青蒿琥酯对人胚肺成纤维细胞系HFL—I细胞增殖、凋亡的影响及机制
青蒿琥酯对人胚肺成纤维细胞系HFL-Ⅰ细胞胶原合成的影响及机制
ｔ ｌ ｒｕ ｒ ｉ ｅ ｑ ｉ ａｅ ｔ ｏ ｇ ｒ ｏ ｐ ｗｅｅ ｇｖ ｎ ｅ ｕ ｖ ｌ ｎ ＤＭＥ Ｍ／ 一 ２ ｈ ｏｌ ｇ ｎ ｓｎ ｈ ｓｓｗ ｓｄ ｔ ｒ ｉｅ ｙ ｓｒ ｓｒ ｄ ｓａｎ ｎ ｔ ｅ ｅ ｐ ｅ ｓ ｎ Ｆ １ ．Ｔ ｅｃ ｌ ａ ｙ ｔ ｅ ｉ ａ ｅｅ ｎ ｄ ｂ ｉ ｕ ｅ ｔ ｉ ｉｇ， ｈ ｘ ｒ ｓ ｉ ｅ ｍ ｉ ｏ
摘要 ： 目的 进一 步探讨青蒿琥酯对肺纤维化 的治疗作用及机制。方法
取对数生长 期的人胚肺成 纤维细胞
（ Ｅ Ｆ 系 ＨＦ ・细胞 ， Ｈ Ｌ） ＬＩ 随机分 为观察 １ ３组及对照组 ， ～ 观察 １— ３组分别加入质 量浓度为 １ １ 、０ ＃Ｌ的青 蒿 、０ １０ ｍ 琥酯 ， 对照组加入等体积 培养液继续培养 。用天狼猩红染色法检测胶原蛋 白的分泌水平 ， ＴＰ Ｒ法测 定 Ｉ Ｒ －Ｃ 型和 Ⅲ 型前 胶原蛋 白 ｍ Ｎ Ｒ Ａ的表达 。结果 观察 １— ３组胶原表达量 、 Ｉ型、 Ⅲ型前 胶原蛋白 ｍ Ｎ Ｒ Ａ表达均显著低于对 照 组， 且各观察组 间两两 比较有显著差异 （ Ｐ均 ＜００ ） ．５ 。结 论 青蒿 琥酯具有抗 纤维化 的作用 ， 可在 一定程 度上 降 低胶 原分泌 ， 其机制可能为下调 Ｉ型和 Ⅲ型前胶原蛋 白 ｍＲ Ａ表达 。 Ｎ
ＷＡ Ｇ Ｃ ａ ｇｍｉ ＬＺ Ａ ＧＸ ａ － ｉＬ ｉｎ ＨＵ Ｎ ａ — ｅ Ｆ Ｎ Ｃ ｉ ｅ Ｎ ｈ ｎ — ｎ ．Ｈ Ｎ ｉｏ ｅ。ＶＱａ 。 Ａ Ｇ Ｌ ｎｚ ｎ． Ａ ａ— ｎ ｇ ｆ ｈ ｗ
青蒿琥酯对人脐带间充质干细胞诱导的去分化肌成纤维细胞凋亡的影响
青蒿琥酯对人脐带间充质干细胞诱导的去分化肌成纤维细胞凋亡的影响王雅文;吴苗;耿素霞;曾令基;王玉连;赖沛龙;杜欣;翁建宇【期刊名称】《实用医学杂志》【年(卷),期】2022(38)13【摘要】目的了解人脐带间充质干细胞(hUCMSC)对肺肌成纤维细胞(MFB)的作用,探索青蒿琥酯联合hUCMSC对肺MFB的作用。
方法胶原酶消化贴壁法获得hUCMSC;人胚肺成纤维细胞(MRC-5)经TGF-β1(10 ng/mL)诱导48 h后,加入MFB和(或)青蒿琥酯共培养24 h;撤除MSC后,在MSC-deMFB体系中重新加TGF-β1再刺激。
流式检测细胞凋亡、CCK8检测细胞增殖及qPCR和WB分别检测纤维化相关蛋白的mRNA和蛋白表达水平。
结果hUCMSC符合ISCT的MSC标准。
经TGF-β1刺激后的MRC-5(即MFB)与hUCMSC共培养24 h后,细胞(MSC-deMFB)呈增殖状态,CCK8检测发现OD值较对照组增加(P<0.01);α-SMA、COL1A1及FN1的表达明显降低,接近FB(MRC-5)初始水平(P<0.01)。
当撤除MSC后,在MSC-deMFB体系中重新加入TGF-β1时,细胞恢复MFB特征(α-SMA、COL1A1及FN1的表达升高),提示MSC诱导MFB去分化是可逆的。
当青蒿琥酯和MSC同时作用MFB时,细胞总凋亡率较对照组增加;并进一步抑制α-SMA、COL1A1的表达(P<0.01)。
结论间充质干细胞分泌物诱导肺肌成纤维细胞增殖、可逆性去分化及抑制细胞外基质合成;青蒿琥酯诱导MSC-deMFB凋亡,与MSC协同抑制MSC-deMFB细胞α-SMA及纤维化相关细胞外基质基因表达。
青蒿琥酯协同人脐带间充质干细胞可能是抗纤维化的新策略。
【总页数】7页(P1630-1636)【作者】王雅文;吴苗;耿素霞;曾令基;王玉连;赖沛龙;杜欣;翁建宇【作者单位】华南理工大学医学院;广东省人民医院(广东省医学科学院)【正文语种】中文【中图分类】R714【相关文献】1.心肌肌球特定基因-肌球蛋白轻链基因可在人脐带间充质干细胞诱导分化为心肌样细胞表达2.肝癌HepG-2细胞培养液上清诱导人脐带间充质干细胞向肿瘤相关间充质干细胞的转分化3.肝癌HepG-2细胞培养液上清诱导人脐带间充质干细胞向肿瘤相关间充质干细胞的转分化4.人脐带间充质干细胞体外诱导分化为成纤维细胞5.人脐带间充质干细胞体外诱导分化为成纤维细胞因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
青蒿琥酯对脂多糖致血管内皮细胞活化及损伤的保护作用
青蒿琥酯对脂多糖致血管内皮细胞活化及损伤的保护作用何晓琳;刘志【期刊名称】《中国中西医结合杂志》【年(卷),期】2004(24)12【摘要】目的观察中药青蒿提取物青蒿琥酯 (artesunate ,AR)对脂多糖(lipopolysaccharide ,LPS)诱导的人脐静脉内皮细胞(humanumbilicalveinendothelialcells,HUVECs)活化及损伤状态下的保护作用及相关机制。
方法建立人脐静脉内皮细胞培养 ,细胞生长至融合状态后分别加入LPS 及不同浓度的AR(0 0 4mg/L、0 2mg/L、1mg/L、5mg/L及 2 0mg/L)共同孵育2 4h。
ELISA方法检测培养上清中血管假性血友病因子(vonWillebrandfactor ,vWF)含量 ,Westernblot法检测细胞间黏附分子 (ICAM 1)蛋白表达 ,原位杂交方法检测肿瘤坏死因子(TNFα)mRNA表达。
