基因工程试卷2
2019届人教版 基因工程 单元测试2
基因工程单元测试学校:___________姓名：___________班级：___________考号：___________一、单选题1．如图是抗虫棉的培育过程，有关该过程叙述错误的是（）A. 抗虫棉的抗虫性状不一定能稳定遗传B. 抗虫基因的插入不会改变受体细胞的染色体结构C. 受体细胞除去细胞壁更利于基因的导入D. 通过Ti质粒上的抗性基因筛选试管苗【答案】D【解析】以一个基因整合到染色体上为例，抗虫基因整合在一对同源染色体中的1条，转基因抗虫棉不一定是纯合子，故不一定稳定遗传，A正确；基因工程属于基因重组，基因对于染色体来说就是一个位点，不会影响染色体结构，B正确；植物细胞除去细胞壁后有利于外源基因的导入，C正确；通过Ti质粒上的抗性基因筛选受体细胞中是否含有重组质粒，并不是筛选试管苗，筛选试管苗是做抗虫性检测，故选D。
考点：本题考查基因工程的原理及技术，意在考查能从课外材料中获取相关的生物学信息，并能运用这些信息，结合所学知识解决相关的生物学问题的能力。
2．有关PCR，下列说法错误的是A．设计的引物要有两种B．设置循环变化的温度并由ATP为反应供能C．将不断消耗引物和原料D．原理是DNA双链复制，遵循碱基互补配对原则【答案】B【解析】PCR设计的引物要有两种, 将不断消耗引物和原料, 原理是DNA双链复制，遵循碱基互补配对原则, A、C、D正确；设置循环变化的温度由机器提供的热能，B错误。
【考点定位】 PCR3．牛奶中一般不含血清蛋白，今年新进的一批奶牛，牛奶中含血清蛋白，这批牛是（）A.转抗凝血酶基因牛B.转生长激素基因牛C.转α抗胰蛋白酶牛D.转血清蛋白基因牛【答案】D【解析】牛奶中本来不含血清蛋白，现在的牛奶中含有了血清蛋白，说明这批奶牛是转血清蛋白基因牛。
4．如下图是DNA分子在不同酶的作用下所发生的变化，下列选项中依次表示限制酶、DNA聚合酶、DNA连接酶、解旋酶作用的正确顺序是A. ①②③④B. ①③④②C. ①④②③D. ①④③②【答案】B【解析】限制酶能够识别双链DNA分子的某种特定核苷酸序列，并且使每一条链中特定部位的两个核苷酸之间的磷酸二酯键断裂，形成黏性末端，因此作用于①；DNA聚合酶用于DNA分子的复制，能在单链上将一个个脱氧核苷酸连接起来，因此作用于③；DNA连接酶能在具有相同碱基末端的两个DNA片段之间形成磷酸二酯键，因此作用于④；解旋酶能够将DNA分子的双螺旋解开，故作用于③，故B正确。
高二生物基因工程练习题
高二生物基因工程练习题基因工程是一种通过改变生物体的遗传信息来获得特定目标的技术方法。
它可以被应用于医学、农业、工业等领域，为人类带来巨大的影响和改变。
本文将介绍一些高二生物基因工程练习题，以帮助学生更好地理解和掌握这一知识点。
第一题：请设计一个基因工程实验，将人类胰岛素基因导入大肠杆菌中，并使大肠杆菌能够大量产生胰岛素。
解答：要将人类胰岛素基因导入大肠杆菌中，首先需要获得人类胰岛素基因的DNA序列。
可以通过分离人类胰岛素基因的mRNA，逆转录为cDNA，并进行PCR扩增得到完整的胰岛素基因。
接下来，需要将胰岛素基因与适当的表达载体连接。
选择适宜的限制酶对载体进行线性化，再与胰岛素基因进行连接，利用DNA连接酶使两者连接成一个完整的质粒。
接下来，将质粒导入大肠杆菌中。
可以通过热冲击、电穿孔或者转化等方法将质粒导入大肠杆菌中，并利用选择性培养基筛选出带有胰岛素基因的转化子。
最后，通过培养大肠杆菌，提取并纯化胰岛素。
可以通过机械方法破碎细胞壁，离心去除细胞器和细胞碎片，再利用层析等技术手段纯化出胰岛素。
第二题：基因工程技术在农业领域也有广泛应用。
请设计一个基因工程实验，增加作物的抗虫能力。
解答：要增加作物的抗虫能力，可以选择合适的抗虫基因，并将其导入作物的染色体中。
首先，选择具有抗虫能力的基因，如Bt基因。
Bt基因可以通过特定的细菌株提供，或者利用PCR技术合成。
然后，将抗虫基因与选择性标记基因进行连接，并将其插入适当的表达载体中。
选择性基因可以使转基因植物在筛选培养基上产生抗性，方便筛选。
将载体导入植物体细胞中。
可以利用冷冻法、冲击法或者农杆菌介导转化法等技术将载体导入植物体细胞。
最后，通过筛选培养基培养转基因植株，并进行抗虫性测试。
可以通过饲养害虫或者喷洒虫食物进行实验观察，比较转基因植株与野生型植株之间的虫害程度。
以上是两道高二生物基因工程练习题的解答。
通过这些实验题，学生不仅可以巩固对基因工程技术原理的理解，还能够培养实验设计和实施的能力。
人教版试题试卷基因工程及其应用 练习 2
