分光光度计的使用
分光光度计的使用方法
分光光度计的使用方法分光光度计的使用方法1、使用方法1.接通电源，打开仪器开关，掀开样品室暗箱盖，预热10分钟。
2.将灵敏度开关调至“1”档（若零点调节器调不到“0”时，需选用较高档）3.根据所需波长转动波长选择钮。
4.将空白液及测定液分别倒入比色杯3/4处，用擦镜纸擦清外壁，放入样品室内，使空白管对准光路。
5.在暗箱盖开启状态下调节零点调节器，使读数盘指针指向t=0处。
6.盖上暗箱盖，调节“100”调节器，使空白管的t=100，指针稳定后逐步拉出样品滑竿，分别读出测定管的光密度值，并记录。
7.比色完毕，关上电源，取出比色皿洗净，样品室用软布或软纸擦净。
2、注意事项①空白溶液与供试品溶液必须澄清，不得有浑浊。
如有浑浊，应预先过滤，并弃去初滤液。
②在规定的吸收峰波长±2nm以内测试几个点的吸收度，以核对供试品的吸收峰波长位置是否正确，除另有规定外，吸收峰波长应在该品种项下规定的波长±2nm以内；否则应考虑该试样的真伪、纯度以及仪器波长的准确度，并以吸收度最大的波长作为测定波长。
③一般供试品溶液的吸收度读数，以在0.3～0.7之间的误差较小。
④由于吸收池和溶剂本身可能有空白吸收，因此测定供试品的吸收度后应减去空白读数，再计算含量。
⑤在测定时或改测其它检品时，应用待测溶液冲洗吸收池3～4次，用干净绸布或擦镜纸擦净吸收池的透光面至不留斑痕（切忌把透光面磨损）。
⑥取吸收池时，应拿毛玻璃两面，切忌用手拿捏透光面，以免粘上油污。
使用完后及时用测定溶剂冲净，再用纯化水冲净，用干净绸布或擦镜纸擦干，晾干后，放入吸收池盒中，防尘保存。
3、日常维护与保养①温度和湿度是影响仪器性能的重要因素。
他们可以引起机械部件的锈蚀，使金属镜面的光洁度下降，引起仪器机械部分的误差或性能下降；造成光学部件如光栅、反射镜、聚焦镜等的铝膜锈蚀，产生光能不足、杂散光、噪声等，甚至仪器停止工作，从而影响仪器寿命。
维护保养时应定期加以校正。
分光光度计的使用方法
分光光度计的使用方法一、准备工作1.检查仪器：确保分光光度计处于正常工作状态，检查是否有损坏或故障。
2.准备试剂：根据实验需要，准备好所需的试剂溶液或样品。
二、进样1.打开仪器：打开分光光度计电源，并按照仪器说明书进行启动和预热。
2.选择光程：根据样品的吸收强度选择适当的光程，一般来说，如果样品浓度较高，可选择较短的光程，反之则选择较长的光程。
3.选择波长：根据实验需要选择适当的波长。
一般情况下，可根据物质的吸收峰选择最大吸收光的波长。
4.进样：将试剂溶液或待测样品倒入透明的样品池中，注意不要溢出或弄脏边缘。
三、调零1.调节零位：根据仪器说明书调节零位，通常为调整样品池为空极或将样品池填满纯溶剂。
确保读数为零或接近零。
2.稳定仪器：根据仪器要求等待一段时间，使仪器系统稳定。
四、测量样品1.设置参比：根据需要选择一个参考物质，可以是纯溶剂或者与待测样品相似的物质，通过与参考物质的比较，可以减少溶液浑浊、杂质等因素对测量结果的影响。
2.读取数据：进行光度值的测量。
读取数据的方法有两种：直接读取和保存数据。
直接读取：先置于比色池中参比物，调节至零位，再将样液置入比色池中，测量吸收度，读取显示屏上的数值。
保存数据：通过设置保存模式，将测量数据保存到仪器的内存中，后期可以通过导出功能将数据导出到计算机或者其他设备中进行分析和处理。
五、数据处理1.曲线绘制：若需要进一步分析和比较各组数据，可以根据测得的吸光度数据绘制吸光度-浓度曲线。
2.数据分析：根据实验需要进行吸光度数据的定量或定性分析，例如计算样品的浓度、比较各组数据等。
3.定量测定：根据标准曲线或者已知吸光度和浓度的关系，计算样品的浓度。
六、使用注意事项1.操作规范：按照仪器操作说明进行操作，避免操作失误。
2.避免污染：保持样品池的清洁，避免样品残留对后续测量的影响。
3.避免干扰：仪器放置在稳定的平台上，避免机械振动对测量结果的影响。
4.选择适当的波长：根据样品的物理、化学性质选择适当的波长进行测量。
分光光度计的使用方法
分光光度计的使用方法主体内容：1．使用仪器前，使用者应该首先了解本仪器的结构和工作原理。
