规程一．项目名称免疫固定电泳（HYDRAGEL IMMUNOFIXATION）二．检验方法名称琼脂糖凝胶免疫固定电泳三．方法学原理血清蛋白电泳中出现的异常条带主要存在于β-球蛋白和γ-球蛋白区域，通常疑为单克隆蛋白质并且提示丙球蛋白血症。
为鉴别异常条带，可运用免疫固定技术。
免疫固定电泳是一种简单的技术，电泳后的蛋白质与相应抗体形成复合物和被固定在相应的位置上，通过下列四个步骤：1．蛋白质在琼脂糖凝胶内进行电泳分离。
2．电泳后已分离的蛋白质被固定并产生免疫沉淀：应用固定剂和抗血清加于凝胶表面的泳道上，并让固定剂和抗血清在凝胶内渗透扩散。
3．使用吸水纸和清洗将未沉淀的蛋白质去除，已被沉淀的蛋白质贮留在凝胶内。
4．将蛋白质染色，并将这些免疫沉淀区带的位置与蛋白质经电泳后观察到的异常蛋白区带进行比较。
为了精确识别单克隆区带，样品同时在六条泳道上进行测试。
经电泳后，ELP作为参考泳道以显示电泳后的蛋白质。
其余五条泳道用于鉴定单克隆成分。
通过它（们）与抗血清，γ(IgG)、α(IgA)、μ(IgM)重链和κ、λ轻链（游离和非游离）反应与否进行鉴别。
该技术简单、快速、图象清晰，易于解释结果。
四．方法学溯源自1930年由Tiselius发现了移界电泳（moving boundary eectrophoresis），而后，这种技术的各种局限性已逐渐被区带电泳（zone elecrrophoresis）所克服，区带电泳的条件和支持介质的选择是电泳成败的关键。
通过免疫化学手段观察其电泳特性及抗原特性是鉴定某一蛋白成分最好的方法，免疫固定电泳技术是目前应用最广泛的方法之一。
五．仪器（一）型号：SEBIA HYDRASYS (PN1210)（二）分析和计算参数：1．处理量：约18个样本/小时2．所需样本量：10ul3．检验时间：约55分钟4．重复性：有良好的批内和批间重复性5．电泳参数：电压0－300V（可选至3000V）电流0－500mA功率0－100W六．试剂及配套品（一）试剂1．HYDRAGEL 1 IF试剂盒HYDRAGEL 2 IF试剂盒HYDRAGEL 4 IF试剂盒HYDRAGEL 9 IF试剂盒（1）商标：SEBIA（2）包装规格：10测试/20测试/40测试/90测试（3）货号：PN4301/ PN4302/ PN4304/PN43092．脱色液（1）商标：SEBIA（2）包装规格：Pack for 10×100ml（3）货号：PN4540（4）成分：柠檬酸3．洗涤液（1）商标：SEBIA（2）包装规格：Pack for 10×80ml（3）货号：PN4541（4）成分：叠氮钠4．稀释剂（1）商标：SEBIA（2）包装规格：Pack for 1×5ml（3）货号：PN4587（二）配套品：IF试剂抗体（1）商标：SEBIA(2 ) 包装规格：Pack for 5×1ml（3）PN4315七．操作步骤㈠开机，启动电泳仪。
Sebia血清免疫固定SOP
Sebia血清蛋白免疫固定标准操作流程一、实验前的准备耗材：小炮弹管或生化小杯子、加样枪2把（5-50ul和20-200ul）、蒸馏水或去离子水500ml、二、操作流程：1、打开机器，选择电泳程序“IF”，选择染色程序“”，检查1、血清稀释并混匀1、加样梳点样（以4人份为例）其中1、8、15泳道不加样。
3、10泳道加各自的LgG。
剩下其余各泳道加样10μL。
加完样的加样梳放置保湿盒内，最后一个样品加完后放至保湿盒内（齿朝上，扩散5分钟）。
2、海绵条放置将海绵条挂在电极丝两端的金属钉上，海绵较凸起部分面向操作人员。
4、胶片处理（免疫固定专用胶片、薄滤纸）电泳模块的温控板下方三分之一处用加样枪加200μL蒸馏水；从黑色底框边开始放置胶片，使水层与温控板充分贴合，没有气泡；用薄滤纸迅速吸取胶片上多余的水分；放下黑色的运送器，将加样梳插至第6齿上，合上机盖。