6 .2 基因工程及其应用【巩固教材——稳扎稳打】1．在遗传工程技术中，限制性内切酶主要用于（）A．目的基因的提取和导入 B．目的基因的导入和检测C．目的基因与运载体结合和导入 D．目的基因的提取和与运载体结合2．下列四条DNA分子，彼此间具有粘性末端的一组是（）A．①② B．②③ C．③④ D．②④3．DNA连接酶的主要功能是（）A．DNA复制时母链与子链之间形成的氢键B．粘性末端碱基之间形成的氢键C．将两条DNA末端之间的缝隙连接起来D．将碱基、脱氧核糖、磷酸之间的键连接起来4．下列关于运载体的叙述中，错误的是（）A．与目的基因结合后，实质上就是一个重组DNA分子B．对某种限制酶而言，最好只有一个切点，但还要有其他多种限制酶的切点C．目前最常用的有质粒、噬菌体和动植物病毒D．具有某些标记基因，便于对其进行切割【重难突破——重拳出击】5．采用基因工程的方法培育抗虫棉，下列导入目的基因的作法正确的是①将毒素蛋白注射到棉受精卵中②将编码毒素蛋白的DNA序列，注射到棉受精卵中③将编码毒素蛋白的DNA序列，与质粒重组，导人细菌，用该细菌感染棉的体细胞，再进行组织培养④将编码毒素蛋白的DNA序列，与细菌质粒重组，注射到棉的子房进入受精卵（）A．①② B．②③C．③④ D．④①6．植物学家在培育抗虫棉时，对目的基因作了适当的修饰，使得目的基因在棉花植株的整个生长发育期都表达，以防止害虫侵害。
这种对目的基因所作的修饰发生在（）A．内含子 B．外显子 C．编码区 D．非编码区7．质粒是基因工程最常用的运载体，下列有关质粒的说法错误的是（）A．质粒不仅存在于细菌中，某些病毒也具有B．根瘤菌、圆褐固氮菌的固氮基因存在于质粒上C．质粒为小型环状DNA分子，存在于核(区)外的细胞质基质中D．质粒能够在宿主细胞中稳定保存，并在宿主细胞内复制8．70年代基因工程技术刚兴起的时候，都是以微生物作为实验材料，且必须在“负压”(低于外界的大气压)的实验室里操作。
复习题 2基因重组与基因工程
复习题 2 基因重组与基因工程一、A型题1.实验室内常用的连接外源性DNA和载体DNA的酶是：（ A ）A．DNA连接酶B．DNA聚合酶ⅠC．DNA聚合酶ⅡD．DNA聚合酶ⅢE．反转录酶2.用来鉴定DNA的技术是：（ B ）A．Northern印迹B．Southern印迹C．Western印迹D．亲和层析E．离子交换层析3.下列那项不是重组DNA技术中常用的工具酶：（ D ）A．限制性核酸内切酶B．DNA连接酶C．DNA聚合酶Ⅰ D．RNA聚合酶E．反转录酶4.关于限制性核酸内切酶的叙述，下列哪项是错误的？（ E ）A．限制性核酸内切酶分为三类，用于基因工程的为Ⅱ酶B．限制性核酸内切酶切割后可产生粘性末端或平端C．识别的核苷酸序列个数可以是6个或8个D. 识别的序列一般具有回文结构E．识别的DN A为单链5.关于基因工程的叙述，下列哪项是错误的？（ B ）A．基因工程也称基因克隆B．只有质粒DNA可作为载体C．重组体DNA转化或转染宿主细胞D．需获得目的基因E．需对重组DN A进行纯化、筛选6.有关质粒的叙述，下列哪项是错误的？（ E ）A．小型环状双链DNA分子B．可小到2～3Kb大到数百个KbC．能在宿主细胞中独立自主地进行复制D．常含有耐药基因E．只有一种限制性核酸内切酶切口7．下列哪项不是重组DN A的连接方式？（C ）A．粘性末端与粘性末端的连接B．平端与平端的连接C. 粘性末端与平端的连接D．人工接头连接E．同聚物加尾连接8．DNA克隆不包括下列哪项步骤？（ E ）A．选择一个适合的载体B．限制性核酸内切酶在特异位点裂解质粒和目的基因C．用连接酶连接载体DNA和目的DNA，形成重组体D．用载体的相应抗生素抗性筛选含重组体的细菌E．重组体用融合法导入细胞9．基因重组是指DNA分子的：（ A ）A．共价连接B．氢键连接C．离子键连接D．交换E．退火10．在分子生物学中，重组DNA又称为：（ D ）A.酶工程B.蛋白质工程C.细胞工程D.基因工程E.DNA工程11．基因工程中，不常用到的酶是（ E ）A．限制性核酸内切酶 B．DNA聚合酶C．DNA连接酶D．逆转录酶E．DNA解酶12．能识别DNA的特异序列，并在识别位点或其周围切割双链DNA的一类酶称为：（ B ）A. DNA内切酶 B．限制性内切核酸酶C．非限制性内切核酸酶 D．限制性外切核酸酶E．非限制性外切核酸酶13．cDNA是指：（ A ）A．在体外经反转录合成的与RNA互补的DNAB．在体外经反转录合成的与DNA互补的DNAC．在体外经反转录合成的与RNA互补的RNAD．在体内经反转录合成的与RNA互补的RNAE．在体内经反转录合成的与RNA互补的DNA14．质粒的分子结构是：（ A ）A．