以及各个操作旋钮之功能。
在未接通电源前，应该对仪器的安全性进行检查，电源线接线应牢固。
通地要良好,各个调节旋钮的起始位置应该正确，然后再接通电源开关。
仪器在使用前先检查一下，放大器暗盒的硅胶干燥筒（在仪器的左侧），如受潮变色，应更换干燥的蓝色硅胶或者倒出原硅胶，烘干后再用。
2．将灵敏度旋钮调置“1”档（放大倍率最小)。
3．开启电源，指示灯亮，选择开关置于“T”，波长调至测试用波长。
仪器预热20分钟。
4．打开试样室盖（光门自动关闭），调节“0”旋钮，使数字显示为“00。
0”，盖上试样室盖，将比色皿架置与蒸馏水校正位置，使光电管受光,调节透过率“100%”旋钮，使数字显示为“100.0”.5．如果显示不到“100。
0”，则可适当增加微电流放大器的倍率档数，但尽可能置低倍率档使用,这样仪器将有更高的稳定性。
但改变倍率后必须按(4）重新校正“0”和“100％”。
6．预热后，按(4)连续几次调整“0”和“100%”，仪器即可进行测定工作.7．吸光度A的测量按(4)调整仪器的“00。
0"和“100%”,将选择开关置于“A”,调节吸光度调零旋钮，使得数字显示为“.000",然后将被测样品移入光路，显示值即为被测样品的吸光度值。
8．浓度C的测量:选择开关由“A"旋置“C”，将已标定浓度的样品放入光路，调节浓度旋钮，使得数字显示为标定值，将被测样品放入光路，即可读出被测样品的浓度值.9．如果大幅度改变测试波长时，在调整“0"和“100%"后稍等片刻，（因光能量变化急剧，光电管受光后响应缓慢，需一段光响应平衡时间)，当稳定后，重新调整“0”和“100％”即可工作.10．每台仪器所配套的比色皿，不能与其它仪器上的比色皿单个调换。
11．本仪器数字表后盖，有信号输出0～1000MV，插座1脚为正，2脚为负接地线。
分光光度计使用方法
分光光度计使用方法一、仪器准备1.打开分光光度计电源，并等待仪器进行自检和初始化。
2.根据需要选择合适的波长范围，并设置好光源的强度。
二、校准1.使用空白试剂（比如去离子水）进行校准。
2.将空白试剂放入样品池中，关闭池盖，通过界面上的按钮选择“空白”模式。
3.调节光源的强度，使得光学通道中没有样品的情况下，检测到的光强度为基准值。
三、样品处理1.准备好带有试剂的样品，将样品移至样品池或比色皿中。
2.确保所有试剂和样品都处于相同的温度和搅拌状态下。
3.注意避免样品与池壁或污染物接触，以免影响测量结果。
四、测量1.将样品池或比色皿插入光度计的样品槽中，并关闭池盖。
2.通过界面上的按钮选择所需测量的波长。
3.选择测量模式，通常有吸光度测量和浓度测量两种模式。
根据实际需求选择。
-吸光度测量模式：用于直接测量样品的光吸收情况，通常用于检测样品的纯度或含量检测。
-浓度测量模式：通过预先建立吸光度与浓度的标准曲线，来计算样品的浓度。
五、数据处理1.根据测量所得的吸光度值和浓度标准曲线，计算出样品的浓度。
2.将结果记录并保存，可以在计算机上进行进一步的数据分析和绘图。
六、维护和保养1.定期清洁光度计的样品槽，以确保准确测量。
2.注意定期校准仪器，校准周期可根据实验室标准进行调整。
总结：分光光度计是一种非常常用的实验仪器，可以用于各种领域的分析检测。
使用分光光度计时，需要准备好试剂和样品，并正确设置仪器的波长范围和光源强度。
在进行测量前需要进行校准，并注意样品的处理和池壁的清洁。
通过选择合适的测量模式和数据处理方法，可以得到准确的浓度或吸光度值。
使用完成后，需要定期进行维护和保养，以保证仪器的正常工作和准确性。
分光光度计的使用
分光光度计的使用一、分光光度计的基本原理分光光度计是利用物质对特定波长的光吸收的原理来测量其浓度的仪器。
其基本原理是，通过可见光或紫外光源将特定波长的光线通过样品，然后检测经过样品后的光强度变化。
当物质吸收一定波长的光线时，吸收光线的强度与物质的浓度呈线性关系。
通过测量吸收光强的变化，可以推算出物质的浓度。
二、分光光度计的使用步骤1.打开仪器：首先打开分光光度计的电源开关，并等待一段时间，让仪器进行预热。
2.调节波长：选择合适的波长以适应被测物质的光吸收范围。