5、电泳，选择免疫固定电泳程序，开始。
6、加抗血清（抗血清、基准色卡、抗体杯架、推动安装架）扔掉使用过的加样梳和海绵条，移除运送器。
将不锈钢固定架置于温控板底端；将抗体杯架装在推动安装架上，再放到胶片和固定架上；照基准色卡对应的孔加相应的抗血清（10μL）。
均匀地将抗血清推到各通道上。
7、孵育（按开始键继续）8、用厚滤纸（光滑面朝下）充分吸去多余的凝胶后，扔掉厚滤纸，继续至自动烘干。
9、染色、褪色、清洗、烘干取出胶片，用胶片固定架将其固定后插入染色槽，选择免疫固定染色程序，开始。
10、胶片扫描将上一步骤处理完的胶片和固定架插入扫描槽，从电脑操作界面选择扫描操作。
免疫固定电泳操作规程精编WORD版
免疫固定电泳操作规程精编W O R D版IBM system office room 【A0816H-A0912AAAHH-GX8Q8-GNTHHJ8】免疫固定电泳操作规程一．项目名称免疫固定电泳（HYDRAGEL IMMUNOFIXATION）二．检验方法名称琼脂糖凝胶免疫固定电泳三．方法学原理血清蛋白电泳中出现的异常条带主要存在于β-球蛋白和γ-球蛋白区域，通常疑为单克隆蛋白质并且提示丙球蛋白血症。
为鉴别异常条带，可运用免疫固定技术。
免疫固定电泳是一种简单的技术，电泳后的蛋白质与相应抗体形成复合物和被固定在相应的位置上，通过下列四个步骤：1．蛋白质在琼脂糖凝胶内进行电泳分离。
2．电泳后已分离的蛋白质被固定并产生免疫沉淀：应用固定剂和抗血清加于凝胶表面的泳道上，并让固定剂和抗血清在凝胶内渗透扩散。
3．使用吸水纸和清洗将未沉淀的蛋白质去除，已被沉淀的蛋白质贮留在凝胶内。
4．将蛋白质染色，并将这些免疫沉淀区带的位置与蛋白质经电泳后观察到的异常蛋白区带进行比较。
为了精确识别单克隆区带，样品同时在六条泳道上进行测试。
经电泳后，ELP作为参考泳道以显示电泳后的蛋白质。
其余五条泳道用于鉴定单克隆成分。
通过它（们）与抗血清，γ(IgG)、α(IgA)、μ(IgM)重链和κ、λ轻链（游离和非游离）反应与否进行鉴别。
该技术简单、快速、图象清晰，易于解释结果。
四．方法学溯源自1930年由Tiselius发现了移界电泳（moving boundary eectrophoresis），而后，这种技术的各种局限性已逐渐被区带电泳（zone elecrrophoresis）所克服，区带电泳的条件和支持介质的选择是电泳成败的关键。
通过免疫化学手段观察其电泳特性及抗原特性是鉴定某一蛋白成分最好的方法，免疫固定电泳技术是目前应用最广泛的方法之一。
五．仪器（一）型号：SEBIA HYDRASYS (PN1210)（二）分析和计算参数：1．处理量：约18个样本/小时2．所需样本量：10ul3．检验时间：约55分钟4．重复性：有良好的批内和批间重复性5．电泳参数：电压0－300V（可选至3000V）电流0－500mA功率0－100W六．试剂及配套品（一）试剂1．HYDRAGEL 1 IF试剂盒HYDRAGEL 2 IF试剂盒HYDRAGEL 4 IF试剂盒HYDRAGEL 9 IF试剂盒（1）商标：SEBIA（2）包装规格：10测试/20测试/40测试/90测试（3）货号：PN4301/ PN4302/ PN4304/PN43092．脱色液（1）商标：SEBIA（2）包装规格：Pack for 10×100ml（3）货号：PN4540（4）成分：柠檬酸3．洗涤液（1）商标：SEBIA（2）包装规格：Pack for 10×80ml（3）货号：PN4541（4）成分：叠氮钠4．稀释剂（1）商标：SEBIA（2）包装规格：Pack for 1×5ml（3）货号：PN4587（二）配套品：IF试剂抗体（1）商标：SEBIA(2 ) 包装规格：Pack for 5×1ml（3） PN4315七．操作步骤㈠开机，启动电泳仪。