结果暴露于1μg/mlLPS后 ,HUVECs的vWF及ICAM 1表达较对照组明显增加 ,加入AR后 ,随AR浓度增加明显下调LPS升高的vWF及ICAM 1表达 ,至AR为1mg/L时 ,其vWF与ICAM 1表达与LPS组比较差异均有显著性 (P <0 0 5 )。
AR抑制LPS 升高的vWF及ICAM 1表达呈一定的浓度依赖方式。
原位杂交显示在AR 02mg/L及 1mg/L时明显下调TNFαmR NA表达 ,与LPS组比较差异有显著性 (P <0 0 5 ,P <0 0 1)。
结论青蒿琥酯对脂多糖诱导的HUVECs的活化及损伤有保护作用 ,可能与AR抑制TNFαmRNA表达有关。
【总页数】4页(P1110-1113)【关键词】LPS;AR;青蒿琥酯;保护作用;表达;脂多糖;HUVEC;目的观;结论;培养【作者】何晓琳;刘志【作者单位】中国医科大学附属第一医院急诊科【正文语种】中文【中图分类】R285.5;R765【相关文献】1.小窝蛋白-1在脂多糖致肺微血管内皮细胞炎性损伤中的作用探讨 [J], 尤青海;张丹;孙耕耘;岳扬;徐秀娟;2.小窝蛋白-1在脂多糖致肺微血管内皮细胞炎性损伤中的作用探讨 [J], 尤青海;张丹;孙耕耘;岳扬;徐秀娟3.Caveolin-1在脂多糖致大鼠肺微血管内皮细胞损伤中作用的初探 [J], 高磊;孙耕耘;尤青海;王楠;岳扬;张丹4.卡托普利对细菌脂多糖致血管内皮细胞活化及损伤的防护作用 [J], 何晓琳;刘志5.血小板在脂多糖激活中性粒细胞致小鼠肺微血管内皮细胞损伤中的作用 [J], 孙振朕;王嘉锋;龚德军;卞金俊;朱科明;邓小明因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
青蒿琥酯通过下调TRAF6抑制LPS诱导心肌细胞炎症反应和细胞凋亡的实验研究
青蒿琥酯通过下调TRAF6抑制LPS诱导心肌细胞炎症反应和细胞凋亡的实验研究翟晓芳,秦国庆,梁晓清摘要目的:探讨青蒿琥酯对脂多糖(LPS)诱导的心肌细胞H9c2炎症反应和细胞凋亡的影响及可能机制㊂方法:体外培养H9c2细胞,用不同剂量(0㊁0.1㊁0.2㊁0.4mmol/L)青蒿琥酯孵育H9c2细胞24h,应用细胞增殖与活性检测(CCK-8)法检测细胞存活率,观察青蒿琥酯对H9c2细胞活性的影响㊂另将不同剂量(0㊁0.1㊁0.2㊁0.4mmol/L)青蒿琥酯孵育H9c2细胞24h后,用LPS进行诱导,CCK-8法检测细胞存活率,流式细胞术检测细胞凋亡,酶联免疫吸附法检测白细胞介素-1β(IL-1β)㊁白细胞介素-6(IL-6)㊁肿瘤坏死因子-α(TNF-α)表达,蛋白质印迹法检测肿瘤坏死因子受体相关因子6(TRAF6)蛋白表达㊂转染TRAF6过表达载体至H9c2细胞,经青蒿琥酯和/或LPS干预后,上述相同方法检测细胞凋亡㊁IL-1β㊁IL-6和TNF-α表达及TRAF6蛋白表达㊂结果:与0mmol/L青蒿琥酯组比较,不同剂量(0.1㊁0.2㊁0.4mmol/L)青蒿琥酯组H9c2细胞存活率差异无统计学意义(P>0.05);不同剂量(0.1㊁0.2㊁0.4mmol/L)青蒿琥酯提高LPS诱导的H9c2细胞存活率,而降低细胞凋亡率和炎性因子IL-1β㊁IL-6和TNF-α的表达,同时降低细胞中TRAF6蛋白表达(P<0.05)㊂上调TRAF6,降低LPS诱导的H9c2细胞存活率,而增加细胞凋亡率和IL-1β㊁IL-6㊁TNF-α的表达㊂上调TRAF6逆转青蒿琥酯对LPS诱导的H9c2细胞凋亡㊁IL-1β㊁IL-6㊁TNF-α及TRAF6蛋白表达具有影响㊂结论:青蒿琥酯可能通过下调TRAF6抑制LPS诱导的H9c2细胞炎性因子表达和细胞凋亡㊂关键词青蒿琥酯;心肌细胞;炎症;凋亡;实验研究d o i:10.12102/j.i s s n.1672-1349.2023.18.009Experimental Study of Artesunate Inhibiting LPS-induced Cardiomyocyte Inflammatory Response and Apoptosis by Down-regulating TRAF6ZHAI Xiaofang,QIN Guoqing,LIANG XiaoqingShijiazhuang Ping'an Hospital,Shijiazhuang050000,Hebei,China,E-mail:**************Abstract Objective:To investigate the effect of artesunate on lipopolysaccharide(LPS)-induced inflammatory response and apoptosis in cardiomyocytes H9c2.Methods:H9c2cells were cultured in vitro and incubated with different doses(0,0.1,0.2,0.4mmol/L)of artesunate for24h.The Cell Proliferation and Cytotoxicity Assay Kit(CCK-8)was used to detect cell viability in order to observe the effect of artesunate on the activity of H9c2cells.In addition,H9c2cells were incubated with