调节波长的方式因仪器不同而有所不同，通常通过旋钮、数字显示屏或软件界面等方式完成。
3.校准空白样本：将待测样品取出，放入容器中，并注入合适的溶剂制成空白样本。
将空白样本置于仪器上，按下校准按钮，以设定空白样本的吸光度为零基准。
4.加入待测样品：将待测样品加入容器中，注意保证样品的溶解度或稀释浓度适宜。
然后将样品置于仪器上，以便后续测量。
5.测量吸光度：按下测量按钮，仪器将自动扫描并记录样品的吸光度变化。
测量时间的长短与样品的吸光度变化速率有关。
6.计算浓度：利用仪器自带的软件或计算公式，根据测得的吸光度数据计算出样品的浓度。
三、分光光度计的注意事项1.玻璃容器：分光光度计通常使用玻璃容器来容纳样品，由于玻璃对紫外光的吸收较大，因此在紫外区域测量时需要使用石英或镀膜的玻璃容器。
2.样品制备：为保证测量结果的准确性，样品的制备应严格按照实验要求进行，避免样品中存在杂质或干扰物质。
3.清洗容器：在进行样品测量之前，应确保容器干净，无灰尘或杂质。
同时，使用纯净水或适当的溶剂来清洗容器，避免杂质对测量结果的影响。
4.光程：光程是指光线在样品容器中的传播距离，光程的选择应根据待测物质的吸光度范围进行，并尽量保持一致。
光程过长会降低灵敏度，而光程过短则易产生误差。
5.波长选择：根据实验需要选择合适的波长。
不同物质的最大吸收波长不同，选择错误的波长可能导致测量结果的不准确。
分光光度计的使用
分光光度计的使用光源：分光光度计通常使用可见光或紫外线光源。
应根据分析物的吸收波长选择光源。
常见的光源有钨灯、氘灯和氙灯。
样品室：样品室是放置溶液的地方。
它通常是一个透明的玻璃或石英室，以便光可以通过。
为了消除干扰，样品室还应具有高反射能力。
光栅：光栅是用于分散光束的装置。
它将光束分成不同的波长，并将它们投射到检测器上。
光栅的分散能力决定了分光光度计的分辨率。
检测器：检测器负责测量通过样品室的光束的强度。
常见的检测器包括光电二极管（PD）、光电倍增管（PMT）和光敏三极管（PDT）。
计算机界面：分光光度计通常与计算机连接，将数据传送到计算机进行分析和处理。
计算机界面可以是USB、RS232等。
使用分光光度计的步骤如下：1.准备好样品：将待测样品准备好，确保它的状态符合测试要求。
如果需要进行稀释，请选取适当的稀释倍数。
2.设置光源：根据实验需要选择恰当的光源。
对于可见光吸收测量常用白光光源，对于紫外可见光吸收测量常用氘灯。
3.设置检测器：选择合适的检测器，并进行初始化和校准。
根据吸光度的量级，选择恰当的光电流放大倍数。
4.设置光栅：根据需要选择合适的光栅衍射光栅，使其分散光束。
5.设置参考样：根据需要选择一个参考样品。
通常选择一个具有已知浓度或零浓度的样品作为参比。
6.打开分光光度计并进行预热：打开电源并进行预热，通常需要几分钟的时间。
7.校准仪器：使用参考样进行仪器校准。
将参考样放入样品室中，并调整光强到合适强度。
然后将吸光度设定为零。
8.测量样品：将准备好的待测样品放入样品室中，测量其吸光度。
确保样品室干净，并避免空气泡影响测量结果。
9.记录数据：将测得的吸光度数据记录下来。
可以将数据保存在计算机中以备后续分析和处理。
10.结果分析：根据吸光度数据，使用相应的方法和公式，计算出样品中所含物质的浓度。
分光光度计的使用
100.0 BLA
100% T
（5）重复（验证）（ ）、（4）两步，直至透 ）重复（验证）（3）、（ ）两步， ）（ ）、（ 射比为 0.000 和 100% 不变。 不变。 按“MODE”键至“ABSORBANCE”灯亮（此 键至“ 灯亮（ 键至 灯亮 时转换到测吸光度功能上）。 时转换到测吸光度功能上）。
将手柄向操作者方向再拉出一档（听到“咔嚓” 将手柄向操作者方向再拉出一档（听到“咔嚓” 一声），此时被测（ ），此时被测 溶液进入光路。 一声），此时被测（1 号）溶液进入光路。 此时仪器所显示的数值即为 1 号被测溶液的吸光 度值（记录下来）。 度值（记录下来）。
0.186 - 0.000