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免疫固定电泳操作规程
一．项目名称
免疫固定电泳(ＨYDRAGEL ＩＭMＵNOＦＩXATＩＯN)
二．检验方法名称
琼脂糖凝胶免疫固定电泳
三．方法学原理
血清蛋白电泳中出现得异常条带主要存在于β-球蛋白与γ-球蛋白区域,通常疑为单克隆蛋白质并且提示丙球蛋白血症。
为鉴别异常条带,可运用免疫固定技术。
免疫固定电泳就是一种简单得技术,电泳后得蛋白质与相应抗体形成复合物与被固定在相应得位置上,通过下列四个步骤:
１。
蛋白质在琼脂糖凝胶内进行电泳分离。
2.电泳后已分离得蛋白质被固定并产生免疫沉淀:应用固定剂与抗血清加于凝胶表面得泳
道上,并让固定剂与抗血清在凝胶内渗透扩散。
3.使用吸水纸与清洗将未沉淀得蛋白质去除,已被沉淀得蛋白质贮留在凝胶内。
4、将蛋白质染色,并将这些免疫沉淀区带得位置与蛋白质经电泳后观察到得异常蛋白区带
进行比较。
为了精确识别单克隆区带,样品同时在六条泳道上进行测试。
经电泳后,ＥLP作为参考泳道以显示电泳后得蛋白质。
其余五条泳道用于鉴定单克隆成分。
通过它(们)与抗血清,γ(IｇＧ)、α(IgＡ)、μ(IgM)重链与κ、λ轻链(游离与非游离)反应与否进行鉴别。
该技术简单、快速、图象清晰,易于解释结果、
四．方法学溯源
自１930年由Ｔiseｌius发现了移界电泳(moｖing bｏundaｒy eｅｃtrｏpｈoresis),而后,这种技术得各种局限性已逐渐被区带电泳(zoｎe ｅlecｒrｏｐhoresis)所克服,区带电泳得条件与支持介质得选择就是电泳成败得关键、通过免疫化学手段观察其电泳特性及抗原特性就是鉴定某一蛋白成分最好得方法,免疫固定电泳技术就是目前应用最广泛得方法之一。
五．仪器
（一）型号:SEＢIA ＨYDＲASYＳ(ＰN1210)
（二）分析与计算参数:
1．处理量:约18个样本/小时
2．所需样本量:１０ul
3．检验时间:约55分钟
4．重复性:有良好得批内与批间重复性
5．电泳参数:电压0-30０V(可选至30０0V)
电流0－500mＡ
功率０－１00W
六．试剂及配套品
（一）试剂
1．HYDＲＡGＥL 1 IF试剂盒
ＨYＤＲAGEＬ２IF试剂盒
HYDRAGEL 4 IF试剂盒
HYDRAＧEL 9 IF试剂盒
（1）商标:SEBIA
（2）包装规格:1０测试／20测试/40测试/90测试
（3）货号:PN43０1/ PＮ43０2/ PN４３0４/PN43０9
2．脱色液
(1) 商标:SEBIA
(2) 包装规格:Paｃｋfｏr 10×10０ｍl
(3) 货号:PＮ454０
(4) 成分:柠檬酸
3。
洗涤液
（1）商标:SEBＩA
（2）包装规格:Paｃk for 10×80ｍｌ
（3）货号:PN4541
（4）成分:叠氮钠
4、稀释剂
（1）商标:SＥBＩA
（2）包装规格:Pａck foｒ1×5ml
（3）货号:PN4５87
（二）配套品:ＩＦ试剂抗体
(1) 商标:SEBIA
(2 ) 包装规格:Pack foｒ5×1ml
(3)PN４3１５
七．操作步骤
㈠开机,启动电泳仪、
㈡将1只(用于1,２IF),2只(用于4ＩF)或3只(用于9IＦ)点样梳置于整表面,有数字得一端向上,在2分钟内完成每块加样梳得加样,每孔加1０uｌ样品,然后齿梳向上把加样梳放于湿盒内5分钟。
㈢选择相应得“IF"电泳程序,
㈣从包装袋内取出缓冲条,将其固定在电极支架背侧得钉上,再取出凝胶,用薄滤纸快速轻轻地吸去凝胶表面多余得液体,在温控板表面下1/3处加20０ｕl蒸馏水或去离子水,将凝胶片底边紧靠框架底边,边缘对齐边线,略弯曲凝胶片慢慢放平,注意凝胶片下面勿出现气泡、