环状双链DNA B．环状单链DNA C．环状单链RNAD．线状双链DNA E．线状单链DNA15．聚合酶链式反应常常缩写为：（ E ）A．PRC B．PER C．PDR D．BCR E．PCR16．用于PCR反应的酶是：（ E ）A．DNA连接酶B．碱性磷酸酶C．逆转录酶D．限制性内切核酸E．Taq DNA聚合酶17．基因工程中使目的基因与载体拼接的酶是：（ C ）A．DNA聚合酶B．RNA聚合酶C．DNA连接酶D．RNA连接酶E．限制性核酸内切酶18．α互补筛选属于：（C ）A．抗药性标志筛选B．酶联免疫筛选 C．标志补救筛选D．原位杂交筛选E．免疫化学筛选19．确切地讲，cDNA文库包含：（ E ）A．一个物种的全部基因信息B．一个物种的全部RNA信息C．一个生物体组织或细胞的全部基因信息D．一个生物体组织或细胞的全部RNA信息E．一个生物体组织或细胞所表达mRNA信息20．下烈描述最能确切表达质粒DNA作为克隆载体特性的是：（D ）A．小型环状双链DNA分子B．携带有某些耐药基因C．在细胞分裂时恒定地传递给子代细胞D．具有自我复制能力E．获得目的基因21.基因工程中常用限制性内切酶Ⅱ的识别序列，正确的说法是：（ E ）A.聚胞苷酸B.聚腺苷酸C.6或8个任意核苷酸D.4或6个任意核苷酸E 具有回文结构22．基因工程的基本过程不包含：（ E ）A.DNA重组体的形成及转化B.限制酶的切割C.载体及目的基因的分离D.重组体的筛选与鉴定E.重组体的序列分析23.有关理想质粒载体的特征，正确的是：（ B ）A.其复制受宿主控制B.含有多种限制性内切酶的单一切点C．含有同一限制酶的多个切点D．为线性单链DNAE．不含耐药基因24.下列那个物质一般不用作基因工程的载体：（ C ）A．噬菌体B．质粒C．大肠杆菌基因组D．反转录病毒DNAE．人工酵母染色体25.基因工程的操作程序可简单的概括为：（E ）A．将重组体导入宿主细胞并筛选B．限制酶的应用C．将载体和目的基因接合成重组体D．目的基因和载体的分离提纯与鉴定E．分、切、接、转、筛26.基因表达的多级调控不包括：（ A ）A．DNA复制B．转录起始C．转录后加工D. 翻译起始E. 翻译后加工27.下列基因工程中的目的基因的来源，最不常用的是：（ C ）A. 人工合成DNAB．从mRNA合成cDNAC. 从真核生物染色体DNA中直接分离D．从基因文库中获取E．从细菌基因组DNA中直接分离28.Ⅱ型限制性内切酶是：（ B ）A．有内切酶和甲基化酶活性B.仅有内切酶活性，甲基化酶活性由另外一种酶提供C．有外切酶和甲基化酶活性D．限制性识别非甲基化的核苷酸序列E．仅有外切酶活性，甲基化酶活性由另外一种酶提供29.基因工程操作应用的许多载体质粒都有抗生素的抗性基因，这是为了便于：（ D ） A．外源基因插入质粒B.宿主菌的生物繁殖C．质粒的转化D．带有目的基因的宿主菌的筛选E．目的基因的表达30.有关目的基因与载体连接的叙述错误的是：（ E ）A.可以同一限制酶切割产生粘性末端连接B.平末端切口可采用“尾接法”C．平末端切口可直接连接D．均需DNA连接酶参与E．不同限制型内切酶切割不能连接1．基因工程的单元操作顺序是（ A ）Ａ．酶切，连接，转化，筛选，验证Ｂ．酶切，转化，连接，筛选，验证Ｃ．连接，转化，筛选，验证，酶切Ｄ．验证，酶切，连接，筛选，转化Ｅ．酶切，连接，筛选，转化，验证2．下列五个DNA 片段中含有回文结构的是（D、E ）Ａ．GAAACTGCTTTGAC Ｂ．GAAACTGGAAACTGＣ．GAAACTGGTCAAAG Ｄ．GAAACTGCAGTTTCＥ．GAAACTGCAGAAAG3．T 4 -DNA 连接酶是通过形成磷酸二酯键将两段DNA 片段连接在一起，其底物的关键基团是（ D ）Ａ．2' -OH 和5' -P Ｂ．2' -OH 和3' -PＣ．3' -OH 和2' -P Ｄ．3' -OH 和5' -PＥ．5' -OH 和3' -P4．噬菌体l-DNA 体外包装的上下限是天然l-DNA 长度的（D ）Ａ．25 - 50 % Ｂ．50 - 100 %Ｃ．75 - 100 % Ｄ．75 - 105 %Ｅ．100 - 125 %8．分子杂交的化学原理是形成（E ）Ａ．共价键Ｂ．离子键Ｃ．疏水键Ｄ．配位键Ｅ．氢键9．促红细胞生长素（EPO ）基因能在大肠杆菌中表达，但却不能用大肠杆菌的基因工程菌生产人的促红细胞生长素，这是因为（ E ）Ａ．人的促红细胞生长素对大肠杆菌有毒性作用Ｂ．人的促红细胞生长素基因在大肠杆菌中极不稳定Ｃ．大肠杆菌内毒素与人的促红细胞生长素特异性结合并使其灭活Ｄ．人的促红细胞生长素对大肠杆菌蛋白水解酶极为敏感Ｅ．