再拉出一档， 再拉出一档，仪器所显示的数值为 2 号溶液的吸 光度值。 光度值。 将 1、2 号吸收池换装入 3 、4 号溶液（黑体 、 号溶液（ 号参比溶液不动）， ），然后同法测定各溶液的 和 0 号参比溶液不动），然后同法测定各溶液的 吸光度、并一一记录下来，记录格式如下表。 吸光度、并一一记录下来，记录格式如下表。
×.××× ×××
4
4.00
×.××× ×××
5
5.00
×.××× ×××
6
未知
×.××× ×××
五、标准曲线（图） 标准曲线（ 六、从标准曲线上查得的 ρ(F =××× m ⋅ L e) g
−1
50 −1 e) g 七、原试液的 ρ(F = ρ查得× = ××× m ⋅ L 5
八、思考题
2号 透 光 窗 1号 0号 遮光 黑体 通过手柄将池架推到头， 通过手柄将池架推到头， 此时黑体对着入射光。 此时黑体对着入射光。
然后盖上盖子。 然后盖上盖子。
（3）调节投射比为 0.000 ）
分光光度计的使用指南
分光光度计的使用指南分光光度计（spectrophotometer）是一种常用的实验仪器，用于测量物质溶液的吸光度。
通过测量溶液在不同波长下对光的吸收情况，可以获得溶液的吸光度谱，从而推断溶液的组成、浓度和反应动力学等信息。
本文将介绍分光光度计的使用指南，帮助您正确地操作和获取准确的测量结果。
1.准备工作：a.检查分光光度计的电源是否连接良好，仪器开机是否正常。
b.准备所需测量物质的溶液，确保其浓度在测量范围之内。
2.校准仪器：a.运行分光光度计的自检程序，确保仪器的各项功能正常。
b.使用标准样品进行校准，一般可以选择已知浓度的标准溶液或者纯溶剂作为参照。
将标准溶液放置在光度计的样品池中，选择合适的波长进行校准操作。
3.设置测量参数：a. 选择合适的波长范围和波长间隔。
波长范围要包含所要测量物质的吸光度峰值，波长间隔的选择一般为1 nm或0.5 nm。
b.选择合适的光谱扫描速度。
快速扫描适用于快速获取吸光度谱信息，而慢速扫描适用于测量低吸光度样品以提高测量精度。
c.根据样品的浓度和所需测量的吸光度范围，选择合适的光程。
4.放置样品：a.将待测溶液加入样品池中，确保池内无气泡和杂质，以免影响测量结果。
b.在进行多个样品的测量时，务必彻底清洗样品池，以避免残留物干扰后续测量结果。
5.测量样品：a.在程序设置好测量参数后，点击测量按钮进行测量。
b.等待测量完成后，仪器会显示吸光度谱，可根据需要选择保存数据或者打印输出。
6.数据处理：a.对于单一波长的测量，可以直接读取吸光度数值。
对于多波长的扫描，可以绘制吸光度谱，并根据需要进行数据分析。
b.根据已知标准样品的吸光度值和浓度，可以利用测得的吸光度值计算未知样品的浓度。
7.清洗仪器：a.测量结束后，及时清洗样品池，以避免样品残留对下次测量的干扰。
b.根据仪器的使用说明，定期对仪器进行维护保养，保持仪器的正常功能。
8.注意事项：a.检查仪器是否处于垂直水平放置，以保证测量的准确性。
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滴加氨水至黄色后再多加 4 mL 。定容、摇匀，测吸光度。
四、数据记录
0 1 编 号 (Fe) / mg L1 0.000 1.00 2
2.00
×.×××
3
3.00
×.×××
4
4.00
×.×××
5
5.00
×.×××
6
未知
×.×××
吸光度（A）
×.×××
×.×××
五、标准曲线（图） 六、从标准曲线上查得的 (Fe) mg L1
50 1 mg L 七、原试液的 (Fe) 查得 5
八、思考题
T 方式
“0%”键
（4）调透射比为 100% 将手柄向操作者方向拉出一档（听到“咔嚓”一 声），此时参比（0 号）溶液进入光路。 按一下“100% T”键， 此时仪器显示“BLA” 表示仪器正在自动校 正，校正完毕后显示 “100.0”。
100.0 BLA
100% T
（5）重复（验证）（3）、（4）两步，直至透 射比为 0.000 和 100% 不变。 按“MODE”键至“ABSORBANCE”灯亮（ 时转换到测吸光度功能上）。
分光光度计的使用
• 原理：分光光度法是利用物质对某种波长 的光具有选择性吸收的特性建立起来的鉴 别物质或测定其含量的一项技术。