㈤自然放下支架,从湿盒中取出加样梳并去除齿梳下得保护支架,1、２ＩF得点样梳置于支架6号位,4IＦ得２只点样梳则分别置于3号与9号,9IＦ得3只点样梳则分别置于2,６号与１0号,注意点样梳上得数字必须面对操作者,关上电泳舱盖,按下键盘左侧得绿色箭头“ＳTARＴ"键,电泳开始,确保仪器右侧得空气通道不被堵塞、
㈥电泳仪自动发出蜂鸣声,提示电泳结束,进行免疫固定操作。
打开电泳盖,将加样梳与缓冲条丢弃,移走两支架,用湿纸巾擦拭电极丝,将抗体加样条装入抗体加样架上,按如下要求将动物血清抗体加入抗体加样条:
··Hydrａsys 1 IF用6孔抗体加样条:每孔加８μl抗体
··Hydraｓｙs 2/4IF用１5孔抗体加样条:2人份每孔加8μl抗体,4人份每孔加1２μl抗体
··Hｙｄｒaｓys 9 IF用18孔抗体加样条: 每孔加8μｌ抗体
固定好抗体加样架,将抗体加到凝胶片上。
然后关上电泳舱盖,按“Ｓtａrt”键开始免疫固定。
㈦10分钟后,电泳仪自动发出蜂鸣声,提示“ＰＡPＥR BＬOTＴＩNG" ,移走抗体加样架,
弃去抗体加样条,放一厚滤纸光面向下盖于于凝胶表面, 左手固定好滤纸,右手手指用力得摩擦滤纸表面,注意勿将滤纸移动,关闭电泳舱盖,按“Sｔart”键开始凝胶表面多余抗体得吸收。
㈧３分钟后,电泳仪自动发出蜂鸣声,打开电泳舱盖,移去滤纸,关闭舱盖,按“Stａｒt”键开始凝胶片得干燥、
㈨６分钟后,电泳仪自动发出蜂鸣声,打开电泳舱盖,取出凝胶片,用湿纸巾擦拭温控板,将胶片固定于凝胶支架上放入染色空间中,在检查洗液瓶中就是否有40０mｌ洗液,染色液瓶内就是否有300ｍl染色液,脱色液瓶内就是否有10０0mｌ脱色液以及就是否排空了废液瓶后,菜单上选择染色指令,按“Sｔarｔ”键开始染色。
㈩在染色、脱色以及干燥步骤完成后,电泳仪自动发出蜂鸣声,取出凝胶支架,将烘干得胶片取下。
八．临床意义
对多发性骨髓瘤、Waldｅｎstrom巨球蛋白血症、分泌型骨髓瘤、轻链病、重链病等研究有重大意义。
1、正常人体内有正常得免疫球蛋白分布,故免疫固定电泳图谱可见均匀分布得IgG/A/Ｍ
2、在IgG/Ａ／M及Ｋappar、lａmmda得泳道上发现浓集得条带即为病理性得。
九．标本要求
㈠取新鲜血清进行分析,根据临床实验室对各种试验所使用得操作程序进行血清样本得采集,样本置于冰箱内(2～８℃)可保存一周,若冰冻可延长保存时间至少一个月。
冰冻得血清样本加入0、０2g/dl得叠氮钠可以增加其存放稳定性。
㈡为避免抗原过剩引起得带现象,血清于加样前应先作如下稀释,并混匀、
㈢特殊Array情况
·当总免
疫球蛋
白得水
平〉20ｇ/L,稀释剂量加倍(除了ELP泳道)
·当总免疫球蛋白水平<5g/L,稀释剂量减半(除了ELP泳道)
·冷藏或冰冻后,某些样本(尤其就是含有冷球蛋白或冷凝胶)可能变得粘稠或混浊。
这种样本
可能由于扩散障碍而存在点样问题。
在这样情况下,加２５ul液化剂于7５mｌ血清中,混
匀1５秒。
然后按规定程序继续进行。
·某些单克隆蛋白质可能因多聚体而导致所有得免疫固定泳道上均出现单克隆片段、在这样情况下(i)准备1％β-巯基乙醇(这种还原剂可在室温于未封闭微管内保存１周)(iｉ)加２５ul 还原剂于75ul血清中(iii)混匀并令其反应至少15分钟(至多３小时)后按规定程序继续进行。
㈣避免使用血浆标本。
十。
操作注意事项
㈠为达到最佳检测效果,同一试剂盒内得所有组分必须一并使用。
㈡用薄滤纸吸去凝胶表面多余液体时,接触时间不能太长,应快速移去,以免凝胶脱水。
㈢注意先挂缓冲条再放凝胶片,缓冲条取出时应均匀挤捏使缓冲液能分布均匀。