different doses(0,0.1,0.2,0.4mmol/L)of artesunate for24h,then induced with LPS K-8method was used to detect the cell viability;flow cytometry was used to detect apoptosis;enzyme-linked immunosorbent assay(ELISA)was used to detect the expressions of interleukin-1β(IL-1β),interleukin-6 (IL-6),and tumor necrosis factor-α(TNF-α);Western Blot was used to detect the expression of turmour necrosis factor receptor-associated factor6 (TRAF6)protein.TRAF6overexpression vector transfected into H9c2cells after artesunate and/or LPS intervention;the same method as above was used to detect cell apoptosis,IL-1β,IL-6,TNF-αexpression,and TRAF6protein expression.Results:Compared with the0 mmol/L artesunate group,there was no significant difference in the survival rate of H9c2cells in different doses(0.1,0.2,0.4mmol/L) artesunate groups(P>0.05);different doses(0.1,0.2,0.4mmol/L)of artesunate increased the survival rate of H9c2cells induced by LPS,decreased the apoptosis rate and the expression of inflammatory factors IL-1β,IL-6,and TNF-α,and decreased the TRAF6protein in cells expression(P<0.05).Up-regulation of TRAF6could reduce the survival rate of H9c2cells induced by LPS,but increase the apoptosis rate and the expressions of IL-1β,IL-6,and TNF-α.Up-regulation of TRAF6could reverse the effects of artesunate on LPS-induced H9c2cell apoptosis,IL-1β,IL-6,TNF-α,and TRAF6protein expression.Conclusion:Artesunate may inhibit LPS-induced expression of inflammatory factors and apoptosis in H9c2cells by down-regulating TRAF6.Keywords artesunate;cardiomyocytes;inflammation;apoptosis;experimental study心肌炎是临床常见心肌疾病,其症状主要有心律失常㊁急性心功能不全等㊂研究认为,心肌损伤如心肌细胞过度炎症反应及心肌细胞凋亡等与心肌炎的发生发展密切相关[1],抑制心肌损伤对心肌炎的治疗尤为重要㊂青蒿琥酯是青蒿素的一种半合成衍生物,具有抗炎㊁免疫调节等作用[2]㊂研究显示,青蒿琥酯可通过抑制肿瘤坏死因子受体相关因子6(TRAF6)/p65信号通路减轻脂多糖(LPS)诱导的人结肠上皮细胞炎性损基金项目河北省科技计划项目(No.20151590)作者单位石家庄平安医院(石家庄050000),E-mail:**************引用信息翟晓芳,秦国庆,梁晓清.青蒿琥酯通过下调TRAF6抑制LPS诱导心肌细胞炎症反应和细胞凋亡的实验研究[J].中西医结合心脑血管病杂志,2023,21(18):3342-3346.伤,并促进细胞增殖,有望成为治疗结肠炎的药物[3];青蒿琥酯可通过激活黏附斑激酶/磷酸肌醇-3激酶/蛋白激酶B(FAK/PI3K/AKT)信号通路对缺氧复氧诱导的心肌细胞凋亡发挥抑制作用,其是治疗心肌缺血再灌注的替代药物[4]㊂但是,还鲜见青蒿琥酯影响脓毒症诱导的心肌损伤的相关报道㊂TRAF6是肿瘤坏死因子受体超家族和白细胞介素-1(IL-1)受体信号转导的关键衔接分子,其可通过激活核转录因子(NF)-κB信号通路参与调控细胞凋亡㊁氧化应激及炎症反应等过程[5]㊂既往研究显示,TRAF6参与心肌损伤的发展进程,过表达miR-506-3p可通过下调TRAF6抑制心肌组织炎症反应及心肌细胞凋亡,减轻心肌炎性损伤[6]㊂本研究建立LPS诱导的大鼠心肌细胞H9c2损伤模型,观察青蒿琥酯对LPS诱导的H9c2细胞炎症反应和细胞凋亡的影响及其能否通过调控TRAF6发挥作用,以期为脓毒症诱导的心肌损伤治疗提供新途径㊂1材料与方法1.1细胞与试剂H9c2细胞,上海通派生物科技有限公司;胎牛血清,浙江天杭生物科技股份有限公司;青蒿琥酯,纯度> 