大肠杆菌不能使人的促红细胞生长素糖基化10．鸟枪法克隆目的基因的战略适用于（ A ）Ａ．原核细菌Ｂ．酵母菌Ｃ．丝状真菌Ｄ．植物Ｅ．人类11．cDNA第一链合成所需的引物是（D ）Ａ．Poly A Ｂ．Poly CＣ．Poly G Ｄ．Poly T Ｅ．发夹结构12．cDNA法获得目的基因的优点是（ B ）Ａ．成功率高Ｂ．不含内含子Ｃ．操作简便Ｄ．表达产物可以分泌Ｅ．能纠正密码子的偏爱性13．人工合成DNA 的单元操作包括（ E ）I 去保护II 偶联III 封端IV 氧化Ａ．I + II Ｂ．II + IVＣ．I + II + III Ｄ．II + III + IV Ｅ．I + II + III + IV二、B型题A．抗药性筛选B．分子杂交筛选C．RNA反转录D．免疫学方法 E．体外翻译1．用于鉴定质粒是否转化的一般方法是：（ A ）2．用于鉴定转化子细胞是否含有目的基因的常用方法是：（ B ）3．利用目的基因表达产物的特异性抗体来筛选含有目的基因的转化子细胞价方法是：（D ）A．限制性核酸内切酶B．DNA连接酶 C．反转录酶D. Taq DNA聚合酶E．碱性磷酸酶4.识别DNA回文结构并对其双链进行切割的是：（ A ）5.用于PCR反应的酶是：（ D ）6.将目的基因与载体进行拼接的酶是：（ B ）A．转染B．转化C．感染D．转导E．转位7．以质粒为载体，细菌为宿主的导入方式是：（ B ）8．以噬菌体为载体，细菌为宿主的导入方式是：（D ）9．以病毒为载体，哺乳动物细胞为宿主的导入方式是：（ C ）A.94℃B.85℃C.50℃D.72℃E.100℃10.PCR变性温度一般为：（ A ）11.PCR退火温度一般为：（C ）12.PCR延伸温度一般为：（ D ）A分 B 切 C接 D 转 E 筛13．获取目的基因属于基因工程中的步骤是（ A ）14.DNA连接酶用于基因工程中的步骤是（ C ）15.DNA重组子转化宿主细胞的步骤是（ D ）16.限制性内切酶切割目的基因和载体的步骤是（ B ）17.对含有DNA重组体的宿主细胞进行筛选的步骤是（ E ）三、C型题A、含有该生物的全部基因B、含有该生物的结构基因C、两者都是D、两者都不是1、基因组文库（ A ）2、cDNA文库（ B ）A、需要逆转录酶B、需要限制性内切酶C、两者都是D、两者都不是3、建立cDNA文库（ C ）4、建立基因组文库（ B ）A、连接酶B、逆转录酶C、两者都是D、两者都不是5、建立cDNA文库需要（C ）6、建立基因组文库需要（ A ）四、X型题1.可用于基因工程载体的DNA分子有：( BDE )A．染色体DNA B．病毒DNA C．细菌DNAD．噬菌体DNA E．质粒DNA2.重组DNA技术的基本过程包括：( ACDE )A．目的基因的获取B．PCR反应C．克隆载体的构建D．目的基因与载体的连接E．重组体分子导入受体菌3.基因克隆又称为：( AC )A．重组DNA B．重组RNA C．DNA克隆D．RNA克隆E．蛋白质复制4.组成PCR反应体系的物质包括：( BD )A．RNA引物B．Taq DNA聚合酶C．RNA聚合酶D．DNA模板E．ddNTP5.对于重组体的筛选，属于直接选择法的是：( BCD )A．免疫化学法B．原位杂交法C．Southern印迹D．补救标志筛选E．抗药性标志筛选6.对于重组体的筛选，属于非直接选择法的是：( AE )A．免疫化学法B．原位杂交法C．Southern印迹D．补救标志筛选E．酶联免疫筛选7.限制性核酸内切酶切割DNA时可产生：( ABCE )A．5’粘性末端B．3’粘性末端C．平末端D．单链缺口 E．粘性末端8.基因工程中目的基因的来源有：( ABCDE )A．化学合成B．PCR合成C．cDNA文库D．基因组文库E．组织细胞中染色体DNA直接提取9.基因工程中外源性基因又称为：( ABD )A．目的基因 B．目的DNA C．目的RNAD．target DNA E．外源RNA10．重组DNA技术中常用的工具酶有：( ABCDE )A．限制性核酸内切酶B．DNA聚合酶ⅠC．DNA连接酶D．反转录酶E．末端转移酶11．作为基因工程的载体必须具备的条件是：( ABCD )A．能独立自主复制B．易转化C．易检测（含有抗药性基因等）D．具有限制性内切核酸酶的位点E．易提取获得五、填空题1．基因工程的一个理想的载体必须具备的条件有__至少有一个复制起点____、___有克隆位点、具备转化的功能、遗传标记基因___、___具有较高的装载能力___。
基因工程试题
基因工程试题基因工程是一门研究如何改变、操控和利用生物体的基因结构和功能的学科。
它可以通过改变生物体的基因组，从而改变其遗传性状，并对其进行精确的调控。