• 当一束单色光通过溶液时，一部分被吸收， 一部分则透过溶液。设入射光强度为Io。， 透射光强度为It，，则透光度T=It／Io
• 吸光度(A)或光密度(O．D)或称消光度(E)则 可表示为A=-lgT。根据Lambert—Beer定 律，吸光度与溶液的浓度成正比，与光束 通过溶液的距离(即光程)成正比，用数学表 达式表示为： A=KLC
放入吸收池架（透光面向着透光窗一侧）。 放置顺序为：
2号 透 光 窗
1号
0号 遮光 黑体 通过手柄将池架推投射比为 0.000
至投射比（T）灯亮
按 MODE 键
按一下“0%”键，此时仪器自动校正后显示 “0.000”。 （有的分光光度计没有黑体，需要在打开试样 室盖（起黑体的作用）的情况下调 T = 0.000）
0 1 编 号 (Fe) / mg L1 0.000 1.00 吸光度（A）
×.××× ×.×××
2
2.00
×.×××
3
3.00
×.×××
4
4.00
×.×××
5
5.00
×.×××
6
未知
×.×××
绘制标准曲线：
吸 光 度 (A)
● ●
●
●
根据未知溶液（6 号 溶液）的吸光度从标准 曲线上查得试液浓度。
（1）选择波长
拧动此旋钮
至所需波长
（2）将测试溶液装入吸收池（操作如下）
手拿毛玻璃面，
先用待装液漂洗 3 遍，
装入量为吸收池高度的 3 / 4，
毛面 透光面 容 量 的 3/4
用镜头纸擦净透光面，
所有关于吸收池的操作 均在实验台面之上的空 间进行，这样可保证一 旦吸收池滑落时掉在台 面上，不至于摔破。 不要将纸团成球， 不要来回擦， 而要向同一方向擦。
将手柄向操作者方向再拉出一档（听到“咔嚓” 一声），此时被测（1 号）溶液进入光路。 此时仪器所显示的数值即为 1 号被测溶液的吸光 度值（记录下来）。
0.186 - 0.000
再拉出一档，仪器所显示的数值为 2 号溶液的吸 光度值。 将 1、2 号吸收池换装入 3 、4 号溶液（黑体 和 0 号参比溶液不动），然后同法测定各溶液的 吸光度、并一一记录下来，记录格式如下表。
光源：发出所需波长范围内的连续光谱，有足够 的光强度,稳定。
可见光区：钨灯，碘钨灯(320～2500nm) 紫外区：氢灯，氘灯(180～375nm)
单色器：将光源发出的连续光谱分解为单色光的 装置。
棱镜:玻璃350～3200nm, 石英185～4000nm
光栅:波长范围宽, 色散均匀,分辨性能好, 使用方便
式中C代表该物质的浓度，L代表光程，一般以cm表 示，K为摩尔消光系数，即当溶液浓度为lmol／l， 光程为1cm时所测得的一定波长下的吸光度。
分光光度法的主要部件框架
通过棱镜或光栅得到一束近似的单色光.
波长可调, 故选择性好, 准确度高.
光源 单色器 吸收池 检测系统
稳压电源
（1）分光光度计的主要部件
V试液/mL VNH4Cl / mL
0 0.00
0.00 4
1
2
3
4
5
6
1.00 2.00 3.00 4.00 5.00 0.00
0.00 0.00 0.00 0.00 0.00 5.00 4 4 4 4 4 4 2.00 2.00 2.00 2.00 2.00 2.00
V磺基水杨酸/mL 2.00
●
(Fe) / mg L1
原试液含铁质量浓度 = 查得的浓度 × 稀释倍数
50 1 查得 mg L 5
实验报告格式
一、实验目的
„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„
二、实验原理
„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„
三、实验步骤
编 号 V标准液/mL
吸收池：(比色皿)用于盛待测及参比溶液。
可见光区：光学玻璃池
紫外区：石英池
检测器：利用光电效应，将光能转换成 电流信号。
光电池，光电管，光电倍增管
指示器：
低档仪器：刻度显示 中高档仪器：数字显示，自动扫描记录
（2）分光光度计的类型
722型分光光度计结构方框图
光 源
分光 系统
吸收池
检测系统
分光光度计的使用