98%,陕西藤迈生物科技有限责任公司;DMEM培养液㊁Lipofectamine TM2000试剂盒㊁二喹啉甲酸法(BCA)蛋白检测试剂盒和V-异硫氰酸荧光素(Annexin V-FITC)/碘化丙啶(PI)凋亡试剂盒,北京索莱宝科技有限公司;蛋白质印迹实验所需抗体,中国Abcam公司;白细胞介素-1β(IL-1β)㊁白细胞介素-6(IL-6)和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)试剂盒,南京建成生物工程研究所有限公司;TRAF6过表达载体(pcDNA-TRAF6)和空载体(pcDNA),上海生工生物工程股份有限公司㊂1.2方法1.2.1细胞培养用完全培养液(含10%胎牛血清的DMEM培养液)置于二氧化碳培养箱中培养H9c2细胞㊂1.2.2细胞增殖与活性检测(CCK-8)法检测细胞存活率于96孔板中接种0.2mL H9c2细胞(5.0ˑ104个/mL),培养4h㊂1)分别用含0㊁0.1㊁0.2㊁0.4mmol/L青蒿琥酯的培养液孵育24h[3];2)加含1μg/mL LPS[7]的培养液诱导细胞2h,并依次记为LPS组㊁LPS+低青蒿琥酯剂量组㊁LPS+中青蒿琥酯剂量组和LPS+高青蒿琥酯剂量组,同时设置对照组(Con组)常规培养,既不用青蒿琥酯孵育,也不用LPS诱导㊂各组培养结束后,向每孔中加10μL CCK-8,孵育2h,用酶标仪测定各孔在450nm处的吸光度(A)值㊂存活率(%)= A实验组/A对照组ˑ100%㊂1.2.3流式细胞术检测细胞凋亡于6孔板中接种2.5mL H9c2细胞(5.0ˑ104个/mL),培养4h后,按照上述1.2.2中的2)分组处理㊂各组培养结束后,收集细胞,用PBS清洗㊂加500μL结合缓冲液,重悬细胞㊂加10μL Annexin V-FITC,避光孵育15min㊂再加5μL PI,避光孵育5min,利用流式细胞仪检测各组细胞凋亡㊂1.2.4酶联免疫吸附法检测IL-1β㊁IL-6㊁TNF-α于6孔板中接种2.5mL H9c2细胞(5.0ˑ104个/mL),培养4h后,按照上述1.2.2中的2)进行分组处理㊂各组培养结束后,收集细胞上清液,3500r/min离心10min㊂取上清,分别利用IL-1β㊁IL-6和TNF-α试剂盒采用酶联免疫吸附法检测其水平㊂1.2.5蛋白质印迹法检测TRAF6蛋白表达于6孔板中接种2.5mL H9c2细胞(5.0ˑ104个/mL),培养4h后,按照上述1.2.2中的2)进行分组处理㊂各组培养结束后,将细胞中总蛋白用RIPA试剂提取出来,并检测蛋白浓度(BCA法)㊂用SDS-PAGE实验对总蛋白进行分离,并转至聚偏二氟乙烯膜(PVDF),用5%脱脂奶粉封闭2h㊂于4ħ冰箱中分别用稀释的TRAF6和GAPDH(内参)一抗孵育过夜,稀释度均为1ʒ1000㊂洗膜,用山羊抗兔二抗(1ʒ2000)在室温下孵育1h㊂加显影液显影,曝光拍照,Image J软件分析蛋白条带灰度值㊂1.2.6细胞转染于6孔板中接种2.5mL H9c2细胞(5.0ˑ104个/mL),培养24h后,利用LipofectamineTM2000试剂盒分别转染pcDNA㊁pcDNA-TRAF6,转染时间为12h,蛋白质印迹法检测TRAF6蛋白表达验证转染效果㊂于6孔板中接种2.5mL转染pcDNA㊁pcDNA-TRAF6的H9c2细胞(5.0ˑ104个/mL),按照LPS组处理,记为LPS+pcDNA组㊁LPS+pcDNA-TRAF6组;按照LPS+高青蒿琥酯剂量组处理,记为LPS+青蒿琥酯+pcDNA 组㊁LPS+青蒿琥酯+pcDNA-TRAF6组㊂各组细胞处理后,按照上述1.2.3至1.2.5中方法检测细胞凋亡㊁炎性因子IL-1β㊁IL-6和TNF-α表达及TRAF6蛋白表达㊂1.3统计学处理应用SPSS22.0软件进行统计分析㊂符合正态分布的定量资料以均数ʃ标准差(xʃs)表示,两组间比较采用独立样本t检验,多组间比较先用单因素方差进行分析,再使用LSD-t检验进行组间两两比较,以P< 0.05为差异有统计学意义㊂2结果2.1青蒿琥酯对心肌细胞H9c2增殖活性的影响不同剂量(0㊁0.1㊁0.2㊁0.4mmol/L)青蒿琥酯组H9c2细胞存活率分别为(100.00ʃ0.00)%㊁(99.02ʃ1.64)%㊁(98.78ʃ1.12)%㊁(99.67ʃ0.33)%,4组间比较差异无统计学意义(F=2.835,P=0.054)㊂与0mmol/L青蒿琥酯组比较,不同剂量(0.1㊁0.2㊁0.4mmol/L)青蒿琥酯组H9c2细胞存活率比较差异均无统计学意义(P>0.05),说明此浓度范围内的青蒿琥酯对H9c2细胞无毒性㊂2.2青蒿琥酯对LPS诱导的心肌细胞H9c2增殖活性的影响Con组㊁LPS组㊁LPS+低青蒿琥酯剂量组㊁LPS+中青蒿琥酯剂量组和LPS+高青蒿琥酯剂量组H9c2细胞存活率分别为(100.00ʃ0.00)%㊁(62.14ʃ1.70)%㊁(71.75ʃ2.96)%㊁(80.13ʃ1.69)%㊁(89.34ʃ2.14)%,组间存活率比较差异有统计学意义(F=519.352,P< 