基因工程技术的广泛应用在医学、农业、环境、工业等领域具有重要作用。
下面是一些关于基因工程的试题，供大家参考和学习。
试题一：基因编辑技术基因编辑技术是一种通过直接修改生物体基因组DNA序列来实现精确遗传编辑的技术，请简要介绍CRISPR-Cas9系统及其应用。
试题二：转基因作物安全性评价转基因作物是指通过基因工程技术将外源基因导入植物的基因组中，使其获得一定的优势特性。
请简要介绍转基因作物的安全性评价内容和方法。
试题三：基因药物的开发与应用基因药物是通过基因工程技术制备的一类新型药物，具有针对性强、疗效持久等特点。
请以人类胰岛素为例，简要介绍基因药物的开发和应用。
试题四：基因工程在环境修复中的应用基因工程技术在环境修复中有着重要地位，可以利用生物体修复受到污染的土壤、水体等环境。
请以重金属污染土壤修复为例，简要介绍基因工程在环境修复中的应用。
试题五：基因工程在动物育种中的应用基因工程技术在动物育种中有着广泛的应用，可以加速优良基因的传播和培育出具有特定优势的新品种。
请以瘦肉型猪育种为例，简要介绍基因工程在动物育种中的应用。
试题六：基因工程伦理问题基因工程技术的发展也带来了一系列伦理问题，如基因改造的人类是否具有平等的生存权利等。
请简要讨论基因工程伦理问题，并提出你自己的观点。
试题七：基因工程在抗疾病治疗中的前景基因工程技术在抗疾病治疗中具有广阔的前景，包括基因治疗、基因诊断等。
请简要介绍基因工程在抗疾病治疗中的前景和应用。
试题八：基因工程与传统育种的比较基因工程技术与传统育种方法相比，具有许多优势和特点。
请以粮食作物的改良为例，比较基因工程技术和传统育种方法在作物改良中的差异和优势。
以上是关于基因工程的一些试题，希望能够帮助你了解和学习基因工程技术的相关知识。
某大学《基因工程》课程考试试卷(含答案)
某大学《基因工程》课程考试试卷一、名词解释（共10小题，每小题1分，共10分）1、粘性末端2、基因工程3、质粒的不相容性4、基因组文库5、克隆(clone)6、电击转化法7、重组PCR8、限制性酶切图谱法9、质粒10、重组率的定义二、填空题（共10小题，每小题1分，共10分）1、在基因克隆中碱性磷酸单酯酶的主要用途有：A、在用P标记DNA 5′端之前；B、在DNA重组技术中，去除DNA片段的，可防止酶切后的载体的与。
2、载体的功能是运送高效转入；为外源基因提供能力或能力；为外源基因的或提供必要的条件。
三、简答题（共10小题，每小题4分，共40分）1、载体应具备的条件是什么？2、受体细胞应具备的条件？3、蓝白斑筛选原理是什么？4、PCR克隆目的基因的基本程序是什么？5、酵母菌表达外源基因的优势是什么？6、营养缺陷型的哺乳动物受体细胞的遗传标记是什么？7、λ-DNA作为载体的优点是什么？8、巴斯德毕赤酵母表达系统特征及优势是什么？9、融合蛋白表达质粒的构建原则是什么？10、分泌型目的蛋白表达系统的构建策略是什么？四、论述题（1-2每小题8分，3-4题每小题12分，共40分）1、论述PCR原理及引物设计的基本原则。
2、强化转录终止的必要性是什么？3、请论述λ-DNA载体的构建策略是什么。
4、请论述植物基因工程的共整合转化程序和二元整合转化程序及二元整合转化程序的特征。
某大学《基因工程》课程考试试卷答案一、名词解释（共10小题，每小题1分，共10分）1、粘性末端因酶切位点在两条DNA单链上不同（对称）酶切后形成的具有互补碱基的单链末端结构，酶切产生的两个粘性末端很容易通过互补碱基的配对而重新连接起来。
2、基因工程指重组DNA技术的产业化设计与应用，包括上游技术和下游技术两大组成部分。
上游技术指的是基因重组、克隆和表达的设计与构建（即重组DNA技术）；而下游技术则涉及到基因工程菌或细胞的大规模培养以及基因产物的分离纯化过程。
高中生物高考考点81 基因工程(二)-备战2022年高考生物考点一遍过
1．基因工程的操作过程与应用（1）基因工程的操作步骤（2）基因工程的应用：培育转基因植物和转基因动物，生产基因工程药物，进行基因治疗。
（3）目的基因导入不同受体细胞的过程生物种类植物动物微生物常用方法农杆菌转化法显微注射技术感受态细胞法受体细胞体细胞或受精卵受精卵原核细胞转化过程将目的基因插入到Ti质粒的T-DNA上→农杆菌→导入植物细胞→整合将含有目的基因的表达载体提纯→取卵(受精卵)→显微注射→受Ca2＋处理细胞→感受态细胞→重组表达载体DNA分子与感受态细胞到受体细胞染色体的DNA上→表达精卵发育→获得具有新性状的动物混合→感受态细胞吸收DNA分子（4）基因治疗与基因诊断的不同点原理操作过程进展基因治疗基因表达利用正常基因导入有基因缺陷的细胞中，以表达出正常性状来治疗(疾病)临床实验基因诊断碱基互补配对制作特定DNA探针与病人样品DNA混合，分析杂交带情况临床应用2．蛋白质工程（1）流程图写出流程图中字母代表的含义：A．转录，B．翻译，C．分子设计，D．多肽链，E．预期功能。