0.05)㊂LPS组H9c2细胞存活率低于Con组(P<0.05); LPS+低青蒿琥酯剂量组㊁LPS+中青蒿琥酯剂量组和LPS+高青蒿琥酯剂量组H9c2细胞存活率均高于LPS组(P<0.05),且LPS+低青蒿琥酯剂量组㊁LPS+中青蒿琥酯剂量组和LPS+高青蒿琥酯剂量组H9c2细胞存活率两两比较差异有统计学意义(P<0.05)㊂2.3青蒿琥酯对LPS诱导的心肌细胞H9c2凋亡及炎性因子的影响LPS组H9c2细胞凋亡率及炎性因子IL-1β㊁IL-6和TNF-α的表达均高于Con组(P<0.05);LPS+低青蒿琥酯剂量组㊁LPS+中青蒿琥酯剂量组和LPS+高青蒿琥酯剂量组H9c2细胞凋亡率及炎性因子IL-1β㊁IL-6和TNF-α的表达均低于LPS组(P<0.05),且LPS+低青蒿琥酯剂量组㊁LPS+中青蒿琥酯剂量组和LPS+高青蒿琥酯剂量组各检测指标两两比较差异均有统计学意义(P<0.05)㊂详见图1㊁表1㊂图1青蒿琥酯对LPS诱导的心肌细胞H9c2凋亡的影响(A为Con组;B为LPS组;C为LPS+低青蒿琥酯剂量组;D为LPS+中青蒿琥酯剂量组;E为LPS+高青蒿琥酯剂量组)表1青蒿琥酯对LPS诱导的H9c2细胞凋亡及炎性因子表达的影响(xʃs)组别样本量凋亡率(%)IL-1β(pg/mL)IL-6(pg/mL)TNF-α(pg/mL) Con组9 6.34ʃ0.2060.48ʃ6.9741.84ʃ6.7787.58ʃ8.80 LPS组922.16ʃ1.06①399.22ʃ15.00①254.45ʃ20.66①432.84ʃ31.16①LPS+低青蒿琥酯剂量组919.73ʃ0.64②328.23ʃ18.94②203.29ʃ8.28②341.67ʃ21.32②LPS+中青蒿琥酯剂量组915.14ʃ0.39②③240.59ʃ13.28②③142.81ʃ10.46②③233.41ʃ14.74②③LPS+高青蒿琥酯剂量组911.42ʃ0.58②③④138.89ʃ15.04②③④73.87ʃ7.21②③④157.63ʃ19.15②③④F值881.040819.391497.444415.191P<0.05<0.05<0.05<0.05注:LPS组与Con组比较,①P<0.05;与LPS组比较,②P<0.05;与LPS+低青蒿琥酯剂量组比较,③P<0.05;与LPS+中青蒿琥酯剂量组比较,④P<0.05㊂2.4青蒿琥酯对LPS诱导的心肌细胞H9c2中TRAF6蛋白表达的影响Con组㊁LPS组㊁LPS+低青蒿琥酯剂量组㊁LPS+中青蒿琥酯剂量组和LPS+高青蒿琥酯剂量组H9c2细胞中TRAF6蛋白表达量分别为0.12ʃ0.01㊁0.74ʃ0.06㊁0.54ʃ0.04㊁0.34ʃ0.03㊁0.24ʃ0.02,5组间TRAF6蛋白表达量比较差异有统计学意义(F=413.727, P<0.05)㊂LPS组H9c2细胞中TRAF6蛋白表达量高于Con组(P<0.05);LPS+低青蒿琥酯剂量组㊁LPS+中青蒿琥酯剂量组和LPS+高青蒿琥酯剂量组H9c2细胞中TRAF6蛋白表达量均低于LPS组(P< 0.05),且LPS+低青蒿琥酯剂量组㊁LPS+中青蒿琥酯剂量组和LPS+高青蒿琥酯剂量组H9c2细胞中TRAF6蛋白表达量两两比较差异有统计学意义(P<0.05)㊂详见图2㊂图2青蒿琥酯对LPS诱导的H9c2细胞中TRAF6蛋白表达的影响2.5TRAF6转染效率TRAF6蛋白在转染pcDNA-TRAF6的H9c2细胞中的表达量为0.56ʃ0.05,较转染pcDNA的H9c2细胞中的表达量0.14ʃ0.02升高(t=-23.398,P< 0.05),说明转染pcDNA-TRAF6的H9c2细胞中TRAF6较转染pcDNA的细胞上调㊂详见图3㊂图3TRAF6蛋白表达的检测2.6上调TRAF6逆转青蒿琥酯对LPS诱导的心肌细胞H9c2凋亡及炎性因子表达的影响LPS+pcDNA-TRAF6组H9c2细胞中TRAF6蛋白表达㊁细胞凋亡率及炎性因子IL-1β㊁IL-6和TNF-α的表达均高于LPS+pcDNA组(P<0.05)㊂LPS+青蒿琥酯+pcDNA-TRAF6组H9c2细胞中TRAF6蛋白表达㊁细胞凋亡率及炎性因子IL-1β㊁IL-6和TNF-α的表达均高于LPS+青蒿琥酯+pcDNA组(P<0.05)㊂详见图4㊁图5及表2㊂图4上调TRAF6逆转青蒿琥酯对LPS诱导的H9c2细胞凋亡的影响(A为LPS+pcDNA组;B为LPS+pcDNA-TRAF6组;C为LPS+青蒿琥酯+pcDNA组;D为LPS+青蒿琥酯+pcDNA-TRAF6组)图5上调TRAF6逆转青蒿琥酯对LPS诱导蛋白表达的影响表2上调TRAF6逆转青蒿琥酯对LPS诱导H9c2细胞凋亡及炎性因子表达的影响比较(xʃs)组别样本量TRAF6凋亡率(%)IL-1β(pg/mL)IL-6(pg/mL)TNF-α(pg/mL) LPS+pcDNA组90.72ʃ0.0622.12ʃ1.10406.53ʃ18.46252.51ʃ25.62434.35ʃ19.84 LPS+pcDNA-TRAF6组9 1.72ʃ0.09①29.30ʃ2.04①645.13ʃ33.41①419.47ʃ30.50①628.13ʃ42.69①LPS+青蒿琥酯+pcDNA组90.23ʃ0.0211.70ʃ0.77134.98ʃ14.0277.11ʃ6.77163.67ʃ14.30 LPS+青蒿琥酯+pcDNA-TRAF6组90.60ʃ0.04②21.02ʃ1.00②336.58ʃ17.22②235.70ʃ23.99②384.97ʃ15.64②F值1065.526269.877817.903319.371491.993P<0.05<0.05<0.05<0.05<0.05注:LPS+pcDNA-TRAF6组与LPS+pcDNA组比较,①P<0.05;LPS+青蒿琥酯+pcDNA-TRAF6组与LPS+青蒿琥酯+ pcDNA组比较,②P<0.05㊂3讨论心肌炎发生发展与感染㊁自身免疫性疾病㊁物理化学刺激等多种因素有关㊂LPS又被称为内毒素,是革兰阴性菌细胞壁的主要成分,其可诱导心肌细胞分泌TNF-α㊁IL-1β和IL-6等炎性因子,产生过度的炎症反应,进一步诱导心肌细胞坏死或凋亡,引发心肌炎[8]㊂本研究结果显示,大鼠心肌细胞H9c2经LPS诱导后, TNF-α㊁IL-1β和IL-6的分泌量明显增加,且凋亡率升高,说明LPS诱导H9c2细胞产生了炎症反应及细胞凋亡,模型建立成功㊂青蒿琥酯具有多种药理活性㊂研究显示,青蒿琥酯对LPS诱导的小鼠RAW264.7细胞炎性因子释放具有显著抑制作用,这与其抑制细胞中Toll样受体4 (TLR4)通路的活化有关[9];青蒿琥酯通过激活AKT/血红素氧合酶(HO-1)信号通路抑制过氧化氢(H2O2)诱导的晶状体上皮细胞氧化应激和细胞凋亡,提示其具有减轻白内障的作用[10];青蒿琥酯可抑制肾缺血再灌注引起的炎性因子释放及细胞焦亡,减轻肾缺血再灌注损伤[11];青蒿琥酯可抑制氧糖剥夺/复氧诱导的心肌细胞炎症㊁铁蓄积和脂质过氧化,减轻心肌细胞铁死亡,并增强细胞活力,缓解细胞损伤,提示青蒿琥酯具有心肌保护作用[12]㊂本实验首先观察到一定浓度范围的青蒿琥酯对心肌细胞H9c2无毒性,且青蒿琥酯可提高LPS诱导的H9c2细胞增殖活性,抑制细胞分泌IL-1β㊁IL-6和TNF-α炎性因子,同时减少细胞凋亡,这一结果与洪莉莉等[12]研究结果基本一致,说明青蒿琥酯可抑制LPS诱导的H9c2细胞炎症反应及细胞凋亡,提示其具有减轻或治疗脓毒症心肌损伤的作用,对心肌损伤具有保护作用㊂有研究证实,TRAF6与心肌炎的发生发展密切相关[13]㊂下调TRAF6可通过抑制NF-κB通路诱导M2巨噬细胞极化,从而减轻病毒性心肌炎[14];miR-146a 可通过靶向抑制TRAF6并阻碍NF-κB信号通路的激活改善心肌炎[15]㊂本研究显示,心肌细胞H9c2经LPS诱导后,细胞中TRAF6蛋白表达增加,而过表达TRAF6促进LPS诱导的心肌细胞分泌IL-1β㊁IL-6和TNF-α炎性因子,促进细胞凋亡,这提示TRAF6对心肌炎发生发展起促进作用㊂为了探究青蒿琥酯能否通过调控TRAF6影响LPS诱导的H9c2细胞炎性因子表达和细胞凋亡,本研究检测了其对LPS诱导的H9c2细胞中TRAF6蛋白表达的影响,结果显示,青蒿琥酯呈剂量依赖性抑制LPS诱导的H9c2细胞中TRAF6蛋白表达;同时恢复实验结果显示,过表达TRAF6逆转了青蒿琥酯对LPS诱导的H9c2细胞炎性因子及细胞凋亡的抑制作用,这提示青蒿琥酯通过下调TRAF6来抑制LPS诱导的H9c2细胞炎性因子表达及细胞凋亡,进而发挥心肌保护作用㊂综上所述,一定剂量的青蒿琥酯对LPS诱导的H9c2细胞炎性因子表达及细胞凋亡具有抑制作用,这可能与其下调了细胞中TRAF6蛋白表达有关,具有治疗心肌炎的潜在价值㊂参考文献:[1]WANG L,ZHANG Y Y,ZHU G F,et al.miR-16exhibits protectivefunction in LPS-treated cardiomyocytes by targeting DOCK2torepress cell apoptosis and exert anti-inflammatory effect[J].CellBiol Int,2020,44(8):1760-1768.[2]LIU Y,DANG W,ZHANG S Y,et al.Artesunate attenuatesinflammatory injury and inhibits the NF-κB pathway in a mousemodel of cerebral ischemia[J].J Int Med Res,2021,49(11):3000605211053549.[3]蒋师,张兴强.青蒿琥酯对脂多糖诱导人结肠上皮细胞炎症反应影响的分子机制研究[J].实用药物与临床,2017,20(11):1256-1259.[4]FAN S Y,ZHANG D Y,LIU F Y,et al.Artesunate alleviatesmyocardial ischemia/reperfusion-induced myocardial necrosis inrats and hypoxia/reoxygenation-induced apoptosis in H9c2cellsvia regulating the FAK/PI3K/Akt pathway[J].Ann Transl Med,2020,8(20):1291.[5]ZHU L J,YANG T C,WU Q,et al.Tumor necrosis factor receptor-associated factor(TRAF)6inhibition mitigates the pro-inflammatoryroles and proliferation of rheumatoid arthritis fibroblast-likesynoviocytes[J].Cytokine,2017,93:26-33.[6]阳慧,苏雨江,钟江华,等.miR-506-3p靶向TRAF6抑制心肌炎的炎性反应和心肌细胞凋亡[J].