（2）结果：改造了现有蛋白质或制造出新的蛋白质。
（3）应用：主要集中应用于对现有蛋白质进行改造，改良生物性状。
学科&网考向一目的基因的获取及基因表达载体的构建1．利用基因工程技术可使大肠杆菌生产人的胰岛素，下列相关叙述正确的是A．人和大肠杆菌在合成胰岛素时，转录和翻译的场所都是相同的B．所有的限制酶都只能识别同一种特定的核苷酸序列C．通过检测，大肠杆菌中没有胰岛素产生则可判断重组质粒未导入受体菌D．选用大肠杆菌作为受体细胞主要原因是繁殖快、易培养、产量高【参考答案】D【试题解析】人是真核生物，大肠杆菌是原核生物，真核细胞转录在细胞核内，原核细胞在拟核中，A 错误；不同的限制酶识别不同的核苷酸序列，B错误；通过检测，大肠杆菌中没有胰岛素产生则可判断重组质粒未导入受体菌或虽已导入受体，但没有表达，C错误；D.利用基因工程技术可使大肠杆菌生产人的胰岛素时，选用大肠杆菌作为受体细胞主要原因是繁殖快、易培养、产量高，D正确。
衡水中学2021届高三生物一轮复习-专题37 基因工程(二)
变式训练-5
（2016·江苏高考）下表是几种限制酶识别序列及其切割位点，图1、图 2中标注了相关限制酶的酶切位点，其中切割位点相同的酶不重复标注。 请回答下列问题：
变式训练-5
(1)若 BamHⅠ酶切的DNA末端与 BclⅠ酶切的DNA末端连接，连接部 位的6个碱基对序列为_______，对于该部位，这两种酶________(填“都 能”“都不能”或“只有一种能”)切开。 (2)若用 Sau3AⅠ切图1质粒最多可能获得________种大小不同的DNA片 段。
。
（3）DNA连接酶是将两个DNA片段连接起来的酶，常见的有 和 ，
其中既能连接黏性末端又能连接平末端的是
。
答案
（1）Sau3AⅠ；两种酶切割后产生的片段具有相同的黏性末端； （2）甲和丙；甲中目的基因插入在启动子的上游，丙中目的基因插入在 终止子的下游，二者的目的基因均不能被转录； （3）E·coliDNA连接酶；T4DNA连接酶；T4DNA连接酶。 解析： （1）分析图解可知，限制酶Sau3AⅠ与BamHⅠ切割后形成的黏性末端 相同，因此经BamHⅠ酶切割得到的目的基因可以与上述表达载体被 Sau3AⅠ酶切后的产物连接； （2）在基因表达载体中，启动子位于目的基因的首端，终止子应位于目 的基因的尾端，这样的基因才能表达，图中甲和丙均不符合，所以不能 在宿主细胞中表达目的基因产物； （3）DNA连接酶是将两个DNA片段连接起来的酶，常见的有 E·coliDNA连接酶和T4DNA连接酶，其中T4DNA连接酶既能连接黏性 末端又能连接平末端。
答案
D
解析：
用BglⅡ和Sau3AⅠ切割目的基因，目的基因的两端将形成不同的粘性末 端，若用BglⅡ和Sau3AⅠ切割图乙所示质粒，质粒的两端也将形成这样 两种相同的粘性末端，它们可构成重组DNA分子，A正确；
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华中农业大学本科课程考试评分标准考试课程与试卷类型：基因操作原理姓名：学年学期：学号：考试时间：班级：一、填空题（每小题2分，共30分）1.PCR技术应用广泛，以下不属于PCR应用的为 ___D_____：(A) 随机扩增多态性DNA(RAPD)； (B) 扩增片段长度多态性(AFLP)； (C) RACE； (D) S1 酶作图。
2.λ噬菌体线性 DNA 分子的两端各有一个____12_____个碱基组成的天然黏性末端。
3.PCR扩增有时会出现弥散的条带，以下原因阐述不正确的是___B______：(A) 退火温度过低； (B) 退火温度过高； (C) dNTP 浓度过高； (D) 循环次数过多。
4.下列哪一种酶作用时需要引物____B_____：(A) 末端转移酶； (B) 反转录酶；(C) DNA连接酶； (D) 限制酶。
5.Cosmid 实际上是由_λ噬菌体__和__质粒_____构成的杂合载体，也可以说是带有__cos__序列的质粒。
6.限制性内切酶的命名主要根据__来源菌株属名第一个字母，种名头两个字母以及菌株号、序号_____来确定，以下各种书写方式中哪种或哪几种是正确的____AC____：(A) Pst I;(B) KpnI； (C) Hin dIII; (D) Hind III; (E) T th111I; (F) Bsp1286I； (G) XbaI7.在分子克隆常用的E.coli菌株中Dam 和Dcm 甲基化酶都是有活性的，它们可在DNA的特定位点作甲基化修饰。
而许多限制性内切酶对甲基化是敏感的，一旦所识别的酶切位点被甲基化就不能切割该位点，如Cla I (AT/CGAT)。
请问Cla I不能切割以下哪个或哪些来自dam+ dcm+ E.coli菌株的DNA序列____C_____。
(A) ATCGATA； (B) ATCGATG；(C) ATCGATC； (D) ATCGATT。
8.限制性内切酶有其特定的识别位点，如Eco RI 的识别位点为 ___GAATTC___；有些限制性内切酶切割DNA后可产生带有相同末端的DNA产物，这些酶称为同尾酶，例如__Bam HI__限制性内切酶与___Sau3AI_________限制性内切酶切割DNA形成的末端相同。
（任举一例都可以）9.在基因操作过程中会使用一些多对人体有害的物质, 操作时应小心谨慎, 常用的有害物质有UV light、DEPC、____EB___和____苯酚____等。
（任举一例都可以）10.根据构建方法的不同，基因文库分为基因组文库、cDNA文库等。
在下列文库中_C_是cDNA文库。
(A) YAC文库； (B) PAC文库； (C) 扣减文库； (D) BAC文库。
11.M13KO7是一种辅助噬菌体，可用它帮助噬菌粒制备单链DNA，这是因为以下原因_B_：(A) M13KO7能够进行滚环复制，得到大量的单链噬菌体DNA； (B) M13KO7能够提供成熟包装的蛋白； (C) M13KO7提供了成熟包装所需的信号； (D) M13KO7的10个基因都是正常的。
12.在制作DNA嵌套缺失突变体时主要有3种方法，其核心技术都使用了一种核酸酶，它们分别是__外切核酸酶III__、__BAL31__和___DNaseI___。
13.在核酸杂交过程中，一般都要先做预杂交，这是为了__B__：(A) 做预备试验，寻找最佳反应条件； (B) 封闭背景； (C) 使杂交信号更强； (D) 减少非特异性杂交信号。
14.在许多克隆载体中都使用了 -互补机制来做筛选标记，也就是俗称的“蓝白菌落”筛选，在应用过程中使用了两种引起颜色变化的试剂，它们是___x-gal__和____IPTG__。
15.在基因操作中有些不同的名称具有相同的缩写，例如RT-PCR, 可以是___实时定量PCR__或___反转录PCR___的缩写。
二、名词解释（每小题3分，共21分）1．Star Activity (in restriction enzymes)星星活性，（1’）极端非标准条件下，限制性内切酶切割与识别序列相似的序列，这个改变的俄特殊性称星星活性。
（2’）2．Northern blottingNorthern 杂交，（1’）即DNA与RNA的杂交，与Northern杂交的不同之处在于转移的是RNA而不是DNA。
（1’）Northern 杂交是转录水平的检测，用于检测样品中是否有与探针同源的mRNA分子。
（1’）3．Shuttle vector穿梭载体，（1’）能够在两类不同的宿主中复制、选择和增殖的载体。
（2’）4．Chromosome Walking染色体步查，（1’）采用一段分离自某一重组体一端的非重复DNA片段作为探针，以鉴定含有相邻序列的重组克隆的方法称染色体步查。
（2’）5．Klenow fragmentKlenow片段，（1’）大肠杆菌DNA聚合酶经枯草杆菌蛋白酶水解的大片段。
（1’）具有5’—3’聚合和3’—5’外切活性。
（1’）6．Universal primer通用引物，（1’）参照载体上多克隆位点两侧的一段固定DNA序列设计的引物，（1’）用于分析插入片段的序列。
（1’）7．Competent cells感受态细胞，（1’）能够吸收外源DNA的细胞称作感受态细胞。
（2’）三、分析简答题（每小题5分，共25分）1. 人类基因组的大小约为3000Mb，测序方法有两种，即图谱测序法和全基因组鸟枪法。
这两种测序结果和分析于2001年分别发表在《Nature》和《Science》杂志上。
在第一种方法中，首先将靶基因组部分酶切产生大分子DNA片段，经电泳分离纯化克隆到BAC载体中。
根据分子标记和指纹图谱构建BAC克隆重叠群，挑选单个克隆采取鸟枪法测序。
在每个BAC克隆内根据测序结果进行顺序拼接，并与BAC克隆重叠群物理图谱对比，完成全部主体顺序的组装(The International Human Genome Sequencing Consortium. Initial sequencing and analysis of the human genome. Nature, 2001, 409: 860~921)。