中国老年学杂志,2019,39(19):4813-4817.[7]朱志扬,葛然,杨露露.人参皂苷Rb1通过抑制PI3K/AKT信号通路保护脂多糖诱导的心肌细胞炎症反应[J].中国循证心血管医学杂志,2018,10(7):823-826.[8]ZHU Z,ZHANG G X,LI D H,et al.Silencing of specificity protein1protects H9c2cells against lipopolysaccharide-induced injury viabinding to the promoter of chemokine CXC receptor4andsuppressing NF-κB signaling[J].Bioengineered,2022,13(2):3395-3409.[9]匡梅,岑彦艳,覃容欣,等.青蒿琥酯对小鼠巨噬细胞RAW264.7中TLR4介导的炎症通路的抑制作用[J].免疫学杂志,2018,34(5):401-406.[10]覃晖,赖莉.青蒿琥酯通过Akt/HO-1信号通路抑制诱导H2O2的晶状体上皮细胞氧化应激和凋亡[J].中国中医眼科杂志,2021,31(9):621-627.[11]袁强,申开文,张瑞波,等.青蒿琥酯通过NLRP3炎症小体抑制细胞焦亡减轻大鼠肾缺血-再灌注损伤[J].器官移植,2021,12(6):733-740.[12]洪莉莉,吴玲娟,何海刚.青蒿琥酯调节PERK/ATF4/CHOP信号通路对OGD/R诱导的心肌细胞铁死亡的影响[J].微循环学杂志,2023,33(1):24-32.[13]杨婷.miR-942-5p靶向TRAF6对病毒性心肌炎细胞损伤的影响[J].中华细胞与干细胞杂志:电子版,2021,11(4):215-221. [14]XUE Y L,ZHANG S X,ZHENG C F,et al.Long non-coding RNAMEG3inhibits M2macrophage polarization by activating TRAF6via microRNA-223down-regulation in viral myocarditis[J].J CellMol Med,2020,24(21):12341-12354.[15]赵思嘉,许蔚起,刘娜,等.miR-146a通过抑制TRAF6减轻自身免疫性心肌炎大鼠心脏炎症并改善其心功能[J].中国分子心脏病学杂志,2015,15(1):1202-1205.(收稿日期:2022-03-28)(本文编辑王雅洁)。
青蒿中青蒿琥酯_概述及解释说明
青蒿中青蒿琥酯概述及解释说明1. 引言1.1 概述青蒿（Artemisia annua L.）是一种常见的多年生草本植物，被广泛应用于传统中药领域。
它以其独特的化学成分而闻名，其中包括青蒿琥酯。
青蒿琥酯是一种天然产物，具有广泛的生物活性和医学应用价值。
1.2 文章结构本文将全面介绍青蒿中青蒿琥酯的概述及解释说明。
首先，我们将详细描述青蒿的起源和特点，为读者提供必要的背景信息。
随后，我们将重点关注青蒿中青蒿琥酯的含量和作用，并深入探讨其化学成分和制备方法。
接着，我们将探索青蒿琥酯在抗疟疾和抗癌研究领域的应用，并展望其他可能的应用领域及未来发展方向。
最后，我们将对青蒿中青蒿琥酯进行解释说明与实验验证结果讨论，并对实验存在的局限性进行评估与讨论。
文章最后将给出结论与展望，总结青蒿中青蒿琥酯的重要性，并探讨进一步研究和发展的方向，以及对读者的启示。
1.3 目的本文旨在全面介绍青蒿中青蒿琥酯，并解释其含义和作用。
通过深入探讨其化学成分、制备方法以及应用领域，我们希望能够增加对青蒿琥酯在医学和药物研究中的认识，并为未来的研究提供参考和启示。
2. 正文：2.1 青蒿的起源和特点青蒿是一种常见的药用植物，又称为黄花蒿。
它原产于中国云南地区，并逐渐传播至其他地区。
青蒿具有一些独特的特点，包括生长迅速、适应性强、耐寒耐旱等。
它通常生长在海拔较高、土壤排水良好的环境中。
2.2 青蒿中青蒿琥酯的含量和作用青蒿中含有一种重要的成分，称为青蒿琥酯。
青蒿琥酯在青蒿中的含量较高，并且具有多种药理活性。
它被广泛研究和应用于医学领域。
青蒿琥酯具有抗疟疾作用，可有效治疗恶性疟原虫感染引起的疟疾。
该药物通过抑制寄生虫体内血红素分解过程，从而阻断寄生虫体内氨基酸和核苷酸合成路径，导致寄生虫死亡。
此外，青蒿琥酯还具有抗癌活性。
它能与细胞内的DNA相互作用，引起DNA 断裂并诱导细胞凋亡。
这使得青蒿琥酯成为一种潜在的抗癌药物，并且在肿瘤治疗领域引起了广泛的兴趣。
青蒿琥酯抑制人成纤维细胞增殖的实验研究
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青蒿琥酯诱导人胚肺成纤维细胞凋亡的分子机制研究
青蒿琥酯诱导人胚肺成纤维细胞凋亡的分子机制研究【摘要】目的研究青蒿琥酯对人胚肺成纤维细胞(HELF)系 HFL-I细胞株体外生长的影响，为青蒿琥酯抗纤维化提供实验依据。
方法采用CCK-8法检测青蒿琥酯对体外培养的HFL-I细胞的生长抑制作用，用流式细胞术测定细胞凋亡率; RT-PCR 法测定Bcl-2 mRNA和Bax mRNA表达。
结果青蒿琥酯呈浓度依赖性抑制HFL-I细胞增殖，HFL-I细胞经青蒿琥酯作用后凋亡率明显增加(P<0.01)，Bcl-2 mRNA的表达显著低于对照组，Bax mRNA的表达显著高于对照组。