假如你是测序工作组中的一员，由你负责某个BAC克隆子中约100kb的序列测定，该如何实施？①分离纯化该质粒，构建外源DNA片段大小2-5kb的亚文库。
（1’）②用构建亚文库的载体上的通用引物作大规模末端测序。
（1’）③测序的各reads 拼接，得到contig。
（1’）④借助PCR等手段，填补contig中的gap。
（1’）⑤通过酶切图谱验证测序结果。
（1’）体是常用的一种。
A/T载体也有多种工作方式，下图是pCR2.1-TOPO 载体的核心工作原理示意图。
请说出A/T载体克隆PCR产物的一般原理，以及pCR2.1-TOPO 载体所拥有的特殊工作方式。
①用不具有3’-5’外切活性的高温DNA polymerase（如Taq）作PCR扩增时，其产物3’多一个碱基A。
（1’）②在A/T载体的3’未端各有一个突出的碱基T，用于和A配对，从而克隆Taq polymerase的PCR产物。
（2’）③Topoisomerase第274位的酪氨酸与DNA 5’端磷酸之间形成的磷酸二酯键是不稳定的，容易受到DNA 3’羟基的攻击。
TOPO 载体利用其末端自身携带的Topoisomerase形成磷脂键，不需要外加连接酶。
（2’）3. 从苏云金芽胞杆菌拟步行甲亚种YBT-1765中克隆得到一个质粒pBMB175，选用限制性内切酶Cla I和Xba I对该质粒进行酶切分析，得到以下如表所示的结果。
请根据所得的酶切片段大小，标出Cla I酶切位点在质粒pBMB175上的位置。
Xba限制片段的大小（kb）片段序号ClaⅠ XbaⅠ Cla I+Xba I1 11.0 8.8 7.62 4.2 5.4 3.03 1.0 2.44 1.25 1.0总计15.2 15.2 15.23.0kb 和14.0 kb ，答对一处给2分4．许多限制性内切酶切割DNA 后可产生相同的突出末端，这些产物彼此之间可进行粘端连接。
但在连接产物中相应位置的酶切位点就不存在了。
例如某DNA 片段用Cla I (AT/CGAT)酶切后，可与Acc I (GT/CGAC)切割的载体连接，但在连接点处的Cla I 和Acc I 位点都消失了，相应的序列变成了ATCGAC 。
下图最上面的序列为Cla I/ Acc I 连接处的DNA 序列。
通过这些步骤可在连接点处恢复Cla I 位点，请指出每一步所用的关键酶和底物。
1.Sph I2.Klenow （或T 4 T 7 polymerase ）3.过量dATP4.S1酶（或绿豆核酸酶）5.ligase 每空一分Recovering Cla I--ATCGACAAGCTT----TAGCTGGCC AA----ATCGA TT-- --TAGCT AA----ATCGATT-- --TAGCTAA----ATCGA CCGGCATGCAAGCTT----TAGCT GGCCGTACGTTCGAA----ATCGACCGGCATG CAAGCTT----TAGCTGGCC GTACGTTCGAA--D ( 5 )C ( 4 )B ( 2 ， 3 )A( 1 )5. 用于cDNA 克隆的方法很多,下图是 SMART 技术构建全长cDNA 文库的基本原理流程图。
请叙述其核心步骤。
①polyT 引物合成cDNA 第一链，反转录酶具有末端转移酶活性，自动在产物末端加上几个d （C ）。
（2’）②反转录过程中同时添加了带有3个d （G ）的引物，以该引物合成第一链的互补链，锚定全长cDNA 。
（2’）③引物延伸或长距离PCR 得到双链cDNA 。
（1’）四、问答题 （每小题8分，共24分）1. 通过生物测定，发现一种真菌具有抗某种细菌的抗菌活性。
通过生物化学的方法从该真菌中分离到一个具有抗细菌活性的蛋白质，该蛋白表现出良好的开发成蛋白药物的潜力。
若要在E.coli 或酵母菌中大量表达并制备该抗菌蛋白质，试问如何分离得到该蛋白的编码基因。
①测定该蛋白质的N 未端氨基酸序列（1’）②根据氨基酸序列设计简并引物，用作基因克隆的探针（2’） ③构建真菌的cDNA 文库（2’）④用探针作Southern 杂交，从文库中筛选含该基因的重组子（2’） ⑤重组子的纯化、验证测序（1’）①中如果是制备该蛋白的抗体③构建表达文库，从中筛选则该题亦可给分。
2. 魔芋 (Amorphophallus ) 是单子叶植物纲 (Monocotyledoeae )、泽泻目 (Alismatales )、天南星科 (Areaceae ) 的多年生草本块茎植物。