结论青蒿琥酯具有抗肺纤维化作用，可能机制为通过下调Bcl-2 mRNA和上调Bax mRNA表达抑制HFL-I细胞增殖，促进HFL-I细胞凋亡。
【关键词】青蒿琥酯; 人胚肺成纤维细胞; 增殖; 凋亡; Bax; Bcl-2肺纤维化是多种病因引起的一种慢性炎性间质性肺疾病，患者平均生存时间一般不超过3年，目前尚无有效治疗方法。
近年研究发现，青蒿素类药物除可抗疟疾外，亦具有抗肿瘤、抗感染及抗纤维化等作用。
2009-06～2009-11，我们观察了青蒿素衍生物青蒿琥酯对人胚肺成纤维细胞(Human embryonic lung fibroblast，HELF)系 HFL-I细胞增殖、凋亡的影响及机制，旨在为临床治疗肺纤维化提供理论依据。
1 材料HFL-I细胞株(中国科学院细胞库提供)，青蒿琥酯(分析纯，纯度>99% ，广西桂林南药公司产品，批号ZA080203)，CCK-8试剂，二甲基亚砜(DMSO)，碘化丙啶(PI)，D-MEM/F-12培养基，FBS，胰酶;RNA提取试剂Trizol，反转录试剂盒PrimeScript TMRT reagent Kit，PCR试剂盒Premix PrimeSTAR HS，引物由上海生物工程有限公司合成。
2 方法2.1 HFL-I细胞培养取 HFL-I细胞株，用含10% FBS、1×105U/L青霉素及100 mg/L链霉素的D-MEM/F-12培养液培养，37℃、5% CO2培养箱培养，3 d换液1次，5～6d传代1次。
青蒿琥酯对人肺腺癌细胞系A549增殖的抑制作用及机制
青蒿琥酯对人肺腺癌细胞系A549增殖的抑制作用及机制马宏境;曾妮;黄少祥【摘要】目的观察青蒿琥酯对人肺腺癌细胞系A549增殖的抑制作用,并探讨其作用机制.方法常规培养A549细胞后,不同浓度(0、25、50、75、100μmol/L)的青蒿琥酯作用A549细胞,采用CCK-8法检测青蒿琥酯对A549细胞的增殖抑制率,Western blotting法检测mTOR信号通路关键分子和自噬相关蛋白p62、LC3B表达变化.结果25μmol/L及以上浓度的青蒿琥酯可抑制A549细胞增殖,并呈时间和浓度依赖性(P均<0.05).不同浓度(0、25、50、75、100μmol/L)的青蒿琥酯作用A549细胞48 h可降低p62表达,增加LC3B表达,并降低mTOR信号通路关键分子的表达,并呈剂量依赖性.青蒿琥酯联合自噬抑制剂3-MA可增加A549细胞的生存率(P<0.05).结论青蒿琥酯可能通过下调mTOR信号通路关键分子表达、诱导A549细胞发生自噬从而抑制A549细胞增殖.【期刊名称】《山东医药》【年(卷),期】2017(057)025【总页数】3页(P42-44)【关键词】肺肿瘤;青蒿琥酯;细胞自噬;细胞增殖;雷帕霉素靶蛋白【作者】马宏境;曾妮;黄少祥【作者单位】天津市第五中心医院,天津300450;天津市第五中心医院,天津300450;天津市第五中心医院,天津300450【正文语种】中文【中图分类】R734.2青蒿琥酯是从黄花蒿叶中提取的单体成分[1]，能治疗疟疾，具有抗肿瘤的功效。
研究表明，青蒿琥酯主要通过促进肿瘤细胞凋亡、产生氧化应激反应、减少局部肿瘤组织的血管形成、诱导细胞发生自噬反应及增强机体免疫力等途径发挥抗肿瘤作用[2～5]。
多项研究表明，不同的试验条件下，自噬能促进细胞存活或抑制细胞生长[6～9]，因此，可通过调节自噬的发生及程度来促进人体正常细胞的存活，诱导肿瘤细胞死亡。
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摘 要： 目的 进 一步探讨青蒿琥酯 的抗纤维化作用及机制 。方 法
取对数生 长期人胚肺 成纤 维细胞 （ Ｅ Ｆ Ｈ Ｌ）
系 Ｈ ＬＩ Ｆ ．细胞株 ， 随机分为观察 Ｉ一 ４组及对照组 ， 观察 ｌ一 ４组分别加入质 量浓度为 ４ ８ １ 、２ｍ ／ 、、６ ３ ｇＬ的青蒿琥 酯 ， 对照组加入等体积培养液后继续培养。用 Ｃ Ｋ ８法检测 细胞增殖情况 （ Ｃ－ Ａ值） 流式细胞 仪检测 细胞周 期及 凋亡 ， 率 ，ＴＰ Ｒ法测定 Ｓ ｒ ｖ Ｒ －Ｃ ｕｖ ｉ ｉｎ Ａ表达 。结果 观察 ｌ一 ４组 Ｇ ＋Ｇ 期细胞所 占比例及细胞凋亡率均显著高于对 ０
青 蒿琥 照组 ， 细胞 Ａ值及 Ｓ ｒ ｖ Ｒ Ａ表达均显著低 于对照组 ， ｕｖ ｉ ｍ Ｎ ｉｎ 且各观察组间亦有显著差异（ ０ ０ ） Ｐ＜ ．５ 。结论
酯具有抗肺纤维化作用 ， 可能机制为通过下调 Ｓ ｒ ｖ Ｒ Ａ表达抑制 ＨＦ － 细胞增殖 、 ｕｖ ｉ ｍ Ｎ ｉｎ ＬＩ 促进 Ｈ ＬＩ Ｆ － 细胞 凋亡 。 关键词 ： 青蒿琥酯 ； 人胚肺成纤维细胞 ； 增殖 ； 细胞凋亡
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山东 医药 ２ １ ００年第 ５ Ｏ卷第 ３期
青 蒿琥 酯 对人 胚肺 成 纤 维 细胞 系 Ｈ ＬＩ Ｆ— 细胞 增 殖 、 亡 的影 响及 机 制 凋
王 昌明 ， 孝飞 ‘ 谭 张 ， 宁 ， 岚珍 ， 黄 林 云， 徐 青
（ 桂林 医学院 附属 医院 ， 西桂林 ５ １ ０ ） 广 ４ ０ １
中 图分 类 号 ： ２ ５５ Ｒ ８ ． 文献标志码 ： Ａ 文 章 编 号 ：０ ２２６ ２ １ ） ３０ ３ －３ １０ －６ Ｘ（０ ０ ０ － ３０ ０
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